Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

פגיעה כירורגית ללבלב העכבר באמצעות קשירת של צינור הלבלב כמודל להאנדוקרינית ואקסוקרינית תכנות מחדש והפצה

Published: August 7, 2015 doi: 10.3791/52765
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1
1Diabetes Research Center, Vrije Universiteit Brussel

Abstract

התרחבות של תאים בטא בלבלב in vivo או vivo לשעבר, או דור של תאי הבטא בבידול מתאי גזע עובריים או מבוגר, יכולה לספק מקורות להרחבה חדשים של תאי הבטא כדי להקל על המחסור בתורמי השתלת איון אדם כטיפול בסוכרת. למרות התקדמות שחלה באחרונה נעשתה לקראת מטרה זו, מנגנונים המווסתים את ההרחבה בטא תא והתמיינות של תאי גזע מ/ אב יישארו להתאפיין. כאן, אנו מתארים פרוטוקול למודל פציעה בלבלב העכבר הבוגר שיכול לתפקד ככלי ללימוד מנגנונים של שיפוץ רקמות והתפשטות תאי הבטא ובידול. קשירת צינור חלקית (PDL) היא פגיעה הנגרמת בניסוי של לבלב המכרסמים הכרוך בקשירה כירורגית של צינור הלבלב הראשי וכתוצאה מכך חסימה של ניקוז של מוצרים אקסוקרינית מהאזור הזנב של הלבלב. הנזקים הנגרמים גורם ניוון acinar, infilt תא החיסוןמנה ושיפוץ רקמות קשה. יש לנו שדווחו בעבר ההפעלה של Neurogenin (NGN) 3 לבטא בתאים כמו אב-אנדוגני ועלייה בהתפשטות תאים בטא לאחר PDL. לכן, PDL מספק בסיס ללמוד אותות מעורבים בדינמיקה של תאי הבטא ואת המאפיינים של אב האנדוקרינית בלבלב מבוגר. מאז, הוא עדיין נשאר במידה רבה לא ברור, שגורמים ומסלולים לתרום לNeoGenesis תאי הבטא ושגשוג בPDL, פרוטוקול סטנדרטי לPDL יאפשר להשוואה בכל מעבדות.

Introduction

השכיחות הגוברת של סוכרת, המשפיעה על יותר מ -300 מיליון בני אדם ברחבי העולם 1,2 יש להגדיל את החיפוש אחר המקורות חדשים של תאי הבטא המייצר אינסולין, הן במבחנה in vivo, כדי לחדש את מסת התאים בטא הלקויה. 3 זיהוי מפתח מנגנונים וגורמים המווסתים את ההתפשטות בטא תא והתא NeoGenesis בטא, כלומר, ההתמיינות של תאי הבטא מתא סלולארי או אב שאינו בטא, יכולים לספק מטרות רומן לפיתוח טיפולי משובי בסוכרת.

בלבלב המכרסמים הפיתוח, כל סוגי התאים האנדוקרינית להבדיל מאוכלוסייה חולפת של תאים האנדוקרינית, המבטאת את גורם השעתוק Neurogenin3 (Ngn3). 4,5 בלבלב המכרסמים המבוגרים, בתנאים פיסיולוגיים נורמלים, מסת התאים בטא היא שמרו על מספר אופטימלי כדי לעמוד בדרישות מטבולים. שינויים בגודל תא בטא,אפופטוזיס והשכפול מהווים מנגנונים העיקריים להתרחבות של תאי הבטא ולהפוך-על. 6-8 בעוד שהפוטנציאל של תאי הבטא להתרבות בתנאים פיסיולוגיים נורמלים הוא הומוגני בכל האוכלוסייה, 9 שיעור הריבוי שלהם הוא נמוך ומחדש שכפול מוגבל על ידי תקופה דינמית קפאון או תקופה עקשן 6,7, הושפעה גיל וחילוף חומרים של הגלוקוז. 10 מאז ותאים האנדוקרינית עד כה לא זוהו בלבלב המבוגר הנורמלי, הוא חשב NeoGenesis לא לתרום לצמיחה של תאי הבטא מבוגרים נורמלים. 8

לכן, זיהוי של תא אב האנדוקרינית פקולטטיביים בלבלב המבוגר שניתן להרחבה ומסוגלת מניב תאי הבטא חדשים יספק רומן, אולי מקור בלתי מוגבל של תאי הבטא.

קשירת צינור חלקית (PDL) היא מודל פציעת חיה שתואר לגרום neogenesi תא בטאים בלבלב המבוגר. 11,12 במודל זה, צינור הלבלב הראשי ניקוז זנב הלבלב הוא ligated בניתוח. החסימה של ניקוז אקסוקרינית וכתוצאה מכך גורמת לשיפוץ רקמות גדול, מלווה בדלקת וניוון דיסטלי לקשירת acinar. 12-14 בסביבה דלקתית זה, מחדש ביטוי של סמן האב האנדוקרינית Ngn3 מושרה ותאי הבטא הנפח מגדיל כפול . הכפלה זו בתוצאות נפח התא בטא מהדור של תאי הבטא חדשים מNgn3 להביע תא אב האנדוקרינית עוברי-סוג ומהתפשטות של תאי הבטא קיימים מראש ויצרו זה עתה שנוטים מחדש שכפול ללא "תקופת קפאון". 11,15

NeoGenesis Beta תא ושכפול בדגמי פציעה, כגון לבלב 6,7,16-19 ואבלציה סלקטיבית של תאי הבטא 20 תוארו בהרחבה. עם זאת, תוצאת משובי בthesמודלים דואר מושפעים מהיקף הנזקים הנגרמים והיא קשורה עם מסת תאים בטא ראשוני ירדה 21. PDL הוא מודל ניתוחי שבי מסת התאים בטא הראשונית אינה מושפעת וNeoGenesis תאי הבטא והתפשטות מופעלים חסונה. ואכן, בלבלב של עכברים שעברו PDL, תאים לבטא Ngn3 מזוהים ליד בטנת אפיתל של הצינור. יכולים להיות מבודדים תאים אלה מלבלב ligated של עכברים הטרנסגניים Ngn3-GFP באמצעות תא הקרינה מיון מופעל (FACS) והם מסוגלים להבחין כלפי תאים בטא פונקציונליים הבא engraftment ולתרבות לשעבר vivo של הלבלב של E12.5 Ngn3 - / - . עכברים 11 באופן דומה, בNgn3 CreERT;. עכברי R26 YFP שבו תאים שהפעילו את גן Ngn3 מסומנים באופן קבוע לאחר הזרקת טמוקסיפן, תאי הביתא תווית חיובית Ngn3 תאים שמקורם מזוהים לאחר PDL 15 יתר על כן, תאי הבטא חדש שנוצרו לדלל מראש -existing תאי הבטא ומעדיף לאתר באיים קטנים שבתוכו תאים בטא להראות פוטנציאל התפשטות גבוה. 15 Ngn3 חשוב לתאי הבטא התרחבות לאחר PDL מאז ירד ביטוי Ngn3 באמצעות היעד ספציפי RNA קצר-הסיכה יורד מסת תאים בטא והתפשטות תאים בטא לאחר באופן משמעותי PDL. 11 יש לציין, את החלק היחסי של תאי הבטא תאים שמקורם Ngn3 ומסת התאים בטא לאחר PDL ביקורתי תלויים ברמה של האינדוקציה Ngn3 15. זה בהתאם לתצפית שרמה הגבוהה של ביטוי Ngn3 היא שלב קריטי למחויבות האנדוקרינית מאבות לבלב multipotent במהלך פיתוח לבלב 22 בנוסף, אבלציה סלקטיבית של Ngn3 לבטא בתאים על ידי ממשל דיפטריה-רעל לNgn3 CreERT;. עכברי R26 iDTR תוצאות בתוכן ירד אינסולין והתפשטות תאי הבטא מופחת, במיוחד באיים קטנים. 15

Ngn3 בתאי צינור לאחר PDL אושרה על ידי רבים 11,15,16,23,24, ביטוי Ngn3 בתאי איים 24,25 ופערים בתוצאה של PDL תיגר התצפיות הראשוניות שלנו מסה של תאי הבטא גדל 26,27, מראה של Ngn3 להביע אבות-נגזר צינור האנדוקרינית 24,26,28,29, וחלוקה של תאי הבטא עלה 27 לאחר PDL. 30

תוצאות הסותרות אלה יכולים, לפחות באופן חלקי, יש לייחס לשילוב של גורמים, כוללים שינויים בנקודות הזמן לאחר הניתוח של ניתוח, משקל גוף, מין וגיל של העכברים, תנאים פיסיולוגיים וסביבתיים שלאחר ניתוח, והכי חשוב, הבדלים בטכניקה ניתוחית. 30 בידיים שלנו, התפשטות בטא תא, תוכן אינסולין, בטא נפח תא ומספר האיים קטנים גדלו באופן עקבי אחרי PDL. כמו כןNgn3 mRNA מגדיל באופן עקבי, אבל יש הבדלים גדולים בביטוי Ngn3 mRNA בין לבלב זנב PDL, שאין לנו הסבר ישיר. חוקרים שערנו כי רמת Ngn3 mRNA עשויה לתאם עם התואר של NeoGenesis תאי הבטא מהתאים שאינם בטא 15, אבל זה צריך הוכחה נוספת. למרות שזה לא להסיר את כל וריאציות הניסיוניות, שיטה סטנדרטית לביצוע ניתוחי PDL מאפשרת לאחידות טובה יותר בתוצאות ופותחת אפיקים חדשים בלימוד התפשטות תאי הבטא וNeoGenesis.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

כל המניפולציות לעקוב אחר ההנחיות שהונפקו על ידי האמנה האירופית להגנה על בעלי החיים בעלי חוליות המשמשת לניסויים ומטרות מדעיות אחרות (ETS 123 וו -2010 / 63 / איחוד אירופי).

1. הכנת איזור העבודה

  1. לספק שטח ייעודי הכנה, אזור ניתוח ואזור התאוששות.
  2. לנהל את ההליך הכירורגי כל בזרימה למינרית כדי למזער מזהמים סביבתיים.
  3. להרכיב את הציוד (כפי שמופיע בחומרים ושיטות) צורך בהכנת השטח, ניתוח והתאוששות, באמצעות טכניקת aseptic מתאימה.
  4. ודא שכלים כירורגיים הם autoclaved לפני הניתוח.
  5. לספק כרית חימום מים הסירקולציה המחודשת בטמפרטורה של 38 מעלות צלזיוס במשך ייצוב טמפרטורה במהלך ניתוח. מכסה את כרית החימום עם כרית עמיד למים סטריליים.
  6. לספק מיקרוסקופ עם הגדלה של לפחות 6.3X.
  7. השתמש Steri מכשירlizer, כגון מעקר חרוז חם, כדי לעקר מכשירים בין פרוצדורות כירורגיות.
  8. הכן אזור התאוששות בהיקף של כלוב גדול, בשורה של מצעי נייר שטוחים

2. הכנת בעלי חיים לכירורגיה

  1. לPDL וניתוח דמה, להשתמש 8 עכברי בן שבוע זכר, שוכנו בכלובים סטנדרטיים ומתוחזק על שעות אור 12 / חושך מחזור 12 שעות והאכיל כרצונך דיאטה מכרסם סטנדרטי.
    שים לב: כאן, אנו משתמשים בעכברי BALB / cJrJ אלא גם השתמשנו בהצלחה זנים אחרים וזנים מהונדסים שונים.
  2. השתמש Buprenophine כשיכוך כאבים מקדים (0.05-0.1 מ"ג / קילוגרם) 30 דקות לפני הניתוח.
  3. להרדים את העכברים בזריקת intraperitoneal של 100 מ"ג / קילוגרם של קטמין ו 5 - 10 מ"ג / קילוגרם של xylazine.
  4. להעריך הרדמה נכונה על ידי התבוננות אובדן הדרגתי של תנועה רצונית והרפיית שרירים. בדוק את אובדן הרפלקסים על ידי צביטת הבוהן.
  5. החל משחת עיניים לקודמותיובש אף אוזן גרון של העיניים בזמן הרדמה.

3. אתר כירורגי הכנה

  1. לחטא בית חזה והבטן עם פתרון chlorhexidine חיטוי.
  2. לגלח שטח של 2.5 סנטימטרים X 1.5 סנטימטר של הבטן.
  3. לחטא את האזור המגולח באמצעות הגזה טבולה בתמיסת כלורהקסידין, אז פתרון אלכוהול ויישום סופי של פתרון chlorhexidine.
  4. מקם את החיה באזור הניתוח, כך שהאתר כירורגית מוכן הוא כלפי מעלה מול המנתח.
  5. לעטוף את העכבר באמצעות וילון כירורגית עמיד למים עם פתיחה שעוזבת את אזור בטן החיטוי נחשף תוך כדי כיסוי שאר הגוף כדי ליצור שדה עבודה סטרילית. לפקח על העכבר לפני ההליך לעומק ההרדמה.

4. לבלב Duct קשירת

  1. Laparotomy
    1. עושה חתך קו האמצע עליון בעור המשתרע מתהליך xiphoid לטבור באמצעות סטרילילהב כירורגים. הפרד את אלבה Linea הבסיס והצפק באמצעות מספריים סטרילי כדי לחשוף רבע העליון של הבטן.
    2. למנוע התייבשות-מהאיברים הפנימיים על ידי קומץ קבוע עם נתרן כלורי 0.9% סטרילי.
    3. באמצעות פינצטה או ספוגית סטרילית, לחזור בו מבטן superiorly, חושף את הטחול ואת אונת הטחול (אזור הזנב) של הלבלב.
    4. בעדינות לחזור בי תריסריון וחלק מהמעי הריק העליון לרבע הבטן הימנית העליון כדי לחשוף את הראש, הצוואר ואזור גוף של הלבלב מכוסה על ידי הצפק הקרביים.
  2. קשירה
    1. לאתר את המיקום האנטומי של הצינור הראשי הלבלב באזור הצוואר של הלבלב.
    2. לחתוך את הצפק הקרביים ורצועת gastrocolic, מתן גישה לretroperitoneum, חושף את אזור הגוף והזנב של הלבלב. כדי לחשוף את אזור הצוואר, לבצע תמרון Kocher. הרם את התריסריון וראשהלבלב את retroperitoneum מרומם אותם מהווריד הנבוב הנחות ואב העורקים מתחת.
    3. בזהירות במקום המרית מתחת לאזור הצוואר. ולקשור את צינור הלבלב עם 6-0 חוט Prolene בצד השמאל של וריד השער שמפריד בין אונות גסטרו-התריסריון וטחול.
    4. לבצע קשירה שנייה בסמיכות לקשירה הראשונה כדי להבטיח שהאונות מופרדות כראוי.
    5. ולקשור בזהירות על מנת שלא לפגוע בכלי הדם שבבסיס, כלומר העורק מעולה pancreaticoduodenal, עורק pancreaticoduodenal הנחותה וחלק הלבלב של עורק הטחול.
    6. מניחים את האיברים בחזרה לתוך חלל הבטן.
    7. סגירת החתך באמצעות חוט פילמנטיות 4-0 polyglycol בדפוס תפר רציף לשרירים / שכבת הצפק ובדפוס תפר רציף לעור.

5. ניתוח שאם

  1. לבצע את כל הפעולות כמו דהתואר בשלבי 1 עד 4.1.4. בעוד הלבלב חשוף, לא לבצע קשירה של צינור הלבלב.
  2. בסופו של שלב 4.1.4, למקם איברים פנימיים חזרה לתוך חלל הבטן.
  3. לסגור את החתך, כמתואר ב4.2.7.

טיפול וניטור 6. פוסט-מבצעיים

  1. לאחר ההליך הכירורגי הוא מלא, במקום את העכבר באזור ההתאוששות. זה מורכב מכלוב מונח על כרית חימום ומרופד בנייר מצעים שטוחים כדי לשמור על טמפרטורת גוף נורמלית.
  2. לספק תמיכה תזונתית כדי למנוע היפוגליקמיה לאחר ניתוח על ידי מזון טבול ממוקם בתחתית הכלוב. לשם כך, השתמש בכדורי דיאטה מכרסם סטנדרטיים ספוגים במים עד שהם מתרככים.
  3. לספק תמיכת נוזל על ידי המזון הטבול ולספק כרצונך מים.
  4. השתמש Buprenophine כשיכוך כאבים (0.05-0.1 מ"ג / קילוגרם) פעמיים ביום למשך 2 ימים לאחר ניתוח. במשך כל הניסוי, מעקב, observדואר העכברים להתרחשותם של סימנים אפשריים של זיהום, כוללים הפרשה של נוזל או מוגלה מהפצע, או להידרדרות פיזית מאופיינת בירידה בטיפוח התנהגות ורמת פעילות, תיאבון נמוך ואובדן משקל.

7. הערכה של PDL מוצלח וקציר של זנב PDL ושאם לבלב זנב

  1. להרדים עכברים על ידי נקע בצוואר הרחם.
  2. גילוח מחדש את אזור הבטן, כדי למנוע לשאת על פרווה.
  3. פתח את שכבת עור ושרירי הבטן ולהסיר שטח גדול של עור ושרירים כדי להשיג גישה טובה ללבלב.
  4. באמצעות פינצטה או ספוגית סטרילית, הבטן הוא חזר בי superiorly, חושפת את הטחול ואת אונת הטחול (אזור הזנב) של הלבלב.
  5. משוך בעדינות את התריסריון וחלק מהמעי הריק העליון כדי לחשוף את אונת גסטרו-התריסריון (אזור הראש) של הלבלב.
    הערה: חלק ligated של לבלב PDL כעת יוקטנו והפך כמעטשקוף כך שהאיים נראים כנקודות קטנות ולבנות. חלק ראש הלבלב הוא ורוד אטומה ואקסוקרינית ברורים lobuli ניתן לצפות.
  6. בעזרת המספריים סטרילי, להפריד את חלק זנב ligated של הלבלב מהטחול, על ידי חיתוך לאורך הטחול. להתנתק רקמת חיבור המחברת את אזור הזנב של הלבלב לאיברים הפנימיים.
  7. חותך את אזור זנב PDL ממש מול קשירה, לא כולל קשירה ורקמה מייד בסמוך אליו מרקמות שנקטפו.
  8. כדי לבודד רקמת זנב דמה, בצע את השלבים 7.1 דרך 7.5. מספריים סטרילי באמצעות להפריד את אזור הזנב של לבלב הדמה מהטחול על ידי חיתוך לאורך הטחול. לבודד את אזור הזנב על ידי חיתוך לאזור הצוואר של הלבלב וחיתוך משוחרר רקמת חיבור המחבר את לבלב הזנב לאיברים הפנימיים
    הערה: שני הזנב ואזור ראש לבלב הדמה הם ורוד אטום, כדי לבודד את שני החלקים בנפרד,לחתוך את הלבלב באזור הצוואר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Supplies for preparation area 
Hibiscrub  Regent Medical 5601IE5F11 Chlorhexidin diglucon
Ketamin Ceva BE-V202526 anesthesia
Rompun(2%) (Xylazin) Bayer BE-V041815 anesthesia
Duratears Alcon 34335-8 ointment for eyes
Razor
Supplies for surgical area 
Leica Operating microscope Leica 10446320
Hot bead sterilizer Fine Science Tools (FST) 18000-45
autoclaved surgical instruments Fine Science Tools (FST)
Recirclulating water heating pad Gaymar Industries, Inc. TP702
Adhesive OP-towel BARRIER 706500-07
OP-tape BARRIER 381035-00
Stella 3/5 Compresse de gaze (Sterile) Lohmann&Rauscher International 35968
Mini Plasco 0.9% NaCl solution B.BRAUN 3521680
6-0 prolene suture Ethicon 8706H
4-0 polyglycol suture Ethicon SL-607
Supplies for recovery area
Paper bedding (paper towel)
Vetergesic ecuPhar BE-V342955
Materials for analysis
Taqman Ngn3 primer Integrated DNA technologies Mm.PT.56a.33574796.gs
Taqman CycloA primer Integrated DNA technologies Mm.PT.39a.2.gs
anti-Rabbit Cleaved Caspase 3 antibody (D175) Cell Signaling 5A1E
anti-mouse/rat Ki-67 antibody eBioscience 14-5698-82
monoclonal anti-actin alpha-Smooth muscle-Cy3 (mouse) Sigma 085K4889
anti-rat Cytokeratin 19  DSHB
monoclonal Mouse anti-BrdU Dako M0744
Hoechst Sigma 33342

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Shaw, J. E., Sicree, R. A. Global estimates of the prevalence of diabetes for. Diabetes Res Clin Pract. 87, 4-14 (2010).
  2. Danaei, G., et al. National, regional, and global trends in fasting plasma glucose and diabetes prevalence since 1980: systematic analysis of health examination surveys and epidemiological studies with 370 country-years and 2·7 million participants. Lancet. 378, 31-40 (2011).
  3. Borowiak, M., Melton, D. A. How to make beta cells. Current opinion in Cell Biology. 21, 727-732 (2009).
  4. Gradwohl, G., Dierich, A., LeMeur, M., Guillemot, F. neurogenin3 is required for the development of the four endocrine cell lineages of the pancreas. Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 1607-1611 (2000).
  5. Gu, G., Dubauskaite, J., Melton, D. A. Direct evidence for the pancreatic lineage: NGN3+ cells are islet progenitors and are distinct from duct progenitors. Development. 129, 2447-2457 (2002).
  6. Dor, Y., Brown, J., Martinez, O. I., Melton, D. A. Adult pancreatic beta-cells are formed by self-duplication rather than stem-cell differentiation. Nature. 429, 41-46 (2004).
  7. Teta, M., Rankin, M. M., Long, S. Y., Stein, G. M., Kushner, J. A. Growth and regeneration of adult beta cells does not involve specialized progenitors. Dev Cell. 12, 817-826 (2007).
  8. Bonner-Weir, S. Perspective: Postnatal pancreatic beta cell growth. Endocrinology. 141, 1926-1929 (2000).
  9. Brennand, K., Huangfu, D., Melton, D. All beta cells contribute equally to islet growth and maintenance. PLoS Biol. 5, e163 (2007).
  10. Salpeter, S. J., Klein, A. M., Huangfu, D., Grimsby, J., Dor, Y. Glucose and aging control the quiescence period that follows pancreatic beta cell replication. Development. 137, 3205-3213 (2010).
  11. Xu, X., et al. Beta cells can be generated from endogenous progenitors in injured adult mouse pancreas. Cell. 132, 197-207 (2008).
  12. Wang, R. N., Kloppel, G., Bouwens, L. Duct- to islet-cell differentiation and islet growth in the pancreas of duct-ligated adult rats. Diabetologia. 38, 1405-1411 (1995).
  13. Yasuda, H., et al. Cytokine expression and induction of acinar cell apoptosis after pancreatic duct ligation in mice. Journal of interferon, & cytokine research : the official journal of the International Society for Interferon and Cytokine Research. 19, 637-644 (1999).
  14. Van Gassen, N., et al. Macrophage dynamics are regulated by local macrophage proliferation and monocyte recruitment in injured pancreas. European journal of immunology. , (2015).
  15. Van de Casteele, M., et al. Neurogenin 3+ cells contribute to beta-cell neogenesis and proliferation in injured adult mouse pancreas. Cell Death Dis. 4, e523 (2013).
  16. Xiao, X., et al. No evidence for beta cell neogenesis in murine adult pancreas. The Journal of clinical investigation. 123, 2207-2217 (2013).
  17. Ackermann Misfeldt, A., Costa, R. H., Gannon, M. Beta-cell proliferation, but not neogenesis, following 60% partial pancreatectomy is impaired in the absence of FoxM1. Diabetes. 57, 3069-3077 (2008).
  18. Lee, C. S., De Leon, D. D., Kaestner, K. H., Stoffers, D. A. Regeneration of pancreatic islets after partial pancreatectomy in mice does not involve the reactivation of neurogenin-3. Diabetes. 55, 269-272 (2006).
  19. Bonner-Weir, S., Sharma, A. Pancreatic stem cells. The Journal of pathology. 197, 519-526 (2002).
  20. Nir, T., Melton, D. A., Dor, Y. Recovery from diabetes in mice by beta cell regeneration. The Journal of clinical investigation. 117, 2553-2561 (2007).
  21. Bouwens, L., Rooman, I. Regulation of pancreatic beta-cell mass. Physiol Rev. 85, 1255-1270 (2005).
  22. Wang, S., et al. Neurog3 gene dosage regulates allocation of endocrine and exocrine cell fates in the developing mouse pancreas. Developmental biology. 339, 26-37 (2010).
  23. Pan, F. C., et al. Spatiotemporal patterns of multipotentiality in Ptf1a-expressing cells during pancreas organogenesis and injury-induced facultative restoration. Development. 140, 751-764 (2013).
  24. Kopp, J. L., et al. Sox9+ ductal cells are multipotent progenitors throughout development but do not produce new endocrine cells in the normal or injured adult pancreas. Development. 138, 653-665 (2011).
  25. Wang, S., et al. Sustained Neurog3 expression in hormone-expressing islet cells is required for endocrine maturation and function. Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 9715-9720 (2009).
  26. Kopinke, D., et al. Lineage tracing reveals the dynamic contribution of Hes1+ cells to the developing and adult pancreas. Development. 138, 431-441 (2011).
  27. Rankin, M. M., et al. beta-Cells are not generated in pancreatic duct ligation-induced injury in adult mice. Diabetes. 62, 1634-1645 (2013).
  28. Solar, M., et al. Pancreatic exocrine duct cells give rise to insulin-producing beta cells during embryogenesis but not after birth. Dev Cell. 17, 849-860 (2009).
  29. Furuyama, K., et al. Continuous cell supply from a Sox9-expressing progenitor zone in adult liver, exocrine pancreas and intestine. Nat Genet. 43, 34-41 (2011).
  30. Van de Casteele, M., et al. Partial duct ligation: beta-cell proliferation and beyond. Diabetes. 63, 2567-2577 (2014).
  31. Zhang, J., Rouse, R. L. Histopathology and pathogenesis of caerulein-, duct ligation-, and arginine-induced acute pancreatitis in Sprague-Dawley rats and C57BL6 mice. Histology and histopathology. 29, 1135-1152 (2014).
  32. Martinez-Romero, C., et al. The epigenetic regulators Bmi1 and Ring1B are differentially regulated in pancreatitis and pancreatic ductal adenocarcinoma. The Journal of pathology. 219, 205-213 (2009).
  33. Prevot, P. P., et al. Role of the ductal transcription factors HNF6 and Sox9 in pancreatic acinar-to-ductal metaplasia. Gut. 61, 1723-1732 (2012).
פגיעה כירורגית ללבלב העכבר באמצעות קשירת של צינור הלבלב כמודל להאנדוקרינית ואקסוקרינית תכנות מחדש והפצה
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

De Groef, S., Leuckx, G., Van… More

De Groef, S., Leuckx, G., Van Gassen, N., Staels, W., Cai, Y., Yuchi, Y., Coppens, V., De Leu, N., Heremans, Y., Baeyens, L., Van de Casteele, M., Heimberg, H. Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation. J. Vis. Exp. (102), e52765, doi:10.3791/52765 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter