Abstract
Leveren har en stor evne til å regenerere. Hepatocytter, parenchymal cellene i leveren, kan regenerere på en av to måter: hepatocyte- eller galledrevet leveren regenerering. I hepatocytter drevet leveren regenerasjon, er regenererende hepatocytter avledet fra preexisting hepatocytter, mens i galle-drevet regenerering, er regenererende hepatocytter avledet fra galle epitelceller (becs). For hepatocytter-drevet leveren regenerasjon, det er gode gnagermodeller som har vesentlig bidratt til dagens forståelse av leveren regenerering. Men det finnes ingen slik gnager modell for galledrevet leveren regenerering. Vi har nylig rapportert om en sebrafisk leverskade modell der becs omfattende gi opphav til hepatocytter ved alvorlig hepatocytter tap. I denne modellen er hepatocytter spesielt ablated av noen farmakogenetiske midler. Her presenterer vi i detalj de metoder for å ablate hepatocytter og å analysere BEC-drevet leveren regenereringsprosess.Dette hepatocytter spesifikke ablasjon modellen kan videre brukes til å oppdage de underliggende molekylære og cellulære mekanismer for galledrevet leveren regenerering. Videre kan disse metodene brukes til kjemiske skjermer for å identifisere små molekyler som utvider eller undertrykke leveren regenerering.
Introduction
Leveren er en svært regenerativ organ. I leveren regenerering regenerering hepatocytter, parenchymal cellene i leveren, er avledet fra pre-eksisterende hepatocytter (hepatocytter-lever drevet restitusjon) eller becs (galledrevet leveren restitusjon) 1,2. Leverskade utløser vanligvis spredning av pre-eksisterende hepatocytter; men når hepatocytter spredning er kompromittert, kan becs bidra til leverceller 2-4. Disse to moduser av leveren regenerering er klinisk signifikant. Etter kirurgisk fjerning av en del av det humane leveren (f.eks, på grunn av levertumorer eller levende lever donorer), hepatocytter i den gjenværende lever proliferere for å gjenvinne den tapte levermassen. I motsetning til pasienter med alvorlige leversykdommer, hepatocytter spredning er sterkt svekket, slik at becs eller lever stamceller (LPC) synes å bidra til å gjenoppfriske hepatocytter 5,6. Den gnager 2/3 delvis hepatectomy modellen, derhepatocytter sprer å gjenopprette den tapte levermasse, vesentlig har bidratt til dagens forståelse av hepatocytter drevet leveren regenerering 7,8. Men det er ingen gyldig gnager modell der regenererende hepatocytter er i hovedsak hentet fra becs. Selv om flere gnager lever toksin modeller ført til identifisering av galledrevet leveren regenerering 2-4, siste avstamning sporing studier på mus viser en minimal bidrag becs å regenerere hepatocytter i disse modellene 9,10. Noen av de gnager leverskade modeller, inkludert delvis hepatectomy 11-13 og paracetamol-indusert leverskade 14,15, har blitt brukt til sebrafisk og førte til identifisering av nye gener eller veier innblandet i leveren regenerering. Imidlertid hepatocytter-drevet, men ikke BEC-drevet, oppstår leveren regenerering i disse sebrafisk leverskade modeller. Derfor er en ny leverskade modell hvor becs utstrekning bidrar til regenerating hepatocytter er nødvendig for en bedre forståelse av BEC-drevet leveren regenerering.
De overordnede målene for hepatocytter ablasjon modellen beskrevet her er (1) å generere en leverskade modell der becs omfattende bidra til regenererende hepatocytter, og (2) belyse de molekylære og cellulære mekanismene bak BEC-drevet leveren regenerering. Vi antok at alvorlighetsgraden av skaden bestemmer modusen for leveren regenerasjon; dermed spådd vi at galledrevet leveren regenerering ville starte på alvorlig hepatocytter skade. For å teste denne hypotesen, har vi utviklet en sebrafisk leverskade modellen ved å generere en transgen linje, Tg (fabp10a: CFP-NTR) s931, som sterkt uttrykker bakterie Nitroreductase (NTR) smeltet sammen med cyan fluorescerende protein (CFP) under hepatocytter spesifikke fabp10a promoter. Siden NTR konverterer giftfri prodrug, metronidazol (Mtz), inn i en cellegift, ablates det bare den tiltenkte NTR-uttrykkende celler 16-18, i dette tilfellet, hepatocyttene. Ved å manipulere varigheten av Mtz behandling, kan omfanget av hepatocytter ablasjon kontrolleres. Ved å bruke denne modellen, vi nylig rapportert at ved alvorlig tap av hepatocytter, Wien omfattende gi opphav til regenererende hepatocytter 19, som ble ytterligere bekreftet ved to andre uavhengige undersøkelser 20,21. Derfor, i forhold til den tidligere nevnte gnagere og sebrafisk leverskade modell, er vår hepatocytter ablasjon modell mer fordelaktig for å studere BEC-drevet leveren regenerering.
Denne protokollen beskriver fremgangsmåten for å utføre leveren restitusjon eksperimenter ved hjelp av sebrafisk hepatocytter ablasjon modell. Denne modellen vil være hensiktsmessig for å bestemme mekanismene bak galledrevet leveren regenerering og for kjemiske skjermer for å identifisere små molekyler som kan undertrykke eller forsterke leveren regenerering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Sebrafisk ble hevet og oppvokst i henhold til standard prosedyre; Forsøkene ble godkjent av University of Pittsburgh Institutional Animal Care og bruk komité.
1. Utarbeidelse av embryoer / larver
- For å gjennomføre tidsbestemt parringer, satt opp voksen hann og hunn Tg (fabp10a: CFP-NTR) s931 hemizygous eller homozygot fisker O / N og plassere en skillelinje mellom dem. Fjern denne skillelinjen følgende morgen når parring er ønsket. Samle embryoer ved å belaste vannet med en fin plast sil.
- Snu sil opp ned og skyll mesh overflaten med en fin strøm av egg vann utlevert fra en klemme flaske. Overfør 100 embryoer inn i en 100 mm petriskål med 25 ml vann egg. Hold ikke mer enn 100 embryoer per petriskål og heve dem ved 28 ° C.
- Å hemme pigmentering, legge phenylthiourea (PTU) inn i petriskåler før 10 timer etter befruktning (HPF), og heve embryos / larver inntil 80 HPF. Den endelige konsentrasjonen av PTU er 0,2 mm. FORSIKTIG: PTU er giftig. Bruk i samsvar med aktuelle retningslinjer for håndtering.
- Bedøve larvene ved tilsetning av 3-amino-benzosyre-etylester (Tricaine), ved en sluttkonsentrasjon på 0,016%, inn i Petri-skåler. Deretter bruker en epifluorescence mikroskop, sortere CFP-positive larver. Bruk larver med en lignende leverstørrelse og forkaste de som har en mindre eller større leveren.
MERK: noen CFP-positive larver, uavhengig av intensitet, kan brukes fordi det ikke er noen forskjell i omfanget av hepatocytter ablasjon mellom hemizygous og homozygot larver. FORSIKTIG: Tricaine er giftig. Bruk i samsvar med aktuelle retningslinjer for håndtering. - Fjern egg vann som inneholder Tricaine og legge egg vann supplert med 0,2 mM PTU. Hold embryo / larver ved 28 ° C.
2. Mtz Treatment
- Forbered fersk 10 mM Mtz løsning ved å løse opp 0,171 g Mtz pulver i en00 ml vann egg supplert med 0,2% DMSO og 0,2 mM PTU. For å fullstendig oppløse Mtz, blande oppløsningen ved RT under hurtig omrøring i 20-30 minutter. For å hjelpe oppløse Mtz og å forbedre Mtz gjennomtrengelighet inn larvene, legge DMSO ved utarbeidelse Mtz. FORSIKTIG: langvarig eksponering eller økt konsentrasjon av Mtz er giftig. Bruk i samsvar med aktuelle retningslinjer for håndtering.
- Separer larver i kontroll- og forsøksgrupper ved å overføre ønsket antall larver i to forskjellige 100 mm petriskål eller multi-brønn plate. For den eksperimentelle gruppen, holde larvene i 10 mM Mtz løsning; for kontrollgruppen, holde dem i egg-vann inneholdende 0,2% DMSO.
- Dekk platene eller petriskåler inneholdende Mtz løsning med aluminiumsfolie for å hindre at foto-inaktivering av Mtz, og inkuber ved 28 ° C. Varigheten av behandlingen avhenger av Mtz larvestadiet, og de transgene linje.
- Å observere lignende alvorlig hepatocytter ablasjon i
3. Analyse av Galledrevet Liver Regeneration
- Ved slutten av ablasjon perioden, fjerner Mtz løsningen fra platene. Vask Mtz-behandlet larver ved å tilsette 25 ml egg vann. Virvle plate 2-3 ganger for å vaske larvene før du kaster egg vann. Gjenta tre ganger og deretter fordype larvene gang i egg vann. For å unngå hjerteødem og larve død i Mtz-behandlede larver, legge til en lavere konsentrasjon av Tricaine, ved en sluttkonsentrasjon på 0,008%, for å immobilisere larver.
- For leveren analyse, undersøke leveren størrelsen på Mtz behandlede larver under en epifluorescence mikroskop med CFP filter. Vurdere hepatocytter ablasjon nivåer basert på den relative leverstørrelse: stor (non-ablated; 0-10% larver), medium (delvis ablated; 10-20%), og meget lite (fullt ablateres, 80-90%).
- Fjern larvene med ikke-tyreoideaektomi eller delvis ablasjon lever. Bare holde larver med en liten leveren, noe som er en indikasjon på alvorlig hepatocytter ablasjon. For leveren analyse ved regenerering 0 hr tidspunkt (R0h), høste larvene etter Mtz utvasking og CFP sortering. Ellers holder sortert larver i egg vann supplert med 0,2 mM PTU til den er klar for høsting.
- Overfør høstet larver inn i et 1,5 ml mikrosentrifugerør og erstatte egg vann med fiksering oppløsning av 3% formaldehyd i PEM-buffer. Inkuber røret på en rotator O / N ved 4 ° C.
- Bytt fiksering løsning med 1 ml PBSDT og rotere røret som inneholder larver på rotator for 5 min.
- Overfør den faste larver i en 100 mm petriskål inneholder PBSDT og bruke tang, manuelt fjerne eggeplomme og brystfinner under et dissekere mikroskop. Overfør opp tp 20 dissekert larver i en 1,5 ml tube. <li> Skift PBSDT løsning med 1 ml blokkeringsløsning og rock røret på en rotator ved romtemperatur i 2 timer.
- Erstatt blokkeringsløsning med 100 ul blokkeringsløsning inneholdende primære antistoffer. Sakte rocke røret på en rotator O / N ved 4 ° C.
- Fjern det primære antistoff-oppløsning og vaske med PBSDT 5 ganger i 10 minutter hver gang. Deretter tilsettes 100 ul blokkeringsløsning inneholdende sekundære antistoffer og rock den på en rotator ved romtemperatur i 2 timer.
- Vask 5 ganger med PBSDT for 10 min hver gang på RT etter rocking på en rotator.
- Orientere larvene sidelengs på et objektglass og tilsett en dråpe monterings media. Dekke dem forsiktig med et dekkglass og forsegle dekkglass med en spiker poleringsmaskin. Nå er det klart for konfokalmikroskopi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
MTZ behandling for 36 timer (A36h, A står for ablasjon) 3,5 til 5 dpf dramatisk redusert leverstørrelse (figur 1B). Etter Mtz utvasking, regnes som begynnelsen på leveren regenerering (R), sterk fabp10a: CFP-NTR og fabp10a: DsRed uttrykk dukket opp igjen i løpet av 30 timer (figur 1B). Den intrahepatisk gallenettverket, som målt ved ekspresjon av Alcam som er tilstede i membranen til Wien 22, først kollapset men ble reetablert ved 54 timer etter utvasking (R54h) (figur 1C). Disse data indikerer at leveren regenerering og gjenvinning raskt oppstå i vårt leverskade-modellen.
Figur 2 viser at regenererende hepatocytter er utledet fra becs. Tg (TP1: H2B-mCherry) s939 linje uttrykker et atom rød fluorescerende protein under kontroll av et element inneholdende 12 RBP-Jĸ bindingssteder 23. Dette Notch responsive element ser ut til å kjøre genekspresjon utelukkende i Wien i leveren 24; Det er imidlertid mulig at det driver genekspresjon i LPC fordi Notch signale er nært knyttet til LPC 25. Derfor tillater denne transgen linje for enkel påvisning av BEC, og sannsynligvis LPC, kjerner. Videre er den utvidede stabiliteten av H2B-mCherry fusjonsprotein tillater kortvarig avstamning tracing. De fleste H2B-mCherry + celler i regenererende lever ved R0h uttrykt Hnf4α (figur 2A), som er uttrykt i hepatocytter, men ikke i Wien, i styre leveren. Hepatocytter, som vurdert av fabp10a: CFP-NTR uttrykk, på R48h fortsatt beholdt TP1: H2B-mCherry uttrykk (figur 2B, piler). Disse data indikerer BEC omdannelse til hepatocytter ved alvorlig tap av hepatocytter, som ble ytterligere bekreftet ved permanent linjen 19 sporing.
Figur 1. En sebrafisk leverskade modell. (A) Scheme illustrerer perioder med Mtz behandling og lever regenerering. (B) 36 hr Mtz behandling sterkt redusert leverstørrelse og fabp10a: CFP og fabp10a: DsRed fluorescens på R0h; imidlertid sterk CFP og DsRed fluorescens dukket opp igjen på R30h. Pilene peker på leveren (li). (C) Confocal projeksjon utsikt over hele leveren immunostained med anti-Alcam antistoffer som merket becs. Den intrahepatisk galle nettverket ble kollapset på R0h men raskt reetablert på R54h. Prikkete regioner skissere leveren. Skala barer:. 100 (B), 20 (C) mikrometer Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
_upload / 52785 / 52785fig2.jpg "/>
Figur 2. becs gi opphav til hepatocytter ved alvorlig hepatocytter tap (A) Confocal projeksjon visninger av leveren viser Hnf4α (grønn) og TP1. H2B-mCherry (rød) uttrykk ved R0h. (B) Confocal enkelt-optiske delen bilder som viser fabp10a: CFP-NTR (grå) og TP1: H2B-mCherry (rød) uttrykk i leveren. mCherry uttrykket ble avslørt av anti-mCherry farging. Legg merke til den svake mCherry uttrykk i kjernen av CFP + hepatocytter (piler). Sterk mCherry + celler er becs. Skala barer:. 20 mikrometer Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Alvorlig, men ikke mild, utløser hepatocytter ablasjon galledrevet leveren regenerering. Derfor, etter Mtz behandling og utvasking, er det viktig å undersøke leverstørrelse på Mtz-behandlede larver, som kan vurderes ved indre CFP fluorescens fra fabp10a: CFP-NTR transgenet. Siden en liten prosentandel av Mtz-behandlede larver viser ikke-ablated (0-5%), eller delvis ablateres (10-20%) lever, er det viktig å sortere ut og bare analysere larver med en meget liten leveren, noe er et tegn på alvorlig hepatocytter ablasjon.
Selv i våre protokoll, behandlet vi sebrafisk larver med Mtz 3,5 til 5 dpf (en 36 timers behandlingsperiode), alternative trinn og varighet av behandlingen Mtz er også mulig. For eksempel, larver behandlet fra 5 til 6 dpf (en 24 timers behandlingsperiode) oppviste også alvorlige hepatocytter ablasjon, i likhet med den forannevnte 36 timers behandlingsperiode. Ytterligere to grupper uavhengig generertlignende fabp10a: NTR transgene linjer og rapporterte også om prosessen med galledrevet leveren regenerering følgende hepatocytter spesifikke ablasjon. Mens en gruppe larver behandlet med Mtz fra 6 til 7 dpf 21, en annen gjorde det 3,5 til 4,5 dpf, nådde konklusjoner 20 lignende. Siden hver fabp10a: NTR transgen linje kan fremvise et annet nivå av NTR uttrykk, bør varighet og dosering av Mtz behandling bestemmes separat for hver av de transgene linjen som brukes. Det kan også være nyttig for å generere en transgen linje med en forbedret versjon av den NTR-genet, hvor innføringen av tre punktmutasjoner fører til en økning i dets enzymatiske aktivitet 26. Denne mutant NTR vil resultere i en raskere ablasjon hendelse enn villtype-NTR 26. Dette er spesielt fordelaktig når villtype NTR kinetikk kan begrense muligheten for fullstendig celle ablasjon på et ønsket tidspunkt.
Siden hundrevis av larverkan samtidig gjennomgå hepatocytter ablasjon, kan dette sebrafisk leverskade modellen brukes til kjemiske skjermer for å identifisere små molekyler som kan undertrykke eller forsterke galledrevet leveren regenerering. For eksempel bruker denne modellen, Shin-gruppen ved Georgia Tech utført en kjemisk skjerm og fant flere Wnt agonister og Notch antagonister som tilrettelagt leveren regenerering 20. Vi utførte også en liten skala kjemisk skjerm og identifisert flere stoffer som kan undertrykke leveren regenerasjon (SK, TYC, JS, og DS, som forberedelse).
Marker analyser hos mennesker foreslo at becs kan bidra til regenerert hepatocytter i den syke leveren 5,6. Dr. Wanless 'gruppe nylig rapportert at en stor andel av parenkym i tilbakegang skrumplever ser ut til å være avledet fra LPC / becs hos mennesker 27, noe som tyder på viktigheten av BEC-drevet leveren regenerering i skrumplever regresjon. Gitt det faktum at becs hovedsakeligbidra til regenererende hepatocytter i sebrafisk leverskade modellen beskrevet her, vil denne modellen være et uvurderlig verktøy for å bestemme de cellulære og molekylære mekanismer bak BEC-drevet leveren regenerering. Forstå slike mekanismer vil gi betydelig innsikt i hvordan å øke medfødt lever regenerasjon hos pasienter med alvorlige leversykdommer. Videre, i kombinasjon med kjemiske skjermer, kan dette sebrafisk modellen være nyttig for å identifisere et potensielt stoff som kan lette medfødt lever regenerering i humane pasienter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne hevder at de ikke har noen konkurrerende økonomiske interesser.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 3-amino benzoic acid ethyl ester (Tricaine) powder | Sigma-Aldrich | A5040 | Make 0.4% (15 mM) tricaine stock : Bring 0.4 g tricaine to 100 mL with egg water. Adjust to pH 7. |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D8418 | |
| Metronidazole | Sigma-Aldrich | M1547 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8532 | |
| Formaldehyde | Sigma-Aldrich | 252549 | |
| Calcium sulfate dihydrate | Sigma-Aldrich | C3771 | |
| N-Phenylthiourea (PTU) | Sigma-Aldrich | P7629 | |
| Mounting media (Vectashield) | Vector Laboratories | H-1000 | |
| 100 x 15 mm petri dish | Denville Scientific Inc. | M5300 | |
| clear nail polish | Fisher Scientific | 50949071 | |
| fine forceps | Fine Science Tools | 11251-20 | Dumont #5 |
| glass slide | Fisher Scientific | 12-544-1 | |
| glass coverslip | Fisher Scientific | 12-540-A and 12-542-A | 18 x 18 mm |
| zn-5 (mouse anti-Alcam) | ZIRC | zn-5 | 1:10 dilution |
| goat anti-Hnf4a | Santa Cruz | sc-6556 (C-19) | 1:50 dilution |
| rat anti-RFP | Allele Biotechnology | ACT-CM-MRRFP10 | 1:300 dilution |
| AlexaFluor 647 AffiniPure Donkey Anti-goat IgG (H+L) | Jackson laboratories | 705-605-147 | 1:500 dilution |
| AlexaFluor 647 AffiniPure Goat Anti-mouse IgG (H+L) | Invitrogen | A21240 | 1:500 dilution |
| Cy3 donkey anti-rat IgG | Jackson laboratories | 712-165-150 | 1:500 dilution |
| dissecting microscope | Leica Microsystems | S6F | |
| epifluorescence microscope | Leica Microsystems | M205FA | |
| confocal microscope | Carl Zeiss | LSM700 | |
| egg water | 0.3 g/L of sea salts ‘Instant Ocean’ and 0.5 mM CaSO4 in distilled water. |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10X PBS | 25.6 g Na2HPO4·7H2O, 80 g NaCl, 2 g KCl, 2 g KH2PO4. Bring to 1 L with distilled water. Adjust pH 7. Autoclave for 20 min at 121°C. | ||
| 1X PBSDT | 0.2% Triton X-100 and 0.2% DMSO in 1 X PBS. | ||
| PEM buffer | 30.2 g PIPES, 761 mg EGTA, 1 mM MgSO4. Bring to 1 L with distilled water. Adjust pH 7. | ||
| Blocking solution | Mix 1 ml of heat-inactivated horse serum with 9 ml of 1X PBSDT. |
References
- Riehle, K. J., Dan, Y. Y., Campbell, J. S., Fausto, N. New concepts in liver regeneration. J Gastroen Hepatol. 26, 203-212 (2011).
- Fausto, N., Campbell, J. S. The role of hepatocytes and oval cells in liver regeneration and repopulation. Mechanisms of Development. 120, 117-130 (2003).
- Duncan, A. W., Dorrell, C., Grompe, M. Stem Cells and Liver Regeneration. Gastroenterology. 137, 466-481 (2009).
- Michalopoulos, G. K. Liver regeneration: Alternative epithelial pathways. Int J Biochem Cell B. 43, 173-179 (2011).
- Falkowski, O., et al. Regeneration of hepatocyte 'buds' in cirrhosis from intrabiliary stem cells. Journal of hepatology. 39, 357-364 (2003).
- Yoon, S. M., et al. Epithelial Cell Adhesion Molecule (EpCAM) Marks Hepatocytes Newly Derived from Stem/Progenitor Cells in Humans. Hepatology. 53, 964-973 (2011).
- Michalopoulos, G. K. Liver regeneration. J Cell Physiol. 213, 286-300 (2007).
- Michalopoulos, G. K. Liver Regeneration after Partial Hepatectomy Critical Analysis of Mechanistic Dilemmas. Am J Pathol. 176, 2-13 (2010).
- Yanger, K., et al. Adult hepatocytes are generated by self-duplication rather than stem cell differentiation. Cell stem cell. 15, 340-349 (2014).
- Schaub, J. R., Malato, Y., Gormond, C., Willenbring, H. Evidence against a Stem Cell Origin of New Hepatocytes in a Common Mouse Model of Chronic Liver Injury. Cell reports. 8, 933-939 (2014).
- Dovey, M., et al. Topoisomerase II alpha is required for embryonic development and liver regeneration in zebrafish. Molecular and cellular biology. 29, 3746-3753 (2009).
- Goessling, W., et al. APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development. Developmental Biology. 320, 161-174 (2008).
- Sadler, K. C., Krahn, K. N., Gaur, N. A., Ukomadu, C. Liver growth in the embryo and during liver regeneration in zebrafish requires the cell cycle regulator, uhrf1. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 1570-1575 (2007).
- Cox, A. G., et al. S-nitrosothiol signaling regulates liver development and improves outcome following toxic liver injury. Cell reports. 6, 56-69 (2014).
- North, T. E., et al. PGE2-regulated wnt signaling and N-acetylcysteine are synergistically hepatoprotective in zebrafish acetaminophen injury. Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 17315-17320 (2010).
- Curado, S., et al. Conditional targeted cell ablation in zebrafish: A new tool for regeneration studies. Developmental Dynamics. 236, 1025-1035 (2007).
- Pisharath, H., Rhee, J. M., Swanson, M. A., Leach, S. D., Parsons, M. J. Targeted ablation of beta cells in the embryonic zebrafish pancreas using E. coli nitroreductase. Mech Dev. 124, 218-229 (2007).
- Curado, S., Stainier, D. Y. R., Anderson, R. M. Nitroreductase-mediated cell/tissue ablation in zebrafish: a spatially and temporally controlled ablation method with applications in developmental and regeneration studies. Nat Protoc. 3, 948-954 (2008).
- Choi, T. Y., Ninov, N., Stainier, D. Y., Shin, D. Extensive conversion of hepatic biliary epithelial cells to hepatocytes after near total loss of hepatocytes in zebrafish. Gastroenterology. 146, 776-788 (2014).
- Huang, M., et al. Antagonistic interaction between Wnt and Notch activity modulates the regenerative capacity of a zebrafish fibrotic liver model. Hepatology. , (2014).
- He, J., Lu, H., Zou, Q., Luo, L. Regeneration of liver after extreme hepatocyte loss occurs mainly via biliary transdifferentiation in zebrafish. Gastroenterology. 146, 789-800 (2014).
- Sakaguchi, T. F., Sadler, K. C., Crosnier, C., Stainier, D. Y. Endothelial signals modulate hepatocyte apicobasal polarization in zebrafish. Curr Biol. 18, 1565-1571 (2008).
- Ninov, N., Borius, M., Stainier, D. Y. R. Different levels of Notch signaling regulate quiescence, renewal and differentiation in pancreatic endocrine progenitors. Development. 139, 1557-1567 (2012).
- Lorent, K., Moore, J. C., Siekmann, A. F., Lawson, N., Pack, M. Reiterative use of the notch signal during zebrafish intrahepatic biliary development. Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 239, 855-864 (2010).
- Itoh, T., Miyajima, A. Liver Regeneration by Stem/Progenitor Cells. Hepatology. 59, 1617-1626 (2014).
- Mathias, J. R., Zhang, Z., Saxena, M. T., Mumm, J. S. Enhanced cell-specific ablation in zebrafish using a triple mutant of Escherichia coli nitroreductase. Zebrafish. 11, 85-97 (2014).
- Stueck, A. E., Wanless, I. R. Regression of cirrhosis: The maturation sequence of buds arising from hepatocyte progenitor cells. Hepatology. 58, 235A (2013).
