Abstract
Kas biyopsi histolojik değerlendirilmesi nöromüsküler bozuklukların patoloji gelişimi ve ilerlemesinde anlamada vazgeçilmez bir araç olarak hizmet vermiştir. Ancak, bunu yapmak için, uygun bakım eksize ve optimum boyama elde etmek için dokular korunması sırasında alınması gerekir. Doku koruma yöntemlerinden biri parafin mumu ile gömerek sonra formaldehit dokuları tamir ve kapsar. Bu yöntem de morfoloji koruyan ve oda sıcaklığında uzun süreli depolama için izin verir, ancak hantal ve toksik kimyasalların kullanımını gerektirir. Bundan başka, etkili bir immün için antijen alma protokolleri gerektiren antijeni çapraz bağlayabilen, formaldehit tespit sonuçları. Aksine, dondurulmuş kesit tespiti gerektiren ve bu nedenle, biyolojik antijen yapısını muhafaza etmez. Bu yöntem aynı zamanda intraopera gibi hızlı histolojik değerlendirme gerektiren durumlarda özellikle yararlıdır hale sefer hızlı sırayla ayrı bir avantaj sağlarCerrahi biyopsi tive. Burada farklı histolojik ve immünolojik lekeleri ile görselleştirme için kas biyopsisi hazırlamak en etkili yöntem tarif.
Introduction
Kas histoloji incelenmesi nöromüsküler bozuklukların 1-4 farklı anlamada kritik bir rol oynamaktadır. Diğer tekniklerle birlikte, bu araştırmacıların patoloji tezahürü ve ilerlemesinin daha iyi bir fikir almak için ve aynı zamanda bir terapötik müdahale 5-10 etkinliğini değerlendirmek için gerekli olabilir izin verir. Eksizyon hemen önce fizyolojik durumunu korumak amacıyla Ancak, doğru olması için, dokular uygun şekilde korunması gerekir. Bu kaldırma, koruma, kesit ve boyama esnasında büyük dikkat gerektirir.
Dokular, ışık mikroskobu çalışma için iki farklı yolla hazırlanabilirler. (FFPE) bölümleri, gömülü ilk yöntem, formalin sabit parafin dokularının parafin mumu 11,12 ile gömülü önce% 10 doğal tamponlu formaldehit sabit gerektirir. tespit aşaması aynı zamanda çapraz bağlantılar endojen pr daha iyi morfolojisi korumak için yardımcı oluroteins böylece immün için karmaşık antijen alma prosedürleri gerektiren ve bu bölümlerde 12 enzimatik boyama olasılığını ortadan kaldırır. Dondurulmuş kesitler, diğer taraftan, önceden sabit veya işlenmesine gerek yoktur; Bu nedenle, proteinler doğal biyolojik konformasyonlar 13,14 muhafaza edebiliyoruz. Bundan başka, dondurulmuş kesitler de bazen sarkomlar ve diğer cerrahi biyopsi 15, ameliyat tanısında, örneğin gerekli olan hızlı gerçekleştirme süresi, izin verir. Düzgün yapılmazsa Ancak, bu yöntem histolojik inceleme için bölümler elverişsiz hale kas mimarisi değişiklikleri tanıtır zararı, don eğilimli. Bu kağıt düzgün muayene için en uygun boyama elde etmek için kas biyopsi hazırlamak için en etkili yöntem açıklayacağım.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Doku Hasat ve kas Dokuların Donma
- Izofluran (2-kloro-2- (diflorometoksi) -1,1,1-trifloro-etan) aşırı dozda fare öldürülür. Davlumbaz bu adımı gerçekleştirin ve böyle bir kurutucuda veya izofluran batırılmış bir pamuklu çubuk içeren bir fanus gibi bir ikincil çevreleme yöntemini kullanın.
- Sıkıca Kapkaççı sıkarak ölümü onaylayın. Böyle servikal dislokasyon olarak ötenazi ikincil yöntemi kullanın.
- Kaslar gevşek saç tellerinin yapışmasını azaltmak için% 70 alkol ile kürk ıslatın. Böyle 5. olarak ince bir forseps kullanarak uzuv kapalı cilt soyma.
- Dikkatle, altından kemiklerden (bu durumda tibialis anterior (TA)) ilgi kas ayrı tendonu başlayarak çıkarın.
- , Kas tüketim OCT (Optimum Kesme Sıcaklığı bileşik) onu karşılamak ve etiketli atılabilir dondurma kalıp üzerinde düz yatıyordu. Kas tai için normal fizyolojik oryantasyon (başında olduğundan emin olungermeden l). Alternatif olarak, küçük strafor karelere kas dondurmak ve kasların doğru uzunluğunu sağlamak için böcek işaretçilerine kullanarak pin.
- Sıvı azot kullanılarak çelik beherglasta 2-metilbütan (izopentan) soğutun. 5 dakika - Bu ortalama 3 alır. Beyaz çökeltiler beher alt ve duvarlarında oluşturmak başlayana kadar aralıklı karıştırarak tutun.
NOT: Bu durumda, izopentan uygun donma sıcaklığına ulaşmıştır (-150 ° C) - Soğutulmuş 2-metilbütana kasları içeren kalıpları batırın. 20 sn - 15 gastroknemius soleus (GS) ve triceps gibi 12 sn ve daha büyük kaslar - Böyle diyafram ve ekstansör digitorum longus 6 (EDL) gibi küçük kasları dondurun. Çok uzun bu çatlama neden olabileceğinden için kasları donma yok.
- Kuru buz üzerinde donmuş dokuları aktarın ve izopentan buharlaşması (bu işlem etrafında ortalama 15 alır unutmayın - 20 dakika) izin verin. Alüminyum folyo dokuları sarın ve u saklayınlökotrien antagonistlerinin düşük sıcaklık kesit kadar (-70 ° C ila -80 ° C).
2. Doku Blok Hazırlanır OCT Dokuları katıştırma
- Kuru buz üzerinde Taşımacılık dokuları çözülme önlemek için cyrostat için. Doku transferi ve bunları, 30 dakika için dengelenmeye bırakın (doku tam çözülme önlemek için -20 -24 ° C'ye ayarlanmış) bölme kriostada.
- Peltier defne soğutma açın. Kriyostat bu soğutma yoksa, hızlı OCT dondurmak için aerosol soğutma sprey kullanın. Bu donma hasara yol açabilir olarak gömme sırasında herhangi bir noktada kas çözülme izin vermeyin.
- Örnek diskte Ekim düzgün bir ince katman ekleyin ve soğumaya bırakın. OCT en durumdayken sıvı üst alt donmuş zaman, (boyuna kesitler için OCT enine kesitler ve paralel için OCT dik) doğru yönde de doku yerleştirin. Hızlı OCT dondurmak için aerosol soğutma sprey kullanın. Isı ext ile doku unembeded bölümünü dokununreaktöre verilmiş ve 45 saniye bekleyin.
- , Kas çevresinde Ekim başka ince bir tabaka ekleyin aerosol soğutma sprey ile sprey ve bir önceki adımda olduğu gibi ısı ayıklayın.
- Bütün kas kaplıdır kadar sprey ve ısı çıkarıcı soğutma aerosol bir arada kullanarak Ekim dondurmak hızla küçük artışlarla Ekim ekleyerek tutun.
- Doku bloğun üstünde ısı çıkarıcı koyun ve 5 dakika bekleyin.
3. Bölüm hazırlanması ve Kasların Orta göbek Bölgesi'nden Bölümler belirlenmesi
- Numune kafasına örnek monte edin. Diski sabitlemek için topuzu sıkın. Numune disk numune kafası ile iyi temas halinde olduğundan emin olun.
- ° -21 ila -24 ° C'ye odası sıcaklığını ayarlamak ve ayarlanan sıcaklık elde edilene kadar bekleyin.
- Kalınlık ayarlarını (7 mikron) ayarlayın; ilerleyen ya da kaba ve ince ayarlarını kullanarak bloğu geri çekilmeden tarafından blok kırpın.
- Bölümleri toplayınüzerinde slayt kesme bölümlerinin yapışmasını kolaylaştırmak için zıt ücretleri arasındaki cazibe kullanarak bölümleri üzerine slayt üst basarak pozitif yüklü mikroskop slaytlar önceden ısıtılmış.
- Bölümlerin enine kesit alanı (CSA) ölçerek orta göbek bölümleri tanımlamak. Mikroskop bağlı olduğu bilgisayarda bu kullanarak görüntüleme yazılımı yapın.
NOT: Faz kontrastlı görüntüler alınır ve tüm kas çevresi yazılım programına bir izleme fonksiyonu üzerinden ölçülür. Bu, her iki CSA ve asgari gelincik çapı ölçümleri (bir tanecik karşıt taraflarında iki paralel teğet arasındaki en küçük mesafe olarak ifade edilir lif enine kesit boyutunun ölçü) ürün elde edilir. Not: CSA ve minimum gelincik çap ölçümleri plato başladığınızda, orta göbek ulaşıldı. - Envanter gelecekteki boyama -80 ° C'de slaytlar arşivlemek ve.
NOT: lekelenme için Ekim öncesinde kaldırılması gerekmezg işlemleri. Slaytlar kaplandı sonra, hemen boyanabilir hazırız.
4. Boyama
NOT: Ayrıntılı adım adım prosedürleri ürün veri sayfasında bulunabilir ve boyama işlemleri için takip edilmesi gerekirken, kişisel optimizasyon optimum boyama elde etmek için gerekli olabilir.
- Ortam (tabloya bakınız), montaj, su ile karışmayan olduğu için, (% 70,% 95 ve% 100 etanol içinde 2 dk) alkol artan sınıflar üzerinde kaydığı dihidrat ve ksilen (5 dakika için% 100) sağlamak için bunları temizlemek slaytlar zamanla opak olmazlar.
- Bölümleri lamel ve kurumaya bırakın. Mikroskop ile görüntü görüntüleme yazılımı ile donatılmış.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
hasat ve dokuların dondurulması için set-up Şekil 1'de görülebilir. Kesilen dokular kurutma (Şekil 1A) önlemek için PBS batırılmış bir gazlı bez üzerine saklanmalıdır. Dokular da doğru morfolojisi (Şekil 1B) sağlamak için Ekim batırılmış ve cryo kalıp düzenlendiği doğru yönde ve mümkün olduğunca fizyolojik uzunluğuna yakın olmalıdır histolojik analiz için kullanılmak üzere seçildiğinde. Bir doku dondurma için müsait izopentan Çamur daha sonra sıvı azot içinde izopentan soğutulur ve küçük beyaz çökeltiler altta görünen kadar karıştırılarak elde edilebilir. Bu noktada, ortam (Şekil 1C) dondurma için uygundur. Dokular, doku (Şekil 1D) büyüklüğü / kalınlığına bağlı olarak soğutulmuş izopentan içinde 6-15 sn arasında dondurulmuş olmalıdır. Donma ardından, kas -80 <kuru buz üzerinde muhafaza edilmelidir bu noktada kireçli beyaz görünmesini ve daha sonra transfer olacakstrong> ° C dondurucu.
Giderek Ekim doku gömme kas kalıbın hazırlanması için gereken Kriyostat ayarı ve katkı maddeleri, Şekil 2'de gösterilmiştir. Kriyostat -20 ve -24 ° C (Şekil 2A) arasında ayarlanmalıdır. OCT ve Freeze-It kesit için uygun blok oluşturmak için hazır olmalıdır. Kriyostat içi manipüle ve doku sağlamak ellerle temas asla çünkü slayt yapma yanı sıra doku bloğu taşınması için cımbız için kesilmiş bölümleri düzleştirmek için küçük fırçalar olmalıdır donmuş (Şekil 2B) kalır. Ekim kesit bloğu oluşturmak için dokuya ilave edilmelidir ama Freeze-It sprey ve daha sonra Resimdeki ısı çıkarıcı (Şekil 2C) ile soğutulan hemen dondurulmalıdır. Enine kesitler için, doku bu bıçak (Şekil 2D) dik yönlendirilmiştir, böylece numune başına yerleştirilmelidir. Sehazrl istenilen kesit kalınlığı (5-10 um dokuya bağlı olarak) elde etmek için ayarlanmalıdır.
Doğru donmuş ise doku yüz montaj işlemi sırasında yanlış dondurulmuş ve çözülmüş bir doku kırmızı / pembe gözükecektir. Kireçli beyaz olmak 3 yanlış ele numuneler için temsili dokular (Şekil 3A) ve düzgün ele örnekleri göstermektedir gerekir (Şekil 3B) .
ortası göbek bölgesi Faz kontrast optik ve görüntü analizi yazılımı ile donatılmış bir mikroskop kullanılarak CSA ve minimum gelincik çapları ölçülerek tespit edilir. Analiz yazılımı temsili bir ekran görüntüsü. Şekil 4'te gösterilen Hematoksilen ve bir dondurarak zarar biyopsi ile birlikte uygun bir şekilde donduruldu ve kesitli biyopsi boyanan görüntü eosin tibialis anterior (TA) kasları, Şekil 5'te gösterilmektedir. Doğru olacaktır işlenir Bölümler Tutarlı morfolojik özelliklerinigy ve hatta boyunca boyama (Şekil 5A). Yanlış. Donma hasarlı veya zamanından önce morfoloji birden molalar ve "parçalanmış buğday" (Şekil 5B) görünüme sahip görünür çözdürülen kasları işlenen optimum immün için 6 görünen programları nemlendirilmiş odasına Şekil. Slaytlar, parafilm ile kaplı ıslak kağıt havlu üzerine tuttu ve immün sırasında bölümlerin kurumasını önlemek için küçük bir kutu içinde mühürlü olmalıdır. 7 düzgün hazırlanmış ve lekeli olan örnek bir immünohistokimyası slayt tasvir Şekil.
Şekil 1. Hazırlık ve uygun doku dondurulması için kurulmuş. (A) Kesilen dokular PBS batırılmış gazlı bez üzerine saklanmalıdır. (B) histolojik seçilenler dokularınAnaliz Ekim batırılmış ve mümkün olduğunca fizyolojik uzunluğuna yakın (tendonu karnından itibaren) uygun yönde cryo kalıp üzerinde ortaya koydu. Doku için müsait izopentan (C) içermiştir. Not: küçük beyaz çökeltiler altında görüntülenir. (D), izopentan içinde bekletildikten sonra Dondurulmuş doku. Not:. Kireçli beyaz görünüm bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Kesit için gerekli 2. Cryostat ayarları ve malzemeyi Şekil. (A) Cryostat -20 -24 ° C ile Ekim ve aerosol sprey soğutma hazır arasında ayarlayın. Küçük fırçalar ile tam kriyostat kurulumu içinde (B) işlemek ve kesim secti düzleştirmek içinslayt doku bloğun kullanım için yapım yanı sıra cımbız için ons. (C) Dondurulmuş doku bloğu hazır ısı çıkarıcı (beyaz ok) ile soğutulacak. Kesilecek hazır kafa montaj ayarlanmış (D) Doku bloğu. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil doğru ve yanlış korunmuş kasların 3. Temsilcisi dokular. (A) Yanlış donmuş veya ele (B) Düzgün donmuş ve kas ele. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Nikon görüntüleme yazılımı kullanarak TA kas kesit alanı Şekil 4. belirlenmesi. CSA ve min gelincik çapının ölçümü için yazılım hayal kullanılarak çember olmuştur kas bölümünün faz kontrast görüntü ekran görüntüsü. Bu daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız rakam.
Düzgün ve yanlış hazırlanmış H & E lekeli kasların Şekil 5. Temsilcisi görüntüler. (A) Düzgün bölümü işlenmiş. (B) Yanlış işlenmiş donma hasarlı kas bölümü. Lütfen cliBu rakamın büyük halini görmek için buraya ck.
Şekil 6. immün için uygun Nemlendirilmiş odası. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Düzgün hazırlanmış ve lekeli slayt. Slide Şekil 7. Örnek immünohistokimyası slayt Fibronektin (yeşil) ve DAPI (mavi) ile boyandı edilmiştir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Histoloji ve immünohistokimya çeşitli nöromüsküler bozukluklar tezahürü ve patoloji ilerlemesini anlamada anahtar bir araç olarak kullanılmıştır. Klasik kas biyopsileri ilk formaldehit sabit ve daha sonra parafin mumu ile gömüldü. Formaldehit tespit mimari dokusu koruyan ve oda sıcaklığında doku depolama ve taşıma izin verirken, aynı zamanda doğru immün elde etmek için daha ileri adımlar gerektiren enzimler ve çapraz bağlarının proteinleri inaktive eder. Bu sorun donmuş kesitlerin kullanımı ile elimine edilir ancak bu yöntem en iyi boyama sonuçları ve doğru yorumlama 14,15 elde eşsiz teknik zorluklar sunar.
İlk olarak, otoliz ve ayrıştırma vücuttan çıkarıldıktan hemen sonra başlar başlamaz numuneler cerrahi eksizyon hemen sonra dondurulabilir esastır. Dokular ayrıca boyutuna bağlı olarak değişir zaman uygun bir miktarı için hızlı bir şekilde ve iyice dondurulabilir/ Dokunun kalınlığı. Bu doğru yapılmadığı takdirde, histolojik değerlendirme için yararsız doku render oluşacak hasarı dondurma. Dondurma sonra, dokular hemen kesit kadar ultra düşük sıcaklıkta (-80 ° C), dondurucu aktarılır, daha sonra kuru buz üzerinde saklanır ve olmalıdır. Bu dokular donma-çözülme doku mimarisi zarar verir, çünkü kuru buz üzerinde olmadan dondurucudan çıkarıldı gerektiğini dikkat etmek önemlidir.
Önemi bir başka not zaman histolojik analiz yapmak her zaman analiz arasındaki bütünlüğü sağlamak için ilgi doku aynı bölümünü analiz özen etmektir. Bu midbelly analizi yaparak kas bölümleri için yapılabilir. Bu en büyük kesit alanına sahiptir ve dolayısıyla kalın olduğu ve kas parçasıdır. Eğer gerçekten midbelly kesit sağlamak için, daha sonraki bölümlerde CSA histolojik görüntüleme yazılımı kullanılarak ölçülmelidir. Measuremkesit alanı plato başlayıncaya kadar hastalar yapılmaya devam edilmelidir. Bu durumda bir kez, orta göbek ulaşıldı; Sadece doku bu kısmı karşılaştırmalar arasında bütünlüğü sağlamak için histolojik analiz için kullanılmalıdır.
2 saat - kesit tamamlanmış ve slaytlar hazırlanmıştır sonra, 1, oda sıcaklığında kurumaya bırakıldı edilmelidir. Kurutma slayt bölümün düzgün yapışması için izin verir ve aynı zamanda ° C derin dondurucuda -80 transfer aşağıdaki kristalize aşırı su engeller. Bu donma-çözülme döngüleri önlemek için analiz için slaytlar seçerken slaytlar da sadece kuru buz üzerinde ele alınması gerektiğine dikkat etmek önemlidir. Slaytlar boyama için seçilmiştir kez optimum sonuçlar elde edilene kadar leke deneme amaçlı olarak ilk uyulmalıdır ile protokoller dahil. Immün yaparken, o emin slaytlar işlem boyunca kurumasını yok yapmak önemlidir. Slaytlar kurutulması geçici etkileşimi neden olabilirs inkübasyon aşağıdaki bozulmadan kalması için. Bu etkileşimler, yıkama sırasında çıkarılır ve spesifik olmayan boyama neden olamaz. Kurutma nemli bir atmosferde slaytlar tutarak önlenebilir. Küçük bir slayt kutusuna mühürlü nemli bir kağıt havlu üzerine parafilm ve slaytlar ile kaplı bölümleri ile inkubasyon gerçekleştirme işlemi sırasında herhangi bir noktada olacak değil kuru slaytlar sağlamak için yeterlidir.
Histoloji morfolojisi ve patoloji çeşitli yönleriyle görselleştirmek önemli bir araçtır. Biraz önemsiz olsa da, dokuların hazırlanmasında histoloji için kullanılacak büyük bir özen büyük önem taşımaktadır. Donma eksizyon, kesit ve boyanması itibaren, dokular dondurma zarar görmemesi ve en doğru görüntüler mümkün verecek şekilde ele alınmalıdır. Uygun koruma olmadan, boyama doğru fizyolojisini yansıtmaz ve bu nedenle yanlış yorumlanmasına yol açar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cryostat | Leica CM 1850 | Leica Microsystems Inc. | Buffalo Grove, IL 60089 U.S.A., office phone 1-800-248-0123 Alternative: Richard Allen Scientific |
| Microscope | Nikon Eclipse 50i | Nikon Instruments Inc. | 1300 Walt Whitman Road, Melville, N.Y. 11747-3064 U.S.A., Phone: 1-631-547-8500 Alternative: Olympus |
| Image analysis software | Nikon Imaging Software Basic Research | Nikon Instruments Inc. | 1300 Walt Whitman Road, Melville, N.Y. 11747-3064, U.S.A., Phone: 1-631-547-8500 Alternatives: Image J, Metamorph |
| Isoflurane | 14043-220-05 | JD Medical Dist. Co., Inc. | 1923 West Peoria Avenue, Phoenix, AZ 85029 U.S.A. |
| OCT | 4583 | Sakura Inc. | Torrence, CA 90501 U.S.A. Alternative source: Leica Microsystem |
| Freeze It | 23-022524 | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA, 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Disposable tissue mold | 22-363-554 | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Colorfrost plus slides | 9991001 | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Acetone | 650501-4L | Sigma-Aldrich | 3050 Spruce Street, St. Louis, MO 63103 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Ethyl alcohol | HC-1300-1GL | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| 2-methyl butane | M 32631-SL | Sigma-Aldrich | 3050 Spruce Street, St. Louis, MO 63103 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Xylene | HC-7001GA | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Cytoseal 280 | 8311-4 | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Hematoxylin Gill #3 | CS402-1D | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
| Eosin | 6766007 | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 U.S.A. Alternative source: VWR Scientific |
References
- Bonnemann, C. G., et al. Diagnostic approach to the congenital muscular dystrophies. Neuromuscular disorders : NMD. 24, 289-311 (2014).
- Caughey, J. E., Pachomov, N.
- Fetterman, G. H., Wratney, M. J., Donaldson, J. S., Danowski, T. S. Muscular dystrophy. I. History, clinical status, muscle strength, and biopsy findings. AMA J Dis Child. 91, 326-338 (1956).
- Platzer, A. C., Chase, W. H. Histologic Alterations in Preclinical Mouse Muscular Dystrophy. The American journal of pathology. 44, 931-946 (1964).
- Mercuri, E., et al. Muscle magnetic resonance imaging involvement in muscular dystrophies with rigidity of the spine. Ann Neurol. 67, 201-208 (2010).
- Tasca, G., et al. Different molecular signatures in magnetic resonance imaging-staged facioscapulohumeral muscular dystrophy muscles. PloS one. 7, e38779 (2012).
- Girgenrath, M., Dominov, J. A., Kostek, C. A., Miller, J. B. Inhibition of apoptosis improves outcome in a model of congenital muscular dystrophy. The Journal of clinical investigation. 114, 1635-1639 (2004).
- Kumar, A., Yamauchi, J., Girgenrath, T., Girgenrath, M. Muscle-specific expression of insulin-like growth factor 1 improves outcome in Lama2Dy-w mice, a model for congenital muscular dystrophy type 1A. Human molecular genetics. 20, 2333-2343 (2011).
- Mehuron, T., et al. Dysregulation of matricellular proteins is an early signature of pathology in laminin-deficient muscular dystrophy. Skeletal muscle. 4, 14 (2014).
- Yamauchi, J., Kumar, A., Duarte, L., Mehuron, T., Girgenrath, M. Triggering regeneration and tackling apoptosis: a combinatorial approach to treating congenital muscular dystrophy type 1 A. Human molecular genetics. 22, 4306-4317 (2013).
- Sheriffs, I. N., Rampling, D., Smith, V. V. Paraffin wax embedded muscle is suitable for the diagnosis of muscular dystrophy. Journal of clinical pathology. 54, 517-520 (2001).
- Fox, C. H., Johnson, F. B., Whiting, J., Roller, P. P.
- Maccarty, W. C. The Diagnostic Reliability of Frozen Sections. The American journal of pathology. 5, 377-380 (1929).
- Shi, S. R., et al. Evaluation of the value of frozen tissue section used as 'gold standard' for immunohistochemistry. Am J Clin Pathol. 129, 358-366 (2008).
- Turan, T., et al. Accuracy of frozen sections for intraoperative diagnosis of complex atypical endometrial hyperplasia. Asian Pacific journal of cancer prevention : APJCP. 13, 1953-1956 (2012).
