Here we demonstrate the most efficient methods for freezing, embedding, cryosectioning, and staining of muscle biopsies to avoid freezing artifacts.
Kas biyopsi histolojik değerlendirilmesi nöromüsküler bozuklukların patoloji gelişimi ve ilerlemesinde anlamada vazgeçilmez bir araç olarak hizmet vermiştir. Ancak, bunu yapmak için, uygun bakım eksize ve optimum boyama elde etmek için dokular korunması sırasında alınması gerekir. Doku koruma yöntemlerinden biri parafin mumu ile gömerek sonra formaldehit dokuları tamir ve kapsar. Bu yöntem de morfoloji koruyan ve oda sıcaklığında uzun süreli depolama için izin verir, ancak hantal ve toksik kimyasalların kullanımını gerektirir. Bundan başka, etkili bir immün için antijen alma protokolleri gerektiren antijeni çapraz bağlayabilen, formaldehit tespit sonuçları. Aksine, dondurulmuş kesit tespiti gerektiren ve bu nedenle, biyolojik antijen yapısını muhafaza etmez. Bu yöntem aynı zamanda intraopera gibi hızlı histolojik değerlendirme gerektiren durumlarda özellikle yararlıdır hale sefer hızlı sırayla ayrı bir avantaj sağlarCerrahi biyopsi tive. Burada farklı histolojik ve immünolojik lekeleri ile görselleştirme için kas biyopsisi hazırlamak en etkili yöntem tarif.
Kas histoloji incelenmesi nöromüsküler bozuklukların 1-4 farklı anlamada kritik bir rol oynamaktadır. Diğer tekniklerle birlikte, bu araştırmacıların patoloji tezahürü ve ilerlemesinin daha iyi bir fikir almak için ve aynı zamanda bir terapötik müdahale 5-10 etkinliğini değerlendirmek için gerekli olabilir izin verir. Eksizyon hemen önce fizyolojik durumunu korumak amacıyla Ancak, doğru olması için, dokular uygun şekilde korunması gerekir. Bu kaldırma, koruma, kesit ve boyama esnasında büyük dikkat gerektirir.
Dokular, ışık mikroskobu çalışma için iki farklı yolla hazırlanabilirler. (FFPE) bölümleri, gömülü ilk yöntem, formalin sabit parafin dokularının parafin mumu 11,12 ile gömülü önce% 10 doğal tamponlu formaldehit sabit gerektirir. tespit aşaması aynı zamanda çapraz bağlantılar endojen pr daha iyi morfolojisi korumak için yardımcı oluroteins böylece immün için karmaşık antijen alma prosedürleri gerektiren ve bu bölümlerde 12 enzimatik boyama olasılığını ortadan kaldırır. Dondurulmuş kesitler, diğer taraftan, önceden sabit veya işlenmesine gerek yoktur; Bu nedenle, proteinler doğal biyolojik konformasyonlar 13,14 muhafaza edebiliyoruz. Bundan başka, dondurulmuş kesitler de bazen sarkomlar ve diğer cerrahi biyopsi 15, ameliyat tanısında, örneğin gerekli olan hızlı gerçekleştirme süresi, izin verir. Düzgün yapılmazsa Ancak, bu yöntem histolojik inceleme için bölümler elverişsiz hale kas mimarisi değişiklikleri tanıtır zararı, don eğilimli. Bu kağıt düzgün muayene için en uygun boyama elde etmek için kas biyopsi hazırlamak için en etkili yöntem açıklayacağım.
Histoloji ve immünohistokimya çeşitli nöromüsküler bozukluklar tezahürü ve patoloji ilerlemesini anlamada anahtar bir araç olarak kullanılmıştır. Klasik kas biyopsileri ilk formaldehit sabit ve daha sonra parafin mumu ile gömüldü. Formaldehit tespit mimari dokusu koruyan ve oda sıcaklığında doku depolama ve taşıma izin verirken, aynı zamanda doğru immün elde etmek için daha ileri adımlar gerektiren enzimler ve çapraz bağlarının proteinleri inaktive eder. Bu sorun donmuş kesitlerin kullan?…
The authors have nothing to disclose.
We would like to thank Alex Miller for manuscript revisions. This work was supported with the research grants awarded to M.G. from Cure CMD, Struggle Against Muscular Dystrophy (SAM) and Muscular Dystrophy Association (218938).
Cryostat | Leica CM 1850 | Leica Microsystems Inc. | Buffalo Grove, IL 60089 United States, office phone 1-800 248 0123 Richard Allen Scientific |
Microscope | Nikon Eclipse 50i | Nikon Instruments Inc. | 1300 Walt Whitman Road, Melville, N.Y. 11747-3064, U.S.A. Phone: +1-631-547-8500 Olympus |
Image analysis software | Nikon Imaging Software Basic Research | Nikon Instruments Inc. | 1300 Walt Whitman Road, Melville, N.Y. 11747-3064, U.S.A. Phone: +1-631-547-8500 Image J, Metamorph |
Isoflurane | 14043-220-05 | JD Medical Dist. Co., Inc. | JD Medical Distrubuting Co., Inc 1923 West Peoria Avenue Phoenix, Arizona 85029 |
OCT | 4583 | Sakura Inc. | Sakrua Fintek, USA, Torrence, CA 90501, USA Leica Microsystem |
Freeze It | 23-022524 | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA, USA, 02139 VWR Scientific |
Disposable tissue mold | 22-363-554 | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA, USA, 02139 VWR Scientific |
Colorfrost plus slides | 9991001 | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA, USA, 02139 VWR Scientific |
Acetone | 650501-4L | Sigma-Aldrich | 3050 Spruce Street, St.Louis MO, 63103 VWR Scientific |
Ethyl alcohol | HC-1300-1GL | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA, USA, 02139 VWR Scientific |
2-methyl butane | M 32631-SL | Sigma-Aldrich | 3050 Spruce Street, St.Louis MO, 63103 VWR Scientific |
Xylene | HC-7001GA | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA, USA, 02139 VWR Scientific |
Cytoseal 280 | 8311-4 | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA 02139 VWR Scientific |
Hematoxylin Gill #3 | CS402-1D | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA, USA, 02139 VWR Scientific |
Eosin | 6766007 | Thermofisher | 790 Memorial Dr, Cambridge, MA, USA, 02139 VWR Scientific |