Introduction
Belysning af de begivenheder, der ligger til grund hjertekammeret svar på både iskæmi og reperfusion er afgørende at forbedre behandlingen af myokardieinfarkt 1 og hjerte kirurgiske procedurer, der kræver aorta cross-fastspænding 2. Mens in vivo modeller for iskæmisk reperfusionsbeskadigelse tillader meget nyttig endepunktsanalyse, er de ikke så effektive til at studere de funktionelle virkninger af iskæmisk reperfusionsbeskadigelse akut i realtid. Derudover in vivo iskæmisk reperfusion modeller frembringer generelt en betydelig variabilitet i infarktstørrelse, og direkte levering af lægemiddel til hjertet på tidspunktet for reperfusion er udfordrende. Udnyttelsen af et Langendorff isoleret hjerte til undersøgelse iskæmisk reperfusionsbeskadigelse muliggør tidstro funktionel vurdering af farmakologiske behandlinger, ensartet område med infarkt væv og øjeblikkelig levering af lægemiddel direkte til myokardiet.
Først beskrevne by Oscar Langendorff i 1895 3, Langendorff isoleret hjerte er en robust model til at studere iskæmi reperfusionsskade, der er blevet brugt i iskæmireperfusion forskning for de sidste 40 år 4,5. Her er nogle modifikationer foretages for at optimere det isolerede hjerte til funktionel analyse. In situ kanylering af aorta, mens hjertet slår sikrer, at hjertet ikke oplever iskæmisk prækonditionering, der kunne ændre resultaterne af iskæmisk reperfusion forsøg 6. For at lette dette, er en tracheotomi udføres, tillader ventilation og sikring fysiologisk stabilitet af rotte under operationen. Hjertet bliver derefter fastgjort til et glas vandkappe spiral søjlen gennem hvilken Krebs Henseleit puffer leveres via retrograd perfusion direkte ind i aorta. En saltvand-fyldte ballon indsættes i den venstre ventrikel og fæstnet til en tryktransducer, som giver mulighed for tidstro måling af tryk inde fra ventriklen end beregning af flere funktionelle parametre. Ved afslutningen af eksperimentet, hjertet skyllet med koldt saltvand at standse sammentrækning og lynfrosset i flydende nitrogen for at muliggøre nedstrøms analyse af DNA, RNA og protein niveauer. Således ændres, Langendorff perfunderet hjerte fungerer som et effektivt system til direkte overvågning af den fysiologiske effekt af farmakologiske interventioner på noget tidspunkt akut under iskæmi reperfusionsskade.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle procedurer, der er anført her, er blevet godkendt af Institutional Animal Care og brug Udvalg på Medical University of South Carolina. De her beskrevne eksperimenter er akutte, ikke-overlevelse eksperimenter. Som sådan er der ingen brug af øjet salve og en steril drift suite er ikke påkrævet. Eutanasi opnås ved afblødning under høst af hjertet.
1. Eksperimentel Forberedelse
- Opsætning enten et konstant tryk eller konstant flow Langendorff Perfusion Apparatus 4.
- Forbered 4 l modificeret Krebs Henseleit puffer (i mM: 112 NaCI, 5 KCI, 1,2 MgSO4, 1 K 2 HPO 4, 1,25 CaCl2, 25 NaHCO3, 11 D-glucose, 0,2 octansyre, pH = 7,4).
- Lav 10x lager buffere.
- Opløs NaCl, KCl, MgSO4, og K 2 HPO 4 i 3 L ultrarent vand.
- Opløs CaCl2 i 500 ml ultrarent vand with 40 ml 1 N HCI.
- Tilsæt langsomt CaCl2 opløsning til bufferen lavet i 1.2.1.1. Tilsæt så ultrarent vand til total 4 L. Lad at omrøre i 1 time før filtrering gennem et 0,8 um filter. Opbevares ved 4 ° C.
- Opløs NaHCO3 i 4 l ultrarent vand. Der omrøres i 1 time før filtrering igennem ved 0,8 um filter. Opbevares ved 4 ° C
- Kombiner 400 ml 10x Krebs Henseleit puffer med 400 ml 10x NaHCO3-puffer. Tilsæt så ultrarent vand til total 4 L. Opløs glucose og octansyre under omrøring. Filtreres gennem 0,8 um filter.
- Lav 10x lager buffere.
- Forbered system til hjerte.
- Tilsættes 2 liter filtreret puffer til en 4 L flaske anbringes 38 ovenfor stophanen fastgjort til aorta kanyle. Dette vil levere et perfusionstryk på 70-80 mmHg til hjertet, hvilket er den anbefalede perfusionstryk 4.
- Indsæt gas dispersion bobler i bufferen i flasken.
- Kør pufferen gennem systemet, og Sørg for at fjerne eventuelle bobler inde i slangen.
- Tænde gas (95% O2 / 5% CO2) i mindst 30 minutter før hjertet skal placeres på systemet. Brug en gasstrøm sonde og blodgasapparat at verificere iltmætning.
- Forbered kirurgiske forsyninger og ballon.
- For høst af hjerte, forberede et par af 6,75 "kirurgiske sakse, et par 4.5" saks, to par hemostats to sæt caramalt pincet, to sprøjter med 27 G kanyler, 2 stykker af 0-guage silkesutur (ca. 15 cm i længde), en 1/16 inch barbed kanyle, og en tracheal kanyle.
- For at samle trakealkanyle, lim et kort stykke 1/16 inch diameter plastrør til en Y-konnektor.
- For at samle apparater ballon: vedhæfte en sonde nål til et stykke 1/16 tommer rør, derefter vedhæfte slangen til tryktransducer boliger. En lille sprøjte fastgjort til den anden side af trykket transducer boliger vil muliggøre oppustning og tømning af ballonen.
- Skære et kvadrat med plastfolie og sted spidsen af en sonde nål i midten. Wrap plastikfolie omkring sonde nål.
- Fyld ballonen med saltvand og binde off med to suturer. Pump ballonen for at sikre der ikke er utætheder. Den volumen saltvand inden den oppustede ballon bør være omkring 200 pi, men kan variere afhængigt af størrelsen af rotten.
- Alternativt kan du bruge en latex finger barneseng i stedet for plastic wrap. Anbring sonde nål inden finger barneseng, fylde med saltvand og binde off.
2. Høst hjertet
- Fastholde en Sprague Dawley rotte under anvendelse af en decapicone eller anden manuel fastspændingsudstyr. Rotte afvejes.
- Administrere ketamin / xylazin-blanding (0,85 mg / kg ketamin og 0,15 mg / kg xylazin) via intraperitoneal injektion at bedøve rotte. Denne dosis af bedøvelsesmiddel vil give tilstrækkelige bedøvelse til20-40 min, men proceduren bør afsluttes så hurtigt som muligt efter bedøvelsen er bekræftet.
- Bekræft rette grad af anæstesi ved afprøvning tå pinch refleks.
- Tracheotomi
- Fjerne skindet fra midten forpote til base af kæben, under anvendelse hemostats at løfte skindet og saks for at gøre indsnit. Holde skindet ophøjet at adskille den fra den underliggende muskel, tillader en at klippe langs skindet og fjern det.
- Ved hjælp hemostats, løft kirtelvæv og lave en vandret snit i fascia ringere end den kirtelvæv. Brug hemostats at sprede snit åben, pas på ikke at nick jugularis vener.
- Ved hjælp hemostats, knivspids muskel overliggende luftrøret, og ved hjælp af en saks gør et tværgående snit i musklen lige under spidsen af hemostats. Hjælp hemostats, spredt væv fra hinanden for at afsløre trachea.
- Sæt forsigtigt hemostats under luftrøret, clearing fascia samtidig forløber ved forsigtigt fremrykkende og tilbagetrække hemostats.
- Når hemostats med succes placeret bag luftrøret, knivspids 0-0 silke sutur med hemostats og hemisect luftrøret med en lille, skarp saks.
- Indsæt tracheale kanyle ind i hemisected luftrøret, træk sutur bag luftrøret, og binde suturen omkring kanyle luftrøret, forankring suturen til Y-lysken af kanylen med et kirurger knude.
- Under anvendelse af en 27 G nål, injicere 1.000 U / kg heparin i halsvenen og lad det cirkulere i 30 sek.
- Thoracotomi
- Fjern skind fra midten af maven til medio forpote region ved at knibe med hemostats og skære med en saks.
- Lav en ¾ tommer tværgående snit i mavemuskel væggen, lige under mellemgulvet.
- Lav en lodret snit op bugvæggen og brystvæggen, skæring langs brystbenet.
- Skær mellemgulvet tilbage bilateralt, derefter spredt brystkassen til at afsløre hjerte, klemme brystkasse med hemostats at sikre det forbliver spredning. Ved hjælp hemostats, forsigtigt fjerne thymus, udsætter den opstigende aorta.
- Drille hemostats gennem aorta løkke, fremme og tilbagetrække hemostats og forsigtigt sprede fascia at tillade spidsen af hemostats igennem.
- Brug hemostats at trække 0-0 silkesutur bag aorta ascendens, binde sutur i en løs halv-knude.
- Drej stophanen for at starte strømmen af perfusion buffer, hemisect aorta og straks indsætte kanylen i aorta lumen. Hurtigt cinch en halv knude og fuldføre knude, stramme grundigt.
- Brug en saks til at dissekere hjerte væk fra de store skibe, fjerne hjerte fra bryst og tillægger perfusion kolonne.
- Trim væk overskydende lungevæv og tillade hjerte at ækvilibrere på kolonnen for omkring 15 min før indføring af ballon. Brug en normal strømningshastighed på puffer gennem hjertet på 10-20 ml / min.
3. Langendorff Perfusion og iskæmisk reperfusionsbeskadigelse
- Placering af LV præssure ballon
- Punktere ballonen mens rullende ind i en kegle form og drej stophane at sikre ballonen forbliver deflateret.
- Excise venstre atrium med en lille saks til at eksponere adgang til mitralklap.
- Sæt ballon gennem venstre forkammer og mitralklapstenose i venstre ventrikel.
- Start pres overvågning software (LabChart Pro).
- Puste ballonen ved at åbne stophane og blidt stigende mængde saltvand i ballonen indtil diastoliske tryk læsning fra mikromanometer overstiger nul.
- For at kontrollere længden-spænding reaktion, puste ballonen langsomt til en diastolisk tryk på 75 mmHg, punktere langsomt, gentag én gang.
- Indstil diastoliske tryk til 10 mmHg ved modulering af mængden af saltvand i ballonen. Drej stophanen at forsegle ballon på dette niveau med inflationen, og vedligeholde lukket tryksystem mellem LV ballon og tryktransducer.
- Lavere hjerte i opvarmet kammer og dæksel kammer med plast.
- AdTjeneste iskæmisk reperfusionsbeskadigelse
- Sæt bunden af det opvarmede kammer og tillade kammeret at fylde med effused puffer.
- Når bufferen er nedsænket hjerte, drej stophane til at stoppe strømmen af buffer ind i hjertet, overtalelse global iskæmi. Iskæmitid kan variere efter målene for eksperimentet.
- Efter 30 min af iskæmi, drej stophane at genoprette strømmen af buffer i hjerte, indlede reperfusion.
- Tillad reperfusion af hjerte i 1 time, før afslutning af forsøget. Brug variable reperfusion gange, afhængigt af målene for eksperimentet.
- Opsigelse af eksperiment og Høst af Tissue
- Under anvendelse sideport af stophane, administrere 10 ml phosphatbufret saltvand ved 4 ° C ind i hjertet ved en hastighed på 10 ml / min at standse hjertet.
- Fjern hjerte fra perfusion kolonne, trim væk resterende atrial væv.
- Placer hjerte i en rustfri stål væv udskæring matrix, dække med PaRåFILM, og den anbringes ved -80 ° C i 8 minutter, eller indtil hjertet har en marshmallow-lignende konsistens.
- Fjern blok fra fryseren og sæt barberblade i udskæring matrix til at skære hjerte i 2 mm skiver. Væv blokke kan også købes sammen med andre end 2 mm skive størrelser.
- Fjern skiver en ad gangen og slip i flydende nitrogen til flash fryse til biokemiske undersøgelser. Behold den tredje ventrikel skive fra spidsen for infarkt farvning.
- Fjerne væv fra flydende nitrogen og opbevares ved -80 ° C indtil anvendelse i biokemiske eksperimenter.
- Infarkt Farvning
- Inkubere den tredje ventrikel skive i 10 ml 1% w / v triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) ved 37 ° C i 15 min.
Bemærk: Inkubation i TTC kan udføres i 15 eller 30 minutter uden ændring i effektivitet 15. - Overfør vævssnit fra TTC til 10% pufret formalin og tillade at inkubere ved stuetemperatur natten over. For at opnå optimale resultater, hørets bør tages ud af formalin og filmede inden 24 timer 4.
- Fotografi farvet skive og bruge software som f.eks ImageJ at estimere infarkt størrelse efter producentens protokol. Tage fotografier snarest muligt efter fiksering, da farvestoffet vil falme med tiden.
- Inkubere den tredje ventrikel skive i 10 ml 1% w / v triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) ved 37 ° C i 15 min.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den venstre ventrikel ballon apparat giver mulighed for real-time overvågning af presset er udviklet af den ordregivende venstre ventrikel (figur 1). Som beskrevet tidligere 7, kan dette tryk spor anvendes til at beregne mange af parametrene for ventrikulær funktion. Disse beregninger kan foretages i baseline fase samt reperfusion fase gennemsnit over flere spor inden for hver gruppe, og sammenlignet med henblik på at afgøre, om farmakologisk intervention medførte hjertestop forkonditionering som vi har gjort tidligere 9. En sådan parameter er udviklet tryk, beregnet som forskellen mellem det systoliske tryk og slutdiastoliske tryk. Den udviklede tryk i normale perfunderede rottehjerter kan spænde fra 70 til 130 mmHg (figur 1A). Efter en iskæmisk insult, er den udviklede tryk reduceret, og slutdiastoliske tryk løfter (figur 1b). Når rotterne eradministreret en kendt forkonditionering middel såsom klasse I og IIb HDAC-hæmmer SAHA (vorinostat) 18 før udtagelse af hjertet, er reduktionen i udviklet tryk og elevationen af slutdiastoliske tryk forbundet med iskæmisk reperfusionsbeskadigelse svækkede (figur 1C). Andre foranstaltninger af venstre ventrikelfunktion, såsom graden af pres generation (dP / dt max), kan hastigheden af trykket afslapning (-dP / dt max), og hastigheden tryk produkt (RPP) opnås direkte eller beregnes ud fra software output (figur 2). Den iskæmiske fase kan også overvåges i realtid, med den tilsyneladende ophør af pres generation inden for få minutter fra indtræden af iskæmi. Iskæmisk kontraktion kan også overvåges ved at måle tid indtil starten af sammentrækning og tid til at toppe sammentrækning.
Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) er almindeligt anvendt til at skelne mellem metabolisk enctive og inaktive væv, og bruges her for infarkt farvning. Når absorberet i vævet TTC reduceres med metaboliske enzymer, vender den aktive væv rød. Inaktiv væv reducerer ikke TTC, og som sådan vil plette hvidt 8. Langendorff perfunderet rottehjerter som ikke har været udsat for iskæmisk skade ikke udviser hvide områder (ikke vist), mens hjerterne udsat for iskæmi reperfusionsskade viser betydelige områder farves hvid, indikerer infarkt væv (Figur 3).
Figur 1: Repræsentative tryk spor fra venstre ventrikel ballon Pressure registreret af LV ballonen ved ventrikulær kontraktion.. Hjerter ikke udsat for iskæmi (A) opleve et mindre tab af kontraktile evner over tid. Hjerter udsat for iskæmi (B) viser immedIATE tryktab generation, efterfulgt af tonic sammentrækning. Ved reperfusion, disse hjerter oplever forhøjet EDP og faldt udviklet tryk. Hjerter forkonditioneres med SAHA og udsat for iskæmi (C) viser dæmpning af iskæmisk reperfusionsbeskadigelse. N = 1 pr gruppe.
Figur 2: Beregnet parametre for ventrikelfunktion Rate tryk generation (A), hastighed pres afslapning (B), der er udviklet tryk (C), og hastigheden tryk produkt (D) er nogle parametre for ventrikulær funktion, der kan beregnes ud fra den. trykovervågning software.
Figur 3: TTC farvning for infarktområde.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det isolerede perfunderede rotte- hjerte med held kan anvendes til at undersøge virkningen af farmakologisk intervention på kardial forkonditionering i iskæmisk reperfusionsbeskadigelse 9. Der er dog nogle væsentlige skridt til den procedure, der skal standardiseres for at sikre reproducerbare resultater. Fastholdelse af en temperatur på 37,4 ° C i systemet er kritisk, da selv mild hypotermi og hypertermi kan forårsage kardial forkonditionering 10,11. Den samlede tid, der går, fra indsprøjtning af bedøvelsesmiddel til excision af hjertet skal holdes på et minimum, da langvarig udsættelse for ketamin kan forstyrre cardiac konditionering 12. Rettidig kanylering af aorta in situ er afgørende for at forhindre udviklingen af hypoxi i hjertet eller afblødning af dyret inden hjerte excision. Alt i alt bør tiden fra første snit til fjernelse af hjertet ikke være længere end 6-8 min. Venstre ventrikulære balloon skal kontrolleres for utætheder før hvert forsøg, og om nødvendigt udskiftes. Systemet skal være omhyggeligt vedligeholdt, herunder skylning af hele apparatet med destilleret vand efter hver kørsel og udslidte rør som nødvendigt for at forhindre lækage eller forurening af det indre af slangen udskiftes.
Det isolerede hjerte kan modificeres for et vilkårligt antal hidtil ukendte anvendelser, herunder fluorescensimagografi 13, NMR spektroskopi 7, og optisk kortlægning 14 blandt mange andre. Systemet kan også modificeres til at perfundere hjerter fra forskellige dyr, herunder mus. Denne modifikation er særlig nyttig, da den giver mulighed for eksperimenter med transgene mus. At ændre systemet til mus hjerter, mindre kanyler og et mindre perfusion kolonne skal anvendes, i tillæg til andre ændringer. Detaljerede beskrivelser af, hvordan man kan udnytte Langendorff metode til mus hjerter er blevet offentliggjort andre steder 16,17. Andre modifikationer afdenne protokol omfatter administration af forskellige lægemidler på forskellige tidspunkter. Ved undersøgelse af et lægemiddels evne til at forårsage farmakologisk prækonditionering eller post-condition, er det vigtigt at indgive lægemidlet på forskellige tidspunkter i forhold til iskæmisk reperfusionsbeskadigelse. Lægemidlet kan administreres til dyret, før hjertet udskæres, eller blandes i bufferen enten før hjertet anbringes på søjlen eller under den iskæmiske fase, således at lægemidlet er til stede ved reperfusion. Alternativt kan en side-port anvendes til at administrere en bolus af lægemiddel som helst tidspunkt i løbet af protokollen. Derudover kan protokollen modificeres til at ændre varigheden af iskæmi, reperfusion eller begge. Dette tillader analysen af funktionelle og biokemiske data på forskellige tidspunkter og kan anvendes til at spore tidsforløbet af den akutte virkning af et lægemiddel. Hvis reperfusionsperioden ændres, er det vigtigt at bemærke, at mindst 60 minutters reperfusion er necessary for TTC-farvning til effektivt at afgrænse infarktområde 15.
Den væsentligste begrænsning af det isolerede hjerte model i form af iskæmisk reperfusionsbeskadigelse er, at det ikke tager hensyn til mange af de systemiske faktorer, der er til stede i fastsættelsen af iskæmisk reperfusion in vivo. Denne eliminering af systemisk påvirkning skal tages hensyn til i analysen af data genereret ved hjælp af Langendorff model, men udelukker ikke muligheden af modellen til at besvare nye spørgsmål om reaktion myocytter, fibroblaster og endotelceller til iskæmi og efterfølgende reperfusion. Det isolerede hjerte model giver mulighed for fuldstændig manipulation af mange af de variabler, der påvirker iskæmisk reperfusionsbeskadigelse i tillæg til tidstro analyse af de funktionelle virkninger på hjertet over korte tidsintervaller. De data, der genereres ved hjælp af isolerede hjerte-systemet er uvurderlig i forståelsen af farmakologiske prækonditionering eller post-konditionering afhjerte som reaktion på forskellige farmaceutiske interventioner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Denne publikation blev støttet af South Carolina Clinical & Translationel Research (SCTR) Institute, med en akademisk hjem på Medical University of South Carolina, NIH / NCATS Grant Nummer UL1 TR000062. Yderligere støtte blev leveret af VA hæderspris BX002327-01 til DRM. DJH blev støttet af NIH / NCATS Grant nummer TL1 TR000061 og NIH Grant nummer T32 GM008716. SEA blev støttet af NIH Grant nummer T32 HL07260.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sodium Chloride | Sigma Aldrich | S3014 | |
| Potassium Chloride | Sigma Aldrich | P9541 | |
| Magnesium Sulfate | Sigma Aldrich | 203726 | |
| Potassium Phosphate Dibasic | Sigma Aldrich | RES20765-A7 | |
| Calcium Chloride Dihydrate | Sigma Aldrich | C8106 | |
| Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S5761 | |
| D-Glucose | Sigma Aldrich | G8270 | |
| Octanoic Acid | Sigma Aldrich | C2875 | |
| 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride | Sigma Aldrich | T8877 | |
| Medical Pressure Transducer | MEMSCAP | SP844 | |
| Masterflex Peristaltic Pump | Cole Parmer | EW-07521-40 | |
| Masterflex Easy Load Pump Head | Cole Parmer | EW-07518-10 | |
| Heated circulating water bath | Lauda | M3 | |
| Tubing Flow Module | Transonic | TS410 | |
| Modular Research Console | Transonic | T402 | |
| Inline flow sensor | Transonic | ME2PXN | |
| PowerLab Data Acquisition Device | AD Instruments | PL3508 | |
| LabChart data acquisition software | AD Instruments | MLU60/8 |
References
- Bainey, K. R., Armstrong, P. W. Clinical perspectives on reperfusion injury in acute myocardial infarction. American Heart Journal. 167 (5), 637-645 (2014).
- Beyersdorf, F. The use of controlled reperfusion strategies in cardiac surgery to minimize ischaemia/reperfusion damage. Cardiovascular Research. 83 (2), 262-268 (2009).
- Langendorff, O. Untersuchugen am überlebenden Säugethierherzen. Pflügers Archives. 61, 291-307 (1895).
- Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. Retrograde heart perfusion: The langendorff technique of isolated heart perfusion. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50 (6), 940-950 (2011).
- Tyers, G. F., Todd, G. J., Neely, J. R., Waldhausen, J. A. The mechanism of myocardial protection from ischemic arrest by intracoronary tetrodotoxin administration. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 69 (2), 190-195 (1975).
- Murry, C. E., Jennings, R. B., Reimer, K. A. Preconditioning with ischemia: A delay of lethal cell injury in ischemic myocardium. Circulation. 74 (5), 1124-1136 (1986).
- Kolwicz, S. C., Tian, R. Assessment of cardiac function and energetics in isolated mouse hearts using 31P NMR spectroscopy. The Journal of Visualized Experiments. (42), (2010).
- Fishbein, M. C., et al. Early phase acute myocardial infarct size quantification: Validation of the triphenyl tetrazolium chloride tissue enzyme staining technique. American Heart Journal. 101 (5), 593-600 (1981).
- Aune, S. E., Herr, D. J., Mani, S. K., Menick, D. R. Selective inhibition of class I but not class IIb histone deacetylases exerts cardiac protection from ischemia reperfusion. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 72, 138-145 (2014).
- Yellon, D. M., et al. The protective role of heat stress in the ischaemic and reperfused rabbit myocardium. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 24 (8), 895-907 (1992).
- Khaliulin, I., et al. Temperature preconditioning of isolated rat hearts--a potent cardioprotective mechanism involving a reduction in oxidative stress and inhibition of the mitochondrial permeability transition pore. The Journal of Physiology. 581 (Pt 3), 1147-1161 (2007).
- Molojavyi, A., et al. Effects of ketamine and its isomers on ischemic preconditioning in the isolated rat heart). Anesthesiology. 94 (4), 623-629 (2001).
- Asfour, H., et al. NADH fluorescence imaging of isolated biventricular working rabbit hearts. The Journal of Visualized Experiments. (65), (2012).
- Sill, B., Hammer, P. E., Cowan, D. B. Optical mapping of langendorff-perfused rat hearts. The Journal of Visualized Experiments. (30), (2009).
- Ferrera, R., Benhabbouche, S., Bopassa, J. C., Li, B., Ovize, M. One hour reperfusion is enough to assess function and infarct size with TTC staining in langendorff rat model. Cardiovascular Drugs and Therapy. 23 (4), 327-331 (2009).
- Sutherland, F. J., Shattock, M. J., Baker, K. E., Hearse, D. J. Mouse isolated perfused heart: Characteristics and cautions. Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 30 (11), 867-878 (2003).
- Reichelt, M. E., Willems, L., Hack BA,, Peart, J. N., Headrick, J. P. Cardiac and coronary function in the langendorff-perfused mouse heart model. Experimental Physiology. 94 (1), 54-70 (2009).
- Xie, M., et al. Histone deacetylase inhibition blunts ischemia/reperfusion injury by inducing cardiomyocyte autophagy. Circulation. 129 (10), 1139-1151 (2014).
