Summary
Um protocolo simples para a preparação de óxido de grafeno reduzido utilizando luz visível e nanopartículas plasmonic é descrito.
Abstract
O presente trabalho demonstra a e método simples, química livre, rápido, eficiente da energia para produzir reduzida solução de óxido de grafeno (r-GO) à temperatura ambiente usando a luz visível irradiação com nanopartículas plasmonic. A nanopartícula plasmonic é utilizado para melhorar a eficiência de redução de GO. Leva apenas 30 min à temperatura ambiente, iluminando as soluções com Xe-lâmpada, as soluções de r-Go pode ser obtido por remoção completamente nanopartículas de ouro através de uma simples etapa de centrifugação. As nanopartículas de ouro esférico (AuNPs) em comparação com as outras nanoestruturas é a nanoestrutura plasmonic mais adequados para a preparação de R-GO. O óxido de grafeno reduzido preparados utilizando luz visível e AuNPs foi igualmente qualitativa como quimicamente reduzida óxido de grafeno, que foi apoiado por várias técnicas analíticas, tais como espectroscopia UV-Vis, espectroscopia Raman, pó de DRX e XPS. O óxido de grafeno reduzido preparado com luz visível mostra excelentes propriedades de têmpera sobre o fluormoléculas escent modificado em ADNcs e excelente recuperação de fluorescência para a detecção de ADN alvo. É encontrado o r-GO preparado por AuNPs reciclados para ser de mesma qualidade com que quimicamente reduzida de r-GO. A utilização de luz visível com nanopartículas plasmonic demonstra a boa método alternativo para a síntese de R-GO.
Introduction
Método 1 e de vapor químico baseado o primeiro scotch-tape desenvolvido deposição 2 foram excelentes métodos para produzir o estado primitivo de um grafeno, mas a formação da camada de síntese de grafeno em grande escala ou grafeno na superfície com área ampla, foram considerados como uma limitação fundamental do métodos anteriores 3 Uma de solução possível para grande escala de síntese de R-GO será método sintético molhado-química que requer em primeiro lugar as reacções com agentes de oxidação fortes, extenso tratamento físico tal como sonicação para produzir VAI folha, e, finalmente, a redução de funcionalidades de oxigénio tal. como hidroxilo, epóxido e grupos carbonilo em GO é essencial, a fim de recuperar as suas propriedades físicas originais Principalmente 4., a redução de GO foi levada a cabo com qualquer método químico usando hidrazina ou dos seus derivados 5 ou por método de tratamento térmico (° 550-1,100 C) numa atmosfera inerte ou redutora. 6
jove_content "> Estes processos necessitam dos produtos químicos tóxicos, longo tempo de reação e temperatura elevada que o aumento da demanda total de energia para a síntese de r-GO. 7 Enquanto os processos de redução de irradiação de fotos, tais como, processo 8 foto-térmico induzido por UV usando um pulsada de xenônio flash, 9 pulsada a laser assistida 10 e foto�t�rmica aquecimento com luzes de flash da câmara 11 também foram descritos para a preparação de R-GO. Em geral, a baixa eficiência de conversão dos métodos foto-induzidas propagada para o uso de UV ou pulsada irradiação laser que pode oferecer alta energia dos fótons. A energia do fóton baixo da luz visível limita o seu uso e não atraiu muito para a síntese de r-GO. Excelentes propriedades de absorção de luz de nanopartículas plasmonic nas regiões visíveis e / ou NIR pode melhorar significativamente as desvantagens atuais da utilização de luz visível para a síntese de R-GO. 12,13 condições de reacção suaves, curto tempo de reacção e utilização limitada de CH tóxicoemicals poderia fazer a luz visível plasmon induzida assistida redução fotocatalítica de GO como um método alternativo útil.No presente método, nós descrevemos o método sintético r-GO eficiente e simples, usando nanopartículas plasmonic e luz visível. O progresso da reacção foi encontrado para ser fortemente dependente das estruturas de nanopartículas plasmonic tais como as nanopartículas de ouro (esféricas AuNPs), ouro nanorods (AuNRs), e nanostars ouro (AuNSs). O uso de AuNPs mostrou a redução mais eficiente de GO e as nanopartículas são facilmente removíveis e reciclável para o uso repetido (Figura 1). A r-GO sintetizado usando a luz visível e AuNPs mostrou quase igual qualidade em comparação com o r-GO preparados por método químico conhecido (hidrazina) como demonstrado pelo uso de várias medições analíticas e do método de detecção de ADN com base extinção de fluorescência / recuperação.
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Protocol
1. Preparação do Precursor
- Preparação de óxido de grafeno (GO):
- GO preparação pelo método de Hummer 14 modificado
- Adicionar 3,0 g de flocos de grafite, a uma mistura de H 2 SO 4 concentrado / H 3 PO 4 (360: 40 ml) à TA. (Nota: Especial cuidado deve ser tomado durante a utilização de ácidos fortes H 2 SO 4 e H 3 PO 4).
- Adicionar KMnO4 (18,0 g) lentamente com agitação e arrefecimento num banho de gelo para manter a temperatura da mistura de reacção a <35 ° C. (A solução tornar-se pegajoso com o aumento do tempo de reação, precisará usar método adequado para manter a agitação eficiente.) (Nota: Cuidado especial deve ser tomado ao adicionar KMnO4 devido à reacção exotérmica).
- Agita-se durante 12 h a 50 ° C e depois arrefece-se para a TA e vertendo-se sobre gelo mistura de reacção (400 ml) contendo 30% de H 2 O 2 (3 mL).
- Filtra-se a reaction mistura utilizando um metal padrão americana testar crivo (300 um) para remover grafite que não reagiu e o centrífuga (velocidade de 4.722 x g durante 2 horas) filtrado para remover o sobrenadante.
- Repetir o passo de centrifugação com 200 ml de água, 200 ml de HCl a 30%, 200 ml de etanol, e água destilada até o pH novamente de solução alcance a 5,0-6,0.
- Liofilizar as soluções finais para produzir um pó fofo GO.
- A fim de fazer a solução de GO nanométricos, dissolver 20 mg de GO em pó em 40 ml de água destilada triplo (> 18 mohms), e, em seguida, esfoliar por sonicação prolongada (35% de amplitude, a 500 W, 2 h) até que toda a distribuição do tamanho de tornar abaixo de 150 nm, em seguida, centrifugar-lo duas vezes (velocidade de 10.625 xg, 15 min) para remover precipitados (folhas grandes GO esfoliada-ONU).
- GO preparação pelo método de Hummer 14 modificado
- Preparação de nanopartículas plasmonic
- Preparação de AuNPs
- Estabilizado com citrato de forma esférica de nanopartículas de ouro (AuNPs, OD = 1,0) tamanho de partículas de 30 nm foi utilizado para a redução de R-GO.
- Preparação de 15 AuNRs
- Preparar a solução de sementes pela adição de 0,6 ml de solução gelada preparada de fresco de NaBH4 solução (0,01 M) a uma solução de mistura de composição aquosa de 0,25 ml de HAuCl 4 (0,01 M) e 9,75 ml de brometo de cetiltrimetilamónio (CTAB, 0,1 M ).
- Agita-se a mistura resultante vigorosamente durante 0,5 minutos e depois mantê-la a 28 ° C durante 3 h.
- Preparar a solução de crescimento através da mistura de 475 ml de CTAB (0,1 M), 3 mL de AgNO3 (0,01 M) e 20 ml de HAuCl 4 (0,01 M).
- Em seguida, adicione preparada de fresco 3,2 ml de ácido ascórbico (0,01 M) à mistura seguido pela adição de 0,8 ml de uma solução aquosa de HCl (1,0 M).
- No passo final, adicionar 3,2 ml de solução de sementes à solução de crescimento a 28 ° C e submeter a mistura reaccional a rápida inversão durante alguns segundos. Finalmente, keep a mistura resultante em repouso durante pelo menos 6 horas.
- Analisar os AuNRs preparados com espectroscopia de UV-Visível para absorção máxima (λ max) e análise de TEM (tipicamente a relação de aspecto λ max e verificou-se ser 730 nm e 3,5, respectivamente).
- Preparação de 16 AuNSs
- Preparar uma solução aquosa estoque de 4- (2-hidroxietil) -1-piperazinoetanossulfónico ácido (HEPES) com a concentração de 100 mM e ajustar o pH a 7,4 a 25 ° C através da adição de solução 1,0 M de NaOH.
- Misturar 20 ml de tampão de fosfato (100 mM) com 30 ml de 2- [4- (2-hidroxietil) -1-piperazinil] etanossulfónico (100 mM).
- Em seguida, adicionar 500 mL de tri-hidrato de ouro (III), cloreto de (20 mM) à mistura acima e manter a 28,5 ° C durante 30 min em banho de água. Solução mudanças de cor de amarelo claro para azul esverdeado depois de 30 minutos pode ser observada.
- Centrifugar a solução a velocidade de 8.928 xg durante 30 min e dispersarOs precipitados em água destilada.
- Finalmente, analisar o AuNSs preparado com espectroscopia UV-Visível para absorção máxima (λ max) e análise TEM para a confirmação de tamanho das partículas que é encontrado para ser 740 nm e 30 nm, respectivamente.
- Preparação de AuNPs
2. Preparação de r-GO Usando luz visível e AuNPs
- Adicionar 1 ml de nanopartículas plasmonic (ABS 1.0 a 520 nm para AuNPs, Abs 1,0 a 750 nm para AuNRs, e Abs 1,0 a 730 nm para AuNSs, respectivamente) e 100 ul de hidróxido de amónio (28%, w / v%) para 10 ml de solução de GO (1,0 OD a 230 nm, 0,125 mg ml -1) colocado em um reactor de vidro Pyrex equipado com uma camisa com circulação de água.
- Irradiar a mistura com lâmpada Xe (densidade de potência de 1,56 W cm2) durante 30 minutos com a circulação de água através do revestimento com circulação de água para manter a temperatura a 25 ° C e depois centrifugar a solução a uma velocidade 10.625 xg durante 15 min pararemover nanopartículas de ouro.
- Tome-se o sobrenadante contendo a r-ir para analisar com espectrofotómetro de UV-Visível (R-GO deve mostrar a banda de absorção característico a 270 nm) na gama de 200-900 nm preparado.
3. Detecção do ADN Alvo Utilizando R-GO 17 Solução
- Por extinção de fluorescência, adicionar 20 ul de 10 -6 M ssDNA Cy3-modificado (5'-ATC CTT ATC AAT ATT TAA CAA TAA TCC CTC-Cy3-3 ') em solução GO ou r-GO contendo 25 ul de GO (0,125 mg ml-1) ou R-GO (0,125 mg mL -1), em 1,955 ml de solução 0,3 M de PBS (tampão fosfato 10 mM, NaCl 0,3 M) e incubar durante 10 min à temperatura ambiente.
- Medir a intensidade de fluorescência destas amostras com espectrofluorímetro (λ ex = 529 nm).
- Para a detecção do alvo, adicione 200 ml de solução de oligonucleotídeo alvo (5'-GAG GGA ATT TTG TTA AAT ATT GAT AAG GAT- 3 ') em três concentrações diferentes (10 -6 </ sup> M, 10 -7 M, 10 -8 M) na solução de GO ou R-GO contendo 20 ul de 10 -6 M ADNcs-Cy3, 25 ul de GO ou R-GO (0,125 mg mL -1) , e 1,755 mL de 0,3 M de PBS para a experiência de recuperação de fluorescência. 17
Notas:
Fontes de Luz e Reactor
A luz visível (400-780 nm) de origem. A luz visível irradiar através Pyrex reator de vidro (diâmetro janela = 1,1 cm), contendo solução GO usando lâmpada Xe (1,56 W / cm 2 de energia). A energia dos fotões aplicada ao reactor é calculada como sendo de 4,8 x 10 21 fótons por min (Figura 2A-2C).
Infravermelho próximo (NIR) laser. NIR laser (diâmetro janela = 13,2 cm) com uma densidade de potência de 0,36 W / cm 2, e comprimento de onda de funcionamento de 808 nm foi utilizada como a fonte de luz do infravermelho próximo para reacções de redução GO (Figura 2E). A energia do fóton é calculada para ser 2,43 × 10 21 fótons por min.
Reactor: Pyrex reator de vidro (diâmetro janela = 1,1 cm; volume de reacção = 10 ml) equipado com uma jaqueta com circulação de água é utilizada para luz visível e NIR luz irradiada reações de redução GO (Figura 2F).
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Representative Results
A Figura 1 mostra o esquema geral para a luz visível e reacção de redução à base de nanopartículas plasmonic R-GO. A Figura 2 mostra a configuração instrumental para as reacções. Depois da reacção, é necessário o passo de centrifugação para remover o fotocatalisador utilizado (AuNSs, AuNRs, ou AuNPs) como mostrado na Figura 3A. A análise HRTEM mostra a remoção completa das nanopartículas no sobrenadante (R-GO) (Figura 3B), que também é possível confirmar com análise de UV-Visível como mostrado na Figura 3C, a banda de absorção em torno de 500-800 nm a partir da r -GO solução e mistura de nanopartículas foi desapareceram após a etapa de centrifugação indicando a remoção completa de nanopartículas plasmonic no produto r-GO. As mudanças estruturais na r-GO foram analisados pela técnica de DRX. Desaparecimento de GO pico a 10,2 indicado claramente a formação de R-GO como mostrado na Figura 4A. A D / G irácios ntensity (I D / I G) de GO e r-GO produzido por um método químico ou um método induzida pela luz sem ou com PN (AuNRs, AuNPs, e AuNSs) foi medido por análise de Raman como mostrado na Figura 4B. A formação de R-GO foi confirmada mais quantitativamente por comparação das relações C / O em análise XPS entre amostras, tal como mostrado na Figura 5. Ao dividir a área de% de carbono (C) com a% de área de oxigénio (O), a relação C / rácios S do R-GO preparado pode ser calculada, o número mais elevado de relação C / S indica o grau mais elevado de redução do estado de R-GO. Como mostrado na Figura 5, o rácio A / O C de GO, R-GO (quimicamente reduzido com hidrazina), R-GO (apenas a luz visível), e R-GO (luz visível e nanopartículas plasmonic) foram 1,95, 4,81, 3,74 , e 5,19. Estes resultados mostram a utilidade de luz visível e método baseado nanopartículas plasmonic para os preparativos de r-GO.
A extinção de fluorescência eficiência e rECUPERAÇÃO para detecção do DNA alvo foram realizados para demonstrar as potencialidades da r-GO para aplicações bio. Figura 6A é o espectro de emissão de fluorescência resumida do DNA Cy3 modificado após incubação com GO, r-GO soluções em 0,3 M PBS, a diminuição da intensidade indica o eficiente eficiência têmpera de GO, r-GO. A r-GO preparado com AuNPs e luz visível mostrou a eficiência de extinção mais eficiente. Quando o ADN-Cy3 modificado ligado com o ADN alvo (ADN antraz no presente documento), o ADN modificado com Cy3 poderia formar duplex e separado da folha de R-GO, o que resulta na recuperação de fluorescência (Figura 6B). Acredita-se que o R-GO preparado utilizando luz visível e nanopartículas plasmonic mostra como excelente, assim como propriedades físicas de reduzida quimicamente R-GO (Figura 6).
FiguraEsquema 1. A reacção para a síntese de r-GO. Descrição esquemática da síntese de r-GO usando nanopartículas plasmonic e luz visível. (Re-imprimir com a permissão do ref. 13) Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2. O reactor e as fontes de luz para a preparação de R-GO. As fotografias de (a) revestimento do reactor com circulação de água na caixa equipado com fonte de luz visível (luz Xe), (B) as imagens ampliadas do reactor, (C) o furo para guiar a luz visível para o reactor, (D) o espectro de luz visível de Xe-lâmpada, (E) NIR laser com aparelho de reação, (F) a vista lateral do reactor (Pyrex, ganhar dow diâmetro = 11 mm). Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3. fotografias, imagens HR-TEM e espectro UV-Vis de r-GO. (A) As fotografias de r-GO, r-GO + AuNPs, r-Go + AuNRs, solução r-GO + AuNSs antes e depois centrifugação, (B) as imagens HR-TEM de uma solução de r-GO e precipitados, (C) a espectros UV-Vis de R-GO + mistura AuNPs, mistura r-GO + AuNRs, e a mistura de R-GO + AuNSs antes e depois centrifugação. (Re-imprimir com a permissão do ref. 13) Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4. Análise qualitativa de GO e r-GO preparado (a) Dados de DRX.; (B) Os espectros Raman de GO e R-GO produzido por um método químico e um método induzida pela luz com ou sem AuNPs, AuNRs, e AuNSs. (Re-imprimir com a permissão do ref. 13) Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 5. A análise XPS de R-GO. A análise XPS de solução GO (A), R-GO soluções preparadas com método químico (B), e método induzida pela luz sem AuNPs (C) ou com AuNPs (D). (Re-imprimir com a permissão do ref. 13)"target =" _ blank ve.com/files/ftp_upload/53108/53108fig5large.jpg "> Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
. Figura 6. extinção de fluorescência e recuperação de fluorescência análise (A) extinção de fluorescência de ssDNA-Cy3 usando GO e r-GO quimicamente reduzida ou produzidos utilizando luz visível e nanopartículas plasmonic, recuperação (B) de fluorescência utilizando concentrações variáveis de ADN alvo (10 - 7 M, 10 -8 M e 10 -9 M). Os dados são médias ± desvios-padrão, N = 4. (Re-imprimir com a permissão do ref. 13) Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
Visível irradiação de luz em solução GO durante 30 minutos com nanopartículas de ouro (AuNPs, AuNSs & AuNRs) mostrou as mudanças de cor rápidas de luz amarela-marrom a cor preta (Figura 1). Para obter produto altamente puro de R-GO, com elevado rendimento, existem dois factores importantes precisa seguir. Um deles é o uso de um catalisador como AuNPs plasmonic eficiente, uma vez que pode absorver AuNPs fortemente a luz visível, entre outras estruturas (por exemplo, AuNRs, AuNSs). Outro é a utilização de uma solução de GO nanosized obter livre de nanopartículas altamente pura do produto R-GO. As nanopartículas plasmonic usado como um fotocatalisador deve ser completamente removido, o que é facilmente realizável pela aplicação de medidas simples de centrifugação a 10.625 xg velocidade durante 15 min. Mas, ao fazer isso, o tamanho grande folha de r-GO (> 500 nm) pode ser centrifugado para baixo com nanopartículas de ouro que levam à grande perda do produto (r-GO). Solução GO Portanto, usando nanosized (tamanho médio da folha <150-200 Nm) é muito importante, porque a nanométricos R-GO não é possível de ser centrifugada para baixo usando a tais condições de centrifugação normais (isto é, velocidade de 10.625 xg durante 15 min).
Portanto, o uso de AuNPs e o uso da solução de GO nanosized são factores críticos para a obtenção de uma solução altamente pura de R-GO com um rendimento elevado. Para obter pó de produto, é necessário executar as etapas de liofilização adicionais. Para confirmar o sucesso da formação de R-GO, a medição dos espectros de UV será um método de simples. O desvio para o vermelho de espectros UV-Vis a partir de 230 nm a 270 nm é uma indicação clara de conversão bem sucedida do de GO no R-GO (Figura 3C). Para verificar a remoção completa de nanopartículas de ouro utilizadas, com a medição de UV-Vis e a análise da FC-TEM são também necessárias como mostrado na Figura 3B e 3C.
O desaparecimento do pico de grafite em 26,48 em GO e (001) de pico a 1Correspondente a 0,2 GO no espectro de DRX mostraram a formação bem sucedida de r-GO (Figura 4A). GO e r-ir preparado por um método químico ou um método induzida pela luz foram analisados qualitativamente por espectrometria de Raman tal como apresentado na Figura 4B. A banda D correspondente a estruturas desordenadas e aviões de ponta e da banda G correspondente ao ordenado sp 2 carbono ligado apareceu em 1.327 cm -1 e 1.590 cm-1, respectivamente, no espectro de Raman de GO. 18 A D e G bandas em 1336 e 1.592 cm -1 também estavam presentes no espectro de Raman do quimicamente reduzida GO, luz visível irradiado reduzida luz visível GO e plasmon assistida irradiado redução de GO. Os / rácios de intensidade G D (I D / I G) foram encontrados para ser 1,03, 1,13, 1,12, 1,13, 1,13 e 1,13 para GO e r-GO preparado por um método químico ou um método induzida pela luz sem ou com PN ( AuNRs, AuNPs, e AuNSs), respectivamente. O XPSanálise é o método analítico mais convincente e quantitativa para verificar a conversão bem-sucedida de GO em produto r-GO. Os rácios C / S (com base na intensidade de cada elemento (carbono e oxigénio) foram encontrados para ser 1,95, 4,81, 3,74, e 5,19 para GO, R-GO (hidrazina), R-GO (HV apenas), e r -GO (HV AuNPs +), respectivamente (Figura 5).
A possível limitação do método atual para a síntese de r-GO é a fonte de luz necessária, como Xe-lâmpada para reações. Mas uma possível, promissor e derradeira solução para esta limitação é o uso da luz solar como fonte de luz desde a luz do sol são compostas principalmente de UV e luz visível. Mas, neste caso, está prevista mais tempo de iluminação ser um possível problema.
Existem inúmeras aplicações potenciais de r-GO, 19-24 uma das propriedades importantes para a bio aplicação é a fluorescência efeito da r-GO têmpera. Neste protocolo,aplicação simples de usar descrito r-GO para esquema de detecção de DNA sensíveis. Como os resultados descritos na Figura 6, o R-GO preparados utilizando luz visível e nanopartículas plasmonic mostrou excelentes propriedades de extinção da fluorescência e recuperação na presença de ADN alvo, em comparação com o r-ir preparado pelo método químico (Figura 6B).
Neste protocolo, descrevemos o método sintético simples para r-GO utilizando luz visível e seu método e aplicações analíticas. Como discutido, as futuras modificações deste método será o uso da luz do sol que considerada como a mais fontes de energia amigas do ambiente para reações.
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Disclosures
Não temos nada a divulgar.
Acknowledgments
Este trabalho foi financiado pela Fundação de Pesquisa Nacional da Coreia (2013R1A1A1061387) e fundo de investigação KU-KIST.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cy3 modifeid ssDNA | IDT(Iowa, USA) | HPLC purified by IDT | |
| Gold nanoparticles (30 nm) | Ted Pella, Inc(Redding, CA, USA). | 15706-20 | colloidal solution |
| 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethane sulfonic acid (HEPES) (99.5%) | Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 7365-45-9 | |
| Gold(III) Chloride Hydrate (99.999%) | Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 27988-77-8 | strongly hygroscopic |
| Sodium Borohydride (99.99%) | Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 16940-66-2 | |
| Hexadecyltrimethylammonium bromide (≥99%) | Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 57-09-0 | |
| L-Ascorbic Acid(≥99.0%) | Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 50-81-7 | |
| Sodium Chloride (99.5%) | Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 7647-14-5 | |
| Silver Nitrate (≥99.0%) | Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 7761-88-8 | |
| Graphite | Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 7782-42-5 | |
| Sulfuric acid | Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 7664-93-9 | |
| Phophoric acid | Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 7664-38-2 | |
| Potassium permanganate | Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 7722-64-7 | |
| Hydrogen peroxide | JUNSEI | 23150-0350 | |
| Ammonium hydroxide | Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) | 1336-21-6 | |
| Xe-lamp | Cermax, Waltham, USA | ||
| NIR Laser | Class-IV, Sanctity Laser, Shanghai, China | 6W (output power) | |
| UV-Vis spectrophotometer | S-3100, SINCO, South Korea | ||
| Transmission Electron Microscopy | H-7650, Hitachi, Japan | ||
| Spectro Fluorometer | Jasco FP-6500, Tokyo, Japan | ||
| X-ray Photoelectron Spectrometer | AXIS–NOVA, KRATOS Inc., UK |
References
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