Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Sacs Ex Vivo המעיים להעריך חדירות ריריות מודלים של מחלות במערכת העיכול

doi: 10.3791/53250 Published: February 9, 2016

Abstract

המכשול אפיתל היא ההגנה מולדת הראשונה של מערכת העיכול באופן סלקטיבי מסדיר תחבורה מן לומן אל תאי הרקמה הבסיסית, הגבלת התחבורה של מולקולות קטנות יותר ברחבי האפיתל וכמעט לחלוטין האוסר תחבורה macromolecular אפיתל. סלקטיביות זו נקבעת ע"י שכבת ג'ל הרירי, אשר מגביל את התחבורה של מולקולות lipophilic ושניהם הקולטנים הפסגה ומכלולי חלבון junctional ההדוקים של האפיתל. במודלי תרבית תאים במבחנה של האפיתל הם נוחים, אבל כמודל, הם חסרים את המורכבות של האינטראקציות בין החיידקים, ג'ל רירי, האפיתל ואת המערכת החיסונית. מצד שני, in vivo הערכה של קליטה או חדירות מעי עשויה להתבצע, אבל אלה מבחנים למדוד כוללת קליטת עיכול, ללא ציון סגולי אתר. Ex vivo מבחני חדירות באמצעות "צקי מעיים"; הם שיטה מהירה ורגישה למדידת טוהר מידות מעיים הכלל או תחבורה השוואתית של מולקולה מסוימת, עם יתרון נוסף של סגוליות אתר מעיים. כאן אנו מתארים את הכנת שקי מעיים ללימודי חדירות והחישוב של חדירות לכאורה (אפליקציה P) של מולקולה על פני מחסום המעי. טכניקה זו ניתן להשתמש כשיטה ספיגת תרופות בהערכת, או לבחון תפקוד מחסום האזורי אפיתל במודלים של בעלי חיים של מחלות במערכת העיכול.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

המכשול אפיתל במעי של מערכת העיכול הוא שטח הפנים הרירית מוערך ב -400 מ '2 ב המבוגר אדם. כתוצאה מכך, היא חשופה כל הזמן לאתגר מחיידקים, תרופות בליעה, חומרים מזינים רעלנים חיידקיים. המארח אסור להבדיל רק בין חיידקי commensal נסבלים פתוגנים פוטנציאליים, אבל חייב למנוע מינים אלה והמולקולות המופרשות שלהם לחצות את מחסום האפיתל, ואילו באותו הזמן המאפשר ספיגת מזון בגוף. לכן, את התפקיד של האפיתל במעי הוא לפעול כמחסום סלקטיבי לתכנים luminal 1. זו המושגת, בין יתר, על ידי מערכת ביטחון אפיתל מולד בבית הרירי, אשר פועלת באמצעות מערכת ביולוגית תגובה המורכבת מנגנוני מכונן מושרים 2.

אובדן תפקוד המחסום אפיתל היא פתולוגית אופיינית של מספר מחלות מערכת העיכול. בשנת vivoבחינת תפקוד המחסום אפיתל ניתן להעריך באמצעות gavage הפה של מולקולה נותב וניתוח בסרום לאחר 3. עם זאת, הטכניקה הזו מציעה שום אינדיקציה לגבי האתר של תפקוד מחסום. במבחנה לשעבר vivo הערכת התנגדות transepithelial באמצעות מערכות Transwell 3 ו Ussing תאי 4,5 בהתאמה, מועסקים בכינויו סמנים פונדקאיים של תפקוד מחסום אפיתל, אך חסרים את פיזיולוגית המחלה התורמת של מודלים של בעלי חיים 6. בפרוטוקול זה אנו מתארים מודל הכנת vivo לשעבר רקמות המאפשר הערכה ישירה ונקודות של שלמות מעיים אשר עשוי לשמש כדי להעריך תפקוד מחסום רירי בכמה רמות. חשוב לציין, טכניקה זו ניתן להחיל במודלים של בעלי חיים של מחלה, או עלולה להיות מניפולציות פרמקולוגית לאפשר בחקירה מעמיקה של תפקוד מחסום רירי.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

כל עבודה חיה בפרוטוקול זה מבוצע תוך הקפדה אוניברסיטת ועדת האתיקה Animal ניוקאסל אישרה נהלים.

1. הכנת מכשירים, מדיה ותרבות ומנות

  1. טרום חם Media 199 (TC199) או בינוני הנשר השונה של Dulbecco (DMEM) תקשורת ל -37 מעלות צלזיוס. טרום oxygenate המדיום ידי מבעבע עם 95% O 2/5% CO 2. בדוק כי מדיום יש pH סופי של 7.3.
  2. כן תפר ידי חיתוך שני סעיפים 5 סנטימטרים לכל צק. Loop התפרים לתוך קשר לא סגור.

2. Dissection הכנה של מערכת העיכול

  1. משיכת מזון 12 שעות מוצקות לפני המתת החסד. אם תרצה, למקם חיות על תוספי ג'ל מזינים במהלך הזמן הזה.
  2. להרדים עכברים על ידי יתר נתרן pentobarbitone ([200 מ"ג / ק"ג], זריקה intraperitoneal) ואחריו נקע בצוואר הרחם בהתאם פרוטו האתיקה של המוסד הרפואיcols ולרסס 70% אתנול על הבטן ובית החזה.
  3. בעזרת מספריים, לעשות חתך אופקי באמצע הבטן ולחשוף את הצפק.
  4. המשך להפריד ואת להסיר את מערכת העיכול על ידי חיתוך במעי הדק העליון מהקיבה על סוגר השוער וחיתוך המעי גס על סף האנאלי. השתמש במלקחיים כדי להסיר לפדר בעדינות. מניחים את המעיים במדיום מראש חימם, מחומצן.
  5. זהה את קטע המעי תוערך עבור חדירות (איור 1) וחותכים את החלק הזה בחינם משאר המעי.
    1. על מנת לשמור על עקביות בין בעלי חיים, למדוד קטעי התריסריון ביחס מְעִי צָם אל הקיבה, ולמדוד קטעי המעי הגס ביחס מעי כדי cecum.
    2. בעת בחירת קטעי רקמה, לציין את נוכחותו של רקמות הלימפה הקשורים ריריות כגון טלאים של Peyer. אלה יכולים להיות מזוהה הנהון קטןules בצד serosal של לומן.
    3. באמצעות מזרק 1 מ"ל, לשטוף את התוכן luminal בעדינות של קטע המעי לתוך צלחת פטרי עם PBS מחומם מראש (37 ° C). תוכן צואתי אלה עשויים להיות מושלכים או לאחסן ב -80 ° C לניתוח בעתיד לפי הצורך.

3. הכנת המעיים Sacs

  1. הכן מזרק 1 מ"ל עם נפח 300 μl של המתחם הבדיקה או מולקולה. עבור שלמות הרירית, פתרון 1 מ"ג / מ"ל ​​של FITC-dextran M.Wt. 4,400 ניתן להשתמש. בדיקות החל 4,400-70,000 דה בגודל עשויות לשמש רגישות מוגברת. מאובטח להתאים קטטר וסקולרית חיה קטנה על המזרק.
  2. מדוד 5 סנטימטרים מהפתח של קטע המעי ולקשור במגזר סגור היטב עם לולאת תפר בנקודה זו. בעדינות להניח לולאת תפר טרום קשורה סביב פתיחת המעי וכנס קטטר הקהה. משוך את החבל סגור כדי לאבטח את קטע המעיולשחרר את נפח 300 μl מן המזרק לתוך המעי, כדי להבטיח שכל הפתרון מוזרק.
  3. בעדינות להסיר את הקטטר ובמקביל משיכת החבל תפר לאבטח סגירת שק מעיים. חותכים את שק מעיים רפויים מהמעי ומקום לתוך צינור 50 מ"ל חרוטי מלא 20 מ"ל של מדיום מחומצן, שחומם מראש ל 37 מעלות צלזיוס.

4. מדידה של חדירות

  1. צינורות חרוטי מקום המכיל את שקי מעיים באמבט מים חמים מוגדר 37 מעלות צלזיוס. ב 0, 30, 60, 90 ו -120 נקודות זמן דק, לקחת דגימת 100 μl מהצינור והעברת החרוטים לצלחת 96 באר, החלפת הנפח עם 100 μl של תקשורת טריה בכל מקרה לגופו.
  2. אחרי המדגם הסופי נלקח, לחתוך צקים פתוחים בנקודת התפר לאורך אורכו של הקטע, חשיפת פני הרירית.
  3. מדוד את האורך והרוחב של כל קטע מעי. אם desiאדום, צמד להקפיא את הפלחים ולאחסן ב -80 ° C עבור חלבון או לאנליזה ביוכימית, או לחלופין, חנות בתמיסת ייצוב RNA עבור מבחנים מולקולריים.
  4. לבנות עקומת תקן של דילולי יומן עבור מולקולות מתויגות FITC בטווח שבין 1 ל 1 x 10 -6.
  5. דגימות מדוד ותקנים FITC על הקורא צלחת ניאון, עירור FITC / פליטה: 495 ננומטר / 519 ננומטר.

5. חישוב חדירות לכאורה עבור כל שק הפרט מעיים

  1. המרת יחידות זמן שני.
  2. עבור כל נקודת זמן, לחשב את הריכוז מצטבר, Q

    Q t = (C * t V r) + (סכום ש t * V ים),
    איפה:

    T Q = ריכוז מצטבר בזמן t
    T C = ריכוז בזמן t
    V r = נפח בצד המקבל
    סכום t Q = סכום של כל t Q הקודם
    S = Vשנדגמו נפח
  3. מגרש Q לעומת הזמן (T) ו לחשב את השיפוע: δQ / δt
  4. חשבתי את החדירות לכאורה (אפליקצית P)

    P האפליקציה = (δQ / δt) / (א Co *), איפה:

    A = שטח של רקמה
    C 0 = ריכוז ראשוני

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לבחון שינויים אזוריים בתפקוד מחסום המעי במודלים של בעלי חיים של מחלות במערכת העיכול. באמצעות מדידת השטף של חללית paracellular פני הרירית לעבר שטחים שונים של מערכת עיכול 7, את היושרה של צומת ההדוקים אפיתל ניתן להעריך. בנוסף, על ידי שינוי האופי של חללית paracellular על פי גודלן (איור 2) או הידרופוביות (איור 3), מידת הפרעות אפיתל, או על שלמות שכבת ג'ל הרירית, ניתן למדוד גם. העסקת סמני משקל מולקולרי גדולים מאפשרת לחקירה רגישה יותר של חדירות paracellular של רירית, גילוי שינויים דיסקרטיים, כי לא יכול להיות ברור על ידי מדידות אלקטרו כגון התנגדות חשמלית transepithelial (TEER), אך אשר יהיה מספיק כדי לאפשר תחבורת paracellular (איור 2). Mucoסאל דלקת עלולה להוביל לאובדן של תאי גביע ולקיטון הג'ל מגן רירי שבדרך כלל overlies ומגן על הממשק אפיתל. באמצעות בדיקות הידרופובי, על שלמות שכבת ג'ל הרירית במעי יכול גם להיבחן (איור 3). בנוסף, שלמות מחסום אזורית יכולה להיבחן דרך להכנות של צקי מעי מאזורים מעיים שונים. לשינויים מקומיים תפקוד מחסום להשתנות בתוך במודלים של בעלי חיים שונים של מחלה וכך, שימוש צקי מעיים מאפשר הערכה מקומית של תפקוד מחסום מעיים (איור 4), בהשוואת gavage פה של בדיקות assay בסרום שלאחר מכן.

איור 1
תרשים איור 1. של מערכת העיכול Murine. סכימטי של מערכת העיכול של עכבר C57Bl / 6, מהקיבה ל- tהוא פי הטבעת. צמתים המעי הדק לא ניתן להבדיל בקלות macroscopically ודגימה עקבי עוזר למזער בעכבר כדי וריאציה העכבר. למטרות יצירת צקי מעי, יכולים דיסטלי קטע 5 סנטימטר כדי סוגר השוער יקיף התריסריון. קטע 10 ס"מ הארכת proximally מן cecum יקיף את מעי. רקמת המעי הקטנה הנותרת מייצגת מְעִי צָם. פי הטבעת ממוקמת 2 הפרוקסימלי ס"מ אל פי הטבעת, עם המעי הגס הנותרים, שהשתרעה עד cecum המייצג את המעי הגס 8. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 2
איור 2.   גודל תלוי תחבורת paracellular של מולקולות-Dextran FITC למרות רירית אפיתל מלא DSS קוליטיס אנימהls. צקי מעיים הוכנו מן הנקודות של עכברי DSS 10 ימים לאחר תחילת מהלך המחלה. צקים הועמסו עם 1 מ"ג / מיליליטר פתרון של FD-4 (MW 4,400 Da), FD-20 (20,000 מגוואט Da) או FD-70 (70,000 Da) ושטף של סמן החדיר FITC-dextran נמדד מעל 120 דקות. הגיל מתאים בעלי חיים בריאים שמש שולט. N = 5, 2 משכפל טכני לכל נ ** p <0.01, מבחן t. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 3
איור 3 :. השפעת השכבה הרירית-ג'ל על שלמות מחסום תרכובות הידרופוביות. צקי מעיים הוכנו מן הנקודות של עכברי DSS 10 ימים לאחר תחילת מהלך המחלה. הגיל מתאים בעלי חיים בריאים שמש שולט. לקבלת שליטה הרירית-ג'ל שלילי, מעייםהועמסו עם 10 מ"מ N-אצטיל ציסטאין (NAC) (300 נפח μl לכל 5 ס"מ של המעי) וטופחו על 37 ° C במשך 15 דקות וסמוקות מדיום חדש לפני הוכנו צקים. שקי הועמסו עם 1 מ"ג / מ"ל ​​פתרון של FD-4 (MW 4,400 Da) ושטף בהסתכלות 120 דקות. N = 3, 2 משכפל טכני לכל p * נ <0.05, ** p <0.01, מבחן t. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 4
איור 4. החדירות האזוריות של מעי כדי FD-4 במודלי Murine של דלקת מעיים. מעיים שקי הוכנו מן מְעִי צָם, המעי או נקודות של חיים בריאים, חיות DSS או אנטיביוטיקה נגרמת dysbiosis (AID) חיות. שקי הועמסו עם 1 מ"ג / מ"ל ​​פתרון של FD-4 (MW 4,400 Da) ו- fלוקס בהסתכלות 120 דקות. N = 3, 2 משכפל טכני לכל p * נ <0.05, ** p <0.01, מבחן t. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

הנה, יש לנו מפורטי הבידוד והכנה צקי מעיים להעריך תפקוד מחסום רירי vivo לשעבר. הכנות צק מעיים כבר נוצלו בעיקר במחקר של תרופות, בחינת ספיגת תרופות מועמד מעבר במעי. עם זאת, assay זה מתאים היטב באותה מידה לחקר מחלת מעיים. חדירות מעי עשוי להשתנות במידה רבה בהתאם לאזור והערכת אתר הספציפי של חדירות מאפשרות הבנה טובה יותר של החשיבות האזורית של שלמות רירית במחל עיכול. Assay הוא חזק בתנאים הפיסיולוגיים הנכונים, רקמות מבודדות נשארים קיימא עבור מורטם עד 6 שעות שלאחר. בעקבות המתת חסד, מהירות הכנת רקמות חשובה והמעי צריך להיות סמוק התכולה והועבר בינוני מחומצן במהירות אפשרית. על מנת להבטיח עקביות בין בעלי החיים, זה הכרחי כי באזורים הנכונים המעיים הם identified (איור 1). מומלץ כי חלקים במעי הגס, ileal נמדדות על פי cecum, בעוד מגזרי התריסריון והמעי הריק יתכן שרמת נמדדים מהקיבה. בגלל זנים שונים, מודלים או חיות טרנסגניות עשויים להיות גדולים יותר, ויש לי עוד gits, כדאי המאפיין את האורך הממוצע או כל קטע מעי במודל שלך לפני עוסקי מבחני חדירות.

בנוסף עקביות אזורית, חשוב להבטיח כי כל צק מעיים נחתכו שווה בהאורך ואת השק מלא את הנפח הנכון של נוזל. חוסר עקביות הגורמים הללו יגרום התנפחות שוויונית של הרירית בין מבחנים. תת התנפחות של קטע המעי לא רק מפחית את החשיפה של תוכן luminal אל פני שטח הרירי, אלא גם מגביר את עובי הרקמה שדרכו הסמן חייב לנסוע. יתר התנפחות של המגזר עלול לגרום נזק לרקמות או להפעיל-תגובות דחק בתוך הרקמה, פוטנציאל שיתוףתוצאות nfounding. יצוין, כי לצורך חישוב אפליקצית P אינו לוקח בחשבון שטח פנים של מבנה villous. אמנם זה מוביל שגיאה בחישוב החדיר לכאורה בפועל של רקמה, זה לא ישפיע על תוצאות השוואה בין דגמים, כמו שטח פן מחושב קבוע. כל שינוי פני שטח בשל מחלה מקוזזת על ידי אובדן של שלמות אפיתל הפרוטוקול הוא חזק מספיק כדי לזהות שינויים בחדירות עם התקדמות מחלה 6.

השימוש בינוני בתרבית רקמה מומלץ. במחקרים שבוצעו על ידי Barthe et al. שימוש TC199 נמצא להגדיל את תוחלת החיים באופן משמעותי של כדאיות אפיתל ואדריכלות היסטולוגית רקמות, בהשוואת מאגרי מלח פשוט 9. במחקרים שלנו הוא DMEM בינונית ו TC199 על 37 ° C סיפק תנאים אופטימליים הישרדות רקמות 5,6,10. התקשורת הנכונהמספק האפיתל עם חומרים מזינים דרושים כדי לקיים שלמויות רקמות, תוך שמירה על טמפרטורה במהלך assay מבטיח מטבוליזם רקמה האופטימלי המהווה שלמות junctional חזקה חיונית מבחנים של הובלה פעילה דרך שבילי transcellular. בטמפרטורות מתחת 37 לגרום לאובדן ° C של הכדאיות רקמות, הגדלת תחבורה paracellular ולהפחית תחבורה transcellular 11. לפיכך, הארכת הכדאיות רקמות עם תנאים אופטימליים חיוני ותוך כדי כך, assay יכול לשמש לא רק לבחון שלמות מחסום האזורית אלא גם לבחון מחקרי התערבות ותגובות פיזיולוגיות תעתיק.

בעוד בעיקר בשימוש ללימודי ספיגת תרופות, טכניקות לבחון חדירות לכאורה (אפליקצית P) של מולקולת סמן על מחסום האפיתל הם מדידה רגישה מאוד של שלמות מעי 12-15. בניגוד פונדקאי vivo לשעבר measurements של תפקוד מחסום, כגון TEER, אפליקצית P היא המדידה ישירה ורגיש מאוד של מכשול מעי 4. ראוי לציין כי מדידות TEER וחדירות כפי שהיא נמדדת על ידי אפליקציית P של מולקולות סמן לא תמיד לתאם. מדידות TEER להקיף את ההתנגדות של שני צמתים הדוקים נגדים במקביל transcellular 16. לכן TEER היא מדידה של התנגדות בשילוב המוצעים על ידי צמתים הדוקים ואת התאים עצמם. אם עמותות תאי תאים חלשות (כלומר, צומת הדוקים הם דולף) ואז התרומה זו להתנגדות הכוללת של בשכבה תהיה נמוכה. לפיכך שינויים קטנים התנגדויות junctional חזקות עבור אפיתל דולף כשינויים זניחים ההתנגדויות של האפיתל בכללותה. בניגוד לכך, מבחני אפליקצית P למדוד את היכולת של מולקולה לחצות את המחסום הרירי 17 ואכן, רגישות של מדידות אפליקצית P עשוי להיות אלאפריקניות באמצעות בחירת מולקולות סמן בגדלים שונים (איור 1). התמורה של גודל סמן חשובה ביחס למודל של מחלת מעיים נבדקת. מודלים של מחלות אלרגיה או תפקודית 18,19, שבו אובדן של שלמות היא קלה עד מתונה, עשוי להיות מתאים יותר כדי סמנים משקל מולקולרי נמוך, אשר יאפשר זיהוי של שינויים עדינים כדי תפקוד המחסום מעיים. לעומת זאת, עם דגמים כמו קוליטיס DSS, אשר כרוכות שהם מרוקנים של האפיתל במעי, סמנים גדולים עשויים להיות מתאימים יותר כדי להעריך ריפוי רירי, כפי עליות קטנות יחסית שלמות מחסום תודגשנה.

בעוד שקי מעיים להציע מודל רלוונטי מבחינה פיזיולוגית של תפקוד המחסום GI, ישנן מספר מגבלות ביחס השתנות של מודלים של בעלי חיים אשר צריכים להילקח בחשבון. למשל, מדינת הפרשה או האפיתל יכולה להשפיע היא על תחבורת paracellular ברחבי intesשן 20 ואת היושרה של שכבת ג'ל הרירית 5. בעוד מבחני vivo לשעבר המאגדת מדידות אלקטרו, כגון הכנות תא Ussing, עשויים להסביר את זה, צקי מעיים לא. שנית, בהכנת החוקרים שקי מעיים צריך להסביר מבנים הלימפה, כגון טלאים של Peyer, בתוך ההכנות שק, מכיוון שהן עשויות להשפיע על חדירות של רקמות 21. למרות שיקולים אלה, בניגוד לדגמי תרבית תאים רב, המשמש להערכת שלמות אפיתל, צקי המעיים להציע את התרומה הן של שכבת ג'ל רירית ו שכבת רירית מיוחדת בסיסית. התרומה של שכבת ג'ל רירי, בפרט, ניתן להעריך באמצעות סוכנים mucolytic, כגון ציסטאין N-אצטיל, או מולקולות נותב הידרופובי, כגון dexamethasone 5,17. זו עשויה להיות חשובה במיוחד בהערכת חדירות המעי במודלים של טיפול בסרטן או מחלת מעיים דלקתית, wאובדן כאן המכשול הרירי יכול להיות פתולוגיה מוקדם הדלקת ברירית 22,23. בדומה לכך, במודלים של מחלת שלשולים, מחלות במערכת העיכול תפקודית או dysbiosis, ייצור ריר המעי ויושרה ג'ל רירי הכוללת עשויים להשתנות באתרים אזוריים 5,19,24. Gavage האוראלי של סמנים חדירים ודגימה בסרום לאחר אפשרות נוספת להערכת חדירות מעי in vivo. אמנם שיטה זו יש מניפולציה מינימאלית של רקמה, שמדובר במדד משולב של תפקוד מחסום מעיים וזה לא להעריך את התרומה האזורית המכשול הכולל. מודלים שונים של מחלת GI צפויים להיות אתרים שונים של חשיבות יחסית אשר לא להיות מוסבר על ידי גישות gavage פה. שימוש צקי מעיים, ולכן הוא assay מהיר, רגיש רלוונטי מבחינה הפיזיולוגית אשר עשוי לשמש כדי לבחון שלמות רירית אזורי מעי במודלים של בעלי חיים קטנים של מחלה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dekantel  Non-absorbable Silk suture Braintree Scientific SUT-S 116
Media 199 (TC199)  Life Technologies 11043-023 No phenol red as this interferes with fluorescence
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) Life Technologies 21063-045 No phenol red as this interferes with fluorescence
N-acetylcysteine Sigma Aldrich Use at 10 mM in media
Small animal vascular cathether: Physiocath Data Sciences International 277-1-002
FITC-Dextran 4,400 MW Sigma Aldrich FD-4
FITC-Dextran 20,000 MW Sigma Aldrich FD-20
FITC-Dextran 70,000 MW Sigma Aldrich FD-70

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Goggins, B. J., Chaney, C., Radford-Smith, G. L., Horvat, J. C., Keely, S. Hypoxia and Integrin-Mediated Epithelial Restitution during Mucosal Inflammation. Frontiers in immunology. 4, 272 (2013).
  2. Otte, J. M., Kiehne, K., Herzig, K. H. Antimicrobial peptides in innate immunity of the human intestine. Journal of gastroenterology. 38, 717-726 (2003).
  3. Robinson, A., et al. Mucosal protection by hypoxia-inducible factor prolyl hydroxylase inhibition. Gastroenterology. 134, 145-155 (2008).
  4. Feighery, L., et al. Increased intestinal permeability in rats subjected to traumatic frontal lobe percussion brain injury. The Journal of trauma. 64, 131-137 (2008).
  5. Keely, S., et al. Chloride-led disruption of the intestinal mucous layer impedes Salmonella invasion: evidence for an 'enteric tear' mechanism. Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 28, 743-752 (2011).
  6. Keely, S., et al. Contribution of epithelial innate immunity to systemic protection afforded by prolyl hydroxylase inhibition in murine colitis. Mucosal immunology. 7, 114-123 (2014).
  7. Sourisseau, T., et al. Regulation of PCNA and cyclin D1 expression and epithelial morphogenesis by the ZO-1-regulated transcription factor ZONAB/DbpA. Mol Cell Biol. 26, 2387-2398 (2006).
  8. Ruehl-Fehlert, C., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1. Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).
  9. Barthe, L., Woodley, J. F., Kenworthy, S., Houin, G. An improved everted gut sac as a simple and accurate technique to measure paracellular transport across the small intestine. European journal of drug metabolism and pharmacokinetics. 23, 313-323 (1998).
  10. Marks, E., et al. Oral Delivery of Prolyl Hydroxylase Inhibitor: AKB-4924 Promotes Localized Mucosal Healing in a Mouse Model of Colitis. Inflammatory bowel diseases. 21, 267-275 (2015).
  11. Keely, S., et al. Hypoxia-inducible factor-dependent regulation of platelet-activating factor receptor as a route for gram-positive bacterial translocation across epithelia. Mol Biol Cell. 21, 538-546 (2010).
  12. Brayden, D. J., Bzik, V. A., Lewis, A. L., Illum, L. CriticalSorb promotes permeation of flux markers across isolated rat intestinal mucosae and Caco-2 monolayers. Pharmaceutical research. 29, 2543-2554 (2012).
  13. Hubbard, D., Ghandehari, H., Brayden, D. J. Transepithelial transport of PAMAM dendrimers across isolated rat jejunal mucosae in ussing chambers. Biomacromolecules. 15, 2889-2895 (2014).
  14. Keely, S., et al. In vitro and ex vivo intestinal tissue models to measure mucoadhesion of poly (methacrylate) and N-trimethylated chitosan polymers. Pharmaceutical research. 22, 38-49 (2005).
  15. Maher, S., et al. Evaluation of intestinal absorption enhancement and local mucosal toxicity of two promoters. I. Studies in isolated rat and human colonic mucosae. European journal of pharmaceutical sciences : official journal of the European Federation for Pharmaceutical Sciences. 38, 291-300 (2009).
  16. Balda, M. S., et al. Functional dissociation of paracellular permeability and transepithelial electrical resistance and disruption of the apical-basolateral intramembrane diffusion barrier by expression of a mutant tight junction membrane protein. The Journal of cell biology. 134, 1031-1049 (1996).
  17. Behrens, I., Stenberg, P., Artursson, P., Kissel, T. Transport of lipophilic drug molecules in a new mucus-secreting cell culture model based on HT29-MTX cells. Pharmaceutical research. 18, 1138-1145 (2001).
  18. Stefka, A. T., et al. Commensal bacteria protect against food allergen sensitization. Proc Natl Acad Sci U S A. 111, 13145-13150 (2014).
  19. Keely, S., et al. Activated fluid transport regulates bacterial-epithelial interactions and significantly shifts the murine colonic microbiome. Gut microbes. 3, 250-260 (2012).
  20. Barrett, K. E., Keely, S. J. Chloride secretion by the intestinal epithelium: molecular basis and regulatory aspects. Annual review of physiology. 62, 535-572 (2000).
  21. Soni, J., et al. Rat, ovine and bovine Peyer's patches mounted in horizontal diffusion chambers display sampling function. Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 115, 68-77 (2006).
  22. Justino, P. F., et al. Regulatory role of Lactobacillus acidophilus on inflammation and gastric dysmotility in intestinal mucositis induced by 5-fluorouracil in mice. Cancer chemotherapy and pharmacology. (2015).
  23. Tran, C. D., Sundar, S., Howarth, G. S. Dietary zinc supplementation and methotrexate-induced small intestinal mucositis in metallothionein-knockout and wild-type mice. Cancer biology & therapy. 8, 1662-1667 (2009).
  24. Musch, M. W., Wang, Y., Claud, E. C., Chang, E. B. Lubiprostone decreases mouse colonic inner mucus layer thickness and alters intestinal microbiota. Digestive diseases and sciences. 58, 668-677 (2013).
Sacs <em>Ex Vivo</em> המעיים להעריך חדירות ריריות מודלים של מחלות במערכת העיכול
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Mateer, S. W., Cardona, J., Marks, E., Goggin, B. J., Hua, S., Keely, S. Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease. J. Vis. Exp. (108), e53250, doi:10.3791/53250 (2016).More

Mateer, S. W., Cardona, J., Marks, E., Goggin, B. J., Hua, S., Keely, S. Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease. J. Vis. Exp. (108), e53250, doi:10.3791/53250 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter