Abstract
Инсульт влияет на белые материя составляет до 25% клинических инсульта презентаций, происходит бесшумно по ставкам, которые могут быть в 5-10 раз больше, и вносит значительный вклад в развитие сосудистой деменции. Немногие модели фокальной белого инсульта вещества существуют, и это отсутствие соответствующих моделей затрудняет понимание нейробиологических механизмов, участвующих в реакции повреждения и восстановления после этого типа инсульта. Основным ограничением других подкорковых моделей инсульта является то, что они не ограничивают очаговым Инфаркт к белого вещества или в основном были подтверждены в не-мышиных видов. Это ограничивает возможность применять широкий спектр мышиных исследовательских инструментов для изучения нейробиологии белого инсульта вещества. Здесь мы представляем методологию для надежного производства фокальной инсульта в мышиной белом веществе, используя локальную инъекцию необратимого ингибитора ENOS. Мы также представляем несколько вариаций на общем протоколе, включая два уникальных стереотаксическойвариации, ретроградной нейронная трассировка, а также маркировки свежей ткани и рассечение, что существенно расширит возможности применения этой техники. Эти изменения позволяют несколько подходов к анализу последствий нейробиологических этой общей и изученной формой инсульта.
Protocol
Использование животных в этом протоколе было проведено в соответствии с процедурами, утвержденными в Университете Калифорнии в Лос-Анджелесе уходу и использованию животных комитета.
Примечание: Начните с определения мышиного населения целевой. В предыдущих исследованиях, только самцов дикого типа мышей линии C57 / BL6 были использованы, однако также могут быть использованы различные трансгенные или нокаутированные мыши. Обратите внимание, что Стереотаксические координаты основаны на С57 / НД6 анатомии. Рекомендуется, чтобы каждый пользователь сначала проверить локализацию инсульта до белого вещества.
1. Белое вещество Инсульт Induction - медиальная Угловая подход
- Начинают с подготовки вытащил стеклянную пипетку с использованием 0,5 мм капиллярной трубки таким образом, что дистальный диаметр находится в диапазоне от 11 мкм 15-25.
- Приготовьте стерильную 10 мкл аликвоты L-Нио (N (5) - (1) -iminoethyl-L-орнитин HCl) при 27,4 мг / мл (130 мкМ) в стерильном 0,9% физиологического раствора.
- Предварительно заполнить притянутое стеклянную пипеткус небольшим объемом L-Нио (2-5 мкл) путем прикреплени стеклянной пипетки для трубки соединена с вакуумной линией. Положите пипеток квартиру на скамейке сверху и вставьте притянутое конец в L-Нио раствора.
- Применение вакуума до тех пор, по крайней мере, на 2 мм 0,5 мм части пипетки не будет заполнена. Выключите пылесос и вынуть пипетку. Поместите его в сторону до шага 1.12.
- Поместите мышь в индукционной камере и вызывают анестезию мыши , используя стандартный 32% изофлуран протекал через испаритель (5 л / мин вдыхают с 5 л / мин кислорода и 0,5 л / мин N 2) в течение 1 мин или до глубоко анестезируют. Перенесите мышь в стереотаксической аппарат, снабженный стереотаксической микроскопом. Обеспечивают поддержание анестезии с использованием 32% изофлуран протекал через испаритель (2 л / мин вдыхают с 5 л / мин кислорода и 0,5 л / мин N 2) и носового конуса. Проверьте глубину анестезии с пальца щепоткой.
- Отрегулируйте инъекционный руку до 36 °.
- AffiXa вытащил стеклянный держатель пипетки к дальнему концу системы впрыска под давлением низкого объема и прикрепить его к инъекционной руку стереотаксической установки.
- Пальто усов наркозом животного с вазелином и место искусственного мазь слезу над обоими глазами. Приготовьте стерильную хирургическую поле путем размещения Салфетка стерильная над головой животного с отверстием 5-10 см над головой. Подготовка aspetic хирургической поверхности бритье мех, покрывающий череп. Очистите кожу головы с чередующимися бетадин и 70% спиртом тампоны.
- Сделать 1,5 см по средней линии скальпа разрез стерильным мелкими ножницами, чтобы обнажить поверхность черепа. Сушат череп с стерильным ватным тампоном и с помощью стереотаксической микроскопа при увеличении 1-3 раза, удалите облегающего периостальное ткани с помощью стерильного инструмента микро точки.
- Отметьте брегма в качестве опорной точки, используя тонкую точку маркера.
- Дрель 2 мм ellipitical краниотомия с помощью стерильной тонкой хирургической Stip сверло0, начиная кзади на темени и кпереди, простирающейся только слева от средней линии. Удалить фрагменты костей и вышележащих мягких тканей, так что кора головного мозга можно визуализировать.
- Держите операционное поле и корковое поверхность влажной за счет прерывистого нанесения капель стерильного физиологического раствора.
- Прикрепите вытащил стеклянную пипетку к инжектору плеча стереотаксической аппарата. Совместите дальний конец пипетки с темени и нулю стереотаксической координаты.
- Advance пипетку к первой передней / задней (A / P) и медиальной / боковой (M / L) координаты приведены в таблице 1.
- Advance пипетку к поверхности коры и обнулить спинные / вентральной (D / V) измерение.
- Медленно пройти пипетку в мозг до достижения первой D / V координат в таблице 1.
- Используя систему впрыска под давлением низкого объема установлена в размере 20 фунтов на квадратный дюйм в течение 20 мс импульсов, вводят 100 нл L-Нио в мозг и подождать 5 минут, чтобы предотвратить рефлюксдо пипетки дорожки.
- Используйте калиброванный визира в окуляр микроскопа стереотаксической и увеличением 3X.
- Соответственно, смещают в общей сложности 0,100 мм 3 (длина 0,5 мм в пипетку диаметром 0,5 мм, что соответствует 100 нл) из захватного стеклянной пипетки для каждого набора координат. С помощью ридикюль, измерения и стандартизации, поскольку каждый настройки изменяется в зависимости от увеличения и шкал.
- Для точного измерения объема при каждой инъекции, приближаются к наклонную пипетку с микроскопом со стороны так, чтобы воздух-жидкость мениска имеет сагиттальный вид. Мениск должен появиться в той же фокальной плоскости и на внутренней, и внешней стенкой пипеткой.
- Медленно вывести пипетку и повторить шаги 1.13-1.16.3 на втором и третьем наборе координат , представленных в таблице 1.
- После последней инъекции, удалите пипеткой и поместите достаточное количество костной массы воска, чтобы заполнить сайт краниотомии.pproximate края раны кожи головы и связать с кожном клеем.
- Вводят 0,1 мл 0,5% -ного Marcaine в краев раны с использованием стерильного 30 G иглу, чтобы предотвратить, чтобы предотвратить локальную боль, связанную с кожей головы надрез.
- Вернуть животное к жилью и снабжения Послеоперационный антибиотиками (0,48 мг / мл триметоприм-сульфаметоксазол, или 0,5 мг / мл левофлоксацина) в питьевой воде в течение 5 дней.
2. Белое вещество Инсульт Induction - Задней Угловая подход
- Выполните шаги 1.1-1.12 как в медиальной под углом протокола захода на посадку, за исключением регулировки впрыска руку стереотаксической установки до 45 градусов ориентированных передних к задним.
- Advance пипетку к первому A / P и M / L координаты приведены в таблице 2.
- Полные оставшиеся шаги 1.14-1.20, как в боковом угловом протокола захода на посадку.
3. Ретроградная Нейрональная Этикетировочное
- Подготовить стерильный 10мкл аликвоты L-Нио при 54,8 мг / мл в 0,9% физиологического раствора.
- Приготовьте стерильную аликвоты 20% Fluororuby (или 20% биотинилированным декстрана амина или 2% Fluorogold) в 0,9% физиологическом растворе.
- Разведите вместе соотношении 1: 1 для конечной концентрации 27,4 мг / мл L-Нио и 10% Fluororuby.
- Выполнение протокола хода, как описано выше в пунктах 1.3-1.23.
- Визуализируйте изначально флуоресцентного индикатора в секции ткани путем перфузионной фиксации, cryosectioning и микроскопии , как описано выше 8.
4. обработка ткани для иммунофлуоресценции
- При соответствующем интервале постинсультной в интервале от 3 часов до 14 дней после инсульта, усыпить мышей через изофлуран передозировки или местного IACUC утвержденной процедурой.
- Откройте грудной полости с помощью ножниц под углом и вставить 23 G бабочки иглу в левый желудочек.
- Поместите небольшой разрез в правом предсердии с помощью тонких ножниц, чтобы отток дорожки для перфузионной жидкости.
- Транскардиальную обрызгивать с 30-40 мл холодного забуференного фосфатом физиологического раствора с последующим 30-40 мл холодной 4% параформальдегида со скоростью 10 мл / мин при комнатной температуре.
- Обезглавьте мыши и удалить мозг с помощью стерильных ножниц, чтобы открыть череп кзади, а затем аккуратно удалить облегающего череп с лопаточкой, поместите мозг в холодной 4% PFA в течение 24 ч, а затем передать до 30% сахарозы в PBS в течение 48 часов ,
- Подготовьте сорок микрон плавающих частей с помощью криостата и выполнять обработку антитела , как было описано выше 6-8. В данном исследовании используются следующие антитела: кролик анти-нейрофиламентов 200 (1: 500 разведение); кролика против виментин (1: 500); козий анти-GFAP (1: 500); кроличье анти-Iba-1 (1: 1000).
5. обработка ткани для анализа белка или РНК
- При соответствующем интервале постинсультной в интервале от 3 часов до 14 дней после инсульта, усыпить с помощью изофлуран передозировки или местный IACUC утвержденной процедурой.
- обезглавитьмыши и удалить мозг с помощью стерильных ножниц, чтобы открыть череп кзади, а затем аккуратно удалить облегающего череп с помощью шпателя.
- Вставьте стерильный 4 мм шпателем на передней части мозга, чтобы разъединить обонятельную луковицу и зрительных нервов. Осторожно поднимите мозг из свода черепа и поместить в ледяную рассечение буфера (1х Хэнкса сбалансированный солевой раствор, 25 мМ HEPES-KOH, рН 7,4, 35 мМ глюкозы, 4 мМ бикарбонат натрия, и 0,01 мг / мл cyclohexamide).
- Используя блок мозга и стерильные новые лезвия бритвы, подготовить 2-3 мм плиты, содержащие ход и место в холодном буфере рассечение.
- Под микроскопом рассекает, определить белого вещества основной моторной коры в закачиваемой полушарии. На более длинных интервалах постинсультных, область может быть визуально идентифицирован очаговым некрозом и миелиновой бледность.
Примечание: В более ранних интервалах после инсульта, инъекции L-Нио смешивают с 1 мкл 10% Fast Green может позволить визуальную идентификацию инсульта (- Под руководством рассекает микроскопом и с использованием свежей скальпель, тщательно препарировать область белого вещества, содержащего инсульт, идентифицированного либо Fast Green маркировки или потери ткани. Удалить облегающего корой и подстилающей полосатого тела по желанию.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Используя модель, представленную, белое вещество лежащий в основе передних конечностей сенсомоторной коры головного мозга надежно могут быть направлены. Это химически индуцированных модель удара производит фокусного аксонов и потерю миелина, астроцитоз и microgliosis (Рисунок 1), как правило , рассматривается в инфарктами лакунарными человека. Используя три инъекции, клинически полезной модели устанавливается с раннего обесценения на передних конечностей двигательных задач 7 и небольшой , но значительная часть опыта мозговой ткани ишемии , что иммуногистохимические, иммунофлуоресцентные и биохимические методы осуществимы и надежны на количественном уровне. В ранние моменты времени (час) после индукции инсульта, изменения в аксонов молекулярной организации могут быть обнаружены (рисунок 2). Через 7 дней, ход завершает свое созревание к вписанной области аксонов потери (рис 1а). В наших руках, этот метод дает фокусное белого поражения материя приближенииДЕТАЛЬ 800 мкм в диаметре и горизонтального расширения около 1 мм вдоль передне-задней оси мозолистого тела. К 7 дней, средний суммарный размер инфаркта составляет примерно 0,200 мм 3 и будет иметь эллиптическую форму. Мы наблюдали около 10% изменчивости размера инсульта как между животными и между секциями, в зависимости от того, где в эллипсе секция происходит. Дальнейший рост размера инфаркта редко можно увидеть за 7 дней.
Добавление одновременного введения декстрана результатов амина в значительной нейронного мечения в слой 5 и слой 6 клеточных тел нейронов , которые имеют аксонов выступающие через область инсульта (рисунок 3). Облегающие корковых нейронов, которые не были повреждены бутафорских аспекты процедуры (прохождение тонкой иглой), подвергаются дистальных аксонов повреждения и могут быть идентифицированы путем включения трассера с L-Нио препарата. Такой подход использования d , чтобы продемонстрировать динамические изменения в аксона начальном сегменте после инсульта 8.
В то время как небольшой размер области ткани, пострадавших от инсульта ограничивает применение других обычных способов, таких как 2,3,5-трифенилтетразолия хлорид (ТТС) окрашиванием, белое вещество область инсульт может быть идентифицирован в свежей ткани. Добавление общей красителя , таких как Fast Green производит идентифицирующую область ткани , которая может быть расчлененный под рассекает микроскопом (рисунок 4). После того, как рассекали эта ткань может быть использована для анализа белков с вестерн - блоттинга или иммунопреципитации, или для выделения и анализа (фиг.4С) РНК. Благодаря использованию различных трансгенных линий мышей, разнообразие инновационных подходов может быть использован для изучения нейробиологии после очаговой белого инсульта вещества , включая исследования по картированию клеточных судеб и лазерного захвата микродиссекции (рис 4С).
палатка "ВОК: Keep-together.within-странице =" 1 ">
Рисунок 1:. Focal Stroke белого вещества Одновременное использование медиальной и Posterior Наклонные подходов Иммунофлуоресцентного маркировки для нейрофиламентов (A, красный) показывает степень аксонов потери через семь дней после инсульта с помощью медиальной подхода. Используя заднюю наклонную подход, белый повреждение инсульта независимо от того , направлен непосредственно над боковой желудочек (B, C) и показывает интенсивную микроглии (В) и астроцитов реактивности (С). Два астроцитов промежуточные маркеры накаливания, Виментин (красный) и глиальных фибриллярный кислый белок (GFAP, зеленый), и выявить изменения в морфологии белого вещества (волокнистых) астроцитов после инсульта (C). Масштабные полоски = 500 мкм. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы увидеть увеличенную верSion этой фигуры.
Рис . 2: Белое вещество Инсульт Кастраты аксонов микродоменной Организация в течение 3 ч белого вещества индукции инсульта, аксонов организации микродоменной в узле, отмеченного бета-IV спектрина (красный) и на paranode, отмеченный contactin-ассоциированный белок (CASPR, зеленый), нарушается (стрелки, в). Контралатеральной белого вещества аксоны показывают регулярные Nodal, paranodal и juxtaparanodal организации (А и С) в то время как ипсилатеральная белое вещество показывает узловую и paranodal удлинение, которое характерно для аксонов с потерянной axoglial контактом (B и D). Шкала бар = 5 мкм.
Рисунок 3: ретроградная Нейрональная Labelinг белого вещества с инсультом Идентифицирует отдельными нейронами с повреждением аксонов. Co-инъекции флуоресцентного декстрана амина (красный) во время такта впуска позволяет идентифицировать отдельных нейронов с аксонов , пострадавших от инсульта. Большая часть маркировки происходит в аксоны в пределах слоя 5 и 6 нейронов в первичных кортикальных сенсомоторных, покрывающих инсульт. Изображение представляет 7 дней после инсульта. Шкала бар = 500 мкм. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рис . 4: микродиссекция белого вещества Stroke поражениями для использования в Биохимические и Транскрипциональные Assays Co закачке Fast Green во время индукции инсульта позволяет раннее выявление пострадавшего региона через 24 часа (A, верхняя панель). Immunoblottiнг для специфических белков аксонов могут быть выполнены , чтобы продемонстрировать снижение в области только инсульта (А, нижняя панель). При более длительных временных точках, область белого вещества инсульта (левая панель) может быть очаговым расчленены без специального маркировки (B). Правая верхняя панель показывает область белого вещества после удаления рассеченной области в то время как нижняя правая панель показывает расчлененный область белого вещества , содержащего хода (В). ПЦР для олигодендроцитов-специфических генов с использованием РНК , выделенной из рассеченных областей из белого вещества (С). IL = Ипсилатеральная; CL = контралатеральной; с = контроль; s = ход.
| впрыскивание | Передней / Задней | Медиальная / Боковая | Спинной / Брюшной |
| 0,22 | 0,22 | -2,10 | |
| 2 | 0,70 | 0,15 | -2,16 |
| 3 | 1,21 | 0,15 | -2,18 |
Таблица 1: Стереотаксические Координаты для бокового Угловая подхода (в мм).
| впрыскивание | Передней / Задней | Медиальная / Боковая | Спинной / Брюшной |
| -0,75 | -0,96 | -2,10 | |
| 2 | -1,00 | -0,96 | -2,05 |
| 3 | -1,25 | -0,96 | -2,00 |
Таблица 2: Стереотаксические Координаты для Posterior Угловая подхода (в мм).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ряд предыдущих моделей подкорковых инсульта были описаны в том числе очаговых инъекции эндотелина-1 во внутреннюю капсулу, подкорковых белого вещества и полосатого тела в крыс и мышей 12-14 6,15. Более поздние модели небольших очаговых инсультов использовали холестерина инъекции микроэмболов в сонной артерии 16 и фототромботического закупорке одного проникающего артериол 17. Каждая из этих моделей имеет как преимущества , так и недостатки 5. Описанная модель в настоящее время производит поражение , которое имеет ряд характеристик , которые имитируют человека лакунарный миокарда , включая аксонов аномалий и потерь, деградации миелина, фокусного некротической ядра и клинического дефицита , который является минимальным и демонстрирует довольно быстрое восстановление зависимой от 7 лет. Ориентация мышиный белое вещество позволяет широкое разнообразие генетических манипуляций, которые могут поддерживать механистических исследований.
критическоеЭтапы протокола включают использование точных стереотаксические координаты. Потому что мышиный белое вещество имеет небольшие размеры и варьируется от штамма к штамму, пересмотр стереотаксической координат могут быть необходимы в зависимости от возраста и штамма мыши используется. Контроль объема впрыска также имеет важное значение, поскольку это непосредственно связано с размером инфаркта. Более крупные инъекции будет производить большие штрихи, которые покушаются на вышележащих коры и подстилающей стриатуме.
Focal инъекции ET-1 с использованием подхода , описанного здесь сообщалось , но было показано , эндотелин-1 , чтобы иметь прямые паракринной эффекты на олигодендроцитов дифференцировки и созревания 10,18 вмешивающихся исследование постинсультной белого вещества биологии. В отличие от этого, L-Нио целевые подход эндотелиальные клетки в покое при производстве идентичного поражения и устраняет любые искажающие паракринной эффекты на клетках, участвующих в реакции травмы. L-Нио не является непосредственно цитотоксическое и Селецдоза Ted определяли с помощью предварительных экспериментов эскалации дозы (данные не показаны). Задний наклонены подход был разработан, чтобы более точно подрезать аксоны от первичной моторной коры головного мозга производить максимальную поведенческий дефицит, который можно отнести к белому веществу травмы. Медиальный под углом захода на посадку также повреждает кору аксоны двигателя, но распространяется более в боковом направлении и включает в себя аксонов, лежащих в основе первичной сенсорной коры головного мозга.
Поражение инсульта расширяется довольно быстро в течение первых 24 часов. К семи дней, размер инфарктом максимальна, и мы не наблюдали значительный рост поражения за это время. Дополнительные клеточные события и дегенерация аксонов будет происходить за пределами этой начальной стадии, но размер инфаркта, как измерено с помощью некротических сердечника существенно не изменится, при отсутствии какого-либо вмешательства.
Со-инъекция нейроанатомические трассеров в момент удара идентифицирует нейроны, испытывающих ишемический аксонального повреждения. Используя либо медриала или задний угловой подход, нейронные клеточные тела с поврежденными аксонов выступами остаются целыми и невредимыми. Это создает полезную модель для изучения влияния ишемического аксотомии на центральных нейронов нервной системы. Мы использовали в основном ретроградной трейсеров включая декстран амина и fluorogold, которые, как показывают превосходное поглощение инсультом поврежденных аксонов. Используя широкий спектр трансгенных и нокаутных линий мышей, пользователи этого протокола могут исследовать специфическую роль нейрональных генов, участвующих в белом инсульта независимо от ответа и ремонта травмы.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Никто
Acknowledgments
SN и MDD получил поддержку от NIH K08 NS083740 и UCLA кафедрой неврологии. AJG признает поддержку со стороны д-ра Мириам и Фондом Шелдон Адельсон Г. медицинских исследований и Ларри Л. Hillblom Фонда. KLN с благодарностью отмечает поддержку со стороны Stroke Center American Heart Association 14BFSC17760005 ASA-Bugher. ILL, EGS и STC были поддержаны NIH R01 NS071481. JDH признает поддержку со стороны NIH K08 NS083740.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| L-N5-(1-Iminoethyl)ornithine, Dihydrochloride | Calbiochem | 400600-20MG | |
| Isoflurane | Phoenix Pharmaceutical, Inc. | NDC 57319-559-06 | |
| Capillary tubes | World Precision Instruments | 50-821-807 | |
| Picospritzer | Parker Instrumentation | Picospritzer II | |
| Stereotactic setup | Kent Scientific | KSC51725 | |
| Pipette puller | KOPF | Model 720 | |
| Stereomicroscope SZ51 | Olympus | 88-124 | |
| Fine scissors | Fine Scientific Tools | 14084-08 | |
| Forceps | Harvard Apparatus | PY2 72-8547 | |
| Curved Forceps | Harvard Apparatus | PY2 72-8598 | |
| Blunt dissection tool | Fine Scientific Tools | 10066-15 | |
| Drill | Dremel | 8220-1/28 | |
| Drill bits | Fine Scientific Tools | 19007-05 | |
| Vetbond | 3M | 1469SB | |
| Marcaine | HOSPIRA | NDC 0409-1610-50 | |
| Trimethoprim-Sulfamethaxole | STI Pharmacy | NDC 54879-007-16 | |
| Fluororuby | Fluorochrome Inc | 30 mg | |
| Paraformaldehyde | Fisher | O4042-500 | |
| Sucrose | Fisher | BP220-10 | |
| Cryostat | Leica CM3050 S | 14047033518 | |
| Glass slides | Fisher | 12-544-7 | |
| Fast Green | Sigma | F7252-5G | |
| Dissection microscope | Nikon | SMZ1500 | |
| 23 G butterfly needle | Fisher | 14-840-35 | |
| 10x Hank's Balanced Salt Solution | Life Technologies | 14065056 | |
| 1 M HEPES-KOH, pH 7.4 | Affymetrix | 16924 | |
| D-Glucose | Sigma | G8270 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma | S5761 | |
| Cyclohexamide | Sigma | 01810 |
References
- Go, A. S., et al. Heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 129, 28-292 (2014).
- Saini, M., et al. Silent stroke: not listened to rather than silent. Stroke. 43, 3102-3104 (2012).
- Koton, S., et al. Burden and outcome of prevalent ischemic brain disease in a national acute stroke registry. Stroke. 44, 3293-3297 (2013).
- Jiwa, N. S., Garrard, P., Hainsworth, A. H. Experimental models of vascular dementia and vascular cognitive impairment: a systematic review. J Neurochem. 115, 814-828 (2010).
- Sozmen, E. G., Hinman, J. D., Carmichael, S. T. Models that matter: white matter stroke models. Neurotherapeutics. 9, 349-358 (2012).
- Sozmen, E. G., Kolekar, A., Havton, L. A., Carmichael, S. T. A white matter stroke model in the mouse: axonal damage, progenitor responses and MRI correlates. J Neurosci Methods. 180, 261-272 (2009).
- Rosenzweig, S., Carmichael, S. T. Age-dependent exacerbation of white matter stroke outcomes: a role for oxidative damage and inflammatory mediators. Stroke. 44, 2579-2586 (2013).
- Hinman, J. D., Rasband, M. N., Carmichael, S. T. Remodeling of the axon initial segment after focal cortical and white matter stroke. Stroke. 44, 182-189 (2013).
- McCall, T. B., Feelisch, M., Palmer, R. M., Moncada, S. Identification of N-iminoethyl-L-ornithine as an irreversible inhibitor of nitric oxide synthase in phagocytic cells. Brit j pharmacol. 102, 234-238 (1991).
- Gadea, A., Aguirre, A., Haydar, T. F., Gallo, V. Endothelin-1 regulates oligodendrocyte development. J Neurosci. 29, 10047-10062 (2009).
- Dean, D. A. Preparation (pulling) of needles for gene delivery by microinjection. CSH prot. , (2006).
- Hughes, P. M., et al. Focal lesions in the rat central nervous system induced by endothelin-1. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 62, 1276-1286 (2003).
- Whitehead, S. N., Hachinski, V. C., Cechetto, D. F. Interaction between a rat model of cerebral ischemia and beta-amyloid toxicity: inflammatory responses. Stroke. 36, 107-112 (2005).
- Frost, S. B., Barbay, S., Mumert, M. L., Stowe, A. M., Nudo, R. J. An animal model of capsular infarct: endothelin-1 injections in the rat. Behav Brain Res. 169, 206-211 (2006).
- Horie, N., et al. Mouse model of focal cerebral ischemia using endothelin-1. J Neurosci Methods. 173, 286-290 (2008).
- Wang, M., et al. Cognitive deficits and delayed neuronal loss in a mouse model of multiple microinfarcts. Neuroscience. 32, 17948-17960 (2012).
- Shih, A. Y., et al. The smallest stroke: occlusion of one penetrating vessel leads to infarction and a cognitive deficit. Nat Neurosci. 16, 55-63 (2013).
- Jung, K. J., et al. The role of endothelin receptor A during myelination of developing oligodendrocytes. J Korean Med Sci. 26, 92-99 (2011).
