Abstract
Stroke drabbar vita substansen står för upp till 25% av kliniska stroke presentationer sker tyst vid hastigheter som kan vara 5-10 gånger högre, och bidrar i hög grad till utvecklingen av vaskulär demens. Några modeller av fokal vit substans stroke finns och denna brist på lämpliga modeller har hämmat förståelsen av de neurobiologic mekanismer som är involverade i skador respons och reparation efter denna typ av stroke. Den största begränsningen av andra subkortikala stroke modeller är att de inte fokalt begränsar infarkten till den vita substansen eller har huvudsakligen validerats i icke-murina arter. Detta begränsar förmågan att tillämpa den breda variationen av murina forskningsverktyg för att studera neurobiologi vita substansen stroke. Här presenterar vi en metod för tillförlitlig produktion av en fokal stroke hos mus vit substans med hjälp av en lokal injektion av en irreversibel eNOS-hämmare. Vi presenterar också flera varianter på det allmänna protokollet inklusive två unik stereotaktiskvariationer, bakåtsträvande neuronala spårning, liksom färsk vävnad märkning och dissekering som kraftigt utöka de potentiella tillämpningar av denna teknik. Dessa variationer tillåter flera metoder för att analysera neurobiologic effekterna av denna gemensamma och understudied form av stroke.
Protocol
Användningen av djur i detta protokoll har utförts i enlighet med de förfaranden som godkänts av University of California Los Angeles Animal Care och användning kommittén.
Obs: Börja med att identifiera målet murina befolkningen. I tidigare studier har endast manliga vildtyp C57 / BL6-möss använts, dock olika transgena eller knockout-möss kan även användas. Observera att stereotaktiska koordinaterna är baserade på C57 / BL6 anatomi. Det rekommenderas att varje användare först kontrollera lokaliseringen av slaget till vit substans.
1. vita substansen Stroke Induktion - Medial Vinklad Approach
- Börja med att förbereda en drog glaspipett med hjälp av 0,5 mm kapillärrör så att den distala diameter är mellan 15-25 pm 11.
- Bered en steril 10 jil alikvot av L-Nio (N (5) - (1) -iminoethyl-L-ornitin-HCl) vid 27,4 mg / ml (130 | iM) i steril 0,9% normal saltlösning.
- Pre-fylla drog glaspipettmed en liten volym av L-Nio (2-5 | j, l) genom att anbringa glaspipett för slangar anslutna till en vakuumledning. Lägg pipetten platt på bänken topp och sätt drog änden i L-Nio lösning.
- Applicera vakuum tills minst 2 mm av 0,5 mm delen av pipetten är fylld. Stäng av vakuumet och dra tillbaka pipetten. Placera den åt sidan tills steg 1,12.
- Placera musen i en induktionskammare och inducera anestesi av musen med standard 32% isofluran strömmade genom en förångare (5 l / min inandas med 5 l / min syre och 0,5 l / min N2) under 1 minut eller tills djupt bedövades. Överför musen till en stereotaktisk apparat utrustad med en stereotaktisk mikroskop. Tillhandahålla underhåll anestesi med användning av 32% isofluran bringas att strömma genom en förångare (2 L / min inhaleras med 5 l / min syre och 0,5 l / min N2) och en noskon. Kontrollera djup anestesi med en tå nypa.
- Justera injektionsarmen till 36 °.
- Affixa drog glaspipett innehavaren till den distala änden av en låg volym insprutningssystemet och anslut den till injektions arm stereo installationen.
- Coat sövd djurets whiskers med vaselin och plats artificiell tår salva över båda ögonen. Förbereda ett sterilt kirurgiska området genom att placera en steril duk över djurets huvud med en 5-10 cm öppningen över huvudet. Förbered en aspetic kirurgisk yta genom att raka pälsen ligger över skallen. Rengör hårbotten med omväxlande Betadine och 70% spritkompresser.
- Gör en 1,5 cm mittlinje hårbotten snitt med sterila fina sax för att exponera skallen ytan. Torka skallen med en steril bomullstuss och med hjälp av en stereotaktisk mikroskop på 1-3X förstoring, ta bort alla överliggande periosteal vävnad med hjälp av en steril mikro punkt verktyg.
- Markera bregma som en referenspunkt med hjälp av en fin spets markör.
- Borra ett 2 mm ellipitical kraniotomi med en steril fin stip kirurgisk borr0; början baktill på bregma och sträcker sig framtill precis till vänster om mittlinjen. Ta bort benfragment och överliggande mjukvävnad så att hjärnbarken kan visualiseras.
- Håll operationsområdet och kortikala ytan fuktig genom intermittent applicering av droppar av steril saltlösning.
- Fäst en drog glaspipett till injektorn arm stereoapparaten. Rikta den distala änden av pipetten med Bregma och nollställa stereotaktiska koordinater.
- Avancera pipetten till den första främre / bakre (A / P) och mediala / laterala (M / L) koordinater tillhandahålls i tabell 1.
- Advance pipetten till kortikala ytan och noll rygg / ventrala (D / V) mätning.
- Sakta passerar pipetten in i hjärnan tills den når den första D / V koordinat i tabell 1.
- Med hjälp av en låg volym insprutningssystem som vid 20 psi under 20 msek pulser, injicera 100 nl av L-Nio in i hjärnan och vänta 5 minuter för att förhindra återflödeupp pipetten spåret.
- Använda en kalibrerad riktmedel i okularet av den stereotaktiska mikroskopet och en förstoring av 3X.
- Följaktligen förskjuta totalt 0,100 mm 3 (0,5 mm längd i en pipett 0,5 mm i diameter, vilket motsvarar 100 nl) från drog glaspipett för varje uppsättning koordinater. Genom att använda ett hårkors, mäta och standardisera eftersom varje uppsättning upp varierar beroende på förstoringen och skalor som används.
- För exakt volymmätning under varje injektion, närmar den vinklade pipetten med mikroskopet från sidan så att luftvätske menisken har en sagittal vy. Menisken ska visas i samma fokalplan både den inre och yttre väggen av pipetten.
- Dra långsamt pipetten och upprepa steg 1.13-1.16.3 på andra och tredje uppsättning koordinater i tabell 1.
- Efter den sista injektionen, ut pipetten och placera tillräckligt med ben vax för att fylla kraniotomi stället. enpproximate kanterna på hårbotten såret och binder med dermal lim.
- Injicera 0,1 ml av 0,5% Marcaine i sårkanterna med användning av en steril 30 G nål för att förhindra att förhindra lokal smärta i samband med hårbotten snittet.
- Tillbaka djuret till bostäder och försörjningspostoperativa antibiotika (0,48 mg / ml trimetoprim-sulfametoxazol, eller 0,5 mg / ml Levofloxacin) i dricksvattnet i 5 dagar.
2. vita substansen Stroke Induktion - posterior Vinklad Approach
- Utför steg 1,1-1,12 som i den mediala vinklade tillvägagångssätt protokoll, utom justera insprutnings arm stereo inställningen till 45 grader orienterade anterior till posterior.
- Avancera pipetten till den första A / P och M / L-koordinater ges i tabell 2.
- Komplett återstående stegen 1.14-1.20 som i sidled vinklade tillvägagångssätt protokoll.
3. Retrograd neuronal märkning
- Förbered en steril 10il alikvot av L-Nio vid 54,8 mg / ml i 0,9% normal koksaltlösning.
- Förbered en steril portion av 20% Fluororuby (eller 20% biotinylerad dextran amin eller 2% fluor) i 0,9% normal koksaltlösning.
- Späd tillsammans en: en för slutkoncentrationer av 27,4 mg / ml L-Nio och 10% Fluororuby.
- Utför stroke protokoll som ovan i steg 1.3-1.23.
- Visualisera inbyggt fluorescerande spårämne i vävnadssnitt av perfusion fixering, cryosectioning och mikroskopi som tidigare beskrivits 8.
4. Vävnadsbearbetning för Immunofluorescens
- Vid en lämplig efter stroke intervall som sträcker sig från 3 timmar till 14 dagar efter stroke, avliva möss via isofluran överdos eller lokala IACUC godkänd procedur.
- Öppna brösthålan med hjälp av vinklade sax och sätt i en 23 G fjärilsnål i den vänstra ventrikeln.
- Placera ett litet snitt i höger förmak med fina sax för att möjliggöra ett utflöde spår för organgenomströmningsfluiden.
- Transkardiellt BEGJUTA med 30-40 ml kall fosfatbuffrad saltlösning följt av 30 till 40 ml kall 4% paraformaldehyd vid en hastighet av 10 ml / min vid rumstemperatur.
- Halshugga musen och ta bort hjärnan med hjälp av en steril sax för att öppna skallen baktill och sedan försiktigt bort den överliggande skallen med en spatel och placera hjärnan i kallt 4% PFA under 24 timmar, och sedan överföra till 30% sackaros i PBS under 48 timmar .
- Förbered fyrtio mikron flytande sektioner med hjälp av en kryostat och utföra antikropps bearbetning som tidigare beskrivits 6-8. I denna studie, använd följande antikroppar: kanin anti-neurofilament 200 (1: 500 utspädning); kanin-anti-vimentin (1: 500); get-anti-GFAP (1: 500); kanin anti-Iba-1 (1: 1000).
5. Vävnadsbearbetning för protein eller RNA Analys
- Vid en lämplig efter stroke intervall som sträcker sig från 3 timmar till 14 dagar efter stroke, avliva via isofluran överdos eller lokala IACUC godkänd procedur.
- decapitate denmus och ta bort hjärnan med hjälp av en steril sax för att öppna skallen baktill och sedan försiktigt bort den överliggande skallen med en spatel.
- Infoga en steril 4 mm spatel på framsidan av hjärnan för att avskilja luktloben och synnerver. Lyft försiktigt hjärnan ut ur calvarium och placera i iskall dissektion buffert (1x Hanks balanserade saltlösning, 25 mM HEPES-KOH, pH 7,4, 35 mM glukos, 4 mM natriumvätekarbonat, och 0,01 mg / ml cyklohexamid).
- Med hjälp av en hjärn block och sterila nya rakblad, förbereda 2-3 mm plattor innehållande slaget och platsen i kallt dissektion buffert.
- Under ett dissektionsmikroskop, identifiera den vita substansen underliggande motor cortex i den injicerade hemisfären. Vid längre efter stroke intervall, kan regionen visuellt identifieras genom fokal nekros och myelin blekhet.
Obs: Vid tidigare post-stroke intervall, injektion av L-Nio blandades med 1 pl av 10% Snabb Grönt kan tillåta visuell identifiering av slaget (- Under ledning av en dissekera mikroskop och med en ny skalpell, noggrant dissekera regionen vit substans som innehåller slag, som identifierats av antingen Snabb Grön märkning eller vävnadsförlust. Ta bort överliggande cortex och underliggande striatum som önskas.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Med hjälp av modellen presenteras kan den vita substansen underliggande forelimb sensomotoriska cortex tillförlitligt riktas. Detta kemiskt inducerade stroke modell producerar fokal axonal och myelin förlust, astrocytosis och microgliosis (figur 1), som typiskt sett i humana lakunära infarkter. Genom att använda tre injektioner, är en kliniskt användbar modell upprättas med tidig försämring på forelimb motor uppgifter 7 och en liten men betydande del av hjärnvävnad erfarenheter ischemi att immunohistokemiska, immunofluorescensglas, och biokemiska metoder är genomförbara och tillförlitlig kvantitativ nivå. Vid tidiga tidpunkter (h) efter stroke induktion, kan förändringar i axonal molekylära organisationen detekteras (Figur 2). Vid 7 dagar, fullbordar stroke dess mognad till ett begränsat område av axonal förlust (Figur 1a). I våra händer, ger denna metod en samlingspunkt vita substansen skada approximabart 800 ^ m i horisontell diameter och som sträcker sig cirka 1 mm längs främre-bakre axeln hos corpus callosum. Av 7 dagar, är den genomsnittliga totala infarktstorleken ungefär 0,200 mm 3 och kommer att ha en elliptisk form. Vi har observerat cirka 10% variabilitet i stroke storlek både mellan djur och mellan sektionerna, som är beroende på var i ellipsen sektionen inträffar. Fortsatt tillväxt i storleken på infarkt är sällan mer än 7 dagar.
Tillsatsen av en samtidig injektion av dextran amin resulterar i betydande neuronal märkning lager 5 och skiktet 6 neuronala cellkroppar som har axoner skjuter genom regionen av stroke (Figur 3). Liggande kortikala neuroner som inte är skadade av sken aspekter av förfarandet (passage av fin nål), genomgår distal axonal skada och kan identifieras genom införandet av ett spårämne med L-Nio preparat. Denna metod var användningen d för att visa dynamiska förändringar i axonet inledande segmentet efter stroke 8.
Medan den lilla storleken av området av vävnaden påverkas av stroke begränsar användningen av andra vanliga tekniker såsom 2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid (TTC) färgning, kan den vita substansen stroke regionen identifieras i färsk vävnad. Tillsatsen av en gemensam färgämne såsom Snabb Grönt producerar en identifierbar vävnadsområde som kan dissekeras under ett dissektionsmikroskop (figur 4). När dissekerade denna vävnad kan användas för proteinanalys med Western blöt eller immunfällning, eller för RNA-isolering och analys (Figur 4C). Genom att använda olika transgena möss linjer, kan en mängd olika innovativa metoder användas för att studera neurobiologi efter fokal vita substansen stroke inklusive cell öde kartläggningsstudier och laser capture microdissection (Figur 4C).
tält "fo: keep-together.within-page =" 1 ">
Figur 1:. Focal vita substansen Stroke Användning Både Medial och Posterior Vinklade Approaches Immunofluorescerande märkning av neurofilament (A, röd) visar graden av axonal förlust sju dagar efter stroke med hjälp av den mediala strategi. Med användning av den bakre vinklade tillvägagångssätt, är den vita substansen stroke lesion riktad precis ovanför den laterala ventrikeln (B, C) och visar intensiv microglial (B) och astrocytisk reaktivitet (C). Två astrocyternas mellanliggande trådmarkörer, vimentin (röd) och glia fibrillärt surt protein (GFAP, grön), båda avslöjar förändringar i morfologi vit substans (fibrösa) astrocyter efter stroke (C). Skalstrecken = 500 um. Klicka här för att se en större versionsionen av denna siffra.
Figur 2:. Vit substans Stroke förändrar axonal mikrodomän organisation inom tre timmar av vit substans stroke induktion, axonal mikrodomän organisation vid noden, markerad med beta-IV spek (röd) och på paranode, präglad av contactin-associerat protein (caspr, grön), avbryts (pilar, B). Kontralaterala vita substans axoner visar regelbunden nodal, paranodal och juxtaparanodal organisation (A och C) medan den ipsilaterala vita substansen visar nodal och paranodal töjning som är typisk för axoner med förlorade axoglial kontakt (B och D). Skalstreck = 5 | j, m.
Figur 3: Retrograde Neuronal Labeling med vita substansen Stroke Identifierar enskilda nervceller med axonal skada. Samtidig injektion av fluorescerande dextran amin (röd) vid tidpunkten för stroke induktion medger identifiering av enskilda nervceller med axoner skadades av stroke. De flesta av märkningen sker i axoner inom lager 5 och 6 nervceller i primära sensomotoriska cortex liggande slaget. Bild representerar 7 dagar efter stroke. Skalstreck = 500 nm. Klicka god här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4:. Microdissection av vit substans Stroke Lesioner för användning i biokemisk och transkriptions Analyser Co injektion Fast grönt vid stroke induktion tillåter tidig identifiering av den skadade regionen vid 24 h (A, övre panelen). Immunoblotting för specifika axonal proteiner kan utföras för att visa minskningar i regionen enbart stroke (A, lägre panelen). Vid längre tidpunkter, kan regionen vita substansen stroke (till vänster) vara fokalt dissekeras utan särskild märkning (B). Övre högra panelen visar regionen av vit substans efter avlägsnande av dissekerade regionen medan den nedre högra panelen visar dissekerade regionen vit substans som innehåller stroke (B). PCR för oligodendrocyt-specifika gener med RNA isolerat från dissekerade regioner från den vita substansen (C). IL = ipsilaterala; CL = kontralateralt; c = kontroll; s = stroke.
| Injektion | Anterior / Posterior | Medialt / lateralt | Dorsal / Ventral |
| 0,22 | 0,22 | -2,10 | |
| 2 | 0,70 | 0,15 | -2,16 |
| 3 | 1,21 | 0,15 | -2,18 |
Tabell 1: stereotaktiska koordinater för Lateral Vinklad Approach (i mm).
| Injektion | Anterior / Posterior | Medialt / lateralt | Dorsal / Ventral |
| -0,75 | -0,96 | -2,10 | |
| 2 | -1,00 | -0,96 | -2,05 |
| 3 | -1,25 | -0,96 | -2,00 |
Tabell 2: stereotaktiska koordinater för Posterior Vinklad Approach (i mm).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ett antal tidigare modeller av subkortikal stroke har beskrivits inkluderande fokala injektioner av endotelin-1 i den inre kapseln, subkortikal vit substans och striatum på råtta 12-14 och mus 6,15. Nyare modeller av små kontaktpunkter stroke har utnyttjat kolesterol microemboli injektion i halspulsådern 16 och photothrombotic ocklusion av en enda genomträngande arteriole 17. Var och en av dessa modeller har både fördelar och nackdelar 5. Den nu beskrivna modellen ger en skada som har ett antal egenskaper som efterliknar människo lakunär infarkt inklusive axonal avvikelser och förlust, myelin nedbrytning, en samlingspunkt nekrotisk kärna och en klinisk underskott som är minimal och visar ganska snabb återhämtning är beroende av 7 år. Targeting murin vita substansen möjliggör en bred variation av genetiska manipulationer som kan stödja mekanistiska studier.
den kritiskasteg i protokollet inkluderar användning av noggranna stereotaktiska koordinater. Eftersom mus vita substansen är liten i storlek och varierar från stam till stam, kan översyn av stereotaktiska koordinater behövas beroende på ålder och stam av mus används. Kontroll av volymen av injektion är också viktigt eftersom det är direkt korrelerad till storleken på infarkten. Större injektioner kommer att producera större slag som inkräktar på överliggande cortex och underliggande striatum.
Focal injektion av ET-1 med användning av den metod som beskrivs här har rapporterats men endotelin-1 visade sig ha direkta parakrina effekter på oligodendrocyt differentiering och mognad 10,18 confounding studier av post-stroke vita substansen biologi. I kontrast, de L-Nio mål inflygnings endotelceller ensamt samtidigt som det producerar en identisk lesionen och eliminerar eventuella störande parakrina effekter på celler som är inblandade i skadesvar. L-Nio är inte direkt cytotoxiska och SelecTed dos bestämdes genom preliminära dosupptrappningen experiment (data ej visade). Den bakre vinklad tillvägagångssätt har utvecklats för att mer exakt skurna axoner från primära motoriska cortex producerar maximal beteende underskott som kan tillskrivas vita substansen skada. Den mediala vinklade metoden också skadar motor cortex axoner men sträcker sig mer i sidled och innebär axoner underliggande primära sensoriska cortex.
Slag skada expanderar relativt snabbt under de första 24 tim. Med sju dagar, är storleken på infarkten maximal och vi inte har observerat betydande skada tillväxt bortom den tiden. Ytterligare cellulära händelser och axonal degeneration kommer att ske utöver detta inledande skede, men infarktstorleken mätt med nekrotiska kärnan kommer inte att förändras avsevärt i avsaknad av något ingripande.
Samtidig injektion av neuroanatomiska spårämnen vid tidpunkten för stroke identifierar neuroner upplever ischemisk axonal skada. Använda antingen den medIAL eller bakre vinklad strategi, de neuronala cellkroppar med skadade axonal prognoser förbli oskadda. Detta skapar en användbar modell för att studera effekten av ischemisk axotomi på centrala nervsystemet neuroner. Vi har använt huvudsakligen bakåtsträvande spårämnen inklusive dextran amin och fluor, som båda visar utmärkt upptag av stroke-skadade axoner. Genom att använda en stor mängd transgena och knock-out mus linjer, kan användare av detta protokoll undersöka särskilda roll neuronala gener som är involverade i vit substans stroke skada respons och reparation.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen
Acknowledgments
SN och MDD fick stöd från NIH K08 NS083740 och UCLA Department of Neurology. AJG erkänner stöd från Dr. Miriam och Sheldon G. Adelson Medical Research Foundation och Larry L. Hillblom Foundation. KLN erkänner tacksamt stöd från American Heart Association 14BFSC17760005 ASA-Bugher Stroke Center. ILL, EGS och STC stöddes av NIH R01 NS071481. JDH erkänner stöd från NIH K08 NS083740.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| L-N5-(1-Iminoethyl)ornithine, Dihydrochloride | Calbiochem | 400600-20MG | |
| Isoflurane | Phoenix Pharmaceutical, Inc. | NDC 57319-559-06 | |
| Capillary tubes | World Precision Instruments | 50-821-807 | |
| Picospritzer | Parker Instrumentation | Picospritzer II | |
| Stereotactic setup | Kent Scientific | KSC51725 | |
| Pipette puller | KOPF | Model 720 | |
| Stereomicroscope SZ51 | Olympus | 88-124 | |
| Fine scissors | Fine Scientific Tools | 14084-08 | |
| Forceps | Harvard Apparatus | PY2 72-8547 | |
| Curved Forceps | Harvard Apparatus | PY2 72-8598 | |
| Blunt dissection tool | Fine Scientific Tools | 10066-15 | |
| Drill | Dremel | 8220-1/28 | |
| Drill bits | Fine Scientific Tools | 19007-05 | |
| Vetbond | 3M | 1469SB | |
| Marcaine | HOSPIRA | NDC 0409-1610-50 | |
| Trimethoprim-Sulfamethaxole | STI Pharmacy | NDC 54879-007-16 | |
| Fluororuby | Fluorochrome Inc | 30 mg | |
| Paraformaldehyde | Fisher | O4042-500 | |
| Sucrose | Fisher | BP220-10 | |
| Cryostat | Leica CM3050 S | 14047033518 | |
| Glass slides | Fisher | 12-544-7 | |
| Fast Green | Sigma | F7252-5G | |
| Dissection microscope | Nikon | SMZ1500 | |
| 23 G butterfly needle | Fisher | 14-840-35 | |
| 10x Hank's Balanced Salt Solution | Life Technologies | 14065056 | |
| 1 M HEPES-KOH, pH 7.4 | Affymetrix | 16924 | |
| D-Glucose | Sigma | G8270 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma | S5761 | |
| Cyclohexamide | Sigma | 01810 |
References
- Go, A. S., et al. Heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 129, 28-292 (2014).
- Saini, M., et al. Silent stroke: not listened to rather than silent. Stroke. 43, 3102-3104 (2012).
- Koton, S., et al. Burden and outcome of prevalent ischemic brain disease in a national acute stroke registry. Stroke. 44, 3293-3297 (2013).
- Jiwa, N. S., Garrard, P., Hainsworth, A. H. Experimental models of vascular dementia and vascular cognitive impairment: a systematic review. J Neurochem. 115, 814-828 (2010).
- Sozmen, E. G., Hinman, J. D., Carmichael, S. T. Models that matter: white matter stroke models. Neurotherapeutics. 9, 349-358 (2012).
- Sozmen, E. G., Kolekar, A., Havton, L. A., Carmichael, S. T. A white matter stroke model in the mouse: axonal damage, progenitor responses and MRI correlates. J Neurosci Methods. 180, 261-272 (2009).
- Rosenzweig, S., Carmichael, S. T. Age-dependent exacerbation of white matter stroke outcomes: a role for oxidative damage and inflammatory mediators. Stroke. 44, 2579-2586 (2013).
- Hinman, J. D., Rasband, M. N., Carmichael, S. T. Remodeling of the axon initial segment after focal cortical and white matter stroke. Stroke. 44, 182-189 (2013).
- McCall, T. B., Feelisch, M., Palmer, R. M., Moncada, S. Identification of N-iminoethyl-L-ornithine as an irreversible inhibitor of nitric oxide synthase in phagocytic cells. Brit j pharmacol. 102, 234-238 (1991).
- Gadea, A., Aguirre, A., Haydar, T. F., Gallo, V.
- Dean, D. A. Preparation (pulling) of needles for gene delivery by microinjection. CSH prot. , (2006).
- Hughes, P. M., et al. Focal lesions in the rat central nervous system induced by endothelin-1. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 62, 1276-1286 (2003).
- Whitehead, S. N., Hachinski, V. C., Cechetto, D. F. Interaction between a rat model of cerebral ischemia and beta-amyloid toxicity: inflammatory responses. Stroke. 36, 107-112 (2005).
- Frost, S. B., Barbay, S., Mumert, M. L., Stowe, A. M., Nudo, R. J. An animal model of capsular infarct: endothelin-1 injections in the rat. Behav Brain Res. 169, 206-211 (2006).
- Horie, N., et al. Mouse model of focal cerebral ischemia using endothelin-1. J Neurosci Methods. 173, 286-290 (2008).
- Wang, M., et al. Cognitive deficits and delayed neuronal loss in a mouse model of multiple microinfarcts. Neuroscience. 32, 17948-17960 (2012).
- Shih, A. Y., et al. The smallest stroke: occlusion of one penetrating vessel leads to infarction and a cognitive deficit. Nat Neurosci. 16, 55-63 (2013).
- Jung, K. J., et al. The role of endothelin receptor A during myelination of developing oligodendrocytes. J Korean Med Sci. 26, 92-99 (2011).
