A simple and general method for the synthesis of cyclic peptides using microwave irradiation is outlined. This procedure enables the synthesis of backbone cyclic peptides with a collection of different conformations while retaining the side chains and the pharmacophoric moieties., and therefore, allows to screen for the bioactive conformation.
تفاعلات البروتين البروتين (مثبطات مضخة البروتون) هي المعنية عن كثب في جميع العمليات الحيوية تقريبا، وترتبط لكثير من الأمراض البشرية. ولذلك، هناك جهد كبير لاستهداف مثبطات مضخة البروتون في مجال البحوث الأساسية وصناعة الأدوية. واجهات البروتين البروتين عادة ما تكون كبيرة، شقة، وغالبا ما تفتقر إلى جيوب، تعقيد اكتشاف الجزيئات الصغيرة التي تستهدف هذه المواقع. نهج استهداف بديلة باستخدام أجسام مضادة لها قيود بسبب سوء التوافر الحيوي عن طريق الفم، وانخفاض الخلية النفاذية، وعدم كفاءة الإنتاج.
استخدام الببتيدات لاستهداف واجهات PPI ديها العديد من المزايا. الببتيدات لديها أعلى من المرونة بتكوين وزيادة الانتقائية، وعادة ما تكون غير مكلفة. ومع ذلك، الببتيدات لها حدودها الخاصة بما في ذلك سوء الاستقرار وعدم الكفاءة عبور أغشية الخلايا. للتغلب على هذه القيود، الببتيد cyclization لا يمكن أن يؤديها. وقد تجلى Cyclization لتحسين الببتيد الانتقائيةوالاستقرار الأيض، والتوافر البيولوجي. ومع ذلك، توقع التشكل النشطة بيولوجيا من الببتيد دوري ليست تافهة. للتغلب على هذا التحدي، واحدة نهج جذابة على الشاشة مكتبة مركزة على الشاشة فيه جميع الببتيدات الحلقية العمود الفقري لها تسلسل الأساسي نفسه، ولكنها تختلف في المعايير التي تؤثر على التشكل، مثل حجم الحلقة والموقف.
وصفنا بروتوكول مفصلة لتجميع مكتبة من العمود الفقري الببتيدات الحلقية التي تستهدف مثبطات مضخة البروتون الطفيلي محددة. باستخدام نهج التصميم الرشيد، وضعنا الببتيدات المستمدة من البروتين سقالة L eishmania مستقبلات لتنشيط C-كيناز (قلة). افترضنا أن تسلسل في LACK التي يتم حفظها في الطفيليات، ولكن ليس في homolog المضيف الثدييات، قد تمثل مواقع التفاعل البروتينات التي تعتبر بالغة الأهمية لبقاء الطفيليات. تم توليفها الببتيدات الحلقية باستخدام أشعة المايكروويف لتقليل زمن رد الفعل وزيادةكفاءة. تطوير مكتبة العمود الفقري الببتيدات الحلقية مع أحجام رنين مختلفة تسهل شاشة منهجية لالتشكل النشطة الأكثر البيولوجي. يوفر هذا الأسلوب بشكل عام، وبسرعة، والسطحية لتجميع الببتيدات الحلقية.
تفاعلات البروتين البروتين (مثبطات مضخة البروتون) تلعب دورا محوريا في معظم العمليات الحيوية، من داخل الخلايا نقل الإشارة إلى خلية الموت 1. وبالتالي، تستهدف مثبطات مضخة البروتون هي ذات أهمية أساسية لالبحوث الأساسية والتطبيقات العلاجية. مثبطات مضخة البروتون يمكن تنظيمها من قبل الأجسام المضادة محددة ومستقرة، ولكن الأجسام المضادة هي مكلفة وصعبة لتصنيع ويعانون من ضعف التوافر البيولوجي. بدلا من ذلك، مثبطات مضخة البروتون يمكن أن تكون مستهدفة من قبل الجزيئات الصغيرة. الجزيئات الصغيرة هي أسهل لتجميع وغير مكلفة بالمقارنة مع الأجسام المضادة. ومع ذلك، فهي نسبيا أقل مرونة وتناسب أفضل لتجاويف صغيرة بدلا من واجهات كبيرة من البروتين البروتين 2،3. وقد أثبتت الدراسات المتنوعة التي الببتيدات، والتي هي أبسط وأرخص من الأجسام المضادة وأكثر مرونة من جزيئات صغيرة، يمكن ربط واجهات البروتين وتنظيم مثبطات مضخة البروتون 4،5. وتقدر قيمة سوق الببتيد العلاجي العالمي حول 15000000000 دولار في عام 2013 وينمو 10.5٪ أنواLLY 6. وعلاوة على ذلك، هناك أكثر من 50 الببتيدات تسويقها، نحو 270 الببتيدات في مراحل مختلفة من الاختبارات السريرية، وحوالي 400 الببتيدات في مراحل ما قبل السريرية المتقدمة 7. على الرغم من أن العديد من الببتيدات تستخدم كأدوية، والببتيدات لا تزال تشكل العديد من التحديات التي تحد من تطبيق على نطاق واسع من بينها قلة التوافر البيولوجي والاستقرار، وعدم الكفاءة في أغشية الخلايا المعبر، والمرونة بتكوين 8،9. بديل واحد لتجاوز هذه العوائق هو تطبيق تعديلات مختلفة مثل المحلي (حمض أميني-D و N-الألكلة) والعالمي (cyclization) القيود 8،10-12. كما تحدث هذه التعديلات بشكل طبيعي. على سبيل المثال، السيكلوسبورين A، الببتيد الطبيعي دوري المناعة، ويحتوي على الأحماض الأمينية-D واحد ويخضع لتعديلات N-الألكلة 13،14.
تعديل الأحماض الأمينية الطبيعية للحث على القيود المحلية، مثل D- وN-الألكلة، وغالبا ما يؤثر على الببتيد9؛ ق النشاط البيولوجي. ومع ذلك، cyclization، التي تتابع الفائدة يمكن أن يبقى كما هو، هو أكثر عرضة للحفاظ على النشاط البيولوجي. Cyclization هو وسيلة جذابة للغاية لتقييد مساحة بتكوين الببتيد عن طريق الحد من التوازن بين التشكل مختلفة. فإنه عادة ما يزيد من النشاط البيولوجي والانتقائية من خلال الحد من الببتيد إلى التشكل النشط الذي يتوسط وظيفة واحدة فقط. Cyclization أيضا يحسن الاستقرار الببتيد عن طريق الحفاظ على الببتيد في التشكل الذي أقل معترف بها من قبل الانزيمات المهينة. في الواقع، عرضت الببتيدات الحلقية قد تحسنت الاستقرار الأيض، التوافر البيولوجي، والانتقائية مقارنة مع نظرائهم الخطية 15-17.
ومع ذلك، يمكن cyclization أن يكون سلاح ذو حدين لأنه في بعض الحالات قد يمنع تقييد الببتيدات من تحقيق التشكل النشطة بيولوجيا. للتغلب على هذه العقبة، مكتبة مركزة فيه جميع الببتيدات لديها نفس sequenc الأوليةيمكن توليفها الإلكترونية وبالتالي ثابتة pharmacophores. الببتيدات في المكتبة تختلف في المعايير التي تؤثر على هيكلها، مثل حجم الحلبة، والموقف، وذلك لفحص في وقت لاحق لالتشكل الأكثر النشطة بيولوجيا 9،18.
الببتيدات يمكن توليفها في كل حل ونهج التوليف الببتيد الحالة الصلبة (SPPS)، والتي هي الآن نهج التوليف الببتيد أكثر انتشارا وسيجري بحثه باستفاضة. SPPS هو العملية التي تتم التحولات الكيميائية على دعم قوي من خلال رابط لإعداد مجموعة واسعة من المركبات الاصطناعية 19. SPPS يتيح تجميع الببتيدات بواسطة اقتران التوالي من الأحماض الأمينية بطريقة متدرجة من C-المحطة، التي يتم تركيبها على دعم قوي، إلى N-المحطة. يجب أن ملثمين الحامض الجانب سلاسل N-α-الأمينية مع حماية الفئات التي هي مستقرة في ظروف التفاعل استخدمت خلال الببتيد استطالة لضمان إضافة حمض أميني واحد في كل شارعالجيش الشعبي. في الخطوة النهائية، يتم تحرير الببتيد من الراتنج والجانب سلسلة حماية الفئات تتم إزالة متزامنة. في الوقت الذي يجري تصنيعه الببتيد، يمكن إزالة جميع الكواشف القابلة للذوبان من الدعم مصفوفة الببتيد الصلبة عن طريق الترشيح وجرفت في نهاية كل خطوة اقتران. مع مثل هذا النظام، وفائض كبير من المواد الكيميائية في تركيز عال يمكن أن تدفع ردود الفعل اقتران على الانتهاء وجميع الخطوات التوليف لا يمكن أن يؤديها في السفينة نفسها دون أي نقل للمواد 20.
على الرغم من SPPS بعض القيود مثل إنتاج ردود فعل غير مكتملة، التفاعلات الجانبية، الكواشف النجسة، فضلا عن الصعوبات رصد رد فعل 21، جعلت من "المعيار الذهبي" لتخليق الببتيد مزايا SPPS. وتشمل هذه المزايا خيار دمج الأحماض الأمينية غير طبيعية، والأتمتة، وتنقية سهلة، والخسائر المادية مصغر، واستخدام الكواشف الزائدة، مما أدى إلىعوائد عالية. وقد تبين SPPS أن تكون مفيدة للغاية في تركيب سلاسل صعبة 21،22، التعديلات الفلورسنت 23، والمكتبات الببتيد 24،25. SPPS هو أيضا مفيد جدا لغيرها من التجمعات بولي سلسلة مثل [أليغنوكليوتيد 26،27، 28،29 يغوساكاريدس، والببتيد الأحماض النووية 30،31. ومن المثير للاهتمام، في بعض الحالات، تبين SPPS ليكون من المفيد لتجميع الجزيئات الصغيرة التي تتم عادة في حل 32،33. يستخدم SPPS سواء في نطاق ضيق للبحث والتدريس 34،35 وكذلك على نطاق واسع في صناعة 36-38.
استراتيجيات تركيب اثنين من التي تستخدم بشكل رئيسي في منهجية SPPS لتركيب الببتيدات هي butyloxycarbonyl (بوك) و 9 fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc). كانت الاستراتيجية الأصلية قدم لSPPS بوك، الأمر الذي يتطلب شروط حمض قوية لإزالة جانب سلسلة حماية الفئات ويلتصق الببتيد من صESIN. التوليف الببتيد تستند Fmoc، ومع ذلك، يستخدم الظروف قاعدة المعتدلة ويعتبر بديل أكثر اعتدالا لحمض عطوب بروتوكول بوك 39. استراتيجية Fmoc تستخدم المتعامدة تي بوتيل (TBU) حماية جانبية السلسلة التي تم إزالتها في الخطوة الأخيرة من التوليف بينما الشق الببتيد من راتنج تحت الظروف الحمضية.
ويرد المبدأ العام لتخليق الببتيد على دعم قوي في الشكل 1. والأحماض الأمينية الأولي، من قبل ملثمين مجموعة حماية مؤقتة على N-α-المحطة، يتم تحميل على الراتنج من C-المحطة. ويستخدم فريق حماية شبه دائمة لإخفاء سلسلة الجانب أيضا إذا لزم الأمر (الشكل 1، الخطوة 1). يتم تجميع توليف الببتيد الهدف من C-محطة إلى N-محطة بدورات متكررة من deprotection من مجموعة حماية N-α-مؤقتة (الشكل 1، الخطوة 2) واقتران المقبل الأحماض الأمينية المحمية (الشكل 1 </str أونج> الخطوة 3). بعد تحميل الماضي الأحماض الأمينية (الشكل 1، الخطوة 4)، هو المشقوق الببتيد من الدعم الراتنج وطرد الجماعات حماية شبه دائمة (الشكل 1، الخطوة 5).
الشكل 1. مخطط عام للنفايات الصلبة الببتيد مرحلة التوليف. ويرتكز هذا الحمض الأميني N-α محمية باستخدام مجموعة الكربوكسيل عن طريق رابط لالراتنج (الخطوة 1). يتم تجميعها الببتيد المطلوب بطريقة خطية من C-محطة إلى N-محطة بدورات متكررة من deprotection من مجموعة حماية مؤقتة (TPG) من N-α (الخطوة 2) واقتران الأحماض الأمينية (الخطوة 3). بعد إنجاز عملية التوليف (الخطوة 4)، وdeprotected المجموعات حماية شبه دائمة (SPG) أثناء الانقسام الببتيد (الخطوة 5).الحصول = "_ فارغة"> الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
بعد تجميع سلسلة الببتيد كاملة، لا يمكن أن يتحقق cyclization عدة بدائل: (A) وجها لالذيل cyclization – وهذا هو وسيلة مريحة ولكن محدودة لأنها توفر خيار واحد فقط لcyclization (الشكل 2A)، (B) cyclization باستخدام الأحماض الأمينية من سلسلة من الفائدة التي تحتوي على المجموعات الوظيفية النشطة بيولوجيا – ومع ذلك، فإن استخدام هذه الأحماض الأمينية قد تؤثر على النشاط البيولوجي (الشكل 2B)، و (C) cyclization بإضافة الأحماض الأمينية (أو اللبنات الأخرى) من دون إزعاج تسلسل النشطة بيولوجيا. إدخال هذه الجزيئات هي على نطاق واسع لأنه يتيح إنتاج المكتبات تركز دون تعديل تسلسل الفائدة (الشكل 2C).
Figure 2. استراتيجيات cyclization الببتيد البديل (A) الرأس الى الذيل cyclization، من خلال السندات الببتيد بين C-محطة وN-محطة؛ (B) cyclization بين المجموعات الوظيفية مثل السندات ثاني كبريتيد بين السيستين المخلفات (1)، أو سندات أميد بين السلاسل الجانبية من ليسين لالأسبارتيك / حمض الجلوتاميك (2)، أو سلسلة جانبية لN- أو C-محطة (3 -4)؛ (C) cyclization بإضافة الأحماض الأمينية إضافية أو مشتقات الأحماض الأمينية أو الجزيئات الصغيرة، على سبيل المثال قبل (R0) وبعد (R7) تسلسل النشطة بيولوجيا. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
يستخدم توليف أشعة الميكروويف لتسخين ردود الفعل، وبالتالي تسريع الكيميائية العضوية التي يساعدها الميكروويف التحولات 40،41. ويستند كيمياء الموجات الصغيرة على قدرة كاشف / مذيب لاستيعابالميكروويف الطاقة وتحويله إلى حرارة 42. قبل أن تصبح هذه التكنولوجيا على نطاق واسع، وكان من العوائق الرئيسية التي يجب التغلب عليها، بما في ذلك التحكم واستنساخ بروتوكولات التوليف وعدم وجود نظم المتاحة لدرجة الحرارة والضغط ضوابط كافية 43،44. وقد تم التقرير الأول من التوليف الببتيد بمساعدة الميكروويف باستخدام الميكروويف المطبخ لتجميع عدة الببتيدات قصيرة (7-10 الأحماض الأمينية) مع تحسن ملحوظ في كفاءة اقتران ونقاء 45. وعلاوة على ذلك، وقد تبين طاقة الميكروويف إلى تقليل سلسلة التجميع، والحد من التفاعلات الجانبية، والحد من تروسم، وتحسين معدلات اقتران، وكلها حيوية لتسلسل صعبة وطويلة 46-53.
حاليا استخدام الإشعاع الميكروويف لتركيب الببتيدات أو المركبات ذات الصلة على دعم قوي واسعة النطاق، بما في ذلك (A) التوليف في الماء بدلا من المذيبات العضوية 54؛ (B) توليف الببتيدات معالتعديلات بعد متعدية المشتركة، مثل glycopeptides 55-58 أو 59-61 phosphopeptides، الذي التوليف يصعب عادة بسبب كفاءة اقتران منخفضة من إعاقة sterically مشتقات الأحماض الأمينية. (C) توليف الببتيد مع تعديل في العمود الفقري، مثل azapeptides، والتي يمكن أن يشكلها استبدال C (α) من بقايا الأحماض الأمينية مع ذرة النيتروجين 62، أو peptoids، التي يتم توصيلها إلى سلسلة جانبية النيتروجين أميد بدلا من الذرة Cα 63،64. (D) التوليف من الببتيدات الحلقية 65-71. و (E) توليف المكتبات اندماجي 51،72. وفي العديد من الحالات، ذكرت والكتاب كفاءة أعلى وتخفيض الوقت التوليف باستخدام أشعة الميكروويف بالمقارنة مع البروتوكول التقليدي.
باستخدام تصميم عقلاني 73-75، وضعنا الببتيدات المضادة للالطفيلية التي كانت مستمدة من مستقبلات السقالة L eishmania في FOص تنشيط C-كيناز (قلة). LACK تلعب دورا هاما في المرحلة المبكرة من العدوى الليشمانيا 76. الطفيليات معربا عن مستويات أدنى نقص تفشل في تتطفل حتى الفئران خطر المناعية 77 كما تشارك نقص في عمليات الطفيلي يشير الأساسية وتخليق البروتين 78. لذلك، وعدم هو بروتين سقالة الرئيسي 79 وهدف المخدرات قيمة. التركيز على تسلسل في LACK التي يتم حفظها في الطفيليات، ولكن ليس في البلد المضيف الثدييات homolog RACK، حددنا من الأحماض الأمينية الببتيد 8 (RNGQCQRK) إنخفاضا الليشمانيا ليرة سورية. الجدوى في الثقافة.
هنا، نحن تصف بروتوكول لتركيب العمود الفقري دوري الببتيدات المستمدة من تسلسل البروتين LACK المذكورة أعلاه. تم توليفها الببتيدات على دعم قوي باستخدام الميكروويف التدفئة عن طريق منهجية SPPS مع بروتوكول Fmoc / TBU. تم مترافق الببتيدات إلى TAT 47-57 (YGRKKRRQRRR) الناقل الببتيد من خلال السندات أميد كماجزء من SPPS. وقد استخدم النقل استنادا TAT من مجموعة متنوعة من البضائع إلى داخل الخلايا لأكثر من 15 عاما، وقد تم تأكيد تسليم البضائع إلى العضيات التحت خلوية 80. أربعة linkers مختلفة، السكسينيك وأنهيدريد الغلوتاريك وكذلك الأديبيك وحمض البيميليك، استخدمت لأداء cyclization لتوليد linkers حمض الكربوكسيلية من 2-5 الكربون. وقد تم Cyclization باستخدام طاقة الميكروويف، وأجريت الانقسام وجنبا إلى سلسلة خطوات deprotection النهائية يدويا بدون طاقة الميكروويف. استخدام المزج الميكروويف الآلي تحسين نقاء المنتج، وزيادة المحصول المنتج، وتخفيض مدة التوليف. ويمكن تطبيق هذا البروتوكول العام للدراسات الأخرى التي تستخدم الببتيدات لفهم الآلية الجزيئية مهمة في المختبر والمجراة وتطوير العقاقير المحتملة لعلاج أمراض الإنسان.
يوصف تركيب مكتبة مركزة من العمود الفقري الببتيدات الحلقية المستمدة من البروتين عدم وجود طفيل الليشمانيا في استخدام المزج الميكروويف مؤتمتة بالكامل. وقد وضعت مكتبة مركزة من الببتيدات الحلقية مع pharmacophores التمايز ومختلف linkers. إضافة linkers مختلفة مثل أنهيدريد الغلوت?…
The authors have nothing to disclose.
نشكر لورين فان فاسينهوف، Sunhee هوانج، وداريا Mochly روزين لإجراء مناقشات مفيدة. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة NIH منح RC4 TW008781-01 C-IDEA (SPARK) لكيو زيارتها للممولين أي دور في تصميم الدراسة وجمع البيانات وتحليلها، قرار نشر أو إعداد المخطوطة.
REAGENTS | |||
Solid support, Rink Amide AM resin ML | CBL | BR-1330 | loading: 0.49 mmol/g |
Fmoc-Ala-OH | Advanced Chemtech | FA2100 | |
Fmoc-Arg(Pbf)-OH | Advanced Chemtech | FR2136 | |
Fmoc-Asn(Trt)-OH | Advanced Chemtech | FN2152 | |
Fmoc-Asp(OBut)-OH | Advanced Chemtech | FD2192 | |
Fmoc-Cys(Trt)-OH | Advanced Chemtech | FC2214 | |
Fmoc-Gln(Trt)-OH | Advanced Chemtech | FQ2251 | |
Fmoc-Glu(OtBu)-OH | Advanced Chemtech | FE2237 | |
Fmoc-Gly-OH | Advanced Chemtech | FG2275 | |
Fmoc-His(Trt)-OH | Advanced Chemtech | FH2316 | |
Fmoc-Ile-OH | Advanced Chemtech | FI2326 | |
Fmoc-Leu-OH | Advanced Chemtech | FL2350 | |
Fmoc-Lys(Boc)-OH | Advanced Chemtech | FK2390 | |
Fmoc-Met-OH | Advanced Chemtech | FM2400 | |
Fmoc-Phe-OH | Advanced Chemtech | FF2425 | |
Fmoc-Pro-OH | Advanced Chemtech | FP2450 | |
Fmoc-Ser-(tBu)-OH | Advanced Chemtech | FS2476 | |
Fmoc-Thr(tBu)-OH | Advanced Chemtech | FT2518 | |
Fmoc-Trp(Boc)-OH | Advanced Chemtech | FW2527 | |
Fmoc-Tyr(But)-OH | Advanced Chemtech | FY2563 | |
Fmoc-Val-OH | Advanced Chemtech | FV2575 | |
1-Methyl-2-pyrrolidinone (NMP) | Sigma | 328634 | Caution Toxic/Highly flammable/Irritant. |
N,N-Dimethylformamide (DMF) | Alfa Aesar | 43465 | Caution Toxic |
Use high quality DMF to eliminate side reactions such as Fmoc removal as a result of the dimethylamine traces from DMF decomposition. | |||
Dichloromethane (DCM) | Sigma | D65100 | Caution Harmful |
Dibromomethane (DBM) | Sigma | D41868 | Caution Harmful |
Trifluoroacetic acid (TFA) | Sigma | T62200 | Caution Corrosive/Toxic |
Trifluoroacetic acid, HPLC grade (TFA) | Sigma | 91707 | Caution Corrosive/Toxic |
Diethylether | Sigma | 31690 | Caution Highly flammable/Harmful |
Triisopropylsilane (TIS) | Sigma | 233781 | Caution Irritant/Flammable |
Water, HPLC grade | Sigma | 270733 | |
Acetonitroile, HPLC grade (ACN) | Fisher Scientific | A998-4 | Caution Flammable/Irritant/Harmful |
N,N-Diisopropylethylamine (DIEA) | Sigma | 3440 | Caution Corrosive/Highly flammable |
Piperidine | Sigma | W290807 | Caution Toxic/Highly flammable |
Pyridine | Sigma | 270970 | Caution Highly flammable/Harmful |
Ethanol (EtOH) | Sigma | 459844 | Caution Highly flammable/Irritant |
1-Hydroxybenzotriazole hydrate (HOBt) | Sigma | 157260 | Caution Highly flammable/Irritant/Harmful |
O-(Benzotriazol-1-yl)-N,N,N′,N′-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU) | Sigma | 12804 | Caution Irritant/Harmful |
Benzotriazole-1-ly-oxy-tris-pyrrolidinophosphonium hexafluorphosphate (PyBOP) | Advanced Chemtech | RC8602 | Caution Irritant |
Ninhydrin | Sigma | 454044 | Caution Harmful |
Phenol | Sigma | P3653 | Caution Corrosive/Toxic |
Potassium cyanide (KCN) | Sigma | 11813 | Caution Very Toxic |
Potassium hydroxide (KOH) | Sigma | 221473 | Caution Toxic |
N,N’- | Sigma | 38370 | Caution Flammable/ Toxic |
Diisopropylcarbodiimide (DIC) | |||
4-Dimethylaminopyridine (DMAP) | Sigma | 522805 | Caution Toxic/Irritant |
Glutaric anhydride | Sigma | G3806 | Caution Flammable/Irritant/Harmful |
Succinic anhydride | Sigma | 239690 | Caution Irritant/Harmful |
Adipic acid | Sigma | A26357 | Caution Toxic/Irritant |
Pimelic acid | Sigma | P45001 | Caution Toxic/Irritant |
Chloranil | Sigma | 23290 | Caution Toxic/Irritant |
Acetaldehyde | Sigma | 402788 | Caution Flammable/ Toxic |
EQUIPMENT | |||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Centrifuge | Beckman Coulter | Allegra 6R centrifuge | |
Lyophilizer | Labconco | freezone 4.5 | |
Vacuum pump | Franklin Electric | model 1101101416 with 3/4 HP | Alcatel pump with Franklin Motor |
Polypropylene cartridge 12 ml | Applied Separation | 2419 | |
Cap plug for 12 ml polypropylene cartridge | Applied Separation | 8157 | |
Polypropylene cartridge 3 ml | Applied Separation | 2413 | |
Cap plug for 3 ml polypropylene cartridge | Applied Separation | 8054 | |
Stop cocks PTFE | Applied Separation | 2406 | |
Tubes flat, 50 ml | VWR | 21008-240 | |
Extraction manifold, 20 pos, 16 x 100 mm tubes | Waters | WAT200609 | |
Shaker, BD adams™ nutator mixer | Fisher scientific | 22363152 | |
Nalgene HDPE narrow mouth IP2 bottles, 125 ml | Fisher scientific | 03-312-8 | |
Erlenmeyer flask | Fisher Scientific | FB-501, 500 ml | |
Heating block | Thermolyne | 1760 dri bath | |
Disposable borosilicate glass tubes with plain end | Fisher Scientific | 14-961-25 | |
Micropipettes and tips Finnpipette | Thermo | 20–200 and 100–1,000 μl | |
HPLC vials – micro vl pp 400 µl PK100 | VWR | 69400-124 | |
HPLC vial- Blue Snap-It Cap | VWR | 66030-600 | |
Analytical HPLC column | Peeke Scientific | U1-5C18Q-JJ | ultro 120 5 µm C18Q, 4.6 mm ID 150 mm |
Prep HPLC column, XBridge | Waters | OBD C18 5 µm column | 19 mm × 150 mm |
Mass spectrometer | Applied Biosystems | Voyager DE-RP |