Bu protokol piyasada mevcut malzemeler ile foto-duyarlı lipozomlar entegre altın nanopartikülüne için basit bir hazırlık yöntem açıklanır. Aynı zamanda darbeli lazer tedavisi üzerine sentezlenen lipozom mikro-kabarcık kavitasyon sürecini ölçmek için nasıl gösterir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Darbe Lazer Tahrik olma üzerine Altın Nanopartikül Entegre Fotoğraf duyarlı lipozomlar ve Bunların Mikro-kabarcık Kavitasyon Ölçülmesi Sentezi
Bu makalede
Özet
Özet
Işığa duyarlı nanopartiküller (NP'ler), ilaç salınımı üzerinde mekansal, zamansal ve dozaj kontrolü sağlama potansiyelleri nedeniyle büyük ilgi görmüştür. Bununla birlikte, ilgili teknolojilerin çoğu hala geliştirme sürecindedir ve klinikler tarafından temin edilememektedir. Burada, bu ışığa duyarlı NP'lerin ticari olarak temin edilebilen altın NP'ler ve ısıya duyarlı lipozomlarla kolay bir şekilde üretilmesini açıklıyoruz. Kalsein, ısı / ışık stimülasyonu üzerine kapsülleme verimliliğini ve salım kinetik profilini değerlendirmek için bir model ilaç olarak kullanılır. Son olarak, bu foto tetiklemeli salınımın, hidrofon ile ölçülebilen mikro kabarcık kavitasyonunun neden olduğu zar bozulmasından kaynaklandığını gösteriyoruz.
Giriş
olasılık maksimize özgüllük ve minimal yan etkileri ile, spatial- temporal- ve dozaj kontrollü modası uyuşturucu teslim çekici bir şekilde dış uyaranlara kullanılarak ilaç salımını tetiklemek için. Eksojen uyaranlara duyarlı sistemlerin (ışık, manyetik alan, ultrason, mikrodalga radyasyon) geniş bir yelpazede arasında, ışık tetiklenen platformlar kliniklerinde onların non-invaziv, sadelik ve uyum sayesinde, caziptir. Geçtiğimiz on yıl içinde 1 Kapsamlı bir araştırma Ancak bu tür yakın kızılötesi ışık sorumlu altın gibi platform teknolojileri, çeşitli sağlamıştır (Au) nanocages akıllı polimerler ile kaplanmış, uyuşturucu, 3 ve kendini monte porph....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Hazırlık
- Yuvarlak temiz 100 mi su regia (konsantre nitrik asidin 1 parçası (HNO 3) ve konsantre edilmiş hidroklorik asit (HCI) 3 ölçü) ve DI suyla şişeler yıkama ile taban şişe içine tartılır. şişeler Otoklav ve 15 dakika boyunca 100 ° C'de sıcak hava fırınında kurutun. Sarın ve kullanılıncaya kadar steril şişeler saklayın.
- % 70 etanol kullanılarak elle tutulan mini ekstruder kümesi sterilize edin.
- Döner buharlaştırıcı açın ve sırasıyla 37 ° C ve 4 ° C'de sıcak su banyosu ve soğutma kulesi sıcaklığını ayarlamak.
- 10 ml 0.1 mM, fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) (pH 7.4) içinde kalseinin 374 mg çözülmesiyle sto....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
10: 4 ya da 7.95: Lipozomlar 86 mol oranında DPPC, MPPC ve DSPE-PEG2000 ile geleneksel bir ince film hidrasyon tekniği kullanılarak hazırlandı 0.65. 1.39 mg / ml 12 Au NPlerin boyutu ışık belirlenmesi önemlidir aşağıdaki lazer ikaz deney sırasında dönüşüm verimi ısı. Au NPS küçük boyutta yüksek 13 Böylece 5 nm Au NPS, satıcıdan küçük numuneler, kapsülleme için seçildi. Nakleden verimliliktir. Sentez sırasında, hidrasyon Au NP içeren ortam ve daha sonra serbest kalse.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
İnce film hidratasyon Lipozomların elde edilmesi için geleneksel bir yöntemdir. Organik çözücü (bu durumda kloroform), ilk şişenin üzerine ince bir lipid filmi oluşturmak için 37 ° C'de bir döner buharlaştırıcı içinde lipitleri yok etmek için kullanılan ve daha sonra çıkarıldı. Bu lipid filmi 60 mM Calcein ve 5 nm ve Au NP içeren sulu bir çözelti ile hidre edilmiştir. Hidratlama işlemi sırasında, sıcaklık 50 ° C civarında muhafaza edildi ve şişe sürekli balon döndürülerek çalkalandı. Bu aşamada önemli buharlaştırılm.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
herhangi bir çıkar çatışması beyan edilir.
Teşekkürler
Bu çalışma kısmen Milli Eğitim Singapur Bakanlığı (CX için RG 64/12) ve Nanotıp NTU-Northwestern Enstitüsü tarafından Tier-1 Akademik Araştırma Fonu tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1,2-Dipalmitoil-sn< / em>-glisero-3-fosfokolin (DPPC | ) Avanti Polar Lipidler (Alabama, ABD) | 850355P | Tozu, -20 ° C'de saklayın; C |
| 1-palmitoil-2-hidroksi- sn< / em>-glisero-3-fosfokolin (MPPC) | Avanti Polar Lipidler (Alabama, ABD) | 855675P | Tozu, -20 ° C'de saklayın; C |
| 1,2-distearoil-sn-glisero-3-fosfoetanol-amin-N-[metoksi (polietilen glikol)-2000] (amonyum tuzu) (DSPE-PEG2000) | Avanti Polar Lipidler (Alabama, ABD) | 880120P | Tozu, -20 °C'de saklayın; C |
| Altın Nanopartiküller | Sigma Aldrich | 752568-100mL | 5 nm parçacıkları, 0.1&1 ° C'de stabilize edilmiştir; mM PBS |
| Calcein | Sigma Aldrich | C0875-10g | 60 mM, pH 7.4 (NaOH kullanılarak ayarlanır) |
| fosfat tamponlu salin (PBS) | Sigma Aldrich | P5493 | 0.1 mM, pH 7.4 |
| Çift damıtılmış su | Millipore Milli-DI su arıtma sistemi | ||
| Triton X100 | Sigma, Yaşam Bilimleri | X-100 | Toplam kapsüllemeyi hesaplamak için lipozomları bozmak için |
| Rotavapor | Buchi (İsviçre) | R 210 | Liposome hazırlama için kullanılır |
| Isıtma banyosu | Buchi (İsviçre) | B 491 | Liposome hazırlama için kullanılır |
| Vakum Kontrol Cihazı | Buchi (İsviçre) | V-850 | Liposome hazırlama için kullanılır |
| Vakum Pompası | Buchi (İsviçre) | V-700 | Liposome hazırlama için kullanılır |
| Sıcaklık kontrollü devridaim banyosu | Polyscience | Liposome hazırlama için kullanılır | |
| Isıtma bloklu mini ekstruder tertibatı | Avanti Polar Lipids (Alabama, ABD) | 610000 | Lipozomların ekstrüzyonu için kullanılan |
| Şırıngalar, 1.000 &# 956; l | Avanti Polar Lipids (Alabama, ABD) | 610017 | Lipozomların ekstrüzyonu için kullanılır |
| Polikarbonat filtre membranı, 200 nm | Whatmann | 800281 | Lipozomların ekstrüzyonu için kullanılır |
| Filtre Desteği | Avanti Polar Lipids (Alabama, ABD) | 610014 | Lipozomların ekstrüzyonu için kullanılır |
| PD 10 Tuz giderme kapları, Sephadex G-25 orta | GE Sağlık, Yaşam bilimleri | 17-0851-01 | Lipozomları saflaştırmak için kullanılır |
| Santrifüj | Sigma Laboratuvar Santrifüjleri | 3K30 | Lipozomal çözeltiyi konsantre etmek için kullanılır |
| Rotor | Sigma | 19777-H | Lipozomal çözeltiyi konsantre etmek için kullanılır |
| Zetasizer | Nano ZS Malvern | Lipozom boyutu ve zetapotansiyel tayini için kullanılır | |
| UV-Görünür Spektrofotometre | Shimadzu | UV-2450 | Numunelerin absorbansını ölçmek için kullanılır |
| Floresan Spektroflorometre ve nbsp; | Moleküler Cihazlar | SpectraMax M5 | Numunelerin floresan emisyonunu ölçmek için kullanılır |
| Nd:YAG Lazer | NewWave Research | 532 nm; Maksimum güç: 17 mJ; Genişlik: 406 Nsec; Numune ışınlaması için kullanılır | |
| HNR Hidrofon | ONDA | HNR-1000 | 1 mm çap ve 450 nV/Pa hassasiyet, Uygun çalışma frekansı aralığı: 0.25-10 Mhz; Kalibrasyon: 50 mV/Çubuk; Akustik sinyalleri ölçmek için kullanılır |
| Dijital Osiloskop | LECORY - Dalga Koşucusu 64Xi-A | Frekans: 600 MHz; Maksimum örnekleme hızı: 10 Gs/sn (iki kanalda); Ölçülen akustik sinyalleri kaydetmek için kullanılır |
Kaynaklar
- McCoy, C. P., et al. Triggered drug delivery from biomaterials. Expert Opin. Drug Deliv. 7 (5), 605-616 (2010).
- Yavuz, M. S., et al. Gold nanocages covered by smart polymers for controlled release with near-infrared light. Nat. Mater. 8
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
