Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Neuroscience

كشف في وقت واحد ج-فو التنشيط من مواقع مكافأة Mesolimbic والقشري المتوسطي الدوبامين بعد ساذج السكر والدهون الابتلاع في الجرذان

doi: 10.3791/53897 Published: August 24, 2016
* These authors contributed equally

Summary

الهدف من هذه الدراسة هو تحديد شبكات الدماغ وزعت المتعلقة مكافأة من قبل ترسيم تقنية immunohistological موثوقة باستخدام الخلوي تفعيل ج منظمات المزارعين لقياس التغيرات في وقت واحد في مسارات الدوبامين ومواقع المحطة بعد تناول الرواية من الدهون والسكر في الفئران.

Abstract

تستخدم هذه الدراسة الخلوية تفعيل ج مكتب الإحصاء الاتحادي لتقييم الآثار المترتبة على تناول الرواية من الدهون والسكر على الدوبامين في الدماغ (DA) مسارات في الفئران. وتوسط مآخذ من السكريات والدهون والمعالم السياحية التي الفطرية وكذلك تفضيلات المستفادة. الدوبامين في الدماغ، وخاصة المتوسط ​​والحوفي والتوقعات والمتوسط ​​القشرية من المنطقة الجوفية السقيفية (VTA)، وقد تورط في كل من هذه الردود امي وتعلمت. مفهوم شبكات الدماغ وزعت، حيث العديد من المواقع ونظم الارسال / الببتيد تتفاعل، وقد اقترح التوسط تناول الطعام مستساغا، ولكن هناك أدلة محدودة مما يدل تجريبيا مثل هذه الأعمال. وهكذا، وتناول السكر يتسبب DA إطلاق والزيادات ج-فو-لمثل مناعية (FLI) من مناطق الإسقاط VTA DA الفردية بما في ذلك النواة المتكئة (بريدا)، اللوزة (AMY) وسطي قشرة الفص الجبهي (mPFC) وكذلك المخطط الظهرية. وعلاوة على ذلك، الإدارة المركزية للانتقائية مستقبلات DA في هذه الموقعق تفاضلي لحد من اكتساب والتعبير عن تفضيلات نكهة مكيفة التي تسببها السكريات أو الدهون. نهج واحد التي يمكن من خلالها تحديد ما إذا كانت هذه المواقع تفاعلت كشبكة الدماغ توزيعها ردا على السكر أو الدهون سيكون لمتزامنة تقييم ما إذا كانت VTA والمناطق الرئيسية في mesotelencephalic DA الإسقاط (الحوف وinfralimbic mPFC، الأساسية وقذيفة من حلف شمال الأطلسي، basolateral ووسط-القشرة-وسطي AMY)، فضلا عن أن المخطط الظهري العرض تنسيق وتفعيل FLI في وقت واحد بعد عن طريق الفم، وتناول غير المشروط من زيت الذرة (3.5٪)، والجلوكوز (8٪) وسكر الفواكه (8٪) والسكرين (0.2 ٪) الحلول. هذا النهج هو خطوة أولى ناجحة في تحديد جدوى استخدام الخلوي تفعيل ج مكتب الإحصاء الاتحادي في وقت واحد عبر مواقع الدماغ ذات الصلة لدراسة التعلم ذات الصلة مكافأة في تناول الطعام مستساغا في القوارض.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

وقد تورط الدوبامين في الدماغ (DA) في استجابات المركزية لتناول السكريات مستساغة من خلال المقترح على أساس المتعة 1،2 و 3 و عادة على أساس 4،5 آليات العمل المتعلقة الجهد. مسار DA الأساسي المتورطين في هذه الآثار ينشأ في منطقة السقيفية البطنية (VTA)، ومشاريع لالمتكئة (بريدا) الأساسية وشركة شل، واللوزة basolateral والقشرة المركزية-وسطي (AMY)، ونواة والحوف وسطي infralimbic قشرة الفص الجبهي (mPFC) (انظر ملاحظات 6،7). وقد تورط في VTA في تناول السكروز 8،9، ويلاحظ إطلاق DA تناول السكر التالية في NAC 10-15، AMY 16،17 وmPFC 18-20. يحفز الدهون أيضا DA NAC الافراج عن 21، ومنطقة الإسقاط DA-غنية أخرى إلى المخطط الظهري (المذنبة-putamen) ارتبط أيضا مع DA-بوساطة تغذية 22،23. اقترح كيلي 24-27 أن هذه المشاريع متعددةشكلت مناطق أيون من هذا النظام بوساطة DA-شبكة الدماغ توزيع متكاملة وتفاعلية من خلال الترابط واسعة وحميمة 28-34.

بالإضافة إلى قدرة DA D1 و D2 مستقبلات للحد من تناول السكريات والدهون 35-37 38-40، كما تورطت DA الإشارات في التوسط في قدرة السكريات والدهون لإنتاج تفضيلات نكهة مكيفة (CFP) 41- 46. إبر دقيقة جدا من مستقبلات DA D1 في حلف شمال الأطلسي، AMY أو mPFC 47-49 القضاء على اكتساب CFP التي تسببها الجلوكوز المعدي. في حين إبر دقيقة جدا إما DA D1 أو D2 مستقبلات في mPFC يزيل اكتساب الفركتوز CFP 50، يتم حظر اقتناء والتعبير من الفركتوز CFP تفاضلي قبل الخصوم DA في حلف شمال الأطلسي وAMY 51،52.

وقد استخدمت هذه التقنية 53،54-ج منظمات المزارعين للتحقيق activatio العصبيالناجم ن قبل تناول قبولا وتفعيل العصبي. مصطلح "تفعيل ج فو" سوف تستخدم في جميع أنحاء مخطوطة، ويعرف من الناحية التشغيلية من زيادة النسخ من ج-فو خلال الاستقطاب الخلايا العصبية. زيادة تناول السكروز مكتب الإحصاء الاتحادي مثل مناعية (FLI) في النواة AMY المركزية وVTA فضلا عن قذيفة، ولكن ليس الأساسية، من NAC 55-57. في حين أن تناول السكروز في الجرذان الرضاعة صورية زيادة كبيرة FLI في AMY وحلف شمال الأطلسي، ولكن ليس VTA 58، داخل المعدة السكروز أو الغلوكوز ضخ زيادة كبيرة FLI في حلف شمال الأطلسي ونوى المركزية وbasolateral من AMY 59،60. بالإضافة المتكررة من السكروز إلى الوصول تشاو المقرر زادت FLI في mPFC فضلا عن قذيفة NAC والأساسية 61. وكشف السكروز تركيز بالاستعداد النموذج أن أكبر الزيادات FLI وقعت في AMY basolateral وحلف شمال الأطلسي، ولكن ليس VTA 62. بعد تكييف، انقراض ريوا الطبيعي ذات الصلة السكرزادت السلوكيات الثالثة FLI في AMY basolateral وNAC 63. وعلاوة على ذلك، أدى الاقتران توافر السكر لهجة في لهجة زيادة في وقت لاحق مستويات FLI في AMY basolateral 64. كما زادت كمية عالية من الدهون FLI في مواقع NAC وmPFC 65-67.

معظم الدراسات المذكورة سابقا فحص السكر وآثار الدهون على تفعيل ج منظمات المزارعين في مواقع واحدة التي لا توفر المعلومات حول تحديد شبكات الدماغ وزعت ذات الصلة مكافأة 24-27. وعلاوة على ذلك، فإن العديد من الدراسات أيضا لم تحدد المساهمات النسبية للمناطق الفرعية لحلف شمال الأطلسي (الأساسية وقذيفة)، AMY (basolateral والقشرة-وسطي المركزي) وmPFC (الحوف وinfralimbic) التي يمكن أن يتم دراستها من قبل ميزة ممتازة المكاني، قرار وحيد الخلية في رسم الخرائط ج-فو 68. مختبرنا 69 استخدمت مؤخرا ج فو تفعيل والتعديلات قياسها في وقت واحد في مسار VTA DA والمؤيدمناطق jection (NAC، AMY وmPFC) بعد تناول الرواية من الدهون والسكريات في الفئران. تصف الدراسة الحالية الخطوات الإجرائية والمنهجية لتحليل في وقت واحد ما إذا كان التعرض الحاد لستة حلول مختلفة (زيت الذرة، الجلوكوز، الفركتوز، والسكرين والمياه والتحكم مستحلب الدهون) من شأنها تفعيل تفاضلي FLI في المناطق الفرعية لحلف شمال الأطلسي، AMY، mPFC فضلا عن المخطط الظهرية. هذا الكشف في وقت واحد من الاختلافات يسمح تأكيد آثار كبيرة على FLI في كل موقع، وتحديد ما إذا كانت التغييرات في موقع واحد معين يرتبط مع التغييرات في المواقع ذات الصلة، وبالتالي توفير الدعم لشبكة الدماغ وزعت 24-27. هذه الإجراءات اختبار ما إذا كان VTA، والحوف وinfralimbic mPFC، جوهر وقذيفة من حلف شمال الأطلسي، وAMY basolateral والقشرة المركزية-وسطي)، وكذلك المخطط الظهري أن العرض تنسيق وتفعيل FLI في وقت واحد بعد عن طريق الفم، وتناول الغير مشروط من الجلوكوز (8٪) وسكر الفواكه (8٪) وزيت الذرة (3.5٪) والحلول السكرين (0.2٪).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

وقد تمت الموافقة على هذه البروتوكولات التجريبية لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي تثبت أن جميع الموضوعات والإجراءات وفقا لالمعاهد الوطنية للصحة الدليل للرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية.

1. المواد الدراسية

  1. شراء و / أو سلالة الذكور سبراغ داولي الفئران (260-300 ز).
  2. الفئران منزل على حدة في أقفاص سلكية. المحافظة عليها في 12:12 ساعة دورة الضوء / الظلام مع طعام الفئران والمياه المتاحة الإرضاع بحسب الرغبة.
  3. تعيين أحجام العينات المناسبة (على سبيل المثال، ن ≈ 6-8) عشوائيا إلى مجموعات.

2. جهاز والسعرات إجراءات الاختبار

  1. استخدام أنابيب الطرد المركزي معايرة مع سدادات المطاط وزاوية 45 درجة أنبوب sipper المعادن لتوفير قياسات دقيقة (± 0.1 مل) من الحلول المقدمة. تأمينها لأقفاص المنزل من قبل الربيع المعادن مشدود للسماح تسليط الضوء على المعايرة.
  2. تقييد الحصص الغذائية (~15 / ز / يوم) من الفئران لخفض الوزن إلى 85٪ من وزن الجسم الأصلي للزيادة الحافز للاستهلاك الحلول. ملاحظة: إنقاص الوزن يجب أن يستغرق ما بين 3-5 أيام.
  3. توفير حلول قبل التدريب (10 مل) من 0.2٪ السكرين لمدة أربعة أيام على جلسة 1 ساعة لتحقيق أقصى قدر من احتمال أن الفئران التي سوف أخذ عينات من حلول اختبار لاحقة قصيرة (أقل من 1 دقيقة) الكمون.
  4. تأكيد التدفق من خلال أنبوب الطرد المركزي بإراقة بضع قطرات.
  5. وزن الأنابيب قبل وبعد كل دورة للحصول على قياس المدخول.
  6. إجراء اختبار تناول في اليوم الخامس على مجموعات فرعية تلقي واحد من ستة حلول (10 مل، 1 ساعة): أ) الماء، ب) رواية النكهة (0.05٪ نكهة الكرز) 0.2٪ السكرين، ج) 8٪ سكر الفواكه، د) 8 ٪ جلوكوز، ه) 3.5٪ زيت الذرة معلقة في 0.3٪ زنتان الصمغ، و) 0.3٪ زنتان الصمغ.
  7. تأكد من أن المحاليل الغذائية هي متساوي الكالوريات. وبالتالي، فإن تركيز الذرة والنفط 3.5٪ غير متساوي الكالوريات إلى حلول السكر 8٪.
  8. ضمان عشرفي حلول عينة الفئران مع الكمون قصيرة (أقل من 1 دقيقة). إذا لم يتحقق هذا الشرط، ثم تجاهل الموضوع من الدراسة.

3. الأنسجة التحضير

  1. تخدير كل حيوان عن طريق الحقن داخل الصفاق من بنتوباربيتال 90 دقيقة بعد التعرض الأولي لكل حل الاختبار. تأكد من أن الحيوانات هي تخدير بشكل صحيح من قبل مما يدل على أن الحيوان لم يعد يستجيب لمثل هذه ردود الفعل كما انسحاب لقرصة القدم، وامض بعد ضغوط القرنية مباشرة أو يهز رأسه لتحفيز الصيوان الشديد.
  2. يروي كل حيوان transcardially كما هو موضح سابقا 69.
    1. تخدير الفئران مع جرعة زائدة من الصوديوم (65 ملغ / كلغ)، وإزالة القفص الصدري وكشف الصدر عن حرية الوصول إلى قلب 69.
    2. وضع إبرة في قمة صمام القلب الأيسر، وقطع الوريد الأجوف. إدارة الفوسفات حل العازلة (PBS، ~ 180 مل) تليها شارك تثبيتي الفوسفاتntaining 4٪ امتصاص العرق (~ 180 مل).
    3. التأكد من أن الحيوان في الواقع يجري perfused بشكل صحيح من خلال دراسة ما إذا كان السائل هو ترك تجاويف أخرى، مثل الأنف والفم والمناطق التناسلية. ملاحظة: سيرافق التثبيت السليم مع امتصاص العرق من قبل حركات العضلات الكبيرة. إذا كان هذا لا يحدث، وإعادة ضبط الإبرة حتى يحدث هذا التفاعل.
  3. إزالة الدماغ من الجمجمة بسرعة عن طريق قطع الفراء والجلد بعيدا عن الجمجمة. استخدام رينجرز للقضاء وإزالة العظام من الدماغ تتحرك من الخلف إلى الأمام. عمل في البداية في منطقة أسفل وخلف المخيخ، وضمان أن مقراض ما بين العظم والسحائية الأم الحنون. حالما تتم إزالة الجزء العلوي وجوانب الجمجمة، استخدم ملعقة صغيرة لرفع الدماغ من القاعدة، وقص الأعصاب القحفية مع مقص صغير. يجب الحرص على عدم تلف الدماغ أثناء محاولة إزالة العظام.
  4. إصلاح العقول في حل بارافورمالدهيد 4٪ بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.وضع العقول في السكروز 30٪ / 70٪ محلول برنامج تلفزيوني في درجة حرارة الغرفة حتى يستقر في قاع الإناء.
  5. منع الدماغ
    1. إزالة جزء منقاري من الدماغ قطع الذيلية بالعرض إلى البصلة الشمية.
    2. إزالة جزء الذيلية من الدماغ قطع بالعرض على مستوى المخيخ والجسر.
  6. جبل الدماغ coronally مع الجزء الذيلية الثابتة إلى مرحلة مشراح انزلاق، وقطع المقاطع الاكليلية (40 ميكرون) من خلال mPFC (2،86-2،20 مم منقاري إلى bregma)، جوهر NAC وقذيفة وظهري المخطط (+ 1،76-1،60 مم منقاري إلى bregma)، وإيمي (-2.12 - -2.92 ملم الذيلية إلى bregma)، وVTA (-5.20 - -5.60 ملم الذيلية إلى bregma). استخدام الفئران أطلس الدماغ 70 للاسترشاد بها.
  7. جمع المقاطع التعويم الحر في الآبار الفردية من 24 لوحة جيدا مليئة برنامج تلفزيوني لتحليل المناعى في نهاية المطاف 71. استخدام بارافيلم لاغلاق نحن 24لوحة ليرة لبنانية للتأكد من أن برنامج تلفزيوني لا تتبخر في الحاوية وتجفيف الدماغ. تخزين أنسجة المخ في 4 درجات مئوية.

4. إجراءات-ج منظمات المزارعين (مقتبس من 71)

  1. علاج كل قسم مع 5 مل من 5٪ مصل الماعز العادي و 0.2٪ تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني لمدة 1 ساعة.
  2. احتضان أقسام تعامل مع الأجسام المضادة الأولية (أرنب المضادة للج-مكتب الإحصاء الاتحادي، 1: 5000) في 4 درجة مئوية لمدة 36 ساعة في الآبار التي تحتوي على 1 مل من برنامج تلفزيوني.
  3. 3X أقسام شطف مع برنامج تلفزيوني (5 مل) لمدة 10 دقيقة لكل منهما.
  4. احتضان مع الأجسام المضادة الثانوية (المعقدة البيروكسيديز الماعز المضادة للأرنب، 1: 200) في RT لمدة 2 ساعة في الآبار التي تحتوي على 1 مل من برنامج تلفزيوني.
  5. شطف كل قسم 3X في برنامج تلفزيوني (5 مل) لمدة 10 دقيقة لكل منهما.
  6. احتضان أقسام تشطف لمدة 2 ساعة في المتاحة تجاريا البيروكسيديز خليط أفيدين-الفجل الذي يأتي في مجموعة مكونة من Avadin درهم (100 ميكرولتر) والبيروكسيديز الفجل البيروكسيد H (100 ميكرولتر) في 5 مل من برنامج تلفزيوني.
  7. إعادة شطف 3X المقاطع في الجريدة الرسميةS (5 مل) لمدة 10 دقيقة لكل منهما.
  8. تتفاعل الأقسام مع 0.05٪ diaminobenzidine (DAB) في وجود 0.0015٪ H 2 O 2 ل5-10 دقائق، وهذا يتوقف على تفاعل النسيج في الآبار التي تحتوي على 5 مل من محلول DAB.
  9. المزدوج تسمية أقسام VTA. احتضان لهم هيدروكسيلاز التيروزين (TH) الأجسام المضادة (أرنب مكافحة الفئران TH، 1: 2000) في برنامج تلفزيوني (5 مل) بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
  10. 3X شطف المقاطع في برنامج تلفزيوني (5 مل) لمدة 10 دقيقة لكل منهما.
  11. احتضان مع الأجسام المضادة الثانوية (الماعز البيروكسيديز المضادة للأرنب، 1: 200) في برنامج تلفزيوني (5 مل) في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة.
  12. 3X شطف المقاطع في برنامج تلفزيوني (5 مل) لمدة 10 دقيقة لكل منهما.
  13. تصور الأجسام المضادة باستخدام مجمع الأضداد البيروكسيديز الثانوي. تتفاعل مع مجموعة من 0،05٪ DAB و 0.3٪ محلول كبريتات النيكل، ل5-10 دقائق، وهذا يتوقف على رد فعل الأنسجة في الآبار التي تحتوي على 5 مل من DAB / حل NiCl.
  14. تأكد من أن حل DAB هو حليبي اللون الأخضر الفاتح اللون منهرد فعل مع كبريتات النيكل بنسبة 0.3٪. إذا كان هذا الحل هو أخضر جدا، ثم رد الفعل سيكون مظلما للغاية.
  15. تحميل كافة الفروع على الشرائح المغلفة الجيلاتين. دعهم بين عشية وضحاها الجافة، ومن ثم تغطية للانزلاق مع بضع قطرات من الحل القائم على التولوين (TBS).
  16. الشرائح التعليمات البرمجية بحيث حالة تجريبية غير معروفة للمراقبين.

5. تحديد ج-مكتب الإحصاء الاتحادي مناعيا التهم

  1. تعيين أزواج من المراقبين غير منحازة لحساب الخلايا العصبية فو-إيجابية في هذه المناطق ذات الاهتمام (ROI): الحوف mPFC، infralimbic mPFC، NAC الأساسية، NAC قذيفة، نوى AMY basolateral، AMY المركزية-القشرة-وسطي، الظهرية المخطط، وVTA. تحدد ما إذا كان ج-فو مناعية موجودة في TH + وTH- الخلايا في VTA الشكل 1 يقدم صورة الملتقطة شاشة NAC من المجهر.

شكل 1
الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. تحليل لا يقل عن ثلاث شرائح تمثيلية لكل موقع مشترك لجميع الحيوانات في جميع الظروف الاختبار.
  2. استخدام البرمجيات والمجهر الضوئي لتحليل المنطقة بأسرها لكل العائد على الاستثمار عن طريق تتبع الخطوط العريضة (الشكل 1).
    1. لموقع معين، افتح التطبيق وانقر على القائمة المنسدلة الاستحواذ وانقر على "صورة لايف". تحقيق العائد على الاستثمار في التركيز وانقر على الشاشة لإنشاء نقطة مرجعية. ثم آرالآس منطقة الدماغ اختيار باستخدام الشبكة كدليل. بمجرد الانتهاء من التتبع، عد خلايا (الخطوات 5.3.1.1 - 5.3.1.3).
      1. انقر نقرا مزدوجا فوق رمز البرنامج. انتقل إلى شريط القائمة، انقر على "شراء" ثم "صورة لايف". تحقيق العائد على الاستثمار في التركيز وانقر على الشاشة لإنشاء نقطة مرجعية.
      2. انتقل إلى شريط الأدوات شبكة وانقر على "العرض الشبكة" و "تسميات استخدام شبكة". الخطوط العريضة للالعائد على الاستثمار مع اثر محددة سلفا.
      3. عدد جميع الخلايا في كل منطقة العائد على الاستثمار، حدد "+" في الشريط الجانبي الأيسر للحفاظ على عدد من الخلايا ج منظمات المزارعين. انقر فوق كل خلية منفردة لتسجيل التهم الموجهة إليه. النظر في خلية إيجابية لج-مكتب الإحصاء الاتحادي عندما لوحظ دائرة حمراء داكنة محددة (الشكل 1).
    2. كرر هذه العملية لكل موقع.
    3. بحساب سجل في دفتر المختبر وعلى الكمبيوتر لتحليل المستقبل. انتقل إلى شريط القائمة، انقر على "ملف"، "ملف حفظ بيانات" لحفظ تتبع والتهم الموجهة إليه.
    4. ضمان موثوقية بين المقيم (باستخدام ارتباط من التهم) من اثنين من ذوي المرتبة جهل لكل قسم في كل العائد على الاستثمار يتجاوز دائما 0.8.

    6. الاحصائيات

    1. تقييم مآخذ السكرين الأساسية خلال الأيام الأربعة الأولى باستخدام المتكررة تدابير تحليل 1-طريقة التباين (ANOVA) مقارنة مآخذ السكرين من أيام 1 و 2 و 3 و 4 69.
    2. قارن تناول السكرين (يوم 4) مع مآخذ اختبار (يوم 5) مجموعة من المجموعات الست باستخدام العشوائية كتلة 2-طريقة أنوفا 69.
    3. استخدام المقارنات توكي (ع <0.05) لتحديد آثار كبيرة الفردية 69.
    4. تحديد موثوقية بين المقيم، ومن ثم استخدام التهم مراقب العادى.
    5. متوسط ​​التهم-ج منظمات المزارعين لشرائح تمثيلية ثلاثة لكل موقع 69.
      1. إجراء 1-طريقة أنوفا من تفعيل ج منظمات المزارعين الناجم عن تناول الحلول ستة (3.5٪ زيت الذرة، و 8٪ الجلوكوز، الفركتوز 8٪، 0.2٪ السكرين النكهة، XAالسيطرة nthan اللثة والماء) لperilimbic mPFC 69.
      2. تحليلات موازية كرر مجموعة من المجموعات الست لinfralimbic mPFC، NAC الأساسية، NAC قذيفة، basolateral AMY، AMY المركزية-القشرة-وسطي، VTA والمخطط الظهرية. استخدام المقارنات توكي (ع <0.05) للكشف عن آثار كبيرة الفردية 69.
    6. مقارنة كمية زيت الذرة مع كل من كمية الماء وتناول وكيل تعليقها، صمغ زنتان. مقارنة سكر الفواكه والجلوكوز مآخذ مع كل من كمية الماء وكمية من مادة التحلية غير الغذائية، السكرين.
    7. تحديد ما إذا كان لوحظت علاقة مهمة بين مآخذ حل وج فو التنشيط في كل موقع من المواقع باستخدام الارتباطات ص بونفيروني (ع <0.05).
      1. مقارنة منهجية عمليات العد ج مكتب الإحصاء الاتحادي في perilimbic وinfralimbic القشرة قبل الجبهية لكل حيوان في مجموعة زيت الذرة 3.5٪.
      2. كرر تحليلات موازية بشكل منهجي من كل زوج من المواقع الستة (VTA، المخطط الظهري، infralimحلبة البحرين الدولية mPFC، perilimbic mPFC، NAC الأساسية، NAC قذيفة، basolateral AMY، وسط-القشرة-وسطي AMY) لزيت الذرة 3.5٪.
      3. كرر تحليلات موازية بشكل منهجي من هذه المواقع الستة لخمسة شروط تناول التجريبية الأخرى (8٪ الجلوكوز، الفركتوز 8٪، 0.2٪ السكرين النكهة، ومراقبة الصمغ زنتان والمياه).
    8. الاستفادة من حقيقة أن الحيوانات نفسها في حالة الحل تم تقييمها في جميع المواقع من خلال تحديد العلاقات الهامة بين تفعيل ج منظمات المزارعين عبر حلول وداخل كل الحل باستخدام بونفيروني ص الارتباط (ع <0.05).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

وقد تم نشر جميع نتائج ممثل موضح أدناه قبل 69 عاما، ويعاد قدمت هنا لدعم "دليل على مفهوم" في يشير إلى فعالية هذه التقنية.

حل الكميات
وقد لوحظت فروق ذات دلالة إحصائية في مآخذ السكرين الأساسية خلال الأيام الأربعة الأولى لجميع الحيوانات (F (3108) = 57.27، ف <0.001) مع مآخذ (يوم 1: 1.3 (± 0.2) مل، يوم 2: 3.9 (± 0.4) مل ؛ اليوم 3: 5.9 (± 0.6) مل؛ اليوم 4: 7.1 (± 0.6) مل) بشكل ملحوظ (ف <0.05، توكي HSD الاختبار) وزيادة تدريجيا. سكر الفواكه وتناول الجلوكوز، ولكن ليس زيت الذرة أو السكرين تناول في يوم 5 معنويا (P <0.05، توكي اختبار HSD) زادت نسبة إلى يوم 4 تناول السكرين (ع <0.05، توكي اختبار HSD) مع سكر الفواكه (9.6 (± 0.4) مل ) والجلوكوز (9.4 (± 0.6) مل) أعلى بكثير من كنائس جنوب أفريقياهارين المدخول. وعلاوة على ذلك، كان تناول زيت الذرة (7.4 (± 0.6) مل) بشكل ملحوظ (ف <0.05، توكي اختبار HSD) أعلى من تناول العلكة زنتان.

وأثارت هذه النتائج إمكانية أن تناول الحل في حد ذاتها قد تمثل أي تفعيل الملحوظ-ج منظمات المزارعين في أي من المواقع. لفحص هذا، تم تنفيذ الارتباطات ص بونفيروني الذي ارتبط تناول الحلول خمسة إلى تفعيل ج منظمات المزارعين في كل من المواقع الستة. فشلت ارتباط ملموس التي يتعين مراعاتها بين تناول حل وج فو التنشيط في جوهر (ص (29) = 0.186)، وقذيفة (ص (29) = 0.029) أو الكلي (ص (29) = 0.10) حلف شمال الأطلسي، والحوف ( ص (29) = 0.23)، infralimbic (ص (29) = 0.30) أو الكلي (ص (29) = 0.14) mPFC، وVTA (ص (29) = 0.10)، المخطط الظهري (ص (29) = 0.14 ) أو basolateral (ص (29) = 0.47)، ومركز-القشرة-وسطي (ص (29) = 0.48) أو مجموع (ص (29) = 0.409) AMY. ونظرا للارتباط بين تناول العالي وAMY-ج منظمات المزارعين التنشيط، المزيد من correlaأجريت ستعقد لكل حل خاص. معنوي (p <0.05، توكي اختبار HSD) فشلت العلاقات التي يتعين مراعاتها بين تناول وAMY FLI لسكر الفواكه (basolateral (ص = 0.15)، ومركز-القشرة-وسطي (ص = 0.13)، ومجموع (ص = 0.13)) والجلوكوز (basolateral (ص = 0.17)، ومركز-القشرة-وسطي (ص = 0.17)، ومجموع ص = 0.13))، السكرين (basolateral (ص = 0.42)، ومركز-القشرة-وسطي (ص = 0.42)، المجموع (ص = 0.42)) أو زيت الذرة (basolateral (ص = 0.54)، ومركز-القشرة-وسطي (ص = 0.59)، ومجموع (ص = 0.64)). (ص <0.05 توكي اختبار HSD) ولوحظ وجود ارتباط سلبي كبير بين تناول صمغ زنتان والكلي AMY FLI (ص = 0.94).

mPFC ج-فو التنشيط
زيت الذرة معنويا (P <0.05، واختبار توكي HSD) زيادة مجموع (الشكل 2A)، infralimbic (الشكل 2B) والحوف (الشكل 2C) mPFC ج-فو بحساب نسبة إلى الماء (*) أو سيطرة صمغ زنتان(#). الفركتوز بشكل كبير (ف <0.05، توكي اختبار HSD) زيادة التهم ج-فو في mPFC infralimbic نسبة إلى الماء (*) أو السكرين (+) (الشكل 2B)، ولكن ليس كليا أو الحوف التهم mPFC. في المقابل، فشل الجلوكوز أو السكرين لتغيير الإجمالية، perilimbic أو infralimbic التهم mPFC ج-فو الشكل 3 يعرض أقسام mPFC تمثيلية من الحيوانات تظهر زيادة الذرة التي يسببها النفط FLI نسبة إلى الماء.

الشكل 2
الشكل 2. الدهون أو السكر تناول يزيد تفاضلي تفعيل-ج منظمات المزارعين في الإنسي الفص الجبهي اللحاء (mPFC). التغييرات في تفعيل ج مكتب الإحصاء الاتحادي (يعني ± SEM) ويلاحظ في mPFC كامل (لوحة أ)، ومنطقة mPFC infralimbic (لوحة B)، ومنطقة mPFC الحوف (لوحة C) استهلاك التالية (1 ساعة) من الماء، والسكرين (0.2٪)، صمغ زنتان (التحكم في زيت الذرة) والجلوكوز (8٪) وسكر الفواكه (8٪) أو زيت الذرة (3.5٪). (نشرت في السابق 69.) الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (3)
الشكل 3. mPFC التنشيط الفعلي-ج منظمات المزارعين وعقب الدهون والسكريات. وقد لوحظ C-فو التنشيط في الحيوانات التي تعرضت لكمية من زيت الذرة (ألواح ألف (التكبير 4 أضعاف) و C (التكبير 10 أضعاف)) الذي كان أكبر بكثير من ذلك من تناول الماء (ألواح ب (4 أضعاف التكبير) ودال (التكبير 10 أضعاف)). وdiagramed تمثيل المناطق الفرعية يرسم من الحوف (PL) وinfralimbic (IL) mPFC في لوحات ألف (زيت الذرة) وجيم (الماء) وكذلك من جانب رلوحات خرطوم (A و C) تضخمت إلى التكبير 10 أضعاف في لوحات المقابلة (B و D). السهام في لوحات جيم ودال تشير الخلايا إيجابية تمثيلية-ج منظمات المزارعين. جميع الحانات على نطاق وهي 100 ميكرون. (نشرت في السابق 69.) الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

AMY ج-فو التنشيط
زيت الذرة معنويا (P <0.05، توكي اختبار HSD) زاد AMY إجمالي الشكل (4A)، basolateral (الشكل 4B) والقشرة-وسطي المركزي (الشكل 4C) منطقة شبه AMY ج-فو تعول النسبي في الماء (*) أو سيطرة زنتان صمغ (#). الجلوكوز بشكل ملحوظ (ف <0.05، توكي اختبار HSD) زيادة مجموع (الشكل 4A)، basolateral (الشكل 4B) ووسط-القشرة-وسطي ( (الشكل 4A) ووسط-القشرة-وسطي الفرعية المنطقة (الشكل 4C) من AMY ج-فو بحساب نسبة إلى الماء (*) أو السكرين (+)، ولكن ليس في AMY basolateral الفرعية المنطقة. فشل السكرين لتغيير المجموع، basolateral أو القشرة المركزية التي سطي AMY ج-فو تعول على صلة بالمياه. كشفت التحاليل المفصلة من نوى الفردية داخل AMY أن التغييرات الهامة لوحظ في منطقة basolateral من AMY لوحظت أيضا في نوى AMY basolateral والجانبية الفردية. لوحظت تغييرات هامة لوحظ في المنطقة الوسطى-القشرة-وسطي من AMY أيضا في الفردية المركزية، القشرية وسطي AMY نوى الشكل 5 يعرض أقسام AMY التمثيليةمن الحيوانات تظهر زيادة نفط الذرة، الجلوكوز، والتي يسببها الفركتوز FLI نسبة إلى الماء. (نشرت سابقا 69).

الشكل (4)
الشكل 4. الدهون أو السكر تناول يزيد تفاضلي تفعيل-ج منظمات المزارعين في اللوزة المخية (AMY). التغييرات في تفعيل ج مكتب الإحصاء الاتحادي (يعني ± SEM) ويلاحظ في AMY كامل (لوحة أ)، ومنطقة AMY basolateral (لوحة B) ، ومنطقة AMY المركزية-القشرة-وسطي (لوحة C) بعد استهلاك (1 ساعة) من الماء، والسكرين، صمغ زنتان، الجلوكوز، الفركتوز أو زيت الذرة. لوحظت تغييرات هامة لوحظ في منطقة basolateral من AMY أيضا في نوى AMY basolateral والجانبية الفردية. لوحظت تغييرات هامة لوحظ في المنطقة الوسطى-القشرة-وسطي من AMY أيضا في نوى AMY المركزية، القشرية وسطي الفردية. (نشرت سابقا 69.) الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الرقم 5
وقد لوحظ الشكل 5. AMY الفعلية تفعيل-ج منظمات المزارعين وعقب الدهون والسكريات. تنشيط C-مكتب الإحصاء الاتحادي في الحيوانات التي تعرضت لجرعات من زيت الذرة (ألواح ألف (التكبير 4 أضعاف)، D (التكبير 10 أضعاف) ومجموعة (60- أضعاف التكبير)) والجلوكوز (ألواح ب (التكبير 4 أضعاف) و E (التكبير 10 أضعاف))، والفركتوز (ألواح C (التكبير 4 أضعاف) وF (10 مرات)) التي كانت أكبر بكثير من ذلك من كمية من الماء (لوحات H (التكبير 4 أضعاف) وأنا (التكبير 10 أضعاف)). تمثيلوdiagramed ويرسم مناطق فرعية من وسط-القشرة-وسطي (CMC) وbasolateral (جيش تحرير بلوشستان) AMY في لوحات ألف (زيت الذرة)، B (الجلوكوز)، C (سكر الفواكه) وH (الماء) وكذلك الجزء من تلك الألواح (A، B، C و H) تضخمت to10 في أضعاف التكبير في لوحات المقابلة (D، E، F) وانا. تتضخم المنطقة الفرعية المحددة في لوحة D (زيت الذرة والتكبير 10 أضعاف) لتكبير 60 أضعاف في لوحة D. السهام في لوحات D، E، F، G، وأنا تشير إلى خلايا إيجابية تمثيلية-ج منظمات المزارعين. جميع الحانات على نطاق وهي 100 ميكرون، باستثناء لوحة G (50 ميكرون). (نشرت في السابق 69.) الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

NAC ج-فو التنشيط
زيت الذرة معنويا (P <0.05، توكي اختبار HSD) زيادة اجمالي (الشكل 6A) والأساسية ( (الشكل 6C). الجلوكوز بشكل ملحوظ (ف <0.05، توكي اختبار HSD) زيادة التهم ج-فو في قلب حلف شمال الأطلسي (الشكل 6B)، ولكن ليس في مجموع بريدا أو قذيفة بريدا نسبة إلى السكرين (+) أو الماء (*). في المقابل، فشل سكر الفواكه والسكرين تختلف عن المياه في انتزاع تفعيل ج-فو في جوهر بريدا و / أو قذيفة الشكل 7 يعرض مقاطع تمثيلية في جوهر بريدا من الحيوانات تظهر زيادة نفط الذرة أو من صنع الجلوكوز FLI نسبة إلى الماء .

الشكل (6)
الشكل 6. الدهون أو السكر تناول يزيد تفاضلي تفعيل-ج منظمات المزارعين في حلف شمال الأطلسي. التغييرات في تفعيل ج مكتب الإحصاء الاتحادي (يعني ± SEM) في NAC كامل (لوحة أ)، جوهر NAC (لوحة B)، وقذيفة NAC (لوحة C) بعد استهلاك (1 ساعة) من الماء، والسكرين، صمغ زنتان، الجلوكوز، الفركتوز أو زيت الذرة. (نشرت في السابق 69.) الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الرقم 7
الرقم 7. الفعلي NAC الأساسية، ولكن ليس بريدا شل تفعيل-ج منظمات المزارعين وعقب الدهون والسكريات. وقد لوحظ تفعيل C-مكتب الإحصاء الاتحادي في الحيوانات التي تعرضت لجرعات من زيت الذرة (ألواح ألف (التكبير 4 أضعاف)، D (التكبير 10 أضعاف ) ومجموعة (التكبير 60 أضعاف)) والجلوكوز (ألواح ب (التكبير 4 أضعاف) و E (التكبير 10 أضعاف)) التي كانت أكبر بكثير من كمية من الماء (ألواح C (التكبير 4 أضعاف) و F (MAGNIFICA 10 أضعافنشوئها)). وdiagramed تمثيل المناطق الفرعية يرسم من جوهر بريدا وقذيفة بريدا في لوحات ألف (زيت الذرة)، B (الجلوكوز) و C (المياه) كما هي جزء من تلك الألواح (A، B، C و H) تضخيم to10 في أضعاف التكبير في لوحات المقابلة (D، E و F). تتضخم المنطقة الفرعية المحددة في لوحة D (زيت الذرة والتكبير 10 أضعاف) لتكبير 60 أضعاف في لوحة G. السهام في لوحات D، E، F و G تشير إلى خلايا إيجابية تمثيلية-ج منظمات المزارعين. جميع الحانات على نطاق وهي 100 ميكرون. (نشرت في السابق 69.) الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الظهرية العقدة المخططة ج-فو التنشيط
زيت الذرة معنويا (P <0.05، توكي اختبار HSD) زادت التهم ج-فو في ظهري المخطط نسبة إلى الماء (*) أو صمغ زنتان (#) (شملت رقمالبريد 8A). الجلوكوز أو الفركتوز بشكل كبير (ف <0.05، توكي اختبار HSD) زاد الظهرية الجسم المخطط FLI نسبة إلى السكرين (+) (الشكل 8A). في المقابل، فشل السكرين تختلف عن المياه في انتزاع ظهري مخططي ج-فو تفعيل الشكل 9 يعرض ظهري التمثيلي أقسام الجسم المخطط من الحيوانات تظهر زيادة نفط الذرة، الجلوكوز، أو التي يسببها الفركتوز FLI نسبة إلى الماء.

شكل 8
الرقم 8. الدهون أو السكر تناول يزيد تفاضلي تفعيل-ج منظمات المزارعين في ظهري المخطط وبطني السقيفية منطقة. الظهرية atriatal (لوحة أ) ومنطقة الجوفية السقيفية (لوحة B) لوحظت تغييرات لتنشيط ج مكتب الإحصاء الاتحادي (يعني ± SEM) التالية الاستهلاك (1 ساعة) من الماء، والسكرين، صمغ زنتان، الجلوكوز، الفركتوز أو زيت الذرة. (نشرت سابقا 69).

الرقم 9
وقد لوحظ الشكل 9. الظهرية العقدة المخططة التنشيط الفعلي-ج منظمات المزارعين وعقب الدهون والسكريات. C-فو التنشيط في الحيوانات التي تعرضت لجرعات من زيت الذرة (ألواح ألف (التكبير 4 أضعاف)، D (التكبير 10 أضعاف) و G (60 التكبير أضعاف)) والجلوكوز (ألواح ب (التكبير 4 أضعاف) و E (التكبير 10 أضعاف)) وسكر الفواكه (ألواح C (التكبير 4 أضعاف) وF (التكبير 10 أضعاف)) التي كانت أكبر بكثير من كمية من الماء (لوحات H (التكبير 4 أضعاف) وأنا (التكبير 10 أضعاف)). يرسم الفرعية ل، B (الجلوكوز)، وأشار رياس من المخطط الظهري في لوحات ألف (زيت الذرة) C (سكر الفواكه) وH (الماء) أن تضخيم to10 في أضعاف التكبير في لوحات المقابلة (D، E، F) وانا. تتضخم المنطقة الفرعية المحددة في لوحة D (زيت الذرة والتكبير 10 أضعاف) لتكبير 60 أضعاف في لوحة G. السهام في لوحات D، E، F و G تشير إلى خلايا إيجابية تمثيلية-ج منظمات المزارعين. جميع الحانات على نطاق وهي 100 ميكرون، باستثناء لوحة G (50 ميكرون). (نشرت في السابق 69.) الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

VTA ج-فو التنشيط
زيت الذرة معنويا (P <0.05، توكي اختبار HSD) زادت التهم ج-فو في TH + VTA خلايا النسبية لسيطرة زنتان صمغ (#) (الشكل 8B). في المقابل، فشل الجلوكوز وسكر الفواكه أو السكرين لتغيير التهم ج-فو في VTA قريب على المياه. الشكل 10 يعرض تمثيلي TH + وTH- والمفعلين ج-فو-لخلايا VTA من الحيوانات تظهر زيادة الذرة التي يسببها النفط FLI نسبة إلى الماء.

الرقم 10
. وقد لوحظ-ج منظمات المزارعين تفعيل الرقم 10. بطني السقيفية منطقة التنشيط-ج منظمات المزارعين الفعلي بعد الدهون والسكريات VTA في حيوانات تعرضت لزيت الذرة (ألواح ألف (4 أضعاف) و C (10 مرات)) والماء (ألواح B (4 أضعاف) ودال (10 مرات)). السهام السوداء تشير TH / ج فو خلايا إيجابية المزدوج المسمى التمثيلية، في حين تشير الأسهم الرمادية تمثيلية ج-مكتب الإحصاء الاتحادي الخلايا فقط. جميع الحانات على نطاق وهي 100 ميكرون. (نشرت في السابق 69.) الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

ove_content "FO: المحافظة على together.within الصفحات =" 1 "> العلاقات من ج-فو التنشيط بين مواقع وحلول
نمط من التهم ج-فو في حيوانات تعرضت لزيت الذرة كشف (ع <0.05) علاقة طردية ذات دلالة إحصائية بين جوهر بريدا وإما قذيفة بريدا (ص = 0.971) أو كامل mPFC (ص = 0.670)، وبين mPFC الحوف و إما infralimbic mPFC (ص = 0.940) أو المخطط الظهري (ص = 0.849)، وبين infralimbic mPFC وظهري المخطط (ص = 0.749)، وبين AMY basolateral ووسط-القشرة-وسطي (ص = 0.999)، وبين المخطط الظهري وVTA (ص = 0.723). في المقابل، فإن نمط من التهم ج-فو في الحيوانات التي تعرضت لزيت الذرة كشف (ع <0.05) الارتباطات سلبية كبيرة بين AMY basolateral وإما جوهر بريدا (ص = -0.712) أو قذيفة (ص = -0.708)، و بين AMY المركزية-القشرة-وسطي وإما جوهر بريدا (ص = -0.712) أو قذيفة (ص = -0.710). هذا النمط من ج-فو التهم في الحيوانات البريدxposed إلى جلوكوز كشف (ع <0.05) علاقة طردية ذات دلالة إحصائية بين الحوف وinfralimbic mPFC (ص = 0.930)، وبين المخطط ظهري وإما VTA (ص = 0.821)، basolateral (ص = 0.910) أو القشرة-وسطي المركزي (ص = 0.911) AMY، وبين basolateral ووسط-القشرة-وسطي (ص = 0.999) AMY. نمط من التهم ج-فو في حيوانات تعرضت لسكر الفواكه وكشف (ع <0.05) علاقة طردية ذات دلالة إحصائية بين جوهر بريدا وإما قذيفة بريدا (ص = 0.969) أو الحوف mPFC (ص = 0.740)، بين قذيفة بريدا و الحوف mPFC (ص = 0.733)، وبين الحوف وinfralimbic mPFC (ص = 0.959)، وبين AMY basolateral ووسط-القشرة-وسطي (ص = 0.996). هذا النمط من التهم ج-فو في حيوانات تعرضت لالسكرين كشف معنوي (p <0.05) علاقة طردية بين جوهر ناك بريدا وقذيفة (ص = 0.792)، وبين بريدا قذيفة وظهري المخطط (ص = 0.715)، وبين الحوف mPFC لالثانية infralimbic mPFC (ص = 0.999).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

وكان الهدف من هذه الدراسة هو تحديد ما إذا كان المصدر (VTA) والدماغ الأمامي أهداف الإسقاط (NAC، AMY، mPFC) من الخلايا العصبية ذات الصلة مكافأة DA تم تفعيلها في وقت واحد بعد تناول الرواية من الدهون والسكر في الفئران باستخدام الخلايا تقنية ج فو . الدراسة الحالية هي عبارة عن وصف مفصل للبروتوكولات دراسة نشرت سابقا 69. كان الافتراض أن VTA، مناطقها إسقاط الرئيسية للالحوف وinfralimbic mPFC، جوهر وقذيفة من NAC وAMY basolateral والقشرة المركزية-وسطي، فضلا عن المخطط الظهري سيكون بمثابة شبكة الدماغ وزعت 24 -27، وعرض منسقة ومتزامنة FLI التالية كمية جديدة من الجلوكوز (8٪) وسكر الفواكه (8٪) أو زيت الذرة (3.5٪) حلول نسبة إلى السكرين (0.2٪)، والمياه وحلول التحكم الأخرى. زيت الذرة، الجلوكوز والفركتوز، ولكن ليس السكرين كمية إنتاج تفعيل كبيرا والتفضيلية FLI من VTA، والحوف وinfralimbic النائبFC، جوهر وقذيفة من حلف شمال الأطلسي، وbasolateral والقشرة-وسطي المركزي AMY، والمخطط الظهرية. بالإضافة إلى تقنية ج منظمات المزارعين، كانوا يعملون التدابير السلوكية من السكر والدهون والسعرات التحلية الاصطناعية.

وشملت واحدة خطوة حاسمة أخذ العينات في الوقت المناسب لتناول مثل أنها ستكون متساوية نسبيا، وبالتالي ضمان أن أي اختلافات في تفعيل ج منظمات المزارعين عبر مواقع ترجع إلى حل تستهلك بالأحرى إما نمط أو حجم الاستهلاك. أربعة أيام من تناول السكرين الأساسي ضمنت أن الحيوانات المقيدة الغذاء أخذ عينات الحلول بسرعة، وبالتالي التقليل آثار غير محددة. وكانت الخطوة الثانية الحاسمة أن هذا الإجراء تسبب الحد الأدنى من الإجهاد أو الجدة للحيوانات عن التغيرات في مستقلين التكافؤ العاطفي من نوع السحب ويمكن أيضا أن تنتج-ج منظمات المزارعين التنشيط. لذلك، توفر هذه النتائج على "دليل على مفهوم" مقنع لفعالية هذا النهج والبروتوكولات ذات الصلةتحديد ما إذا كان التعرض الحاد للدهون (على سبيل المثال، زيت الذرة) والسكر (الجلوكوز والفركتوز) والحلول المحلي غير الغذائية (السكرين) ينشط بشكل متزامن DA-بوساطة العائد على الاستثمار في بطريقة توحي بتنسيق نظام الدماغ وزعت 24-27.

لأن تفعيل الأمثل ج-فو يتطلب استجابات حساسة للوقت قبل أن يضحي 51،52، إجراءات معتمدة سابقا 42،44 أخذ العينات حل أقصى حد ممكن مع الكمون قصيرة في الاختبار 1-ساعة. وهكذا، تم تدريب الفئران غذاء مقيد مع حلول السكرين 0.2٪ (10 مل، 1 ساعة) لمدة 4 أيام، ونظرا لحل الاختبار في اليوم الخامس. مآخذ السكرين الأساسية كبيرا وتدريجيا زيادة، وكان سكر الفواكه والجلوكوز، ولكن ليس زيت الذرة أو السكرين مآخذ في اليوم الخامس أعلى بكثير من اليوم الرابع السكرين المدخول. وبالتالي، حلول مرتبطة بزيادة FLI زيادة كبيرة (الجلوكوز والفركتوز) أو فشلت في التأثير (زيت الذرة) إعادة المدخولlative للتدريب السكرين السابق، ويبدو أن توسطت من خلال آلية حافز السلوكية ذات الصلة مكافأة. لا بد من اتخاذها لضمان أخذ العينات والمساواة في سلوك دراسة متأنية. يمكن للباحثين الآخرين استخدامها بشكل فعال هذا الإجراء لدراسة أنواع أخرى من حلول جديدة أو إدخال تغيرات في نموذج لفهم الآليات المتصلة بالتكيف والتعلم.

الاستفادة من هذا البروتوكول هو القدرة على مقارنة آثار السكريات مدروسة (سكر الفواكه والجلوكوز) والدهون (زيت الذرة) وقارن بها ج-مكتب الإحصاء الاتحادي تفعيل الآثار مع من الضوابط الهامة (التحلية غير الغذائية، السكرين، مستحلب السيطرة، صمغ زنتان، والمياه)، ومن ثم دراسة هذه الآثار على ستة مواقع في الدماغ ذات الصلة. على الرغم من أن هذا النهج له فوائد واضحة في السماح للفحص في وقت واحد عبر مواقع الدماغ من المواد مستساغة مختلفة، فمن لديه عيب على إنتاج مجموعة من البيانات يحتمل أن تكون فلكياالخلايا التي تظهر التعبير الخلايا العصبية. لجعل هذا أكثر قابلية للإدارة، وقد اتخذنا منهج تحليل ثلاث شرائح الاكليلية تمثيلية لكل موقع مشترك لجميع الحيوانات في جميع الظروف الاختبار. ويرافق هذا بالطبع من قبل التحذير من اختيار المستويات المناسبة من كل العائد على الاستثمار في هذه الأقسام الثلاثة. ونظرا لمدى واسع rostro-الذيلية للAMY، حلف شمال الأطلسي، mPFC، المخطط ظهري وVTA، لا ينبغي أن يؤخذ هذا التحذير على محمل الجد. وعلاوة على ذلك، فمن ثم يتعين على المحققين أن تكون متسقة في اختيار بدقة كل قسم من الأقسام التمثيلية الثلاث في جميع الحيوانات في جميع المواقع. الاخطاء البسيطة في هذا الاختيار يمكن أن يؤدي إلى "ايجابيات كاذبة" و "السلبيات كاذبة". كفاءة الفرز أيضا هو متغير ذات الصلة. وكان لدينا حل لهذه نخلط المحتملين لتعيين اثنين من ذوي المرتبة جهل لكل قسم في كل العائد على الاستثمار، ومن ثم ضمان موثوقية بين المقيم (باستخدام ارتباط من التهم) تجاوزت دائما 0.8. هذا النهج، في حين duplicative، أعطانا أكبر بكثير تأكيدات حول دقة كما موثوقية بين المقيم تجاوزت بسهولة الحد الأدنى هذا المعيار. وقد تم تحليل المناطق الفرعية من حلف شمال الأطلسي (الأساسية مقابل شل)، AMY (باسو الاطراف مقابل المركزي القشرة-وسطي) وmPFC (perilimbic مقابل infralimbic). هذه المناطق يمكن زيادة تقسيم، لا سيما نوى الفردية AMY، والتصحيح ومصفوفة المقصورات من المخطط الظهري، وقذيفة بريدا (قمة الرأس، قوس، مخروط، منطقة وسطى). لأن NAC قذيفة فشل لعرضه باستمرار التغيرات في FLI التالية زيت الذرة، الجلوكوز أو الفركتوز، لم يتم تنفيذ المزيد من التحليلات الفرعية لهذا الهيكل. فحص نهائي من التصحيح ومصفوفة مناطق المخطط الظهري يتطلب تقنيات أخرى المناعى التي لا يعملون في هذه الدراسة، ولكن ستكون دراسة مهمة المتابعة. أن التحاليل التي أجريت على نواة AMY الفردية داخل كل منطقة فرعية أيضا أن تكون دراسة إضافية المستقبل.

وأظهرت دراسات سابقة أن يمثارتفع ارتفعت كمية FLI في النواة AMY المركزية وVTA فضلا عن قذيفة، ولكن ليس الأساسية، من حلف شمال الأطلسي، بعد ضخ السكرين عن طريق الفم أو IG غير فعالة إلى حد كبير 55-57، 60-62. الجلوكوز والفركتوز تناول أثارت آثار السكر معين على FLI مع كل فعالية في AMY المركزية-القشرة-وسطي والمخطط الظهري، وفعالة السابق في قلب بريدا وAMY basolateral، وهذا الأخير فعالة في mPFC infralimbic. فشل السكرين كمية للحصول أية تغييرات في FLI في أي موقع قريب للماء. كما زادت كمية الدهون FLI في مواقع accumbal وmPFC في الدراسات السابقة 65-67، وإنتاج تفعيل كبيرا في وقت واحد في VTA، infralimbic والحوف mPFC، المخطط ظهري، NAC الأساسية، وAMY basolateral ووسط-القشرة-وسطي.

على الرغم من أن الدراسات السابقة أظهرت أن السكر والدهون السعرات يسببها FLI في أنظمة DA الدماغ الأمامي المتوسط ​​وcorticolimbic وnigro-الجسم المخطط، هذه الدراسة بشكل منتظمتفعيل تقييمها في وقت واحد FLI في VTA، basolateral وAMY المركزية-القشرة-وسطي، المخطط ظهري، الحوف وinfralimbic الأساسية mPFC، بريدا وقذيفة التالية تناول حاد في زيت الذرة وسكر الفواكه والجلوكوز أو السكرين. تم زيادة FLI هامة ترتبط ارتباطا وثيقا ببعضها البعض عبر مواقع الدماغ الأمامي، ودعم فكرة توزيع تفعيل شبكة الدماغ التوسط السكر والدهون. هذه البروتوكولات تحديد التغييرات في وقت واحد في مواضع الدماغ متعددة يمكن الاستفادة منها في ظل الظروف المزمنة ونهم وكذلك في إطار تكييف والأفضليات. وتشير هذه الدراسات إلى أن إلى المترابطة التشريحية قوي (ج-FOS) يمكن استخدامها بشكل فعال في مواقع الدماغ متعددة في وقت واحد لتحديد المرشحين للوساطة في تناول وتفضيلات قبولا لدى الحيوانات التي يمكن أن توفر نظرة ثاقبة الظروف الطبية البشرية التي ترتبط بالبدانة ومرض السكري وغيرها من اضطرابات الأكل .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

Acknowledgments

بفضل ديانا إيكاثا-Culaki، كريستال سامبسون وTheologia Karagiorgis على عملهم الشاق في هذا المشروع.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Equipment
Sprague-Dawley rats Charles River Laboratories CD-1
Wire Mesh Cages Lab Products, Seaford, DE 30-Cage rack
Rat Chow PMI Nutrition International 5001
Taut Metal Spring Lab Products, Seaford, DE n/a
Rat Weighing Scale Fisher Scientific Company n/a
Nalgene Centrifuge Tubes Lab Products, Seaford, DE 10-0501
Rubber Stopper Lab Products, Seaford, DE n/a
Metal Sippers Lab Products, Seaford, DE n/a
Saccharin Sigma Chemical Co 82385-42-0
Kool-Aid, Cherry Kool-Aid Commerical
Kool-Aid, Grape Kool-Aid Commercial
Fructose Sigma Chemical Co F0127
Glucose Sigma Chemical Co G8270
Corn Oil Mazzola Commerical
Xanthan Gum Sigma Chemical Co 11138-66-2
Sliding Microtome Microm International n/a
Neurolucida Camera MBF Bioscience Software application
Gelatin-coated Slides Fisher Scientific Company 12-550-343
Cover glass Fisher Scientific Company 12-545-M
Golden Nylon Brushes Loew-Cornell  2037
Natural Hair Sable  Loew-Cornell  2022
24 Well Plates Fisher Scientific 3527
6 Well Plates Fisher Scientific 3506
1 L Pyrex bottles Fisher Scientific 1395-1L
Tissue insert (tissue strainer) Fisher Scientific 7200214
Eagle pipettes  World Precision Instruments E10 for 1-10μl
Eagle pipettes  World Precision Instruments E100 for 20-100μl
Eagle pipettes  World Precision Instruments E200 for 50-200μl
Eagle pipettes  World Precision Instruments E1000 for 100-1000μl
Eagle pipettes  World Precision Instruments E5000 for 1000-5000μl 
Universal Tips .1-10 μl World Precision Instruments 500192
Universal Tips 5-200 μl World Precision Instruments 500194
Universal Tips 500-5,000 μl World Precision Instruments 500198
Blade Vibroslice 100 World Precision Instruments BLADE
DPX Mounting Medium  Electron Microscopy  13510
15 ml centrifuge tubes Biologix Research Co. 10-0501
Slide Boxes Biologix Research Co. 41-6100
Orbital Shaker  Madell Corporation   ZD-9556
weigh boats  Fisher Scientific 02-202-100
5 ml disposable pipettes Fisher Scientific 13-711-5AM
Stereo Investigator Software Micro Bright Field Software application
Name Company Catalog number Comments
Reagents
Paraformaldehyde Granular Fisher Scientific 19210
NaCl Fisher Scientific S271-1
Sodium Phophate Monobasic Fisher Scientific S468-500
Sodium Phosphate Diphasic Fisher Scientific BP332-500
Hydrogen Peroxide  Fisher Scientific H324-500
SafeClear II  Fisher Scientific 23-044-192
Methanol  Fisher Scientific A412-1
Normal Goat Serum Vector S-1000
Biotinylated Anti-Rabbit IgG (H+L) Vector BA-1000
ABC Kit Peroxidase Standard Vector PK-4000
Anti-cFos (Ab-5) Rabbit EMD chem/Cal Biochem PC38
Triton X 100 SigmaAldrich X-100
3,3' diaminobenzidine tetra hydrochloride  SigmaAldrich D5905
Sodium Hydroxide SigmaAldrich 5881
Primary TH anti body EMD Millipore AB152
Euthosol Virbac AH

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Koob, G. F. Neural mechanisms of drug reinforcement. Ann. N.Y. Acad. Sci. 654, 171-191 (1992).
  2. Wise, R. A. Role of brain dopamine in food reward. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 361, 1149-1158 (2006).
  3. Salamone, J. D., Correa, M. The mysterious motivational functions of mesolimbic dopamine. Neuron. 76, 470-485 (2012).
  4. Horvitz, J. C., Choi, W. Y., Morvan, C., Eyny, Y., Balsam, P. D. A "good parent" function of dopamine: transient modulation of learning and performance during early stages of training. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1104, 270-288 (2007).
  5. Wickens, J. R., Horvitz, J. C., Costa, R. M., Killcross, S. Dopaminergic mechanisms in actions and habits. J. Neurosci. 27, 8181-8183 (2007).
  6. Bjorklund, A., Dunnett, S. B. Dopamine neuron systems in the brain: an update. Trends Neurosci. 30, 194-202 (2007).
  7. Swanson, L. W. The projections of the ventral tegmental area and adjacent regions: a combined fluorescent retrograde tracer and immunofluorescence study in the rat. Brain Res. Bull. 9, 321-353 (1982).
  8. Cacciapaglia, F., Wrightman, R. M., Careli, R. M. Rapid dopamine signaling differentially modulates distinct microcircuits within the nucleus accumbens during sucrose-directed behavior. J. Neurosci. 31, 13860-13869 (2011).
  9. Martinez-Hernandez, J., Lanuza, E., Martinez-Garcia, F. Selective dopaminergic lesions of the ventral tegmental area impair preference for sucrose but not for male sex pheromones in female mice. Eur. J. Neurosci. 24, 885-893 (2006).
  10. Bassareo, V., Di Chiara, G. Differential influence of associative and nonassociative learning mechanisms on the responsiveness of prefrontal and accumbal dopamine transmission to food stimuli in rats fed ad libitum. J. Neurosci. 17, 851-861 (1997).
  11. Bassareo, V., Di Chiara, G. Differential responsiveness of dopamine transmission to food-stimuli in nucleus accumbens shell/core compartments. Neurosci. 89, 637-641 (1999).
  12. Cheng, J., Feenstra, M. G. Individual differences in dopamine efflux in nucleus accumbens shell and core during instrumental conditioning. Learn. Mem. 13, 168-177 (2006).
  13. Genn, R. F., Ahn, S., Phillips, A. G. Attenuated dopamine efflux in the rat nucleus accumbens during successive negative contrast. Behav. Neurosci. 118, 869-873 (2004).
  14. Hajnal, A., Norgren, R. Accumbens dopamine mechanisms in sucrose intake. Brain Res. 904, 76-84 (2001).
  15. Hajnal, A., Smith, G. P., Norgren, R. Oral sucrose stimulation increases accumbens dopamine in the rat. Am. J. Physiol. 286, R31-R37 (2003).
  16. Bassareo, V., Di Chiara, G. Modulation of feeding-induced activation of mesolimbic dopamine transmission by appetitive stimuli and its relation to motivational state. Eur. J. Neurosci. 11, 4389-4397 (1999).
  17. Hajnal, A., Lenard, L. Feeding-related dopamine in the amygdala of freely moving rats. Neuroreport. 8, 2817-2820 (1997).
  18. Bassareo, V., De Luca, M. A., Di Chiara, G. Differential expression of motivational stimulus properties by dopamine in nucleus accumbens shell versus core and prefrontal cortex. J. Neurosci. 22, 4709-4719 (2002).
  19. Feenstra, M., Botterblom, M. Rapid sampling of extracellular dopamine in the rat prefrontal cortex during food consumption, handling, and exposure to novelty. Brain Res. 742, 17-24 (1996).
  20. Hernandez, L., Hoebel, B. G. Feeding can enhance dopamine turnover in the prefrontal cortex. Brain Res. Bull. 25, 975-979 (1990).
  21. Liang, N. C., Hajnal, A., Norgren, R. Sham feeding corn oil increases accumbens dopamine in the rat. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 291, R1236-R1239 (2006).
  22. Dunnett, S. B., Iversen, S. D. Regulatory impairments following selective kainic acid lesions of the neostriatum. Behav. Brain Res. 1, 497-506 (1980).
  23. Salamone, J. D., Zigmond, M. J., Stricker, E. M. Characterization of the impaired feeding behavior in rats given haloperidol or dopamine-depleting brain lesions. Neurosci. 39, 17-24 (1990).
  24. Kelley, A. E. Ventral striatal control of appetitive motivation: role in ingestive behavior and reward-related learning. Neurosci. Biobehav. Rev. 27, 765-776 (2004).
  25. Kelley, A. E. Memory and addiction: shared neural circuitry and molecular mechanisms. Neuron. 44, 161-179 (2004).
  26. Kelley, A. E., Baldo, B. A., Pratt, W. E. A proposed hypothalamic-thalamic-striatal axis for the integration of energy balance, arousal and food reward. J. Comp. Neurol. 493, 72-85 (2005).
  27. Kelley, A. E., Baldo, B. A., Pratt, W. E., Will, M. J. Corticostriatal-hypothalamic circuitry and food motivation: integration of energy, action and reward. Physiol. Behav. 86, 773-795 (2005).
  28. Berendse, H. W., Galis-de-Graaf, Y., Groenewegen, H. J. Topographical organization and relationship with ventral striatal compartments of prefrontal corticostriatal projections in the rat. J. Comp. Neurol. 316, 314-347 (1992).
  29. Brog, J. S., Salyapongse, A., Deutch, A. Y., Zahm, D. S. The patterns of afferent innervation of the core and shell in the "accumbens" part of rat ventral striatum: immunohistochemical detection of retrogradely transported fluoro-gold. J. Comp. Neurol. 338, 255-278 (1993).
  30. McDonald, A. J. Organization of amygdaloid projections to the prefrontal cortex and associated stritum in the rat. Neurosci. 44, 1-14 (1991).
  31. McGeorge, A. J., Faull, R. L. The organization of the projection from the cerebral cortex to the striatum in the rat. Neurosci. 29, 503-537 (1989).
  32. Sesack, S. R., Deutch, A. Y., Roth, R. H., Bunney, B. S. Topographical organization of the efferent projections of the medial prefrontal cortex in the rat: an anterograde tract-tracing study with Phaseolus vulgaris leucoagglutinin. J. Comp. Neurol. 290, 213-242 (1989).
  33. Wright, C. I., Beijer, A. V., Groenewegen, H. J. Basal amygdaloid complex afferents to the rat nucleus accumbens are compartmentally organized. J. Neurosci. 16, 1877-1893 (1996).
  34. Wright, C. I., Groenewegen, H. J. Patterns of convergence and segregation in the medial nucleus accumbens of the rat: relationships of prefrontal cortical, midline thalamic and basal amygdaloid afferents. J. Comp. Neurol. 361, 383-403 (1995).
  35. Geary, N., Smith, G. P. Pimozide decreases the positive reinforcing effect of sham fed sucrose in the rat. Pharmacol. Biochem. Behav. 22, 787-790 (1985).
  36. Muscat, R., Willner, P. Effects of selective dopamine receptor antagonists on sucrose consumption and preference. Psychopharmacol. 99, 98-102 (1989).
  37. Schneider, L. H., Gibbs, J., Smith, G. P. D-2 selective receptor antagonists suppress sucrose sham feeding in the rat. Brain Res. Bull. 17, 605-611 (1986).
  38. Baker, R. W., Osman, J., Bodnar, R. J. Differential actions of dopamine receptor antagonism in rats upon food intake elicited by mercaptoacetate or exposure to a palatable high-fat diet. Pharmacol. Biochem. Behav. 69, 201-208 (2001).
  39. Rao, R. E., Wojnicki, F. H., Coupland, J., Ghosh, S., Corwin, R. L. Baclofen, raclopride and naltrexone differentially reduce solid fat emulsion intake under limited access conditions. Pharmacol. Biochem. Behav. 89, 581-590 (2008).
  40. Weatherford, S. C., Smith, G. P., Melville, L. D. D-1 and D-2 receptor antagonists decrease corn oil sham feeding in rats. Physiol. Behav. 44, 569-572 (1988).
  41. Azzara, A. V., Bodnar, R. J., Delamater, A. R., Sclafani, A. D1 but not D2 dopamine receptor antagonism blocks the acquisition of a flavor preference conditioned by intragastric carbohydrate infusions. Pharmacol. Biochem. Behav. 68, 709-720 (2001).
  42. Baker, R. M., Shah, M. J., Sclafani, A., Bodnar, R. J. Dopamine D1 and D2 antagonists reduce the acquisition and expression of flavor-preferences conditioned by fructose in rats. Pharmacol. Biochem. Behav. 75, 55-65 (2003).
  43. Dela Cruz, J. A., Coke, T., Icaza-Cukali, D., Khalifa, N., Bodnar, R. J. Roles of NMDA and dopamine D1 and D2 receptors in the acquisition and expression of flavor preferences conditioned by oral glucose in rats. Neurobiol. Learn. Mem. 114, 223-230 (2014).
  44. Dela Cruz, J. A., et al. Roles of dopamine D1 and D2 receptors in the acquisition and expression of fat-conditioned flavor preferences in rats. Neurobiol. Learn. Mem. 97, 332-337 (2012).
  45. Yu, W. Z., Silva, R. M., Sclafani, A., Delamater, A. R., Bodnar, R. J. Pharmacology of flavor preference conditioning in sham-feeding rats: effects of dopamine receptor antagonists. Pharmacol. Biochem. Behav. 65, 635-647 (2000).
  46. Yu, W. Z., Silva, R. M., Sclafani, A., Delamater, A. R., Bodnar, R. J. Role of D(1) and D(2) dopamine receptors in the acquisition and expression of flavor-preference conditioning in sham-feeding rats. Pharmacol. Biochem. Behav. 67, (1), 537-544 (2000).
  47. Touzani, K., Bodnar, R. J., Sclafani, A. Activation of dopamine D1-like receptors in nucleus accumbens is critical for the acquisition, but not the expression, of nutrient-conditioned flavor preferences in rats. Eur. J. Neurosci. 27, 1525-1533 (2008).
  48. Touzani, K., Bodnar, R. J., Sclafani, A. Dopamine D1-like receptor antagonism in amygdala impairs the acquisition of glucose-conditioned flavor preference in rats. Eur. J. Neurosci. 30, 289-298 (2009).
  49. Touzani, K., Bodnar, R. J., Sclafani, A. Acquisition of glucose-conditioned flavor preference requires the activation of dopamine D1-like receptors within the medial prefrontal cortex in rats. Neurobiol. Learn. Mem. 94, 214-219 (2010).
  50. Malkusz, D. C., et al. Dopamine signaling in the medial prefrontal cortex and amygdala is required for the acquisition of fructose-conditioned flavor preferences in rats. Behav. Brain Res. 233, 500-507 (2012).
  51. Bernal, S. Y., et al. Role of dopamine D1 and D2 receptors in the nucleus accumbens shell on the acquisition and expression of fructose-conditioned flavor-flavor preferences in rats. Behav. Brain Res. 190, 59-66 (2008).
  52. Bernal, S. Y., et al. Role of amygdala dopamine D1 and D2 receptors in the acquisition and expression of fructose-conditioned flavor preferences in rats. Behav. Brain Res. 205, 183-190 (2009).
  53. Dragunow, M., Faull, R. The use of c-fos as a metabolic marker in neuronal pathway tracing. J. Neurosci. Methods. 29, 261-265 (1989).
  54. VanElzakker, M., Fevurly, R. D., Breindel, T., Spencer, R. L. Environmental novelty is associated with a selective increase in Fos expression in the output elements of the hippocampal formation and the perirhinal cortex. Learn. Mem. 15, 899-908 (2008).
  55. Norgren, R., Hajnal, A., Mungarndee, S. S. Gustatory reward and the nucleus accumbens. Physiol. Behav. 89, 531-535 (2006).
  56. Park, T. H., Carr, K. D. Neuroanatomical patterns of fos-like immunoreactivity induced by a palatable meal and meal-paired environment in saline- and naltrexone-treated rats. Brain Res. 805, 169-180 (1998).
  57. Zhao, X. L., Yan, J. Q., Chen, K., Yang, X. J., Li, J. R., Zhang, Y. Glutaminergic neurons expressing c-Fos in the brainstem and amygdala participate in signal transmission and integration of sweet taste. Nan.Fang Yi.Ke.Da.Xue.Xue.Bao. 31, 1138-1142 (2011).
  58. Mungarndee, S. S., Lundy, R. F., Norgren, R. Expression of Fos during sham sucrose intake in rats with central gustatory lesions. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 295, R751-R763 (2008).
  59. Otsubo, H., Kondoh, T., Shibata, M., Torii, K., Ueta, Y. Induction of Fos expression in the rat forebrain after intragastric administration of monosodium L-glutamate, glucose and NaCl. Neurosci. 196, 97-103 (2011).
  60. Yamamoto, T., Sako, N., Sakai, N., Iwafune, A. Gustatory and visceral inputs to the amygdala of the rat: conditioned taste aversion and induction of c-fos-like immunoreactivity. Neurosci. Lett. 226, 127-130 (1997).
  61. Mitra, A., Lenglos, C., Martin, J., Mbende, N., Gagne, A., Timofeeva, E. Sucrose modifies c-fos mRNA expression in the brain of rats maintained on feeding schedules. Neurosci. 192, 459-474 (2011).
  62. Pecoraro, N., Dallman, M. F. c-Fos after incentive shifts: expectancy, incredulity, and recovery. Behav. Neurosci. 119, 366-387 (2005).
  63. Hamlin, A. S., Blatchford, K. E., McNally, G. P. Renewal of an extinguished instrumental response: Neural correlates and the role of D1 dopamine receptors. Neurosci. 143, 25-38 (2006).
  64. Kerfoot, E. C., Agarwal, I., Lee, H. J., Holland, P. C. Control of appetitive and aversive taste-reactivity responses by an auditory conditioned stimulus in a devaluation task: A FOS and behavioral analysis. Learn. Mem. 14, 581-589 (2007).
  65. Zhang, M., Kelley, A. E. Enhanced intake of high-fat food following striatal mu-opioid stimulation: microinjection mapping and fos expression. Neurosci. 99, 267-277 (2000).
  66. Teegarden, S. L., Scott, A. N., Bale, T. L. Early life exposure to a high fat diet promotes long-term changes in dietary preferences and central reward signaling. Neurosci. 162, 924-932 (2009).
  67. Del Rio, D., et al. Involvement of the dorsomedial prefrontal cortex in high-fat food conditioning in adolescent mice. Behav. Brain Res. 283, 227-232 (2015).
  68. Knapska, E., Radwanska, K., Werka, T., Kaczmarek, L. Functional internal complexity of amygdala: focus on gene activity mapping after behavioral training and drugs of abuse. Physiol. Rev. 87, 1113-1173 (2007).
  69. Dela Cruz, J. A. D., et al. c-Fos induction in mesotelencephalic dopamine pathway projection targets and dorsal striatum following oral intake of sugars and fats in rats. Brain Res. Bull. 111, 9-19 (2015).
  70. Paxinos, G., Watson, C. The rat brain in stereotaxic coordinates. Elsevier. (2006).
  71. Ranaldi, R., et al. The effects of VTA NMDA receptor antagonism on reward-related learning and associated c-fos expression in forebrain. Behav. Brain Res. 216, 424-432 (2011).
كشف في وقت واحد ج-فو التنشيط من مواقع مكافأة Mesolimbic والقشري المتوسطي الدوبامين بعد ساذج السكر والدهون الابتلاع في الجرذان
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Dela Cruz, J. A. D., Coke, T., Bodnar, R. J. Simultaneous Detection of c-Fos Activation from Mesolimbic and Mesocortical Dopamine Reward Sites Following Naive Sugar and Fat Ingestion in Rats. J. Vis. Exp. (114), e53897, doi:10.3791/53897 (2016).More

Dela Cruz, J. A. D., Coke, T., Bodnar, R. J. Simultaneous Detection of c-Fos Activation from Mesolimbic and Mesocortical Dopamine Reward Sites Following Naive Sugar and Fat Ingestion in Rats. J. Vis. Exp. (114), e53897, doi:10.3791/53897 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter