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Article de méthode

Une nouvelle technique de production et d'observation de chimiluminescence en milieu biologique

8.1K vues

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DOI :

10.3791/54694

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9 mars 2017

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Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit une nouvelle technique d’imagerie peropératoire qui utilise un complexe de ruthénium comme source d’émission de lumière chimiluminescente, produisant ainsi des rapports signal/bruit élevés lors de l’imagerie in vivo. L’imagerie peropératoire est un domaine en pleine expansion qui pourrait révolutionner la façon dont les procédures chirurgicales sont effectuées.

Résumé

Les techniques d’imagerie peropératoire ont le potentiel de rendre les interventions chirurgicales plus sûres et plus efficaces ; pour ces raisons, ces techniques se répandent rapidement dans la salle d’opération. Nous présentons ici une nouvelle approche qui utilise une technique non encore explorée pour l’imagerie peropératoire : l’imagerie chimiluminescente. Cette méthode utilise un rapporteur chimiluminescent à base de ruthénium ainsi qu’un système de nébulisation sur mesure pour produire des images ex vivo ou in vivo avec des rapports signal/bruit élevés. Le rapporteur à base de ruthénium produit de la lumière après exposition à une solution oxydante aqueuse et une ré-réduction dans les tissus environnants. Cette méthode nous a permis de détecter des concentrations de rapporteurs aussi faibles que 6,9 pmol/cm2. Dans ce travail, nous présentons un guide visuel de nos études in vivo de preuve de concept impliquant des injections sous-cutanées et intraveineuses chez la souris. Les résultats suggèrent que cette technologie est un candidat prometteur pour d’autres recherches précliniques et pourrait éventuellement devenir un outil utile en salle d’opération.

Introduction

Au cours des dernières décennies, les technologies d'imagerie ont révolutionné la façon dont les médecins à diagnostiquer et de surveiller la maladie. Ces techniques d'imagerie, cependant, ont été largement limitée à des systèmes d'imagerie du corps entier, comme la tomographie par émission de positrons (PET), le photon unique par émission de positrons (SPECT), tomographie assistée par ordinateur (CT) et l'imagerie par résonance magnétique (IRM). Une attention particulière a été accordée au cancer, et des percées technologiques d'imagerie ont grandement amélioré la façon dont cette maladie est diagnostiquée et traitée. Malgré ces progrès, il y a u....

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Protocole

Déclaration éthique: Tous les in vivo des expérimentations animales décrites ont été réalisées selon un protocole approuvé et selon les directives éthiques du Memorial Sloan Kettering Cancer Center (MSK) Institutional Animal Care et utilisation Commission (IACUC).

1. Construction d'un dispositif de nébulisation

  1. Fixer le bois de la partie A (12,5 x 2,5 x 1,8 cm 3) en position verticale dans le centre de la partie B (12,7 x 10,7 x 1,8 cm 3) à l' aide de deux vis (4 x 25 mm 2). Fixer le bois de la partie C (11 × 2,5 × 1,8 cm 3) au milieu de la partie A (12,5 x 2,5 x 1,8 ....

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Résultats

Le système de nébuliseur décrit dans la section 1 du protocole peut être construit à partir de matériaux facilement disponibles à un faible coût. Il est destiné à être un encart pour la télécommande déclenché par pulvérisation du réducteur / agent oxydant à l' intérieur d' un lecteur de bioluminescence (figure 1). Notre conception permet le fonctionnement en toute sécurité du nébuliseur dans le lecteur de bioluminescence à une distance de 14 cm de la lentille. Pas de bué.......

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Discussion

Ici, nous présentons une technologie qui est capable de délimiter le tissu optiquement par l'intermédiaire de l'émission de photons créés par un rapporteur chimioluminescent. Contrairement à d' autres, plus établi, les technologies 4, 5, 6, 7, 8, 9, ce système rapporteur chimioluminescent utilise une sonde d'.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Les auteurs remercient le professeur Jan Grimm et M. Travis Shaffer pour leurs discussions utiles et M. David Gregory pour la révision du manuscrit. Nous remercions chaleureusement les services techniques fournis par la plateforme d’imagerie animale MSK, soutenue en partie par la subvention de soutien P30CA008748-48 du NIH Cancer Center. Les auteurs remercient les NIH (K25 EB016673 et R21 CA191679, T.R. et 4R00CA178205-02, B.M.Z.), le MSK Center for Molecular Imaging and Nanotechnology (T.R.), la Tow Foundation (C.-B.) et la National Science Foundation Integrative Graduate Education and Research Traineeship (IGERT 0965983 at Hunter College for B.C. and T.M.S.) pour le....

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Partie A en bois (12,5 × ; 2,5 × ; 1,8 cm)  ; Woodcraft131404Coupé dans une feuille de contreplaqué de bouleau de 3/4 » x 24 » x 30
Partie de bois B (12,7 & fois ; 10,7 & fois ; 1,8 cm)Woodcraft131404Coupé dans une feuille de contreplaqué de bouleau de 3/4 » x 24 » x 30
de bois C (11 × ; 2,5 & fois ; 1,8 cm)Woodcraft131404Coupé dans un 3/4 » x 24 » x 30& rdquo ; Vis en tôle de contreplaqué de bouleau
(4 & times ; 25 mm)Screwfix79939
Harmon Face Values Mini pulvérisateur 3 ozBed, Bath and Beyond
(10 cm d’acier 1/16")Metals Depot Int. Inc.2192
Crayon Classic HBPapermate58592
TromboneOffice Depot221720
câble haut-parleurRCA Inc.
Pile alcaline Energizer 9VEnergizer Holdings Inc.EN22
Hitech HS-82MG, couple de sortie de 3,4 kg/cm @ 6VHitech RCD USA Inc.32082S
Nomde l’entrepriseNuméro de catalogueCommentaires Colliers
serrage en plastique de 28 cmGeneral Electric Inc.50725
Ruban adhésif3M Inc.3939
littleBits w1 fillittleBits Inc.w1 fil
littleBits p1 puissancelittleBits Inc.p1 puissance
littleBits i2 interrupteur à basculelittleBits Inc.i2 interrupteur
littleBits 011 servolittleBits Inc.011 servo
20 cm Fil revêtu de plastique Attaches torsadéesFour Star Plastics71TIE8000
Tris(2,2&prime ;-bipyridyl)dichlororuthénium(II) hexahydratéSigma-Aldrich Inc.
Nitrate d’ammonium et de cérium(IV)Sigma-Aldrich Inc.22249
IsofluoraneBaxter Healthcare1001936060
PBSSigma-AldrichPBS1
ÉthanolSigma-Aldrich2854
TriéthylamineSigma-Aldrich Inc.T0886
EauL’eau a été purifiée à l’aide d’un Milipore Mili-Q (R &ge ; 18 M&Omega ; )
Souris nues femelles JacksonLaboratories19295 - 6 semaines
Souche C57BL/6J  ;   ;
souris mâles NU/J à  ;Jackson Laboratories20196 ans &ndash ; 8 semaines
IVIS 200 lecteur de bioluminescenceCaliper Live Science
4.2 logicielPerkin-Elmer128165
lames de microscopeThermoScientific4951PLUS4
 »  » Partie Tige en acier inoxydable AH1650SNMicro servomoteur de à bascule 224758 Live Image

Références

  1. Fong, Y., Giulianotti, P. C., Lewis, J., Koerkamp, B. G., Reiner, T. Imaging and Visualization in The Modern Operating Room: A Comprehensive Guide for Physicians. , Springer. (2015).
  2. Nguyen, Q. T., Tsien, R. Y. Fluorescence-guided surgery with live molecular navigation - ....

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Réimpressions et autorisations

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