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Pulpal के मूल्यांकन के लिए एक प्रत्यक्ष पल्प-कैपिंग मॉडल के विकास के घाव भरने और चूहे में सुधारक दन्त-ऊतक गठन

Published: January 12, 2017 doi: 10.3791/54973
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1,2, 1,2, 1,2,3, 1,2
1The Shapiro Family Laboratory of Viral Oncology and Aging Research, The UCLA School of Dentistry, 2UCLA Jonsson Comprehensive Cancer Center, 3David Geffen School of Medicine at UCLA

Summary

हम pulpal घाव भरने और vivo में सुधारक दन्त-ऊतक गठन के मूल्यांकन के लिए चूहों दांतों पर कैपिंग प्रत्यक्ष लुगदी प्रदर्शन करने में एक कदम-दर-कदम विधि का वर्णन है।

Protocol

चूहे जैक्सन प्रयोगशाला से खरीदा है और प्रयोगशाला पशु चिकित्सा के यूसीएलए प्रभाग (DLAM) में एक रोगज़नक़ मुक्त मछली पालने का बाड़ा में रखा गया था। प्रयोगों चांसलर के पशु अनुसंधान समिति (एआरसी # 2016-037) से मंजूरी दे दी संस्थागत दिशा निर्देशों के अनुसार प्रदर्शन किया गया।

1. माउस Anesthetization

  1. आठ सप्ताह पुराने महिला C57 / BL6 चूहों का उपयोग करें (एन = 3)।
  2. ketamine (80-120 मिलीग्राम / माउस वजन का किलो) / xylazine (5 मिलीग्राम / माउस वजन के प्रति किलोग्राम) समाधान का प्रयोग चूहों anesthetize और 10 मिलीग्राम / किग्रा की एक खुराक पर intraperitoneally (आईपी) प्रशासन।
  3. ketamine तैयार (80 - 120 मिलीग्राम / किग्रा) / xylazine (5 मिलीग्राम / किग्रा) समाधान और उन्हें 10 मिलीग्राम / किग्रा की एक खुराक पर intraperitoneally (आईपी) प्रशासन।
  4. पुष्टि करें कि चूहों को पूरी तरह से एक पैर की अंगुली चुटकी प्रदर्शन से anesthetized हैं।

2. पल्प-कैपिंग प्रक्रिया

  1. माउस के मुंह में मुंह धारक रखें।
  2. ऐसी है कि मेज पर मुंह धारक को सुरक्षित वहविज्ञापन ऊपर की ओर का सामना करना पड़ रहा है।
  3. मुंह के शीर्ष पर माइक्रोस्कोप (10X) इतनी जगह है कि पहली दाढ़ की दाढ़ पूरी तरह से दिख रहा है।
  4. 200,000 rpm पर एक उच्च गति handpiece में ¼ के दौर बर का उपयोग करना, बीच में दांत के तामचीनी हिस्सा निकाल जब तक लुगदी पारदर्शी दंतधातु के माध्यम से दिखाई दे रहा है। बर के साथ लुगदी का खुलासा नहीं करते।
  5. एक # 15 endodontic कश्मीर फ़ाइल (150 माइक्रोन का व्यास) का उपयोग करना, दंतधातु के माध्यम से छेदना और लुगदी बेनकाब।
    नोट: इतना है कि दंतधातु मलबे लुगदी में नहीं धकेल दिया जाए विशेष ध्यान रखा जाना चाहिए। इस तिमाही कश्मीर फ़ाइल घूर्णन और फिर बाहर कश्मीर फाइल खींच कर बचा जा सकता है।
  6. बाँझ एच 2 ओ के साथ एमटीए मिक्स निर्माता के निर्देशों के अनुसार। उद्धार और एक्सप्लोरर के टिप के साथ संपर्क में लुगदी पर एमटीए जगह है। कोमल दोहन द्वारा उजागर लुगदी में एमटीए पैक करने के लिए कागज बिंदु (ठीक) के पीछे की ओर का प्रयोग करें। कागज बिंदु के मोटा पक्ष फ्लैट है और इसलिए अनुमति देता हैउजागर लुगदी में एमटीए के समुचित संक्षेपण के लिए।
  7. 35% फॉस्फोरिक एसिड एचेंट जहां यह सिर्फ दांत को शामिल किया रखकर 15 एस के लिए दांत खोदना। एचेंट की नियुक्ति को सीमित करने का विशेष ध्यान रखना है, क्योंकि यह मसूड़ों के ऊतकों में जलन पैदा कर सकता है।
    नोट: एचेंट एक सिरिंज में आता है और इसलिए है कि दंत चिकित्सा चिपकने में प्रवाह दांत पर micromechanical संबंध मध्यस्थता करने के लिए कर सकते हैं दांत सतहों मोटा हो जाना करने के लिए प्रयोग किया जाता है। क्योंकि वे चिपचिपा हैं, यह आत्म निहित थोड़ी मात्रा दांत पर सीधे लागू करने से हो सकता है।
  8. नकारात्मक दबाव सक्शन का प्रयोग एचेंट हटा दें। एक कपास की गोली है कि हल्के से एच 2 ओ लथपथ है एचेंट का बच दूर करने के लिए प्रयोग करें। इस चरण को दोहराएँ जब तक पूरी तरह से एचेंट दांत से निकाल दिया जाता है।
  9. एक संपीड़ित हवा डस्टर का प्रयोग, धीरे दांत सूखी।
  10. दंत चिपकने कागज बिंदु के पीठ का उपयोग कर लागू करें।
  11. चिपकने वाली परत 3 एस के लिए संपीड़ित हवा का उपयोग पतली बनाओ।
  12. सीUre 20 इलाज प्रकाश इकाई का उपयोग एस के लिए दंत चिकित्सा चिपकने।
  13. थोड़ी मात्रा में flowable समग्र दांत कि एमटीए के साथ छाया हुआ था पर रखें। दांत खांचे में समग्र प्रवाह करने के लिए एक्सप्लोरर की नोक का प्रयोग करें।
  14. 30 एक प्रकाश इलाज इकाई का उपयोग कर इसे भाजन करने के लिए एस के लिए समग्र इलाज। पुष्टि करें कि समग्र पूरी तरह से ठीक हो जाता है और मुश्किल एक्सप्लोरर का उपयोग कर।

3. बाद सेशन देखभाल

  1. Carprofen (5 मिलीग्राम / किग्रा) subcutaneously (अनुसूचित जाति) तुरंत लुगदी-कैपिंग प्रक्रिया के बाद प्रशासन।
  2. कम शक्ति पर एक हीटिंग पैड पर चूहों की जगह जानवरों को गर्म रखने के लिए इससे पहले कि वे जाग।
  3. आवास के लिए मछली पालने का बाड़ा के लिए चूहों लौटें।

4. ऊतक खरीद

  1. 5 के बाद - 6 सप्ताह, isoflurane के साथ एक पूर्ण संवेदनाहारी शर्त के तहत ग्रीवा अव्यवस्था से चूहों euthanize।
  2. ध्यान से खोपड़ी के आधार से बाहर जबडा हटा दें और इसे एक 50 मिलीलीटर ट्यूब में डाल दिया। entir फिक्सई जबडा है कि रात में 4 डिग्री सेल्सियस पर, दोनों लुगदी से ढकी दांत और पीबीएस में 4% paraformaldehyde, 7.4 पीएच में contralateral नवोदित दांत होते हैं, और उसके बाद एक 70% इथेनॉल समाधान में संग्रहीत।
    नोट: Paraformaldehyde विषाक्त और कैंसर है। के रूप में मानक संचालन प्रक्रिया (एसओपी) में उल्लिखित समुचित उपयोग paraformaldehyde निगरानी की जानी चाहिए।
  3. μCT स्कैन का उपयोग माउस ऊर्ध्वहन्वस्थि स्कैन करें। स्कैनिंग के दौरान ऊर्ध्वहन्वस्थि को सुरक्षित करने के लिए, 70% इथेनॉल से लथपथ धुंध के साथ नमूने लपेटो और उन्हें 15 एमएल सेल संस्कृति ट्यूब में जगह है।

5. μCT स्कैन

  1. μCT स्कैनिंग के लिए नमूने तैयार करें। संक्षेप में, 70% इथेनॉल से लथपथ धुंध के साथ नमूने लपेटो और उन्हें एक सामान्य 15-एमएल सेल संस्कृति शंक्वाकार ट्यूब में सुरक्षित है। μCT स्कैनिंग मंच पर ट्यूब माउंट, निर्माता के निर्देशों के रूप में रेखांकित।
  2. 145 μA के एक वर्तमान, 55 केवीपी के एक वोल्टेज, और 2 के एक जोखिम समय के लिए एक्स-रे स्रोत सेट00 एमएस।
  3. एक 20 माइक्रोन संकल्प पर और एक 0.5 मिमी अल फिल्टर के साथ μCT स्कैनर के साथ छवि अधिग्रहण प्रदर्शन करना।
  4. छवि को फिर से संगठित और यह 11 कल्पना।
  5. एक बार जब μCT स्कैन पूरा हो गया है, 2 सप्ताह के लिए 5% EDTA और पीबीएस में 4% सुक्रोज (7.4 पीएच) के साथ विकैल्सीकरण शुरू करते हैं।

6. ऊतक प्रसंस्करण और धुंधला

  1. पैराफिन में decalcified ऊतकों शामिल करें। embedding से पहले, एक बाण कटौती बनाकर जबडा ट्रिम तुरंत पहले दाढ़ के लिए पूर्वकाल। embedding, वहीं इस सतह नीचे की स्थिति ऐसी है कि पहली दाढ़ के अनुदैर्ध्य अनुभाग काटने की सतह है।
  2. microtome का प्रयोग, 5 माइक्रोन मोटी स्लाइड तैयार करते हैं। लुगदी-कैपिंग क्षेत्रों में आमतौर पर distopalatal (डीपी) जड़ है, जो एक मील का पत्थर के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है के साथ मेल खाना। प्रकाश माइक्रोस्कोप के नीचे ऊतक विज्ञान की जांच और μCT छवियों की तुलना द्वारा ब्याज की सटीक क्षेत्र निर्धारित करते हैं।
  3. एच एंड ई धुंधला, depara के लिएffinize और xylene (2x) और क्रमानुसार पतला इथेनॉल (100% EtOH 2x, 95% EtOH 2x, और 70% EtOH 1x) के साथ स्लाइड्स rehydrate।
  4. नल का पानी चलाने के साथ स्लाइड कुल्ला।
  5. 2.5 मिनट के लिए Hematoxylin समाधान के साथ दाग और नल के पानी से कुल्ला।
  6. 1 मिनट के लिए 95% इथेनॉल में स्लाइड्स डुबकी।
  7. 1 मिनट के लिए Eosin समाधान के साथ दाग और नल के पानी से कुल्ला।
  8. क्रमानुसार पतला इथेनॉल (70% EtOH 1x, 2x 95% EtOH, और 100% EtOH 3x) और xylene (3x) के साथ निर्जलीकरण।
  9. समाधान बढ़ते के साथ स्लाइड माउंट।

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Representative Results

यहाँ, हम चूहों दांतों पर कैपिंग लुगदी प्रदर्शन करने के लिए कदम-दर-कदम प्रक्रिया दिखाया। लुगदी चूहों में कैपिंग के प्रमुख पहलुओं में से एक उचित तंत्र के लिए है। इस संबंध में एक 10X शक्ति बढ़ाई साथ माइक्रोस्कोप होने आवश्यक (चित्रा 1 ए) है। दांत में एक कक्षा-मैं-तरह तैयारी बनाने के लिए, हम 200,000 आरपीएम (चित्रा 1 बी) पर एक बिजली के उच्च गति handpiece में एक चौथाई के दौर गड़गड़ाहट इस्तेमाल किया। वैकल्पिक रूप से, उन है कि संपीड़ित हवा का उपयोग सहित किसी भी अन्य इंजन, एक दांत तैयार करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

चित्रा 2A -2 ई में, लुगदी कैपिंग के प्रदर्शन के लिए प्रतिनिधि कदम दिखाए जाते हैं। कक्षा-मैं-तरह तैयारी प्रदर्शन किया गया था (चित्रा 2 बी)। क्योंकि एक पानी स्प्रे प्रक्रिया के दौरान चूहों को डुबो सकता है, इसके उपयोग अनुशंसित नहीं है। इस कारण से, यह कोमल और intermi साथ दांत तैयार करने के लिए आवश्यक हैttent overheating रोकने के लिए स्ट्रोक। संपीड़ित हवा का उपयोग भी ठंडा प्रभाव प्रदान करने के लिए सिफारिश की है। एक endodontic फ़ाइल के साथ लुगदी को उजागर करते हुए, लुगदी में दंतधातु मलबे धक्का नहीं सावधानी रखना के रूप में इस सुधारक दन्त-ऊतक गठन (चित्रा -2) में डेटा व्याख्या के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं। इस संपीड़ित हवा का उपयोग करके बचा जा सकता है। इसी तरह, एमटीए लुगदी में बहुत दूर धकेलने के बिना उजागर लुगदी पर रखा जाना चाहिए। एमटीए प्लेसमेंट के कोमल दोहन गतियों (चित्रा 2 डी) के साथ कागज बिंदु के पीठ का उपयोग करके प्राप्त किया जा सकता है। एमटीए प्लेसमेंट के बाद, दांत एच 2 ओ से लथपथ कपास छर्रों का उपयोग कर खांचे है, जो दांत पर समग्र के बंधन के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं में किसी भी शेष एमटीए दूर करने के लिए साफ किया जाना चाहिए। समग्र बहाली के पारंपरिक तरीकों, दांत सतहों नक़्क़ाशी भड़काना और चिपकने के साथ संबंध, और रखने और इलाज flowable कंपोजिट सहित उपयोग किया जाता है, (चित्रा 2 ई)।

छह हफ्ते का गूदा कैपिंग के बाद, चूहों काटा गया, और शीर्ष दृश्य पुष्टि करने के लिए कि समग्र अभी भी बरकरार था (चित्रा 3) फोटो खिंचवाने गया था। μCT स्कैनिंग लुगदी से ढकी समूह (चित्रा 3 बी) में pulpal अंतरिक्ष के महत्वपूर्ण मंदी से पता चला है, सुझाव है कि सुधारक दन्त-ऊतक लुगदी में गठन किया गया था। Decalcified ऊतकों के नमूनों आगे histologically विवो में सुधारक दन्त-ऊतक के गठन की जांच के लिए एच एंड ई धुंधला के अधीन थे। नियंत्रण समूह में, odontoblastic परतों (ओ) दंतधातु (- 4C चित्रा -4 ए) के किनारों के आसपास प्रमुखता से स्पष्ट थे। इसके विपरीत, लुगदी-कैपिंग समूह सुधारक दन्त-ऊतक (आरडी) pulpal अंतरिक्ष (- 4F चित्रा 4D) में गठन के महत्वपूर्ण मात्रा में था। दिलचस्प है, एक करीब परीक्षा से पता चला है कि सुधारक दन्त-ऊतक (आरडी) दंतधातु का एक विशिष्ट विशेषता का प्रदर्शन (जैसे, एस triated लाइनों दन्त-ऊतक नलिकाओं, लाल तीर) का प्रतिनिधित्व करने के साथ-साथ कि हड्डी के (जैसे, osteocytes का प्रतिनिधित्व फंस अस्थिकोरक, काला तीर)। हम Dentin मैट्रिक्स प्रोटीन 1 (DMP1), odontogenic भेदभाव 12 के लिए एक मार्कर के लिए दाग है, हम लुगदी से ढकी दांत के गूदे में DMP1 अभिव्यक्ति में एक उल्लेखनीय वृद्धि पाया जब नवोदित दांत की तुलना (चित्रा 5 ए और 5 ब) यह दर्शाता है कि सुधारक दन्त-ऊतक लुगदी के भीतर का गठन किया गया था।

आकृति 1
चित्रा 1: पल्प-कैपिंग प्रक्रिया के लिए उपकरण सेटअप। (ए) माउस दांत visualizing के लिए एक माइक्रोस्कोप (10X)। (बी) उच्च गति handpiece और लुगदी बेनकाब करने के लिए एक कक्षा मैं तैयारी की तैयारी के लिए बिजली की मोटर इंजन।= "_blank"> कृपया यहाँ यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2: कैपिंग प्रक्रिया में प्रतिनिधि कदम। (ए) एक माउस में दाढ़ की पहली दाढ़ पर बिना तैयारी के दाँत। (बी) के क्वार्टर दौर बर का उपयोग कर प्रारंभिक तामचीनी हटाने। (सी) पल्प जोखिम endodontic फ़ाइल का उपयोग। (डी) एमटीए उजागर लुगदी में तलाशें। (ई) दांत पर समग्र बहाली नियुक्ति। बार 500 माइक्रोन का प्रतिनिधित्व करता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3: नैदानिक प्रस्तुति और μCT scanninचूहे में पल्प से ढकी और नवोदित दांत के जी। (ए) के गूदे से ढकी दांत (बाएं) और नवोदित दांत (दाएं) पर माउस ऊर्ध्वहन्वस्थि की occlusal देखें। (बी) ऊर्ध्वहन्वस्थि के पार के अनुभागीय μCT छवियों। बार 500 माइक्रोन का प्रतिनिधित्व करता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा 4: सुधारक दन्त-ऊतक गठन विवो में के histological साक्ष्य। (एसी) और एच ई 100X, 200X, और 400X पर एक माउस में नवोदित दाढ़ की पहली दाढ़ का धुंधला हो जाना। (DE) एच एंड ई 100X, 200X, और 400X पर एक माउस में लुगदी से ढकी दाढ़ की पहली दाढ़ का धुंधला हो जाना। आरडी = सुधारक दन्त-ऊतक; बार 100 माइक्रोन (ओ = odontoblast परतों का प्रतिनिधित्व करता है काला तीर =osteocytes; लाल तीर = दन्त-ऊतक नलिकाओं)। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 5
चित्रा 5: DMP1 की Immunohistochemical धुंधला हो जाना। 400X पर एक माउस में नवोदित दाढ़ की पहली दाढ़ (ए) DMP1 धुंधला हो जाना। (बी) DMP1 400X पर एक माउस में लुगदी से ढकी दाढ़ की पहली दाढ़ का धुंधला हो जाना। बार 100 माइक्रोन का प्रतिनिधित्व करता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

वर्तमान में, वहाँ कई अलग अलग प्रयोगात्मक मॉडल दंत लुगदी स्टेम सेल (DPSCs) 13 के odontogenic भेदभाव पर दंत चिकित्सा सामग्री, मचान, या वृद्धि कारकों के vivo प्रभाव को मान्य करने के लिए उपलब्ध हैं। इन मॉडलों को अस्थानिक ऑटोलॉगस इस तरह के गुर्दे कैप्सूल के रूप में एक अंग में DPSCs के प्रत्यारोपण, या scaffolds 14,15 साथ immunocompromised चूहों में DPSCs के चमड़े के नीचे प्रत्यारोपण शामिल हैं। हालांकि, इन तरीकों में सीमित कर रहे हैं कि DPSCs पर अपने odontogenic प्रभाव ओर्थोटोपिक लुगदी वातावरण में नहीं किया जाता है। दूसरी ओर, एक दांत पर गूदा या लुगदी कैपिंग प्रक्रियाओं में ओर्थोटोपिक प्रत्यारोपण बड़े जानवरों 16,17 में उपयोग किया जाता है। हालांकि इन मॉडलों ओर्थोटोपिक वातावरण में odontogenic संभावित मूल्यांकन में मूल्यवान हैं, उन मॉडलों का उपयोग लुगदी घाव भरने और सुधारक दन्त-ऊतक गठन पर सीमित यंत्रवत अंतर्दृष्टि प्रदान प्रकृति में काफी हद तक पर्यवेक्षणीय है। इस पत्र में, हम चूहों में लुगदी कैपिंग प्रदर्शन करने के लिए एक विस्तृत तरीका मौजूद है। यह कदम-दर-कदम प्रक्रिया चूहों anesthetizing भी शामिल है, कक्षा-मैं-तरह गुहा की तैयारी, लुगदी-कैपिंग सामग्री रखने, ऊर्ध्वहन्वस्थि कटाई, μCT के साथ विश्लेषण करने स्कैन, और सुधारक दन्त-ऊतक गठन के लिए ऊतकों के नमूनों का आकलन। हमारे लुगदी-कैपिंग माउस मॉडल ट्रांसजेनिक या पीटा चूहों, जो अनुसंधान समुदाय में व्यापक रूप से उपलब्ध हैं के उपयोग को सक्षम करने से सुधारक दन्त-ऊतक के संदर्भ में इन विवो में pulpal घाव भरने के मौलिक आणविक तंत्र की जांच में सहायक होगा।

हाल के अध्ययनों से कई माउस मॉडल, जिसमें दंतधातु गठन 18,19 मनाया गया प्रदर्शन किया। उल्लेख किया गया था एट अल। जो प्रतिक्रियावादी, विरोहक नहीं, दंतधातु गठन को बढ़ावा देने के गूदे जोखिम के बिना एक कक्षा-मैं-तरह तैयारी, बनाया। दोनों प्रतिक्रियावादी दंतधातु और सुधारक दन्त-ऊतक तृतीयक दंतधातु के रूप में वर्गीकृत कर रहे हैंहै, जो दांत के लिए बाहरी उत्तेजना के बाद रूपों। हालांकि, प्रतिक्रियावादी दंतधातु, जो मौजूदा ओडॉन्टोब्लास्ट द्वारा बनाई है के विपरीत, सुधारक दन्त-ऊतक ऐसे DPSCs रूप odontoblast कोशिकाओं की तरह, जब लुगदी उजागर हो जाता है और odontoblastic परतों 20 का उल्लंघन कर रहे हैं द्वारा बनाई है। इसलिए, यह क्लिनिक में एक वास्तविक लुगदी-कैपिंग प्रक्रिया का प्रतिनिधित्व नहीं करता है। एक अन्य अध्ययन में, कांच ionomer लुगदी जोखिम 19 टोपी के लिए इस्तेमाल किया गया था। हालांकि, एक नैदानिक अध्ययन है कि कांच ionomer जीर्ण सूजन प्रेरित किया, लेकिन विरोहक 21 Dentin नहीं दिखाया। इस संबंध में, हमारे लुगदी-कैपिंग माउस मॉडल बेहतर रोगियों में वास्तविक लुगदी-कैपिंग प्रक्रिया का प्रतिनिधित्व करता है।

ऐसा नहीं है कि जब हम अधिक से अधिक 6 सप्ताह के बाद चूहों काटा, सुधारक दन्त-ऊतक गठन गूदा कक्ष और जड़ नहरों (चित्रा 4) के दौरान हुई उल्लेखनीय है। इस तरह के एक अवलोकन बजाय अप्रत्याशित है, जैसा कि हम जून में सुधारक दन्त-ऊतक गठन प्रत्याशितलुगदी-कैपिंग सामग्री और लुगदी के बीच ction। हालांकि, लुगदी के शक्तिशाली खनिज भी, नैदानिक सेटिंग में मनाया जाता है, विशेष रूप से अपेक्षाकृत युवा रोगियों 22 में। क्योंकि इस अध्ययन में इस्तेमाल 8 सप्ताह पुराने चूहों "युवा वयस्कों" 23 माना जाता है, एक संभावना मौजूद है जिससे इन चूहों अभी भी महत्वपूर्ण odontogenic संभावित बंदरगाह। इसलिए, यह चूहों में सुधारक दन्त-ऊतक गठन की उम्र बढ़ने के प्रभाव की जांच करने के लिए सार्थक होगा।

हमारे ऊतकीय परीक्षाओं है कि, हालांकि सुधारक दन्त-ऊतक स्पष्ट रूप से लुगदी से ढकी दांत में गठन किया गया था, वहाँ थे दोनों दंतधातु और हड्डी गठन की विशेषताओं, के रूप में विरोहक में दन्त-ऊतक नलिकाओं की उपस्थिति (लाल तीर) और osteocytes (काला तीर) इसका सबूत से पता चला दंतधातु (चित्रा 5)। इस तरह की टिप्पणियों है कि सुधारक दन्त-ऊतक गठन के लिए स्थानीय स्तर पर odontoblast की तरह दंत लुगदी स्टेम कोशिकाओं, साथ ही infiltratin रहने से प्रेरित किया जा सकता का सुझावआसपास के हड्डी से छ mesenchymal स्टेम कोशिकाओं।

दंतधातु कोशिकाओं के गठन की तुलना में, हम कोई दंतधातु-resorbing कोशिकाओं के गूदे के भीतर, के रूप में द्वारा टारट्रेट प्रतिरोधी एसिड फॉस्फेट (जाल) धुंधला चुना गया पाया (डेटा) नहीं दिखाया। दरअसल, pulpal या periapical सूजन पर दांत के आसपास की हड्डी सतहों अस्थिशोषक गठन लाती है, लेकिन पर नहीं के रूप में अभी तक अज्ञात तंत्र 24 के कारण दंतधातु सतहों। ध्यान से, वहाँ मौजूदा दंतधातु और नवगठित सुधारक दन्त-ऊतक (चित्रा 4) के बीच एक स्पष्ट सीमांकन किया गया था। पिछले एक अध्ययन एक ऐसी ही घटना का प्रदर्शन किया; जब एक दांत बिसफ़ॉस्फ़ोनेट या विरोधी RANKL एंटीबॉडी, जो दोनों के अस्थिशोषकों के कार्यों को बाधित की उपस्थिति में निकाला जाता है, वहाँ मौजूदा परतदार हड्डी और नवगठित बुना हड्डी 25 के बीच स्पष्ट demarcations थे। यह धारणा आगे लुगदी में दंतधातु-resorbing कोशिकाओं के अभाव का समर्थन करता है। सामूहिक रूप से, हमारे स्थापित माउस मॉडल पी होगालुगदी घाव भरने और vivo में सुधारक दन्त-ऊतक गठन के तंत्र की जांच करने के लिए अद्वितीय अवसर rovide।

वहाँ लुगदी-कैपिंग माउस मॉडल के लिए एक सीमा है। इंसानों और चूहों के बीच आनुवंशिक makeups स्पष्ट रूप से अलग हैं। पूरा जीनोम मनुष्यों और चूहों में अनुक्रम निर्धारण किया गया है, और वहाँ चूहों और इंसानों के बीच 26,27 प्रोटीन कोडिंग क्षेत्रों में 85% के बारे में समानता है। इस धारणा के साथ लाइन में, यह सुझाव दिया था कि लुगदी पशुओं में कैपिंग के लिए संबंधित निष्कर्षों जरूरी मनुष्यों 28 में उन लोगों को प्रतिबिंबित नहीं करते। बहरहाल, पशु मॉडल बड़े पैमाने पर ऐसे संधिशोथ 29, प्रणालीगत सदमे 31 के लिए के लिए ऑस्टियोपोरोसिस 30, lipopolysaccharide (LPS) प्रशासन ovariactomy प्रेरित हड्डी हानि, और संयुक्ताक्षर के लिए कोलेजन प्रेरित गठिया के रूप में vivo में मानव रोगों, पुनरावृत्ति करने के लिए अनुसंधान समुदाय में इस्तेमाल कर रहे हैं periodontitis 32 के लिए नियुक्ति। इस तरह, लुगदी-कैपिंग समझौता ज्ञापन के रूप मेंएसई मॉडल लुगदी घाव भरने और vivo में सुधारक दन्त-ऊतक गठन के आणविक तंत्र की जांच करने के लिए आवश्यक हो जाएगा। बहरहाल, सिर्फ अन्य पशु मॉडल, व्याख्या और लुगदी-कैपिंग माउस मॉडल से निष्कर्षों के सत्यापन की तरह ध्यान से मूल्यांकन किया जाना चाहिए।

सारांश में, वर्तमान अध्ययन सफल लुगदी चूहों में कैपिंग को दर्शाता है। अन्य ज्ञात मॉडल के विपरीत, इस लुगदी-कैपिंग माउस मॉडल लुगदी उत्थान और सुधारक दन्त-ऊतक गठन क्योंकि यह प्रदान के क्षेत्र में एक अमूल्य अनुसंधान उपकरण प्रदान करेगा: 1) एक में अंतर्निहित तंत्र को स्पष्ट करने के लिए व्यापक रूप से उपलब्ध अनुवांशिक इंजीनियर माउस उपभेदों का उपयोग करने का अवसर आणविक स्तर और 2) एक आर्थिक रूप से कारगर तरीका नमूना आकार में वृद्धि से सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण परिणाम प्राप्त करने के लिए। आगे के अध्ययन विवो में सुधारक दन्त-ऊतक के गठन का उद्देश्य मात्रा का ठहराव, सुधारक दन्त-ऊतक गठन की उम्र पर निर्भर प्रभाव, evalua सहित इंतजार है,चिकित्सकीय उपलब्ध लुगदी-कैपिंग सामग्री के मोर्चे, और आणविक निर्धारकों है कि उचित pulpal घाव भरने और सुधारक दन्त-ऊतक उत्थान के लिए आवश्यक हैं के मान्यकरण।

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Acknowledgments

इस अध्ययन NIDCR / एनआईएच से R01DE023348 (RHK) और यूनिवर्सिटी ऑफ कैलिफोर्निया के लॉस एंजिल्स डिवीजन के अकादमिक सीनेट के अनुसंधान पर संकाय अनुसंधान अनुदान (RHK) परिषद से द्वारा समर्थित किया गया।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
BM-LED stereo microscope MEIJI Techno Microscope 
Optima MCX-LED  Bien Air Dental 1700588-001 Electic motor engine
isoflurane Henry schein animal health NDC 11695-0500-2
1/4 round bur Brasseler 001092T0
Endodontic K-file Roydent 98947
ProRoot MTA Dentsply PROROOT5W MTA
Paper point Henry schein 100-3941
Ultra-Etch Ultradent product Inc. Phosphoric acid etchant
OptiBond SoloPlus Kerr 29669 Adhesives
Coltolux LED Coltene/whaledent Inc. C7970100115 Curing light unit
Characterization tint Bisco T-14012 Flowable composite
Skyscan Breuker 1275 uCT scanner
Microm Thermo HM355S Microtome
Hematoxyline-1 Thermo Scientific 7221
Eosin-Y Thermo Scientific 7111
Cytoseal 60 Thermo Scientific 8310-16 Mounting solution

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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Song, M., Kim, S., Kim, T., Park, S., Shin, K. H., Kang, M., Park, N. H., Kim, R. Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice. J. Vis. Exp. (119), e54973, doi:10.3791/54973 (2017).

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