Summary
Мы опишем метод шаг за шагом выполнения прямых пульпы на мышах зубов для оценки пульпарного заживления раны и формирования репаративного дентина в естественных условиях.
Protocol
Мыши были приобретены у Jackson Laboratory и хранятся в патогена вивария в UCLA Отдел лабораторных животных медицины (DLAM). Эксперименты проводились в соответствии с утвержденными институциональными руководствами Исследовательского комитета канцлера животных (ARC # 2016-037).
1. Мышь обезболиванием
- Используйте восемь-недельных самок мышей C57 / НД6 (п = 3).
- Обезболить мышей с использованием растворов (5 мг / кг веса мыши) кетамином (80-120 мг / кг веса мыши) / ксилазина и управлять внутрибрюшинно (IP) в дозе 10 мл / кг.
- Приготовьте кетамином (80 - 120 мг / кг) / ксилазином (5 мг / кг) растворы и вводить их внутрибрюшинно (IP) в дозе 10 мл / кг.
- Убедитесь, что мыши полностью под наркозом, выполняя носок щепотку.
2. Целлюлозно-укупорки Процедура
- Поместите держатель рот в рот мыши.
- Закрепите держатель рта на стол таким образом, чтобы онОбъявление обращена вверх.
- Поместите микроскоп (10x) в верхней части рта, так что первый верхнечелюстной молярной полностью виден.
- Используя ¼ круглый бур в высокоскоростном наконечнике при 200000 оборотов в минуту, удалите эмаль часть зуба в середине, пока мякоть не видна через прозрачный дентин. Не подвергать мякоть с бором.
- Использование # 15 эндодонтического K-файл (диаметр 150 мкм), перфорировать через дентина и подвергать мякоть.
ПРИМЕЧАНИЕ: Особое внимание следует соблюдать осторожность, чтобы дентин мусор не получает проталкивается в пульпе. Этого можно избежать путем поворота K-файл ежеквартально, а затем потянув K-файл из. - Смешайте MTA стерильной H 2 O в соответствии с инструкциями изготовителя. Доставка и поместите АПС на открытую пульпу с наконечником исследователя. Используйте обратную сторону точки бумаги (штраф), чтобы упаковать АПС в обнаженную пульпу Осторожным нарезании резьбы. Чем толще сторона точки бумаги является плоской, и, следовательно, позволяетдля надлежащего конденсации МТА в обнаженную пульпу.
- Протравите зуб за 15 сек путем размещения 35% травильного фосфорной кислоты, где она просто покрывает зуб. Соблюдайте особую осторожность, чтобы ограничить размещение травителя, так как это может вызвать раздражение тканей десны.
Примечание: травителя приходит в шприц и используется для придания шероховатости поверхности зубов таким образом, что зубные клеи могут протекать в посредничать микромеханическую склеивание на зуб. Поскольку они являются вязкими, он может быть самодостаточным путем применения небольших количеств непосредственно на зуб. - Используйте отрицательное-давление всасывания для удаления травителя. Используйте ватный шарик , который слегка смоченную H 2 O , чтобы удалить остатки травителя. Повторите этот шаг до тех пор, пока травитель полностью удаляется из зуба.
- Использование воздуха тряпку сжатый, осторожно высушить зуб.
- Примените стоматологические клеи, используя тыльную точки бумаги.
- Сделать клеевой слой тонкий с помощью сжатого воздуха в течение 3 сек.
- СЮр стоматологические клеи для 20 с помощью отверждения света блок.
- Поместите текучий композит в небольших количествах на зуб, который был ограничен с МТА. Используйте кончик исследователя течь композита в пазы зуба.
- Отверждение композита в течение 30 с с использованием свето- полимеризационное полимеризоваться его. Убедитесь, что композит полностью вылечить и трудно с помощью проводника.
3. Послеоперационное уход
- Администрирование карпрофен (5 мг / кг) подкожно (подкожно) сразу после процедуры целлюлозно-укупорки.
- Поместите мышей на грелку при низкой мощности, чтобы держать животных теплой, прежде чем они просыпаются.
- Вернуть мышей в виварии для жилищного строительства.
4. Тканевая закупок
- Через 5 - 6 недель, усыпить мышей путем смещения шейных позвонков при полном анестетика состоянии с изофлуран.
- Осторожно снимите верхнюю челюсть из основания черепа и поместить его в пробирку 50 мл. Закрепить entirе максилла, что содержит как целлюлозный вершины зуба и контралатеральной кэппированную зуб в 4% параформальдегид в PBS, рН 7,4, при 4 ° С в течение ночи, а затем хранить его в 70% -ном растворе этанола.
Примечание: параформальдегид является токсичным и канцерогенным. Правильное использование параформальдегид следует контролировать, как описано в стандартных операционных процедур (СОП). - Сканирование Максиллы мыши с помощью сканирования μCT. Для обеспечения Максиллы во время сканирования, завернуть образцы с марлей, смоченной 70% -ным этанолом и помещают их в культуре клеток трубки 15 мл.
5. μCT Сканирование
- Подготовка образцов для сканирования μCT. Если коротко, то завернуть образцы с марлей, смоченной 70% -ным этанолом и закрепить их в родовом 15-мл клеточной культуры коническую трубку. Установите трубки на этапе сканирования μCT, как указано в инструкции изготовителя.
- Установите источник рентгеновского излучения с током 145 мкА, напряжение 55 кВп, и временем экспозиции 200 мс.
- Выполните получение изображений с помощью сканера μCT с разрешением 20 мкм и с Al фильтром 0,5 мм.
- Реконструировать изображения и визуализировать его 11.
- После того, как μCT сканирование завершено, начинают декальцификацию с 5% ЭДТА и 4% сахарозы в PBS (рН 7,4) в течение 2-х недель.
6. обработка ткани и Окрашивание
- Встраивать декальцинированной ткани в парафин. Перед тем как вложение, обрезать верхнюю челюсть, сделав сагиттальный разрез непосредственно впереди первого моляра. В то время как вложение, расположить эту поверхность вниз, таким образом, что продольное сечение первого моляра является режущая поверхность.
- Используя микротом, подготовить 5 мкм толщиной слайды. Пульпа-укупорочные районы, как правило, совпадает с distopalatal (DP), корень, который может быть использован в качестве ориентира. Определить точную сферу интересов путем изучения гистологии под световым микроскопом и сравнивая изображения μCT.
- Для H & E окрашивания, deparaffinize и регидратации слайды с ксилолом (2 раза) и серийно разведенной этанолом (100% этанола в 2 раза, 95% этанола 2x и 70% этанола 1x).
- Промыть слайды с проточной водопроводной водой.
- Пятно с раствором гематоксилин в течение 2,5 мин и сполоснуть водой.
- Dip слайдов в 95% этаноле в течение 1 мин.
- Пятно раствором эозина в течение 1 мин и сполоснуть водой.
- Высушить с серийно разведенной этанолом (70% этанола 1x, 95% этанола 2x, и 100% этанола 3x) и ксилол (3x).
- Установите слайды с монтажным решением.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Здесь мы показали процедуры шаг за шагом выполнить покрытие пульпы на мышах зубов. Одним из ключевых аспектов пульпы у мышей должна иметь соответствующее устройство. В связи с этим, имея микроскопа с 10 - кратным увеличением мощности является существенным (Фиг.1А). Чтобы создать класс-I-подобный препарат в зуб, мы использовали ¼ круглый заусенцев в электрической высокой скорости наконечник при 200000 оборотов в минуту (рис 1В). В качестве альтернативы, любые другие двигатели, в том числе те, которые используют сжатый воздух, может быть использован для подготовки зуба.
На рисунке 2А-2Е, репрезентативные шаги для выполнения пульпы показаны. Класса I-как подготовка была выполнена (рис 2В). Поскольку водная струя может утонуть мышей во время процедуры, ее использование не рекомендуется. По этой причине очень важно, чтобы подготовить зуб с нежным и intermittent ударов, чтобы предотвратить перегрев. Использование сжатого воздуха также рекомендуется обеспечить эффект охлаждения. Разоблачая целлюлозы с эндодонтического файла, будьте осторожны , чтобы не нажать дентина мусор в пульпу, так как это может помешать интерпретации данных в формировании репаративной дентина (рис 2C). Этого можно избежать с помощью сжатого воздуха. Аналогичным образом, MTA должен быть помещен на открытую пульпу, не выдвигая слишком далеко в пульпу. Размещение MTA может быть достигнуто путем использования тыльную точки бумаги с нежными выстукивая движений (рис 2D). После размещения MTA, зуб должен быть очищен с помощью H 2 O-смоченные ватные шарики , чтобы удалить оставшиеся MTA в канавках, которые могут препятствовать связыванию композита на зуб. Обычные методы композитной реставрации используются, в том числе травления поверхности зубов, грунтования и склеивание с клеями, а также размещение и отверждения текучего композитов (Рисунок 2E).
Через шесть недель после того, как перекрытия пульпы мышей собирали, а вид сверху сфотографировали , чтобы подтвердить , что композиция была еще цела (Фиг.3А). Сканирование μCT показали значительный спад пульпарного пространства в целлюлозно-группы ограничен (рис 3B), предполагая , что репаративный дентин был сформирован в пульпе. В декальцированной ткани образцы были подвергнуты H & E окрашивания для дальнейшего изучения гистологически образование репаративного дентина в естественных условиях. В контрольной группе, odontoblastic слои (ОВ) были заметно очевидны по краям дентина (рис 4A - 4C). В отличие от этого , целлюлозно-укупорочные группа имела значительное количество репаративного дентина (RD) , образованное в пульпозного пространстве (рис 4D - 4F). Интересно, что при ближайшем рассмотрении выяснилось , что репаративный дентин (RD) демонстрировали типичную характеристику дентина (например, с triated линии , представляющие дентинные канальцы, красная стрелка), а также , что кости (например, остеоциты , представляющие запертые остеобласты, черные стрелки). Когда мы окрашивали на дентин белковый матрикс 1 (DMP1), маркера одонтогенного дифференцировки 12, мы обнаружили значительное увеличение экспрессии DMP1 в мякоти пульпы шапками зуба по сравнению с что из раскрытый зуба (рис 5А и 5В) , указывая, что репаративный дентин был сформирован в пульпе.
Рисунок 1: Установка оборудования для целлюлозно-укупорки процедуры. (А) Микроскоп (10X) для визуализации зуб мыши. (B) Высокоскоростной наконечник и двигатель двигатель электрический для получения препарата класса I разоблачить пульпы.= "_blank"> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 2: Типичные этапы процедуры укупорки. (A) Неподготовленных зуб на верхней челюсти первого коренного зуба у мыши. (Б) Начальное удаление эмали с использованием четверть круглый бур. (C) обнажением пульпы с использованием эндодонтического файла. (D) МТА размещение в облученной целлюлозы. (Е) Композитный размещение на восстановление зуба. Столбик представляет 500 мкм. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 3: Клинические проявления и μCT сканировг Целлюлозно-закрывали крышкой и колпачков зубов у мышей. (A) Occlusal вид максилл мыши на пульпу зуба ограничен (слева) и раскрытый зуб (справа). (Б) Поперечные μCT образы челюстей. Столбик представляет 500 мкм. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 4: гистологические признаки Репаративная дентина формирования в естественных условиях. (AC) H & E окрашивание раскрытый верхнечелюстной первого моляра в мыши на 100X, 200X и 400X. (DE) H & E окрашивание пульпы с концевыми верхнечелюстной первого моляра в мыши на 100X, 200X и 400X. Столбик представляет 100 мкм (OB = одонтобласт слоев; RD = репаративный дентин, черный = наконечники стрелостеоцитами; красная стрелка = дентинные канальцы). Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 5: Иммуногистохимическое Окрашивание DMP1. (A) DMP1 окрашивание раскрытый верхнечелюстной первого моляра в мыши на 400X. (B) DMP1 окрашивание пульпы с концевыми верхнечелюстной первого моляра в мыши на 400X. Столбик представляет 100 мкм. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В настоящее время существует несколько различных экспериментальных моделей , доступных для проверки эффектов в естественных условиях стоматологических материалов, строительных лесов, или факторов роста на одонтогенного дифференциации зубных стволовых клеток пульпы (DPSCs) 13. Эти модели включают в себя внематочной аутологичной трансплантации DPSCs в орган, такой как капсулу почки или подкожное трансплантацию DPSCs в иммунодефицитом мышей с подмостей 14,15. Тем не менее, эти методы ограничены в том, что их действие на одонтогенного DPSCs не выполняется в среде ортотопической пульпы. С другой стороны, ортотопической трансплантации в процедуры целлюлозы или целлюлозно-укупорки на зуб используются в более крупных животных 16,17. Хотя эти модели играют важную роль в оценке потенциала одонтогенная в ортотопической среде, использование этих моделей во многом наблюдательное по своей природе, обеспечивая ограниченные механистической идеи о заживлении раны пульпы и формирования репаративного дентина. В этой статье мы представляем подробный метод для выполнения пульпы укупорки у мышей. Этот шаг за шагом процедура включает в себя обезболиванием мышей, подготовки класса-I-как полость, помещая целлюлозно-укупорочные материалы, уборки Максиллы, анализируя с μCT сканирования, а также оценка образцов тканей для формирования репаративного дентина. Наша целлюлозно-укупорки модель мыши будет играть важную роль в изучении фундаментальных молекулярных механизмов пульпарного заживления ран в естественных условиях в контексте репаративной дентина, обеспечивая возможность использования трансгенных или нокаутных мышей, которые широко доступны в научном сообществе.
Недавние исследования показали несколько мышиных моделей , в которых формирование дентин наблюдалась 18,19. Сайто и др. создал класс-I-подобный препарат без обнажением пульпы, стимулирующий реакционный, не репаративной, образование дентина. Оба реакционным дентин и репаративный дентин классифицируются как третичный дентин, Который образует следующее внешнее раздражение к зубу. Тем не менее, в отличие от реакционного дентина, который формируется с помощью существующих одонтобластами, репаративный дентин образуется одонтобласт-подобные клетки, такие как DPSCs, когда пульпа обнажается и odontoblastic слои пробиваются 20. Таким образом, он не представляет фактическую процедуру целлюлозный-укупорки в клинике. В другом исследовании, Стеклоиономерные использовали в довершение обнажением пульпы 19. Тем не менее, клинические исследования показали , что Стеклоиономерные индуцированный хроническое воспаление, но не репаративный дентин 21. В связи с этим, наша целлюлозно-укупорочные мышиная модель лучше отражает реальную процедуру целлюлозный-укупорочные у пациентов.
Следует отметить , что , когда мы собирали мышей после более чем 6 недель, формирование репаративный дентин происходило по всей камере пульпы и корневых каналов (рисунок 4). Такое наблюдение является довольно неожиданным, так как мы ожидали образование репаративного дентина в Цзюньфикция между целлюлозно-укупорочные материала и целлюлозы. Тем не менее, мощный минерализация целлюлозы наблюдается также в клинических условиях, особенно в относительно молодых пациентов 22. Поскольку 8-недельных мышей , использованные в данном исследовании рассматриваются как "молодые люди" 23, существует вероятность того, в результате чего эти мыши до сих пор питают значительную одонтогенная потенциал. Поэтому, было бы целесообразно рассмотреть эффекты старения формирования репаративного дентина у мышей.
Наши гистологические исследования показали, что, несмотря на то репаративный дентин четко сформирован в целлюлозной шапками зуба, были характеристики дентином и костной формации, о чем свидетельствует наличие дентинных канальцах (красная стрелка) и остеоцитов (черный стрелки) в репаративный дентин (рисунок 5). Такие наблюдения позволяют предположить, что образование репаративного дентина может быть вызвана проживающему одонтобласт-как стоматологические стволовые клетки пульпы, а также infiltratinг мезенхимальные стволовые клетки из окружающей кости.
По сравнению с дентина клеток, образующих, мы не обнаружили дентинные резорбции клеток в пульпе, как определено фосфатазы тартрат-кислотостойкие (TRAP) окрашивания (данные не показаны). Действительно, пульпарной или периапикальной воспаление индуцирует образование остеокластов на поверхности кости вокруг зуба, но не на дентина поверхностях из - за пока еще неизвестны механизмы 24. Следует отметить, что существует четкое разграничение между существующим дентина и вновь образованной репаративной дентина (рисунок 4). Предыдущее исследование показало аналогичное явление; когда зуб извлекается в присутствии бисфосфонатов или анти-RANKL антителом, оба из которых ингибирует функции остеокластов, существовали четкие разграничения между существующими пластинчатой кости и вновь образованной костной ткани тканого 25. Это понятие еще раз подтверждает отсутствие дентина резорбции клеток в пульпе. Все вместе, наша установленная модель мыши будет рrovide уникальные возможности для изучения механизмов заживления ран пульпы и формирования репаративного дентина в естественных условиях.
Существует ограничение на целлюлозно-укупорки модели мыши. Генетические между людьми Макияж и мышей явно отличаются. Полный геном был секвенирован в организме человека и мышей, и есть около 85% сходства в белок-кодирующих областей между мыши и человека 26,27. В соответствии с этим понятием, было высказано предположение о том , что выводы , связанные с пульпы у животных , не обязательно отражают те , у человека 28. Тем не менее, модели на животных широко используются в научно - исследовательском сообществе резюмировать заболеваний человека в естественных условиях, таких как коллаген-индуцированного артрита ревматоидного артрита 29, ovariactomy-индуцированной потери костной массы при остеопорозе 30, липополисахарида администрации (LPS) для системного шока 31 и лигатуры размещение для периодонтита 32. Таким образом, целлюлозно-укупорки МОВSE модель будет иметь важное значение для изучения молекулярных механизмов заживления ран пульпы и формирования репаративного дентина в естественных условиях. Тем не менее, так же как и другие модели животных, интерпретации и проверки достоверности выводов из мякоти-укупорки модели мыши должны быть тщательно оценены.
Таким образом, настоящее исследование демонстрирует успешное покрытие пульпы у мышей. В отличие от других известных моделей, эта целлюлозно-укупорки мышиная модель обеспечит неоценимый инструмент исследования в области регенерации пульпы и формирования репаративного дентина, так как он обеспечивает: 1) возможность использовать широко доступные генетически измененные штаммы мыши, чтобы пролить свет на глубинные механизмы на молекулярном уровне и 2) экономически эффективным способом для получения статистически значимых результатов за счет увеличения размеров выборки. Дальнейшие исследования ожидают, в том числе объективной количественной оценки формирования репаративного дентина в естественных условиях, зависящих от возраста эффекты образования репаративной дентина, оценние клинически доступных целлюлозно-укупорки материалов, а также проверка молекулярных детерминант, которые необходимы для правильного пульпарного заживления ран и репаративной регенерации дентина.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Это исследование было поддержано R01DE023348 (RHK) из NIDCR / NIH и Научно-исследовательского гранта факультета (RHK) из Совета по научным исследованиям ученого Сената Лос-Анджелеса отделения Калифорнийского университета.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| BM-LED stereo microscope | MEIJI Techno | Microscope | |
| Optima MCX-LED | Bien Air Dental | 1700588-001 | Electic motor engine |
| isoflurane | Henry schein animal health | NDC 11695-0500-2 | |
| 1/4 round bur | Brasseler | 001092T0 | |
| Endodontic K-file | Roydent | 98947 | |
| ProRoot MTA | Dentsply | PROROOT5W | MTA |
| Paper point | Henry schein | 100-3941 | |
| Ultra-Etch | Ultradent product Inc. | Phosphoric acid etchant | |
| OptiBond SoloPlus | Kerr | 29669 | Adhesives |
| Coltolux LED | Coltene/whaledent Inc. | C7970100115 | Curing light unit |
| Characterization tint | Bisco | T-14012 | Flowable composite |
| Skyscan | Breuker | 1275 | uCT scanner |
| Microm | Thermo | HM355S | Microtome |
| Hematoxyline-1 | Thermo Scientific | 7221 | |
| Eosin-Y | Thermo Scientific | 7111 | |
| Cytoseal 60 | Thermo Scientific | 8310-16 | Mounting solution |
References
- Dye, B., Thornton-Evans, G., Li, X., Iafolla, T. Dental caries and tooth loss in adults in the United States, 2011-2012. NCHS Data Brief. (197), 197 (2015).
- Bagramian, R. A., Garcia-Godoy, F., Volpe, A. R. The global increase in dental caries. A pending public health crisis. Am J Dent. 22 (1), 3-8 (2009).
- Koliniotou-Koumpia, E., Tziafas, D. Pulpal responses following direct pulp capping of healthy dog teeth with dentine adhesive systems. J Dent. 33 (8), 639-647 (2005).
- Tarim, B., Hafez, A. A., Cox, C. F. Pulpal response to a resin-modified glass-ionomer material on nonexposed and exposed monkey pulps. Quintessence Int. 29 (8), 535-542 (1998).
- Tziafa, C., Koliniotou-Koumpia, E., Papadimitriou, S., Tziafas, D. Dentinogenic responses after direct pulp capping of miniature swine teeth with Biodentine. J Endod. 40 (12), 1967-1971 (2014).
- Dammaschke, T., Stratmann, U., Fischer, R. J., Sagheri, D., Schafer, E. A histologic investigation of direct pulp capping in rodents with dentin adhesives and calcium hydroxide. Quintessence Int. 41 (4), 62-71 (2010).
- Jegat, N., Septier, D., Veis, A., Poliard, A., Goldberg, M. Short-term effects of amelogenin gene splice products A+4 and A-4 implanted in the exposed rat molar pulp. Head Face Med. 3, 40 (2007).
- Paterson, R. C., Radford, J. R., Watts, A. The response of the rat molar pulp of two proprietary calcium hydroxide preparations. Br Dent J. 151 (6), 184-186 (1981).
- Sela, J., Ulmansky, M. Reaction of normal and inflamed dental pulp to Calxyl and zinc oxide and eugenol in rats. Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 30 (3), 425-430 (1970).
- Maurice, C. G., Schour, I. Experimental cavity preparations in the molar of the rat. J Dent Res. 34 (3), 429-434 (1955).
- Skyscan, N. V. NRecon user manual. , Available from: http://bruker-microct.com/next/NReconUserGuide.pdf (2011).
- Sohn, S., et al. The Role of ORAI1 in the Odontogenic Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells. J Dent Res. 94 (11), 1560-1567 (2015).
- Kim, S., Shin, S. J., Song, Y., Kim, E. In Vivo Experiments with Dental Pulp Stem Cells for Pulp-Dentin Complex Regeneration. Mediators Inflamm. 2015, 409347 (2015).
- Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (25), 13625-13630 (2000).
- Yu, J., et al. Odontogenic capability: bone marrow stromal stem cells versus dental pulp stem cells. Biol Cell. 99 (8), 465-474 (2007).
- Zhu, X., et al. Transplantation of dental pulp stem cells and platelet-rich plasma for pulp regeneration. J Endod. 38 (12), 1604-1609 (2012).
- Iohara, K., et al. Dentin regeneration by dental pulp stem cell therapy with recombinant human bone morphogenetic protein 2. J Dent Res. 83 (8), 590-595 (2004).
- Saito, K., Nakatomi, M., Ida-Yonemochi, H., Ohshima, H. Osteopontin Is Essential for Type I Collagen Secretion in Reparative Dentin. J Dent Res. , (2016).
- Hunter, D. J., et al. Wnt Acts as a Pro-Survival Signal to Enhance Dentin Regeneration. J Bone Miner Res. , (2015).
- Goldberg, M., Kulkarni, A. B., Young, M., Boskey, A. Dentin: structure, composition and mineralization. Front Biosci (Elite Ed). 3, 711-735 (2011).
- Nascimento, A. B., Fontana, U. F., Teixeira, H. M., Costa, C. A. Biocompatibility of a resin-modified glass-ionomer cement applied as pulp capping in human teeth). Am J Dent. 13 (1), 28-34 (2000).
- Bogen, G., Kim, J. S., Bakland, L. K. Direct pulp capping with mineral trioxide aggregate: an observational study. J Am Dent Assoc. 139 (3), 305-315 (2008).
- Miller, R. A., Nadon, N. L. Principles of animal use for gerontological research. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 55 (3), 117-123 (2000).
- Shah, A., Song, M., Cao, Y., Kang, M. K., Kim, R. H. Osteoclasts are absent in pulpal and periapical inflammatory lesions. J Dent Res. 95, 1503 (2016).
- Williams, D. W., et al. Impaired bone resorption and woven bone formation are associated with development of osteonecrosis of the jaw-like lesions by bisphosphonate and anti-receptor activator of NF-kappaB ligand antibody in mice). Am J Pathol. 184 (11), 3084-3093 (2014).
- McPherson, J. D., et al. A physical map of the human genome. Nature. 409 (6822), 934-941 (2001).
- Gregory, S. G., et al. A physical map of the mouse genome. Nature. 418 (6899), 743-750 (2002).
- Hilton, T. J. Keys to clinical success with pulp capping: a review of the literature. Oper Dent. 34 (5), 615-625 (2009).
- Holmdahl, R., Bockermann, R., Backlund, J., Yamada, H. The molecular pathogenesis of collagen-induced arthritis in mice--a model for rheumatoid arthritis. Ageing Res Rev. 1 (1), 135-147 (2002).
- Kalu, D. N., Chen, C. Ovariectomized murine model of postmenopausal calcium malabsorption. J Bone Miner Res. 14 (4), 593-601 (1999).
- Yokochi, T. A new experimental murine model for lipopolysaccharide-mediated lethal shock with lung injury. Innate Immun. 18 (2), 364-370 (2012).
- Abe, T., Hajishengallis, G. Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice. J Immunol Methods. 394 (1-2), 49-54 (2013).
