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Neuroscience

Die Verwendung von Trace Eyeblink klassische Konditionierung hippocampale Funktionsstörung in einem Rattenmodell der Fetal Alcohol Spectrum Disorders bewerten

Published: August 5, 2017 doi: 10.3791/55350

Summary

Spur Eyeblink klassische Konditionierung (ECC) wurde verwendet, um zu beurteilen hippocampal-abhängige assoziativen Lernens bei erwachsenen Ratten, die eine hohe Konzentration (11,9 % V/V) von Alkohol während der frühen Entwicklung des Neugeborenen Gehirns verabreicht. ECC-Verfahren sind in der Regel fundierte Diagnose-Tools zur Erkennung von Funktionsstörungen des Gehirns über viele psychologische und biomedizinische Einstellungen.

Abstract

Neugeborene Ratten verabreicht wurden eine relativ hohe Konzentration von Ethylalkohol (11,9 % V/V) während der postnatalen Tagen 4-9, eine Zeit des fetalen Gehirns organisatorischen Wandel unterzogen und ist ähnlich wie beschleunigte Veränderungen im Gehirn, die während des dritten Trimesters beim Menschen auftreten. Dieses Modell der fetale Alkohol-Spektrum-Störungen (FASDs) produziert schwere Hirnschäden, imitiert den Betrag und das Muster der Alkoholexzesse, die in einige alkoholische schwangeren auftritt. Wir beschreiben die Verwendung von Trace Eyeblink klassische Konditionierung (ECC), ein höherer Ordnung-Variante des assoziativen Lernens, langfristige hippocampal Dysfunktion beurteilen, die in der Regel bei Erwachsenen Nachkommen Alkohol ausgesetzt gesehen wird. In 90 Tage alt Nagetiere bereiteten sich chirurgisch mit Aufnahme und stimulierende Elektroden, die elektromyographische (EMG) gemessen blinken Aktivität aus dem linken Augenlid Muskel und leichten Schock posterior auf dem linken Auge, bzw. geliefert. Nach einer 5-Tage Erholungszeit unterzog sie 6 Sitzungen der Ablaufverfolgung ECC zu bestimmen, assoziativen Lernens Unterschiede zwischen Alkohol ausgesetzt und Ratten zu kontrollieren. Trace ECC ist eines der vielen möglich ECC-Verfahren, die leicht geändert werden können mit der gleichen Ausrüstung und Software, so dass verschiedene neuronale Systeme beurteilt werden können. ECC-Verfahren können im Allgemeinen als Diagnose-Tools verwendet werden, für die Erkennung von neuronalen Pathologie in verschiedenen Gehirn-Systeme und andere Bedingungen, die das Gehirn zu beleidigen.

Representative Results

Die Eyeblink Software ist in der Lage eine große und umfassende Reihe von Daten für viele Arten von Messungen. Aus Platzgründen berichten wir in dieser Studie ergibt sich Vertreter für lernen und Leistung Maßnahmen, die adaptive CR Prozentsatz, adaptive CR Amplitude, UR-Prozentsatz und UR-Amplitude enthalten. Die adaptive CR-Zeitraum wurde gewählt, weil es den Erwerb von gut getimten Eyeblink Antworten über wiederholte Schulungen durch verbesserte synaptische Plastizität im Hippocampus während Spur ECC50,51,52darstellt. Die UR-Maßnahmen wurden ausgewählt, um aufzuklären, ob die Neugeborenen Alkohol-induzierten lernen Defizite im ECC verfolgen aufgrund von Störungen im assoziativen Lernens oder Störungen bei der Reaktion auf den Schock waren uns - die motivationalen oder motor Unterschiede anstatt lernen Unterschiede zwischen den Behandlungsgruppen hinweisen können. Daten für jede einzelne Maßnahme wurden mit 2 (Sex) X 3 (neonatale Group) X 6 (Session) gemischt ANOVAs mit Session als Faktor wiederholt Maßnahmen analysiert. Signifikanten Haupteffekte für neonatale Behandlung wurden mittels Tukey post-hoc-Tests analysiert und signifikante Wechselwirkungen wurden mit einfachen Effekten Tests analysiert. Alle statistischen Analysen wurden mit einer minimalen alpha-Niveau von 0,05 durchgeführt und die Ergebnisse in Diagrammen sind Mittelwert ± SEM

Beginnend mit der adaptiven CR Prozentsatz Maßnahme, die ANOVA angegeben ein signifikanten Haupteffekt der neonatalen Gruppe F(2,21) = 11.69, p < 0,001, aber keine signifikanten Haupteffekt des Geschlechts (p = 0,71) oder signifikante Wechselwirkung zwischen diesen Faktoren (p = 0,20). Wie erwartet, adaptive CR Prozentsatz erhöht über die sechs Sitzungen des Trainings, F(5, 105) = 81.15, p < 0,001 und die Unterschiede zwischen den Neugeborenen Gruppen waren angewiesen auf einer bestimmten Ebene Sitzung, F(10, 105) = 4,58, p < 0,001. Es gab keine anderen signifikanten Wechselwirkungen mit der Sitzung Faktor. Ebenso für adaptive CR Amplitude, gab es wieder ein signifikanten Haupteffekt der neonatalen Gruppe F(2,21) 22,32, p = < 0,001, aber keine signifikanten Haupteffekt des Geschlechts (p = 0,21) oder signifikante Wechselwirkung zwischen diesen Faktoren (p = 0,48). CR-Amplitude erhöht auch deutlich über der sechs Sitzungen des Trainings, F(5, 105) 59.27, p = < 0,001 und die Unterschiede zwischen den Neugeborenen Gruppen waren angewiesen auf einer bestimmten Ebene Sitzung, F(10, 105) 4.31, p = < 0,001. Insgesamt zeigten beide CR-Maßnahmen erhebliche Unterschiede zwischen der Gruppe und diese Mittel bei verschiedenen Sitzungen des Trainings deutlich getrennt. Um zu bestätigen, welche Gruppen deutlich unterschieden, Tukey post-hoc-Tests zeigten, dass der Alkohol intubiert (AI) Ratten deutlich schlechter zu beiden CR-Maßnahmen als die unintubated-Kontrolle (UC) und Schein intubiert (SI) Ratten durchgeführt (p < 0,01 für CR-Anteil; p < 0.001 für CR-Amplitude), die nicht voneinander unterscheiden (p> 0,05). Einfache Effekte auf die bedeutende neonatale Gruppe x Session Interaktionen für beide CR-Maßnahmen, bestätigt, dass die AI-Ratten mehr erheblich, beim Erwerb von CRs Sitzung 2 Beginn und Durchführung beeinträchtigt wurden auf Session 6 im Vergleich zu UC und SI Ratten durchgeführt (alle p< 0,05), die in sechs Sitzungen nicht voneinander unterscheiden. Die einzige Ausnahme war adaptive CR Amplitude für SI Ratten nicht unterscheiden sich deutlich von AI Ratten bis 3 Uhr Sitzung begann. Diese Ergebnisse sind in Abbildung 5A, 5 bgezeigt.

Es gab keine signifikanten Unterschiede in der UR-Maßnahmen aufgrund von Geschlecht, neonatale Gruppe oder Wechselwirkungen dieser Faktoren mit der Sitzung Faktor. Diese negativen Ergebnisse zeigten, dass jede Gruppe durfte Eyeblink Antworten auf den Schock, die uns ebenso emittieren, und, dass das Lernen Defizite bei den AI-Ratten beobachtet nicht durch motivierende oder motor Unterschiede beeinflusst in blinken (Abbildung 6A, 6 b).

Figure 5
Abbildung 5 : Übernahme der Spur bedingt reagiert (Mittelwert ± SEM). Anfang Alkohol Exposition (AI-Gruppe) beeinflusst deutlich Erwerb von adaptive konditionierte Reaktion (CR) Prozentsatz (A) und Amplitude (B). Trace ECC ist von Natur aus schwer zu erwerben, daher die Maßnahmen sind relativ niedriger für alle Gruppen - mit Verzögerung ECC, Prozentsätze erreichen 80-85 % in Nager-Modelle von Kraniofasziale21,53. Dennoch ist die Ablaufverfolgung ECC-Verfahren mehr Besteuerung auf den Hippocampus, die ist anfällig für Alkohol Auswirkungen während der frühen Entwicklung des Gehirns. * = p < 0,05, ** = p < 0,01, *** = p < 0,001 zwischen UC und AI Ratten; Stichprobengrößen sind in Klammern angegeben. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 6
Abbildung 6 : Übernahme von Unconditioned Antworten (Mittelwert ± SEM). Eyeblink Leistung (Prozentsatz der UR und UR-Amplitude) war nicht signifikant unterschiedlich zwischen den Gruppen. Der Mangel an Unterschiede zeigen, dass die Schock Intensität während der Ausbildung Übernahme änderten nicht differentiell Motivation bei den AI-Ratten oder ihre Fähigkeit, defensive produzieren blinken Antworten auf den Schock, im Vergleich zu beiden Kontrollgruppen (UC und SI). Stichprobengrößen sind in Klammern angegeben. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Discussion

Neonatalen Ratte Welpen, die Äthyl-Alkohol während der postnatalen Tagen 4-9 erhalten ausgestellt Spur Eyeblink Konditionierung Beeinträchtigungen im Erwachsenenalter. Diese Ergebnisse unterstützen die Idee, dass Alkohol Teratogen dauerhaften nachteilige Auswirkungen auf hippocampal Funktion. Insgesamt, Klimaanlage in der Spur-Verfahren reagiert war niedriger für Ratten, Alkohol im Vergleich zu Ratten in beiden Kontrollgruppen ausgesetzt. Die assoziativen Lernens Beeinträchtigungen bei der Alkohol-exponierten Ratten waren unbeeinflusst von motivationalen oder motor Unterschiede (d. h.., keine Unterschiede im Schock U.S. Intensität blinkend).

Während Trace ECC ein nützliches Diagnosetool für erhellendes Herausforderung-induzierte hippocampal Neuropathologie ist, müssen die Ergebnisse dieser Methode in den richtigen Kontext gesetzt werden. Zunächst beteiligt die wichtige Verfahrenselemente in dieser Demo die gezielte Gabe von Alkohol während einer bekannten Fenster der Anfälligkeit für das sich entwickelnde Gehirn, Herstellung von Elektrode Hardware, erlaubt die Aufzeichnung von elektromyographische Aktivität und liefert Schock, chirurgische Implantation der oben genannten Hardware und anschließende Tierversuche mit ein Learning-Paradigma, die eine kognitive Funktion von Interesse bewertet. In jeder Phase des Prozesses muss darauf geachtet werden, die Nager Themen nicht unnötig/unbeabsichtigten Schaden zuzufügen und ihre Gesundheit Zeichen, regelmäßig zu überwachen. Ihres Verhaltens Ergebnisse liefern das "Fenster" zur Erkenntnis, ein psychologisches Konstrukt, das ist nur genau beschrieben wann ihre Gesundheit nicht durch experimentelle Fehler umfasst Alkohol Dosierung, Hardware-Defekte oder chirurgische Implantation beeinträchtigt wird. Somit muss jeder Verfahrenselement in den Forschungsprozess in einer gesunden Art und Weise implementiert werden, um sicherzustellen, dass die Ergebnisse von ECC Feststellungen in den Menschen übertragbar sind. Zweitens, das ECC-Paradigma bietet einen Einblick auf die Art des assoziativen Lernens, aber geachtet werden nicht zu Ergebnisse mit diesem Ansatz zu erweitern und sie weitgehend auf andere kognitive Bereiche - wie z. B. Arbeitsspeicher, kurz-/langfristige Erinnerungen und Bewusstsein - zuschreiben, wenn man einige Facetten dieser Domänen innerhalb einer ECC-Studie von experimentellen Design übernommen hat. Zum Beispiel diese Demonstration der Akquisitionsphase Spur ECC lernen untersucht, aber Merkfähigkeit bei den Ratten habe nicht geprüft, nachdem sie die Ausbildung abgeschlossen. Speicher ist somit eine unabhängige psychologische Prozess, der neben lernen ausgewertet werden soll. Durch Design kann man eine Erinnerung Aufbewahrung Intervall, um entweder kurz- oder langfristigen Speicher-Fähigkeit beurteilt integrieren. Drittens, Erkennung gibt es parallelen Speicher Systeme54 , die möglicherweise gleichzeitig funktionieren zusammen mit motivierenden, Erlebnispädagogik und hormonelle Faktoren beitragen zu Verhalten, ist essenziell für Verständnis, die Assoziativität (während ECC) ist aber eine der vielen Prozesse, die zeigen, was "gut" oder "schlecht" über das lernen. Zu guter Letzt ist Spur ECC keine rein hippocampal-abhängige Aufgabe wie andere Hirnregionen ein Teil der Tschechischen Republik vermitteln können. So muss ein Verständnis der Wechselwirkungen zwischen verschiedenen neuronalen Schaltkreise und/oder der Art der Anregung Parameter, die in einer Studie verwendet werden berücksichtigt werden bei der Auswirkungen anhand der diskreten Ergebnisse. Das Kleinhirn trägt beispielsweise auch zur Ablaufverfolgung ECC, wo es die topographischen Merkmale der CR und CR timing beeinflusst, besonders wenn die ISI kurzer Dauer ist. Spur ECC wirkt nicht bei Menschen mit Kleinhirn Schäden, die mit einem langen Spur Intervall (1000 ms) getestet, sondern wirkt sich bei denjenigen, die eine kürzere Spur Intervall (400 ms)34erhalten. Darüber hinaus bilaterale Läsionen des dorsalen medialen präfrontalen Kortex (mPFC), die auf der anterioren cingulären und medialen Agranular Regionen bei Mäusen verhindern, Erwerb von Trace CRs55, während Zerstörung der kaudalen mPFC bei Kaninchen ähnliche Ergebnisse46produziert. Diese Ergebnisse weisen auch wie wichtig es ist, wenn man bedenkt, dass Artenunterschiede im präfrontalen Beiträge zur zerebelläre Gehirn ergeben sich angetriebenen assoziativen lernen, wie Spur ECC. Während neonatale Alkohol Exposition bei PD 4-9 beeinträchtigt Akquisition von 500 ms Spur CRs für Erwachsenen in dieser und anderer Studien47,56 Ratten, ist dies nicht der gleiche Fall für neonatale Alkohol ausgesetzt Ratten, die eine 300-ms Spur Intervall zu erleben, auch wenn bei einer relativ hohen Dosis von Alkohol (5 g/kg)57, darauf hindeutet, dass die Ablaufverfolgung Beeinträchtigung bei Alkohol-exponierten Ratten abhängig von der Dauer des Intervalls Spur ist in Frage gestellt.

In dieser Studie wurde der Hippocampus betont, wie von entscheidender Bedeutung für die Vermittlung Spur ECC, und wenn von Neugeborenen Alkohol Exposition, herausgefordert wird im Zusammenhang mit neuronalen Schäden Exponate Beeinträchtigungen beim Erwerb von Trace CRs widerspiegelt. Es muss warnte jedoch, dass die Kleinhirn-Gehirn Stammzellen Schaltung, besonders der Interpositus Kern, für viele Facetten des ECC, einschließlich Erwerb, Ausdruck und topografische Merkmale der CR, abhängig von der ECC Aufgabe einschließlich Spur ECC36,40,55,58,59unerlässlich. In der Tat interagiert diese neuralen Schaltkreis mit der Hippocampus für die Expression von CRs während höherer Ordnung Formen der ECC, wie Spur ECC60fahren. Es ist nicht ganz klar, ob Alkohol Exposition während der frühen Entwicklung des Gehirns betrifft speziell hippocampal Funktion im Trace ECC. Viele verschiedene Hirnregionen sind anfällig für frühen Alkohol Beleidigung, einschließlich mPFC, Kleinhirn und Hippocampus18,19,23,47,61,62, und es ist sehr wahrscheinlich, dass Alkohol stört die Funktionsweise dieser Strukturen in unterschiedlichem Umfang und unterschiedlicher, aber funktionell wichtige Unterschiede über viele ECC-Verfahren. Trotz der Fallstricke bezüglich der Interpretation der Ergebnisse von Trace ECC Studien erfolgreiche Akquisition von Trace CRs nachweislich mindestens ein intakter Hippocampus, abhängig von tierischen Läsion Studien42,44,63,64,65unterstützt. Dieses Verfahren bleibt somit einen wertvollen Ansatz für den Nachweis der Verbindungen zwischen Entwicklungsstörungen Alkohol Exposition zu verfolgen bedingt reagiert, weil die neuralen Schaltkreis zugrunde liegt, ist viel besser verstanden als die der anderen hippocampal-abhängige Aufgaben wie Ort lernen in Morris Wasser-Irrgarten, neuartige Objekterkennung und kontextuellen und Spur Konditionierung zu befürchten.

ECC als Verhaltensstörungen Methode "Kognition, assay" hat weit verbreiteten Anwendbarkeit auf dem Gebiet der Entwicklungsbiologie Neuroteratology. In der Tat, neueste Erkenntnisse aus unserem Labor unterstützen das Konzept, die Entwicklung Hippocampus sehr empfindlich auf Alkohol Wirkungen, die durch verschiedene interventionelle Strategien18,47gemindert werden kann. Der Hauptvorteil ist, dass ein besseres Verständnis der Alkohol-induzierten Spur ECC lernen Defizite sie prädiktiv für andere Probleme im Hippokampus-basierte Funktionen außerhalb der assoziativen Lernens - insbesondere bekannt durch die gleichen hippocampal Neurocircuitry vermittelt werden können.

Anwendung von Trace ECC und seinen anderen Varianten (z.B., Verzögerung, Umkehr, Diskriminierung, Verbindung), die neurobiologischen Mechanismen und assoziativen Lernens beteiligten neuronalen Systeme aufzuklären kann über den Bereich der fetalen Alkohol-Forschung erweitert werden. Beispielsweise hat dieses Paradigma in menschlichen Fällen und Tiermodellen der psychiatrischen Erkrankungen wie Schizophrenie66,67, Neurodegenerative Erkrankungen wie Alzheimer-Krankheit68,69, und Drogen Missbrauch70,71,72viel Aufmerksamkeit erhalten. Ihre Vorteile als Forschungsmethode, neurokognitiven Funktion und Dysfunktion zu beurteilen sind somit offensichtlich in vielen psychologischen und biomedizinische Disziplinen, einschließlich der Neurowissenschaften.

Disclosures

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Acknowledgments

Diese Arbeit wurde durch einen Zuschuss zur TDT aus dem Alkohol Getränk medizinische Forschung Foundation (ABMRF) unterstützt.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Neonatal Alcohol Exposure
190 Proof Ethyl Alcohol (USP) Pharmco-AAPER 225-36000 [ECU Medical Storeroom] Can be substituted; should be USP; avoid using 200 proof ethyl alcohol
Container/Basket for Pups Any
Corn Oil Any Food grade
Heated Water Therapy Pump w/ Pads Gaymar TP-500 To keep pups warm; can be substituted
Hypodermic Needles 22G x 1 in, Sterile Any
Hypodermic Needles 30G x 1/2 in, Sterile Any
Isopropyl Alcohol 70% EMD Millipore PX1840-4 [Fisher Scientific] Can be substituted; reagent grade
www.fishersci.com
Long-Evans Rats (Female and Male Breeders) Charles River Laboratories N/A [ECU Dept. of Comparative Medicine] Age and weight need to be specified; pricing varies by these factors
www.criver.com
Micro Dissecting Scissors, 3.5 in, 23 mm Blades Biomedical Research Instruments 11-2200 For cutting PE tubing
brisurgical.com
Polyethylene 10 Tubing (0.011 in. I.D.; 0.024 in. O.D.) BD Diagnostic Systems 22-204008 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Polyethylene 50 Tubing (0.023 in. I.D.; 0.038 in. O.D.) BD Diagnostic Systems 22270835 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Regulated water heater or baby milk bottle warmer Any Optional; helps with warming up cold milk solutions
Tuberculin Syringes, Sterile, 1.0 ml Any
Tuberculin Syringes, Sterile, 10 ml Any Can be used to draw out ethyl alcohol or use appropriate size micropipet
Weigh Scale Any Should have good resolution (in gram units)
Name Company Catalog Number Comments
EMG Headstage Fabrication and Bipolar Electrode Modification
Bipolar Electrode, 2 Channel SS Twisted Plastics One, Inc. MS303/2-B/SPC  ELECT SS  2C TW .008" Must specify custom length of 20 mm below pedestal
www.plastics1.com
Centi-Loc Strip Socket Insulator (aka, Micro Strip) ITT Cannon / ITT Interconnect Solutions CTA4-IS-60* or CTA4-1S-60* *Depends on vendor; see www.onlinecomponents.com or www.avnetexpress.avnet.com
Dental Pliers, Serrated CMF Medicon 390.20.05 Can be substituted; use to crimp wires to male contact pins
www.medicon.de
Micro Dissecting Scissors, 3.5 in, 23 mm Blades Biomedical Research Instruments 11-2200 Only use to cut 3T wires; cutting 10T wires will damage the blade - use the blade of the wire stripper instead
brisurgical.com
PTFE-Coated Stainless Steel Wire, 10T (Bare Diameter .010 in) Sigmund Cohn-Medwire 316SS10T
www.sigmundcohn.com
PTFE-Coated Stainless Steel Wire, 3T (Bare Diameter 0.003 in) Sigmund Cohn-Medwire 316SS3T
www.sigmundcohn.com
Razor Blade Any To strip 1 mm from prongs of bipolar electrode
Relia-Tac Socket Contact Pin, Male Cooper Interconnect 220-P02-100 See Allied Electronics Cat # 70144761
www.alliedelec.com
Tweezers, High Precision, Serrated, 4 3/4 in Electron Microscopy Sciences 78314-00D To grasp 10T wire firmly while stripping PTFE with smooth tweezers
www.emsdiasum.com
Tweezers, High Precision, Smooth, 4 3/4 in Electron Microscopy Sciences 78313-00B
www.emsdiasum.com
Tweezers, Ultra Fine Tips, 4 3/4 in Electron Microscopy Sciences 78510-0 To strip 1 mm of PTFE from one end of 3T wire; grasp shielded portion with smooth tweezers
www.emsdiasum.com
Wire Stripper, 16-26 AWG Any Use the blade end to cut micro strips
Name Company Catalog Number Comments
Eyelid Surgery
Surgical Instruments (High Quality Stainless Steel)
2 x Dressing Forceps, 4 in Serrated Biomedical Research Instruments 30-1205 Can be substituted; extra forceps for grasping electrodes/screws outside of surgery tray
brisurgical.com
Dressing Forceps, 3 in Serrated Biomedical Research Instruments 30-1200 Can be substituted
brisurgical.com
Instrument Tray Biomedical Research Instruments 24-1355 Can be substituted
brisurgical.com
Knife Handle No. 3, 5 in Biomedical Research Instruments 26-1000 Can be substituted
brisurgical.com
Micro Dissecting Forceps, 3.5 in, Fine Points Biomedical Research Instruments 10-1630 Can be substituted
brisurgical.com
Micro Dissecting Forceps, 3.5 in, Smooth Platform (0.3 x 5 mm) Biomedical Research Instruments 10-1720
brisurgical.com
Micro Dissecting Scissors, 3.5 in, Extremely Delicate, 15 mm Blades Biomedical Research Instruments 11-2000 Can be substituted
brisurgical.com
Plain Splinter Forceps, 3.5 in  Biomedical Research Instruments 30-1600 Can be substituted
brisurgical.com
#10 Stainless Steel Surgical Blade for #3 Handle, Sterile Any Can be substituted
0-80 x 0.125 in Stainless Steel Screws Plastics One, Inc. 0-80 x 0.125 Can be substituted
www.plastics1.com
Alcohol Prep Pads, Sterile Fisher Scientific 22-363-750 [Fisher Scientific Can be substituted
www.fishersci.com
Betadine Povidone-Iodine Purdue Frederick Co. 6761815101 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Betadine Povidone-Iodine Prep Pads Moore Medical 19-898-946 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Cotton-Tipped Swabs, Autoclavable Any Typically 7.6 cm or 15.2 cm length
Drill Bit for Pin Vise, #55 (0.052 in) Any Metal should resist rusting and corrosion
Gauze Pads, 2 in x 2 in Fisher Scientific 22-362-178 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
General Purpose Latex/Nitrile/Vinyl Gloves Any
Glass Bead Sterilizer Any Sterilize instruments between surgeries
Heated Water Therapy Pump w/ Pads x 2 Gaymar TP-500 Can be substituted; separate pumps are recommended - 1 for surgery, 1 for recovery
Hypodermic Needles 26G x 3/8 in, Sterile Any
Isoflurane Vedco NDC 50989-150-12 Manfacturer can be substituted; veterinary approval may be required
Isoflurane Vaporizer System, Tabletop, Non-Rebreathing Parkland Scientific V3000PK Can be substituted
www.parklandscientific.com
Jewelers Screwdriver w/ 1.8-2 mm Blade Any Metal should resist rusting and corrosion
Ortho-Jet BCA Package (Dental Cement) Lang Dental B1334 Contains powder (1 lb) and liquid
www.langdental.com
Oxygen Tank with Pressure Regulator, Large Local supplier
Porcelain Crucible, High-Form, Glazed, 10 ml CoorsTek, Inc. 07-965C [Fisher Scientific] Can be substituted with Fisher FB-965-I Wide-Form Crucible
www.fishersci.com
Puralube Veterinary Ophthalmic Ointment, Sterile Henry Schein Company NC0144682 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Quatricide PV-15 Pharmacal PV-15 Antimicrobial disinfectant; can be substituted
www.pharmacal.com
Rat Gas Anesthesia Masks for Stereotaxic Surgery  Stoelting Company 51610
www.stoeltingco.com
Rat Stereotaxic Apparatus w/ Ear Bars (45 Degree) Any 45 degree bars are recommended to prevent damaging eardrums
Roboz Surgical Instrument Milk Roboz Surgical NC9358575 [Fisher Scientific] Can be substituted; for lubricating instruments during autoclaving
www.fishersci.com
Rodent Hair Trimmer Any
Sodium Chloride Fisher Scientific S641-500 [Fisher Scientific] To make 0.9% saline; reagent grade; USP
www.fishersci.com
Stainless Steel Microspatula (Blade: 0.75 L x 0.18 in. W) Fisher Scientific 21-401-15 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Starrett Pin Vise, 0.000 in - 0.055 in Any Nickel-plated or equivalent recommended to resist rusting and corrosion
Sterile Surgical Gloves Any
Sterilization Wraps, 20 in x 20 in, Autoclavable Propper Manufacturing 11-890-8C [Fisher Scientific] Useful for wrapping autoclavable supplies and on sterile field during surgery
www.fishersci.com
Surgical Drape, Sterile/Autoclavable Any May need to cut to size for rats
Surgical Gown* Any *If required by IACUC
Surgical Mask Any
Tuberculin Syringes, Sterile, 1.0 ml Any
Weigh Scale Any Should have good resolution (in gram units)
Name Company Catalog Number Comments
Eyeblink System and Components (assuming 4-rodent system)
5 Channel Commutator x 4 Plastics One, Inc. SL2 + 3C
www.plastics1.com
Bipolar Electrode Cable, Dual 305 x 4 Plastics One, Inc. 305-305 80CM TT2 (C) Provides plug end to bipolar electrode on rat and to commutator; must be modified
www.plastics1.com
Cable, 5 Channel, Shielded, 26 AWG x 4 Any To fabricate commutator cable; this must be made from scratch
Chamber for Operant Test Box (Inside: 24 H x 23 W x 14 D in) x 4 Med-Associates Can be substituted; inner dimensions should fit operant test box comfortably, with room for acoustical foam; fit with fan - 55-60 dB
www.med-associates.com
Eyeblink System and Software JSA Designs N/A Proprietary and customized for research lab
Heat Shrink Tubing (3/16 in, 1/4 in, 3/8 in, 1/2 in Diameters) Any To protect modified commutator cable soldered ends and splices
Melamine Triple Peak Acoustical Foam w/Black Hypalon (24 x 48 in) McMaster-Carr 9162T5 Can be substituted; cut to fit 4 housing chambers
www.mcmaster.com
Operant Test Box (Exterior 12.5 L x 10 W x 13.5 in H), Complete x 4 Med-Associates ENV-007 Custom Package With stainless steel grid floor and custom top (3 in hole in center for commutator cable)
www.med-associates.com
Oscilloscope (Optional) Any Recommended minimum specs: 200 MHz analog bandwidth, 1 GS/s real-time sampling, 4 channels; see www.picotech.com
/td>
Piezo Tweeters (Speakers) x 4 (7 x 3 in) MCM Electronics 53-805 Must match frequency range specifications for eyeblink system (2500 Hz - 25 KHz)
www.mcmelectronics.com
Soldering Station, Solder, Flux, Tinner Any For soldering 26 AWG cables to female sockets (that fit male relia-tac contact pins) and bipolar plugs
Stimulus Isolators x 4 WPI International A365 These units run on 16-9V alkaline batteries; a suitable rechargeable version (A365R) is available
www.wpiinc.com
Tripolar Electrode Cable for SL3C Commutator x 4 Plastics One, Inc. 335-335 80cm TT3 C Provides plug end to EMG headstage on rat and to commutator; must be modified
www.plastics1.com
USB LED Lights x 4 Any USB-based lights do not cause electrical "noise" with the EMG signals from the rats
www.plastics1.com
Webcams x 4, Surveillance Software Any
PC Computer Running MS Windows OS Any

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References

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Neurowissenschaften Ausgabe 126 Eyeblink Konditionierung Hippocampus Erkrankungen der fetale Alkohol-Spektrum lernen Gedächtnis Kleinhirn
Die Verwendung von Trace Eyeblink klassische Konditionierung hippocampale Funktionsstörung in einem Rattenmodell der Fetal Alcohol Spectrum Disorders bewerten
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Tran, T. D., Amin, A., Jones, K. G., More

Tran, T. D., Amin, A., Jones, K. G., Sheffer, E. M., Ortega, L., Dolman, K. The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders. J. Vis. Exp. (126), e55350, doi:10.3791/55350 (2017).

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