Abstract
इस्कीमिक हृदय रोग (IHD), या तीव्र कोरोनरी सिंड्रोम (ACS), संयुक्त राज्य अमेरिका में मृत्यु के प्रमुख कारणों में से एक है। IHD दिल को कम रक्त की आपूर्ति की विशेषता है, के लिए ऑक्सीजन की कमी और हृदय की मांसपेशी के आगामी परिगलन में जिसके परिणामस्वरूप। एमआई मॉडल एक अल्पकालिक ischemia-reperfusion मॉडल और एक लंबे समय तक स्थायी बंधाव मॉडल के रूप में इसके उपयोग के लिए लोकप्रियता हासिल की है। नीचे, हम LAD की स्थायी बंधाव के लिए एक विश्वसनीय तरीका का वर्णन। साथ माउस जेनेटिक इंजीनियरिंग प्रौद्योगिकी और अधिक उन्नत होता जा रहा है, और गुणवत्ता murine शल्य चिकित्सा उपकरणों की एक बढ़ती हुई उपलब्धता के साथ, माउस एमआई सर्जरी के लिए एक लोकप्रिय मॉडल बन गया है। हमारे शल्य मॉडल माउस का तेजी से वसूली के लिए एक आसानी से उलटने संवेदनाहारी के उपयोग को शामिल किया गया; एक ट्रेकिआटमी को शामिल किए बिना एक न्यूनतम इनवेसिव अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण; और सीने में एक अतिरिक्त चीरा बनाने के बिना मूल थोरैकोटॉमी साइट के माध्यम से एक thoracentesis है, जैसा किकुछ अन्य तरीके से किया, प्रभावी रूप से छाती गुहा से अतिरिक्त रक्त और हवा निकालने के लिए। इस विधि अपेक्षाकृत अन्य तरीकों, जो नाटकीय रूप से शल्य चिकित्सा और बाद शल्य जटिलताओं और मृत्यु दर कम कर देता है और reproducibility को बेहतर बनाता है तुलना में कम आक्रामक है।
Introduction
कोरोनरी रोग, या एसीएस, सबसे अधिक प्रचलित हृदय घटना है और 2020 के 1 में रुग्णता और मृत्यु दर दुनिया भर का मुख्य कारण माना जाता है। एसीएस के कारण एक कोरोनरी atherosclerotic पट्टिका कि ब्लॉक या हृदय के ऊतकों 2 में रक्त का प्रवाह कम कर देता है का टूटना के कारण मायोकार्डियल घनास्त्रता की उपस्थिति है। इसलिए, इस तरह के रोधगलन (एमआई) 3, 4 के रूप में तीव्र myocardial ischemia की उपस्थिति के साथ संगत नैदानिक लक्षण, कर रहे हैं। एमआई cardiomyocytes के मास में एक नुकसान और रोग वेंट्रिकुलर remodeling के लिए एक प्रगति है, जो वेंट्रिकुलर में शिथिलता और दिल की विफलता 5, 6 को जन्म दे सकता हो जाती है।
IHD अध्ययन करने के लिए सबसे प्रभावी तरीकों में से एक एक पशु मॉडल में मानव रोधगलन नकल करने के लिए किया गया है। इस में LAD occluding द्वारा हासिल की हैचूहों। इस मॉडल का उपयोग, हम अध्ययन कैसे दिल IHD से उत्पन्न नुकसान से बचाया जा सकता है।
पिछले दशक में शोधकर्ताओं ने छोटे जानवरों को बड़े पशु मॉडल का उपयोग कर, चूहों को चूहों से पारी को शामिल करने से स्थानांतरित कर दिया है। छोटे माउस मॉडल उनके छोटे आकार सहित कई कारणों से,, बड़े कूड़े आकार, कम लागत बनाए रखने के लिए, और कम गर्भावधि, साथ ही ट्रांसजेनिक और जीन नॉकआउट मॉडल 7 की प्रशस्त उपलब्धता के लिए के लिए पसंद किया जा रहा है। हालांकि चूहों आकार में छोटे होते हैं, नई शल्य चिकित्सा उपकरणों विशेष रूप से उन लोगों के लिए बनाया गया इस विकास में और अधिक योगदान दिया। हमारे विधि इन नए शल्य चिकित्सा उपकरणों का इस्तेमाल करता है।
जबकि कई तरीके एक आक्रामक ट्रेकिआटमी लागू है, हम अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण के एक कम आक्रामक विधि का उपयोग करें। oropharynx की भूमि के ऊपर रोशनी का उपयोग करना, हम किसी भी चीरों बनाए बिना नली लगाना, टी के लिए एक सुरक्षित और कम दर्दनाक अनुभव प्रदानवह पशु। माउस तो एक वेंटीलेटर पर रखा गया है और पूरे प्रक्रिया के दौरान isoflurane पर रखा है। संज्ञाहरण की कम अवधि दवा द्वारा उत्पादित के कारण, यह केवल कुछ ही मिनट लगते पशु संवेदनाहारी से उबरने के लिए के लिए एक बार इसे बंद कर दिया गया है। हमारे शल्य मॉडल भी एक न्यूनतम इनवेसिव thoracentesis भी शामिल है। तनाव वातिलवक्ष: सावधान मूल थोरैकोटॉमी चीरा के माध्यम से छाती गुहा से रक्त और अतिरिक्त हवा को हटाने thoracentesis का उपयोग कर LAD बंधाव की एक आम पोस्ट ऑपरेटिव जटिलता को संबोधित किया गया है। इस विधि है, जो दो अतिरिक्त अन्य तरीकों एक thoracentesis-है झुकेंगे कम के बाद शल्य जटिलताओं के लिए ट्रेकिआटमी के लिए और एक अन्य में इस्तेमाल किया चीरों की आवश्यकता समाप्त और तेजी से मृत्यु दर में कमी आई है।
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Protocol
इस जानवर प्रोटोकॉल की समीक्षा की और संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) रोड आइलैंड अस्पताल में द्वारा अनुमोदित किया गया।
1. संज्ञाहरण और इंटुबैषेण
- माउस ऑपरेशन के बाद दर्द की दवा की खुराक की गणना करने के वजन।
- एक प्रेरण कक्ष में माउस रखें और 9 के लिए 4 isoflurane% देने - 10 मिनट, भर पशु की निगरानी। एक गर्म मनका अजीवाणु बनानेवाला चालू करें ताकि तंत्र लगभग 250 डिग्री सेल्सियस के लिए पहले से गरम कर सकते हैं। 20 मिनट - preheating 15 ले जाएगा।
- एक बार जब माउस संज्ञाहरण की गहरी विमान, लगभग 32 साँस / मिनट की साँस लेने की दर के साथ पहुंचता है, एक स्टायरोफोम बोर्ड पर माउस लापरवाह जगह है और एक लोचदार बैंड शीर्ष कृन्तक के तहत सुरक्षित का उपयोग मुंह खुला धारण करने के लिए। एक पैर की अंगुली चुटकी प्रदर्शन से बेहोश करने की क्रिया की पुष्टि करें। माउस के ऊपर एक उच्च तीव्रता प्रकाशक स्थिति तो यह है कि oropharynx देखे जा सकते हैं।
- जबड़ा और एक अन्य जोड़ी को खोलने के लिए घुमावदार संदंश का प्रयोग करेंसंदंश के रास्ते से बाहर जीभ लिफ्ट करने के लिए। पर या माउस के शरीर के साथ आंख के स्तर से थोड़ा नीचे तैनात जबकि नली लगाना सुनिश्चित करें। शल्य loupes के उपयोग की सिफारिश की है।
- उद्घाटन और स्वर रज्जू के समापन कल्पना। जब खुला, सम्मिलित एक 20 गेज, 1-में अंतःशिरा (चतुर्थ) एक कुंद की नोक सुई परिचयकर्ता के साथ कैथेटर। सुई का प्रयोग करें नली उद्घाटन करने के लिए कैथेटर मार्गदर्शन, लेकिन ट्रेकिआ में सुई डालने से बचने के लिए। सही स्थान का सत्यापन एक प्लास्टिक हस्तांतरण पिपेट का उपयोग किया जा सकता है।
- एक ऑपरेटिंग एक हीटिंग डिवाइस के साथ सुसज्जित करने के लिए सतह intubated माउस स्थानांतरित करें। एक छोटे कृंतक वेंटीलेटर 150 μL / स्ट्रोक का एक स्ट्रोक की मात्रा और 130 स्ट्रोक / मिनट की एक स्ट्रोक दर करने के लिए सेट करने के लिए माउस से कनेक्ट करें।
- 2.5% isoflurane वितरित करें। द्विपक्षीय छाती वृद्धि के लिए जाँच करके इंटुबैषेण सत्यापित करें। एक पैर की अंगुली चुटकी प्रदर्शन से संज्ञाहरण सत्यापित करें। पूरी तरह से anesthetized बनने के लिए वेंटीलेटर पर 10 मिनट - माउस 5 पड़ सकता है।
- वेंटीलेटर और चतुर्थ कैथेटर के बीच जोड़ने स्थल पर इंटुबैषेण ट्यूब नीचे टेप। हाथ पैरों नीचे टेप। आंखों पर बाँझ चिकनाई बूँदें रखें।
- एक बिजली के रेजर से छाती के उदर बाईं ओर ट्रिम। सूखी वाइप के साथ मुंडा फर की धूल और एक बाँझ कपास पट्टी का उपयोग कर बालों को हटाने क्रीम की एक छोटी परत लागू होते हैं। 45 s - क्रीम लगभग 30 के लिए बाल कूप के साथ संपर्क में रहना चाहिए।
- जबकि क्रीम प्रक्रियाओं, तीन 1.5 एमएल Betadine से भर सोखने के लिए ट्यूबों में तीन बाँझ कपास के फाहे जगह। आसुत जल से सिक्त वाइप का उपयोग करना, धीरे क्रीम और फर को मिटाने।
- शल्य क्षेत्र को साफ तीन बार, Betadine और बाँझ 70% isopropanol तैयारी पैड बारी, एक परिपत्र गति के केंद्र से परिधि में जाने में सफाई। माउस के सर्जिकल क्षेत्र से अधिक एक चौथाई आकार छेद के साथ एक बाँझ कपड़ा रखें।
- समझौता ज्ञापन के आसपास के क्षेत्र को साफ करें70% इथेनॉल के साथ ई। एक पैर की अंगुली चुटकी के साथ एक बार फिर संज्ञाहरण सत्यापित करें।
3. LAD Ligation
- गर्म मनका अजीवाणु बनानेवाला में autoclaved शल्य चिकित्सा उपकरणों लगभग 20 s के लिए 250 डिग्री सेल्सियस के लिए छोड़ देते रखें। बाँझ autoclaved शल्य कपड़ा पर निष्फल उपकरणों रखें। डॉन शल्य दस्ताने।
- ठीक टिप संदंश का प्रयोग धीरे प्रमुख जिफाएडा उपास्थि के बाईं ओर लगभग 5 मिमी एक बिंदु पर त्वचा लिफ्ट करने के लिए। manubrium के स्तर तक ऊपर की ओर इस बिंदु से त्वचा में एक ऊर्ध्वाधर चीरा बनाने के लिए, एक नंबर 10 ब्लेड के साथ एक शल्य चिकित्सा स्केलपेल का प्रयोग करें।
- घुमावदार संदंश का प्रयोग धीरे त्वचा और मांसपेशियों परतों को अलग करने के। मांसपेशियों की परत खोलें, त्वचा चीरा के बाद। मांसपेशियों की परत, चीरा के दोनों तरफ एक के माध्यम से दो 5-0 polypropylene टांके डालें, और clamps मांसपेशियों की परत खुला रखने के लिए के साथ अस्थायी रूप से टांके सुरक्षित है।
- पहचानें और तीसरे पसलियों के बीच अंतरिक्ष में एक चीरा बनाने के लिए, निम्नribcage के प्राकृतिक कोण। माउस के बाएं हाथ पैरों से टेप निकालें और टेप के साथ अपने सही रियर पैर करने के लिए अपनी बाईं रियर पैर सुरक्षित है। टेप की एक लंबी टुकड़ा कट और एक से थोड़ा ऊपर उठाया स्थिति में ऑपरेटिंग सतह के लिए अपने बाएँ फ्रंट फुट सुरक्षित है। 70% इथेनॉल के साथ दस्ताने को साफ करें।
- एक प्रतिकर्षक का प्रयोग धीरे 3 और 4 वें पसलियों के अलावा प्रसार करने के लिए। बाँझ जाली के एक छोटे खंड कट, लगभग 1 एक्स साढ़े में में, और बाँझ 0.9% खारा में यह डुबकी। अतिरिक्त खारा बाहर निचोड़ और संदंश का उपयोग धीरे बाएं फेफड़े के खिलाफ जाली सम्मिलित करने के लिए प्रक्रिया के दौरान आकस्मिक फेफड़ों को नुकसान को रोकने के लिए।
- धीरे संदंश के साथ पतली पेरीकार्डियम को हटा दें।
- एक बाँझ कपास पट्टी बंद कपास की एक छोटी राशि आंसू और एक छोटे से गेंद में रोल। बाँझ 0.9% खारा में इस कपास की गेंद डुबकी और धीरे दिल की सतह पर झाड़ू धमनियों सराहना करते हैं। धीरे ऊपर की ओर बाईं अलिंद धक्का और नीचे कोरोनरी धमनियों का पता लगानेनीथ।
- LAD की पहचान करें और LAD के तहत एक 8-0 नायलॉन टांका पास; पूरा दो बंधाव सुरक्षित करने के लिए फेंकता है। बंधाव सफल होता है, संयुक्ताक्षर इच्छा Blanch से बाएं वेंट्रिकल बाहर का।
- संदंश का प्रयोग, जाली पहले डाला हटाने, और फिर धीरे से प्रत्यागामी को हटा दें। एक 6 में, 25 गेज लचीला थोरैकोटॉमी खोलने के माध्यम से छाती गुहा में एक 25 गेज सुई से जुड़ी ट्यूब डालें। बाएं फेफड़े ऊपर अंतरिक्ष में टयूबिंग के में 2 - लगभग अग्रिम 1। एक लापरवाह स्थिति के लिए माउस लौटें और 70% इथेनॉल के साथ दस्ताने साफ।
- एक सरल बाधित पैटर्न में 5-0 polypropylene टांके का उपयोग करें ribcage बंद करने के लिए, जगह में छाती ट्यूब रखते हुए। मांसपेशियों की परत खुला पकड़े दो टांके निकालें। एक सरल निरंतर पैटर्न में 5-0 polypropylene टांके का उपयोग मांसपेशियों की परत बंद करने के लिए, फिर से जगह में छाती ट्यूब रखते हुए।
- छाती ट्यूब पर 25 गेज सुई के लिए एक 1 एमएल सिरिंज देते हैं। धीरे डुबकी पर ऊपर की तरफ खींचआर जबकि एक साथ धीरे-धीरे संदंश के साथ छाती गुहा से सीने में नली निकालने। ट्यूबिंग धीरे धीरे निकालें, इस कदम के रूप में अतिरिक्त हवा और खून है, जो अन्यथा छाती गुहा और एक वातिलवक्ष में परिणाम में फंस बन जाएगा निकाल देता है।
- एक बार जब सिरिंज भरा हुआ है, सुई से सिरिंज को अलग कर बर्बादी बीकर या सिंक में कचरे के निपटान के। इस प्रक्रिया को जारी रखें जब तक सीने में नली पूरी तरह से निकाला जाता है। सुनिश्चित करें कि छाती कसकर बंद है।
- 1.5% isoflurane में कटौती करें। एक सरल बाधित पैटर्न में 4-0 polypropylene टांके के साथ त्वचा को बंद करें। isoflurane vaporizer बंद कर दें।
- एक इंट्रापेरिटोनियल (आईपी) इंजेक्शन के जरिए व्यवस्थापित और 0.9% खारा में 0.1 मिलीग्राम / एमएल buprenorphine। स्थानिक चीरा करने के लिए 0.9% खारा में 2 मिलीग्राम / एमएल Bupivacaine साथ 2 मिलीग्राम / एमएल Lidocaine लागू होते हैं। एक चमड़े के नीचे इंजेक्शन के जरिए 500 0.9% खारा की μL, माउस के वजन के खारा राशि स्केलिंग - 200 के बीच में व्यवस्थापित।
- एडमिनिस्ट्रेशन के बाद 5 मिनट तक प्रतीक्षा करेंइंटुबैषेण ट्यूब से माउस को हटाने के लिए दर्द दवाओं stering। यह वेंटीलेटर बंद संक्रमण में मदद करता है।
- अगर माउस वेंटीलेटर बंद एक बार एक द्विपक्षीय छाती वृद्धि नहीं है, सुई विसंपीड़न प्रदर्शन करते हैं। ऐसा करने के लिए, एक 25 गेज बाँझ सुई और 3 और 4 वें पसलियों के बीच एक 1 एमएल सिरिंज परिचय जब तक यह वक्ष गुहा, प्रतिरोध में अचानक कमी से दर्शाया जाता है में प्रवेश करती है। अतिरिक्त हवा निकालने के लिए सवार पर धीरे ऊपर खींचें।
- माउस एक पर्याप्त द्विपक्षीय साँस लेने की दर और गहराई को दर्शाता है और एक पैर की अंगुली चुटकी का जवाब देता है, एक गर्मी दीपक के तहत एक साफ वसूली पिंजरे में माउस जगह। 20 मिनट - 15 के लिए एक लामिना का प्रवाह हुड में निगरानी नम भोजन और पानी की एक बोतल के साथ माउस प्रदान करते हैं। एक अतिरंजित साँस लेने में प्रयास, अत्यधिक रक्तस्राव, या अन्य संभावित जीवन धमकी जटिलताओं के लिए की निगरानी करें।
- अगले तीन दिनों के लिए, में एक आईपी के माध्यम से प्रशासन के 0.1 मिलीग्राम / एमएल buprenorphine दर्द की दवादिन में दो बार jection। दैनिक माउस की निगरानी करें।
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Representative Results
चूहों अट्ठाईस दिनों सर्जरी के बाद euthanized हैं, और दिल काटा और जांच की जाती है। 75 मिलीग्राम / किग्रा ketamine और 5 - - 10 मिलीग्राम / किग्रा xylazine चूहों के साथ 50 संज्ञाहरण कर रहे हैं। पशु पर्याप्त संज्ञाहरण के तहत होने पर, वक्ष गुहा खोला जाता है, और एक 23 गेज सुई का उपयोग, ठंड पोटेशियम क्लोराइड (KCl, 30 मिमी) दिल के पीछे बेसल क्षेत्र में इंजेक्ट किया जाता। दिल हृत्प्रसार में गिरफ्तार किया गया है। बंधाव के आगे सत्यापन के लिए, दिल जानवर से हटा दिया है और और फिर 1% इवान के ब्लू डाई 4% paraformaldehyde के साथ इंजेक्ट किया जाता है। चित्रा 1 इस्कीमिक बाएं वेंट्रिकल में इवान की ब्लू की कमी को दर्शाता है। चित्रा 2 एक उचित अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण सेटअप को दर्शाता है। 3 चित्र प्रदर्शित करता है प्रारंभिक चीरा साइट में thoracentesis के लिए सीने में नली की नियुक्ति, सिलाई की मांसपेशियों की परत के साथ ग से हवा निकासी से पहले ट्यूब के आसपास बंद कर दियाhest गुहा। Trichrome धुंधला (चित्रा 4) infarcted क्षेत्र में कोलेजन में वृद्धि को दर्शाता है।
चित्र 1: इवान के ब्लू इंजेक्शन। इवान के ब्लू इंजेक्शन इस्कीमिक ऊतकों में डाई की कमी, बाएं वेंट्रिकल infarcted क्षेत्र के लिए स्थानीय पता चलता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 2: endotracheal इंटुबैषेण। एक उचित अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण सेटअप का प्रदर्शन। ऑपरेटर, शल्य चिकित्सा loupes पहने हुए, माउस के साथ आंख के स्तर पर बैठा है। एक उच्च तीव्रता प्रकाशक नली क्षेत्र पर नीचे की ओर केंद्रित है, ओ transilluminatingropharynx। एक लोचदार बैंड ऊपरी कृन्तक पीछे झुका है, ऑपरेटर घुमावदार संदंश के साथ मुंह खोलने के लिए अनुमति देता है। घुमावदार संदंश स्पष्ट दृश्य के लिए पक्ष के लिए जीभ पकड़ करने के लिए उपयोग किया जाता है। एक कुंद की नोक सुई परिचयकर्ता के साथ एक अंतःशिरा कैथेटर इंटुबैषेण प्रवेशनी एक मामूली ऊपर की ओर कोण पर उन्नत जबकि स्वर रज्जू के खोलने और बंद कल्पना कर रहा है। स्वर रज्जू खोलने और इंटुबैषेण प्रयास करने से पहले बंद करने का विजुअलाइजेशन एक सफल इंटुबैषेण के लिए महत्वपूर्ण बिंदुओं में से एक है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 3: thoracentesis। thoracentesis के लिए इस्तेमाल किया छाती ट्यूब, मूल चीरा साइट में डाला की नियुक्ति। मांसपेशियों की परत सिलाई की जाती है चारों ओर से बंद कर दियाछाती गुहा के भीतर हवा से पहले ट्यूब एक सिरिंज के साथ निकाला जाता है, और फिर छाती ट्यूब निकाल दिया जाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 4: Trichrome धुंधला। बाएं पैनल: नियंत्रण, गैर LAD-ligated दिल। राइट पैनल: LAD-ligated, infarcted दिल। Trichrome दाग (मेसन) Biebrich लाल एसिड fuchsin समाधान, phosphotungstic / phosphomolybdic एसिड समाधान, और एनिलिन नीले रोजगार में वृद्धि हुई कोलेजन (नीला) पार sectioned बाएं वेंट्रिकल infarcted क्षेत्र में फाइब्रोसिस के लिए एक मार्कर के रूप में पता चलता है। बार = 500 सुक्ष्ममापी। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
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Discussion
प्रयोगशालाओं में एमआई मॉडल की एक बढ़ती हुई उपयोग के साथ, वर्णित प्रक्रिया जबकि उनके ऑपरेशन के बाद दर्द और तकलीफ को कम करने चूहों की क्षमता और जीवित रहने की दर बढ़ाना चाहती है। यह प्रोटोकॉल LAD बंधाव प्रक्रिया के विभिन्न पहलुओं के लिए कई सुधार लागू करने से मृत्यु दर कम करने के लिए प्रयास करता है। कुछ भेद कर रहे हैं। कुछ murine इंटुबैषेण अध्ययन है कि शामिल करने के लिए isoflurane के साथ ketamine और xylazine का उपयोग, संज्ञाहरण के अपने लंबी अवधि के लाभ के कारण, मृत्यु दर 8 वृद्धि हुई दिखाई है। हमारे विधि शामिल करने के लिए केवल isoflurane का उपयोग करता है, बहुत मादक पदार्थों से संबंधित जटिलताओं के लिए संभावित कम करने। एक और इसी तरह LAD बंधाव प्रोटोकॉल एक विस्तारित वसूली समय और सटीक प्रशिक्षण 9 के लिए एक बढ़ा जरूरत उत्पादन, एक ट्रेकिआटमी भी शामिल है। प्रक्रिया हम यहाँ का वर्णन लो, जिसके परिणामस्वरूप अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण के एक गैर इनवेसिव विधि का इस्तेमाल करता हैwer मृत्यु दर और परिणाम के उच्च reproducibility। इसके अलावा, न कि केवल एक बिजली के रेजर का उपयोग करने से, हमारे प्रक्रिया भी बालों को हटाने क्रीम फर हटाने के लिए इस्तेमाल करता है, कम से कम 1 मिनट में बाँझ क्षेत्र की एक पूरी तरह से स्पष्ट दृश्य प्रदान करते हैं।
एक और महत्वपूर्ण अंतर माउस, जो, बल्कि पहले की तुलना में, के बाद होता है प्रारंभिक चीरों में से पुनः स्थिति है। चीरों बनाने जबकि माउस लापरवाह है, इस तरह के जिफाएडा उपास्थि के रूप में स्थलों में से एक और अधिक प्रत्यक्ष और सटीक दृश्य के लिए अनुमति देता है इस प्रकार के परिणाम के उच्च reproducibility में जिसके परिणामस्वरूप। हमारे विधि भी नहीं बल्कि खून बह रहा है प्रबंधन, चिकित्सकजनित जला चोटों और संक्रमण का खतरा कम करने के लिए एक Cauter से बाँझ कपास के फाहे उपयोग करता है। इसके अलावा इन मतभेदों से, thoracentesis के लिए छाती ट्यूब प्रविष्टि विशेष रूप से टिप्पणी की है, के रूप में हमारे विधि ट्यूब के लिए एक नया चीरा बनाने शामिल नहीं है। दरअसल, यह पिछले एक चीरा में ट्यूब डालने, फिर से कम हो रही शामिल है मोरtality। प्रक्रिया हम भी वर्णन में शामिल हैं: (1) एक प्रतिकर्षक के उपयोग, कोरोनरी धमनियों की एक और अधिक सटीक और स्थिर दृश्य को सक्षम करने; (2) प्रक्रिया के दौरान छाती गुहा में बाँझ जाली की प्रविष्टि, जिससे चिकित्सकजनित फेफड़ों की चोट के जोखिम को कम करने; और प्रक्रिया है, जो दोनों को दिखाया गया है निम्नलिखित नमक की (3) प्रशासन वसूली समय को छोटा करें और हाइपोथर्मिया को रोकने के।
हालांकि हम एक स्थायी बंधाव मॉडल का वर्णन, इस प्रक्रिया भी एक तीव्र एमआई मॉडल के लिए संशोधित किया जा सकता। Ischemia के 60 मिनट हृदय के ऊतकों 7 में reperfusion के बाद - तीव्र एमआई मॉडल, भी ischemia और reperfusion के रूप में वर्णित, 30 को दर्शाता है। एक वैकल्पिक पद्धति रोधगलितांश आकार या खतरे में क्षेत्र का आकलन करने के ischemia और reperfusion के बाद 2% triphenyl tetrazolium क्लोराइड (टीटीसी) 10 में धुंधला है। टीटीसी धुंधला इस्कीमिक अपमान के बाद व्यवहार्य ऊतक दाग करने की क्षमता पर आधारित हैहृदय ऊतक में मौजूद डीहाइड्रोजनेज की वजह से। ये एंजाइम एक अघुलनशील लाल घटक में एक घुलनशील घटक परिवर्तित, जिससे infarcted क्षेत्र 11 वर्णन किया है। तीव्र एमआई मॉडल तंत्र कि मानव हृदय रोग में पाए जाते हैं और इस तरह myocardial ischemia 10 की घटनाओं का वर्णन के लिए एक उपयोगी उपकरण हो सकता है की नकल कर सकते हैं। LAD बंधाव ऊतक रंग में तत्काल परिवर्तन देखने, एक एमआई उत्प्रेरण की इस पद्धति के लिए एक लाभ प्रदान करके सत्यापित किया जा सकता। हालांकि यह महंगे उपकरण का उपयोग शामिल है और सभी प्रयोगशालाओं के लिए संभव नहीं हो सकता है सफल बंधाव के लिए जाँच करने के लिए एक अन्य विधि, इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम का उपयोग है।
जैसा कि ऊपर वर्णित है, वहाँ कई आसान और सस्ती आणविक दिल कटाई के बाद बंधाव पुष्टि करने के लिए तकनीक है। ऊपर दिखाए गए दो तकनीकों इवान के ब्लू धुंधला और trichrome धुंधला कर रहे हैं। इवान के ब्लू डाई सीधे Ao के कट्टर में इंजेक्ट किया जाताrta, जो दर्शाता है रक्त प्रवाह की कमी नहीं है। यह एक त्वरित और कुशल पद्धति का परीक्षण करने के लिए कि क्या मॉडल सफल रहा था और कोरोनरी रुकावट की हद को मापने के लिए दिल की कटाई के तुरंत बाद कार्यरत है। trichrome धुंधला के लिए, दिल sectioned किया जाना चाहिए और फिर इम्युनोहिस्टोकैमिस्ट्री के अधीन। Trichrome धुंधला बाद इस्कीमिक तंतुमय क्षेत्रों या पुरानी ischemia से प्रभावित हृदय क्षेत्रों का संकेत कर सकते हैं। पोस्ट ऑपरेटिव चूहों 2 के इंजेक्शन - 24 घंटे 5-ethynyl-2'-डिऑक्सीयूरिडीन (edu), thymidine के लिए एक एनालॉग, साथ बलिदान करने से पहले, डीएनए प्रतिकृति और कोशिका प्रसार के क्षेत्रों का संकेत ischemia निम्नलिखित के लिए एक प्रभावी तरीका है, खासकर में संवहनी उत्थान 12 को शामिल अध्ययन करता है।
सामान्य तौर पर, LAD बंधाव अध्ययन की सीमाओं पोस्ट ऑपरेटिव मृत्यु दर की घटनाओं, कार्डियक अतालता, अवरोधित खून बह रहा है, और वातिलवक्ष की मौजूदगी से मुख्य रूप से की वजह से शामिल हैं। एक प्रभावी thoracentesis, बुद्धिहोउट अतिरिक्त छाती चीरों (वर्तमान पद्धति में वर्णित), और उचित पोस्ट ऑपरेटिव देखभाल पशुओं में रुग्णता और मृत्यु दर से बचने के लिए जरूरी हैं। पोस्ट ऑपरेटिव हाइपोथर्मिया की बहुत सावधान निगरानी भी महत्वपूर्ण है। गर्दन और छाती चीरों (ट्रेकिआटमी और thoracentesis के लिए) की संख्या में कमी वर्तमान पद्धति में वर्णित बचने की दर में सुधार होगा। इस के साथ साथ वर्णित इंजेक्शन पूर्व ऑपरेटिव निश्चेतक से बचाव भी पशुओं के पोस्ट ऑपरेटिव वसूली में सुधार होगा।
आदेश उच्च reproducibility प्राप्त करने के लिए, LAD बंधाव मॉडल कठोर प्रशिक्षण और अनुभव की आवश्यकता है। ऑपरेटर reproducibly दिल पर वांछित स्थलों पर दौरे बनाने की क्षमता हासिल करने के लिए सर्जरी के कई हफ्तों के प्रदर्शन करने के लिए की जरूरत है। प्रशिक्षण और अनुभव एक सफल LAD बंधाव अस्तित्व सर्जरी के लिए दो महत्वपूर्ण कारक हैं।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| High-Intensity Light Source | Harvard Apparatus | 72-0215 | |
| SurgiSuite Operating Platform | Kent Scientific Corporation | SurgiSuite | Uses a rechargeable, battery-operated far infrared warming pad. Charge overnight before surgery. |
| SurgiSuite LED Lighting Kit | Kent Scientific Corporation | SURGI-5003 | |
| Hot Bead Sterilizer | Fine Science Tools | 18000-45 | Preheating takes 15 - 20 min. Instruments take 20 s to sterilize. |
| Small Rodent Anesthesia System | VetEquip Inc. | 901810 | |
| Isofluorane | Piramal Enterprises | 66794-017-10 | |
| Buprenorphine | Rhode Island Hospital Pharmacy | NDC 12496-0757-1, 12496-0757-5 | |
| Surgical Loupes | Roboz | RS-6687 | |
| Small Rodent Ventilator | Harvard Apparatus | 73-0043 | |
| Lubricating Drops | Thermo Fisher Scientific | 19-898-350 | |
| Electric Razor | Kent Scientific Corporation | CL 9990-1201 | |
| Hair Removal Cream | Nair | ||
| Medical Tape | Thermo Fisher Scientific | 18-999-380 | |
| Betadine | Thermo Fisher Scientific | 19-027136 | |
| 70% Isopropanol Wipes | Thermo Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| Surgical Drapes | Braintree | SP-TS | |
| Surgical Gloves | Thermo Fisher Scientific | 18999102D | |
| 5-0 Polypropylene Sutures | Ethicon | 8630G | |
| 8-0 Nylon Sutures | Fine Science Tools | 12051-08 | |
| Platinum-Cured Tubing | Harvard Apparatus | 72-1042 | 0.3 mm inside diameter x 0.6 mm outside diameter |
| 0.9% Saline | Thermo Fisher Scientific | 19-310-207 | |
| 4-0 Polypropylene Sutures | Ethicon | 8631G | |
| 1 CC Syringe with 25-Gauge Needle | Thermo Fisher Scientific | 14-826-100 | |
| Scissors | Kent Scientific Corporation | INSS600225 | |
| Forceps | Kent Scientific Corporation | INS700100 | |
| Cotton Swabs | Thermo Fisher Scientific | 23-400-118 | |
| IV Catheter, 20-Gauge | Thermo Fisher Scientific | NC9892181 | |
| Retractor | Kent Scientific Corporation | INS 750369 | |
| Forceps | Fine Science Tools | 11003-12 | |
| Dissecting Forceps, Straight | Kent Scientific Corporation | INS 700101 | |
| Dissecting Forceps, Curved | Kent Scientific Corporation | INS 700103 | |
| Hemostatic Forceps, Straight | Kent Scientific Corporation | INS 750451 | |
| Hemostatic Forceps, Curved | Kent Scientific Corporation | INS 750452 | |
| Tissue Forceps | Kent Scientific Corporation | INS 700131 | |
| Needle Holder | Kent Scientific Corporation | INS 600109 | |
| Scissors | Kent Scientific Corporation | INS 600225 |
References
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