Abstract
Ischemisk hjärtsjukdom (IHD) eller akut kranskärlssjukdom (ACS), är en av de vanligaste dödsorsakerna i USA. IHD kännetecknas av minskad blodförsörjning till hjärtat, vilket resulterar i förlust av syre till och den därpå följande nekros av hjärtmuskeln. MI modellen har vunnit popularitet för dess användning som en kortsiktig ischemi-reperfusion modell och en långsiktig permanent bindning modell. Nedan beskriver vi en tillförlitlig metod för permanent ligation av LAD. Med musen genteknik blir mer avancerade och med en ökande tillgängligheten kvalitets mus kirurgiska instrument, har musen blivit en populär modell för MI operationer. Vår kirurgiska modell omfattar användningen av en lätt reversibel bedövningsmedel för snabb återhämtning av musen; en minimalt invasiv endotrakeal intubation utan att involvera en trakeotomi; och en thoracentesis genom den ursprungliga torakotomi stället utan att skapa ett ytterligare snitt i bröstet, som ärgjort i vissa andra metoder, för att effektivt avlägsna överskott av blod och luft från brösthålan. Denna metod är jämförelsevis mindre invasiv än andra metoder, som dramatiskt minskar kirurgiska och postoperativa komplikationer och dödlighet och förbättrar reproducerbarheten.
Introduction
Kranskärlssjukdom, eller ACS, är den vanligaste hjärt-händelse och kommer att betraktas som den främsta orsaken till sjuklighet och dödlighet i världen år 2020 en. Orsaken till ACS är närvaron av en myokardiell trombos på grund av bristning av en koronar aterosklerotiskt plack som blockerar eller minskar blodflödet till hjärtvävnaden 2. Därför finns det kliniska tecken som överensstämmer med närvaron av akut myokardiell ischemi, såsom hjärtinfarkt (Ml) 3, 4. MI leder till en förlust i massan av cardiomyocytes och en progression till patologisk kammar ombyggnad, vilket kan leda till kammardysfunktion och hjärtsvikt 5, 6.
En av de mest effektiva sätten att studera IHD har varit att efterlikna den mänskliga hjärtinfarkt i en djurmodell. Detta uppnås genom att tillsluta LAD imöss. Med hjälp av denna modell, studerar vi hur hjärtat kan skyddas från skador till följd av IHD.
Under det senaste årtiondet har forskare skiftat från att använda större djurmodeller för mindre djur, inklusive övergången från råttor till möss. Den mindre musmodell börjar vara föredragen av många skäl, inklusive deras lilla storlek, stor kull storlek, låg kostnad för att upprätthålla, och korta dräktighetstiden, såväl som för den expansiva tillgängligheten av transgena och gen knockout-modeller 7. Även möss är små i storlek, har nya kirurgiska instrument särskilt utformade för dem hjälp i denna utveckling. Vår metod använder dessa nya kirurgiska instrument.
Medan flera metoder genomföra en invasiv trakeotomi, använder vi en mindre invasiv metod för endotrakeal intubation. Med hjälp av overhead belysning av orofarynx, vi intuberas utan att skapa några snitt, vilket ger en säkrare och mindre traumatisk upplevelse för tHan djur. Musen placeras sedan i respirator och hålls på isofluran under hela proceduren. På grund av den korta varaktigheten av anestesi som produceras av läkemedlet, det tar bara några minuter för djuret att återhämta sig från bedövningen när den upphör. Vår kirurgiska modellen innehåller också en minimalinvasiv thoracentesis. Noggrann borttagning av blod och överskottsluft från brösthålan med användning thoracentesis genom den ursprungliga torakotomi snittet har riktat ett gemensamt postoperativ komplikation av LAD-ligering: spänn pneumothorax. Denna metod, som eliminerar behovet av de två ytterligare snitt som används i andra metoder-en för trakeotomi och en annan för torakocentes-har gett färre postoperativa komplikationer och har drastiskt minskad dödlighet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Detta djur protokoll har granskats och godkänts av Institutional Animal Care och användning kommittén (IACUC) vid Rhode Island Hospital.
1. Anestesi och Intubation
- Väg musen för att beräkna doseringen av postoperativ smärta medicinering.
- Placera musen i en induktionskammare och leverera 4% isofluran under 9 - 10 min, övervakning djuret hela. Slå på en varm pärla autoklav så att anordningen kan förvärma till approximativt 250 ° C. Förvärmning tar 15-20 minuter.
- När musen når ett djup plan av anestesi, med en andningshastighet av ungefär 32 andetag / min, placera musen i ryggläge på en Styrofoam ombord och använda ett elastiskt band fäst under de översta framtänder för att hålla munnen öppen. Bekräfta sedering genom att utföra en tå nypa. Positionera en hög-intensitets illuminator ovanför musen så att orofarynx kan visualiseras.
- Använd böjd pincett att öppna käken och ett annat parav pincett för att lyfta tungan ur vägen. Var noga med att intubation medan placerad vid eller strax under ögonhöjd med kroppen av musen. Användningen av kirurgiska luppar rekommenderas.
- Visualisera öppning och stängning av stämbanden. När den är öppen, sätt i en 20-gauge, 1-i intravenös (IV) kateter med en trubbig spets nål införare. Använd nålen för att styra katetern till luftstrupen öppningen, men undvik att sätta nålen i luftstrupen. Kontroll av korrekt placering kan göras med hjälp av en plast överföringspipett.
- Överföra intuberade musen en rörelseytan försedd med en uppvärmningsanordning. Anslut musen till en liten gnagare ventilator inställd på en slagvolym av 150 | il / slag och en slagfrekvens av 130 slag / min.
- Leverera 2,5% isofluran. Verifiera intubation genom att kontrollera bilateral bröst stiga. Verifiera anestesi genom att utföra en tå nypa. Musen kan behöva 5 - 10 min på ventilatorn att bli helt sövd.
- Tejp ned intubation röret vid anslutningsstället mellan ventilatorn och IV-katetern. Tape ned extremiteterna. Placera sterila smörj droppar på ögonen.
- Trimma den ventrala vänstra sidan av bröstkorgen med en elektrisk rakapparat. Damma av rakade päls med torra våtservetter och applicera en liten lager av hårborttagningskräm med en steril bomullspinne. Krämen bör förbli i kontakt med hårsäckarna för cirka 30-45 s.
- Medan kräm processer, placera tre sterila bomullspinnar i tre 1,5 ml-rör fyllda med Betadine i blöt. Använda våtservetter fuktad med destillerat vatten, torka försiktigt bort krämen och päls.
- Rengöra det kirurgiska området tre gånger, omväxlande Betadine och sterila 70% isopropanol prep dynor, rengöring i en cirkelrörelse flyttar från centrum till periferin. Placera en steril duk med en kvarts storlek hål ovanför operationsområdet musen.
- Rengör området kring mouse med 70% etanol. Kontrollera anestesi gång med en tå nypa.
3. LAD Ligering
- Placera de autoklaverade kirurgiska instrument i varmt pärla autoklav förvärmts till 250 ° C under ca 20 s. Placera de steriliserade instrument steril autoklaveras operationslakanet. Don operationshandskar.
- Använd fin spets pincett för att försiktigt lyfta huden vid en punkt ungefär 5 mm till vänster om den framstående xiphoid brosk. Använda en kirurgisk skalpell med en nr 10 blad för att skapa ett vertikalt snitt i huden från denna punkt uppåt, till nivån av manubrium.
- Använd böjd pincett för att försiktigt separera hud och muskler lager. Öppna muskelskiktet efter snittet huden. Infoga två 5-0 polypropylen suturer genom muskelskiktet, en på vardera sidan av snittet, och säkra suturerna temporärt med klämmor för att hålla muskelskiktet öppen.
- Identifiera och göra ett snitt i tredje interkostalrummet, efternaturliga vinkel på bröstkorgen. Ta bort tejpen från den vänstra ändarna av musen och säkra sin vänstra bakre foten till höger bakre foten med tejp. Skära en längre bit tejp och säkra dess vänstra främre foten till operationsytan i ett något höjt läge. Rengör handskar med 70% etanol.
- Använd en indragare för att försiktigt isär den 3: e och 4: e revben. Skära en liten sektion av steril gasbinda, ungefär 1 tum x ½ i, och doppa den i steril 0,9% saltlösning. Pressa ut överflödigt saltlösning och använder pincett för att försiktigt in gasväv mot den vänstra lungan för att förhindra oavsiktlig lungskador under förfarandet.
- Försiktigt bort den tunna hjärtsäcken med pincett.
- Riv en liten mängd bomull från en steril bomullstuss och rulla den till en liten boll. Doppa denna bomullstuss i steril 0,9% saltlösning och torka försiktigt rent över ytan av hjärtat för att uppskatta artärerna. Tryck försiktigt vänstra förmaket uppåt och lokalisera kransartärer enligtneath.
- Identifiera LAD och passera en 8-0 nylon sutur under LAD; fullständig två kast för att säkra ligation. Om ligation lyckas vänster kammare distalt från ligatur kommer blekna.
- Använd pincett, ta bort gasväv in tidigare, och sedan försiktigt bort upprullningsdonet. Infoga en 6-i, 25-gauge flexibla röret fäst till en 25-gauge nål in i brösthålan genom torakotomi öppningen. Avancera ca 1 - 2 i av rör in i utrymmet ovanför den vänstra lungan. Återgå musen till ryggläge och rengör handskar med 70% etanol.
- Använd 5-0 polypropylen suturer på ett enkelt avbruten mönster för att stänga bröstkorgen, hålla bröstet röret på plats. Ta bort de två suturer som håller muskelskiktet öppen. Använda 5-0 polypropylen suturer på ett enkelt kontinuerligt mönster för att stänga muskelskiktet, återigen hålla bröstet röret på plats.
- Bifoga en 1-ml spruta till den 25-gauge nål på bröstet röret. Dra försiktigt uppåt på stegetr samtidigt gradvis extrahera bröströret från brösthålan med pincett. Extrahera slangen långsamt, eftersom detta steg avlägsnar överskottsluft och blod, som annars skulle fastna i brösthålan och resulterar i en pneumothorax.
- När sprutan är full, ta bort sprutan från nålen och göra sig av med avfallet i en avfallsbägare eller sjunka. Fortsätt tills bröströret är helt extraheras. Se till att bröstkorgen är tätt tillsluten.
- Minska isofluran till 1,5%. Stäng huden med 4-0 polypropylen suturer på ett enkelt avbruten mönster. Stäng av isofluran förångare off.
- Administrera 0,1 mg / ml buprenorfin i 0,9% saltlösning via en intraperitoneal (IP) injektion. Topiskt applicera 2 mg / ml lidokain med 2 mg / ml Bupivakain i 0,9% koksaltlösning till snittet. Administrera mellan 200 - 500 mikroliter av 0,9% saltlösning via en subkutan injektion, skalning av saltlösning beloppet till vikten av musen.
- Vänta 5 minuter efter administering de smärtstillande medel för att avlägsna musen från intubation röret. Detta underlättar övergången från ventilatorn.
- Om musen inte har en bilateral bröst stiger en gång utanför fläkten, utför nål dekompression. För att göra detta, införa en 25-gauge steril nål och en 1-ml spruta mellan de 3: e och 4: e revben tills den kommer in i brösthålan, som betecknas med en plötslig minskning i motstånd. Dra upp försiktigt på kolven för att avlägsna överskottsluft.
- När musen visar en tillräcklig bilateral andning och djup och svarar på en tå nypa, placera musen i en ren återhämtning bur under en värmelampa. Ge musen med fuktig mat och en vattenflaska, övervakning i en huv med laminärt flöde under 15 - 20 min. Övervaka en överdriven andningsansträngning, kraftig blödning eller andra potentiellt livshotande komplikationer.
- För de nästa tre dagarna, administrera 0,1 mg / ml buprenorfin smärta medicinering via en IP ijection två gånger dagligen. Övervaka musen dagligen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Mössen avlivas tjugoåtta dagar efter operationen, och hjärtan skördas och undersöks. Mössen sövs med 50 - 75 mg / kg ketamin och 5 - 10 mg / kg xylazin. Då djuret är under adekvat anestesi, är brösthålan öppnades och med användning av en 23-gauge nål, är kall kaliumklorid (KCl, 30 mM) injicerades i den bakre basala regionen av hjärtat. Hjärtat arresteras i diastole. För ytterligare validering av ligering hjärtat avlägsnas från djuret och injiceras med 4% paraformaldehyd och sedan 1% Evans Blue färg. Figur 1 visar avsaknaden av Evans Blue i den ischemiska vänstra ventrikeln. Figur 2 visar en ordentlig endotrakeal intubering setup. Figur 3 visar placeringen av bröströret för torakocentes i den initiala snittstället, med muskellagret suture stängd runt röret innan luft extraktion från chest hålighet. Trikromfläckning visar en ökning i kollagen i infarktområdet (fig 4).
Figur 1: Evan Blue Injection. Den Evan Blue injektion avslöjar en brist på färg i ischemisk vävnad, lokaliserad till vänster kammare infarktområdet. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: endotrakeal intubation. Demonstration av en riktig endotrakealintubering setup. Operatören, klädd kirurgiska luppar, sitter i ögonhöjd med musen. En hög intensitet illuminator fokuseras nedåt på den trakeala regionen, genomlysning av oropharynx. Ett elastiskt band hakas bakom de övre framtänder, vilket tillåter operatören att öppna munnen med de krökta pincett. De böjda pincett används för att hålla tungan åt sidan för tydlig visualisering. En intravenös kateter intuberingskanyl med en trubbig spets nål införare förs fram i en något uppåtriktad vinkel medan öppning och stängning av stämbanden visualiseras. Visualisering av stämbanden öppna och stänga innan intubering försök är en av de kritiska punkterna för en lyckad intubering. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: Thoracentesis. Placering av bröströret används för torakocentes, införas i den ursprungliga snitt webbplatsen. Muskellagret sutureras slutet omkringröret innan luften inom brösthålan extraheras med en spruta, och sedan bröstet röret avlägsnas. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: Trichrome-färgning. Vänster panel: kontroll, icke-LAD-ligerade hjärta. Höger panel: LAD-ligerade, infarkt hjärta. Trikromfärg (Masson) med användning Biebrich scarlet-syra fuksin lösning, fosforvolfram / fosformolybdensyra-lösning, och anilin blå avslöjar ökad kollagen (blå) som en markör för fibros i tvärsektionerad vänstra ventrikeln infarktregionen. Bar = 500 | im. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Med en ökande användning av Ml-modellen i laboratorier, det beskrivna förfarandet syftar till att öka effektiviteten och överlevnadsgraden hos mössen under minimering deras post-operativ smärta och obehag. Detta protokoll strävar efter att minimera dödligheten genom att göra ett antal förbättringar av olika aspekter av LAD ligation proceduren. Det finns några skillnader. Vissa murina intubation studier som använder ketamin och xylazin tillsammans med isofluran för induktion, på grund av till förmån för deras längre varaktighet av anestesi, har visat ökad dödlighet 8. Vår metod använder enbart isofluran för induktion, vilket kraftigt minskar risken för narkotikarelaterade komplikationer. En annan liknande LAD ligation protokoll inkluderar en trakeotomi, som producerar en förlängd återhämtningstid och ett ökat behov av exakt utbildning 9. Förfarandet beskriver vi här använder en icke-invasiv metod för endotrakeal intubation, vilket resulterar i lower dödlighet och högre reproducerbarhet av resultat. Dessutom, i stället för att endast använda en elektrisk rakapparat, vårt förfarande använder också hårborttagningskräm för päls borttagning, vilket ger en helt klar visualisering av det sterila området på mindre än en minut.
En annan viktig distinktion är ompositioneringen av musen, som uppträder efter, snarare än tidigare, de initiala snitt. Vilket gör snitten medan musen är i ryggläge möjliggör en mer direkt och noggrann visualisering av landmärken såsom xiphoid brosk, vilket således resulterar i högre reproducerbarhet av resultat. Vår metod använder också sterila bomullspinnar i stället för en Cauter för blödning ledning, minskar iatrogena brännskador och risken för infektion. Bortsett från dessa skillnader, är bröstet röret insättning för thoracentesis speciellt notera, eftersom vår metod inte innebär att skapa en ny snitt för röret. Snarare handlar det om införande av röret i en tidigare snitt, åter avtagande morTality. Det förfarande som vi beskriver också inkluderar: (1) användning av en sårhake, vilket möjliggör en mer exakt och stabil visualisering av hjärtats kranskärl; (2) införande av steril gasväv in i brösthålan under förfarandet, vilket minskar risken för iatrogena lungskador; och (3) administrering av saltlösning genom att följa förfarandet, som har visat sig både förkortar återhämtningstiden och förhindra hypotermi.
Även om vi beskriva en permanent bindning modell, kan detta förfarande även modifieras för en akut MI modell. Den akut Ml modell, beskrivs också som ischemi och reperfusion, hänvisar till 30-60 min av ischemi följt av reperfusion i hjärtvävnaden 7. En alternativ metod för att bedöma infarktstorlek eller riskområdet efter ischemi och reperfusion är färgningen av 2% trifenyltetrazoliumklorid (TTC) 10. TTC färgning bygger på förmågan att färga livsduglig vävnad efter ischemisk insultpå grund av dehydrogenaser som finns i hjärtvävnad. Dessa enzymer omvandlar en löslig komponent till en olöslig röd komponent, vari delineating infarktregionen 11. Den akuta MI modell kan efterlikna de mekanismer som förekommer i den mänskliga hjärtsjukdomar och därmed kan vara ett användbart verktyg för att belysa händelserna myokardischemi 10. LAD ligation kan verifieras genom att observera en omedelbar förändring i vävnad färg, vilket ger en fördel för denna metod för att inducera ett MI. En annan metod för att kontrollera om lyckad ligation är användningen av EKG, även om detta innebär användning av dyr utrustning och kan inte vara möjligt för alla laboratorier.
Såsom beskrivits ovan, det finns flera enkla och prisvärda molekylära tekniker för att bekräfta ligeringen efter skörd hjärtat. De två teknikerna som visas ovan är Evans Blue-färgning och trikrom-färgning. Evans Blue färgämne direkt injiceras i bågen av aoRTA, som visar var det finns en brist på blodflödet. Detta är en snabb och effektiv metod som används omedelbart efter skörd hjärtat att testa om modellen var framgångsrik och att mäta omfattningen av koronar blockering. För trikromfläckning måste hjärtat vara sektioneras och utsattes sedan för immunohistokemi. Trikromfläckning kan indikera efter ischemiska fibrotiska områden eller hjärt områden som drabbats av kronisk ischemi. Insprutningen av postoperativ möss 2-24 h före avlivning med 5-etynyl-2'-deoxiuridin (EDU), en analog för tymidin, är en effektiv metod för att indikera områden av DNA-replikation och cellproliferation efter ischemi, i synnerhet i studier med vaskulär regenerering 12.
I allmänhet, begränsningarna hos LAD-ligering studien omfattar förekomsten av postoperativ dödlighet, som orsakas huvudsakligen genom närvaron av hjärtarytmier, blödning och pneumothorax. En effektiv thoracentesis, intelligensHout ytterligare bröst skåror (beskriven i den nuvarande metoden), och korrekt postoperativ vård är nödvändigt för att undvika morbiditet och mortalitet hos djuren. Den mycket noggrann övervakning av postoperativ hypotermi är också kritisk. Minskningen av antalet hals och bröst snitt (för trakeotomi och thoracentesis) som beskrivs i den nuvarande metoden kommer att förbättra överlevnaden. Undvikande av injicerbara preoperativa anestetika som beskrivs häri kommer också att förbättra postoperativ återhämtning av djuren.
För att uppnå hög reproducerbarhet kräver LAD ligation modell rigorös utbildning och erfarenhet. Operatören behöver utföra flera veckor av operationer för att få möjlighet att reproducerbart göra infarkter vid önskade platser på hjärtat. Utbildning och erfarenhet är två viktiga faktorer för en lyckad LAD ligation överlevnad kirurgi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| High-Intensity Light Source | Harvard Apparatus | 72-0215 | |
| SurgiSuite Operating Platform | Kent Scientific Corporation | SurgiSuite | Uses a rechargeable, battery-operated far infrared warming pad. Charge overnight before surgery. |
| SurgiSuite LED Lighting Kit | Kent Scientific Corporation | SURGI-5003 | |
| Hot Bead Sterilizer | Fine Science Tools | 18000-45 | Preheating takes 15 - 20 min. Instruments take 20 s to sterilize. |
| Small Rodent Anesthesia System | VetEquip Inc. | 901810 | |
| Isofluorane | Piramal Enterprises | 66794-017-10 | |
| Buprenorphine | Rhode Island Hospital Pharmacy | NDC 12496-0757-1, 12496-0757-5 | |
| Surgical Loupes | Roboz | RS-6687 | |
| Small Rodent Ventilator | Harvard Apparatus | 73-0043 | |
| Lubricating Drops | Thermo Fisher Scientific | 19-898-350 | |
| Electric Razor | Kent Scientific Corporation | CL 9990-1201 | |
| Hair Removal Cream | Nair | ||
| Medical Tape | Thermo Fisher Scientific | 18-999-380 | |
| Betadine | Thermo Fisher Scientific | 19-027136 | |
| 70% Isopropanol Wipes | Thermo Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| Surgical Drapes | Braintree | SP-TS | |
| Surgical Gloves | Thermo Fisher Scientific | 18999102D | |
| 5-0 Polypropylene Sutures | Ethicon | 8630G | |
| 8-0 Nylon Sutures | Fine Science Tools | 12051-08 | |
| Platinum-Cured Tubing | Harvard Apparatus | 72-1042 | 0.3 mm inside diameter x 0.6 mm outside diameter |
| 0.9% Saline | Thermo Fisher Scientific | 19-310-207 | |
| 4-0 Polypropylene Sutures | Ethicon | 8631G | |
| 1 CC Syringe with 25-Gauge Needle | Thermo Fisher Scientific | 14-826-100 | |
| Scissors | Kent Scientific Corporation | INSS600225 | |
| Forceps | Kent Scientific Corporation | INS700100 | |
| Cotton Swabs | Thermo Fisher Scientific | 23-400-118 | |
| IV Catheter, 20-Gauge | Thermo Fisher Scientific | NC9892181 | |
| Retractor | Kent Scientific Corporation | INS 750369 | |
| Forceps | Fine Science Tools | 11003-12 | |
| Dissecting Forceps, Straight | Kent Scientific Corporation | INS 700101 | |
| Dissecting Forceps, Curved | Kent Scientific Corporation | INS 700103 | |
| Hemostatic Forceps, Straight | Kent Scientific Corporation | INS 750451 | |
| Hemostatic Forceps, Curved | Kent Scientific Corporation | INS 750452 | |
| Tissue Forceps | Kent Scientific Corporation | INS 700131 | |
| Needle Holder | Kent Scientific Corporation | INS 600109 | |
| Scissors | Kent Scientific Corporation | INS 600225 |
References
- Hausenloy, D. J., Yellon, D. M. New directions for protecting the heart against ischaemia-reperfusion injury: targeting the Reperfusion Injury Salvage Kinase (RISK)-pathway. Cardiovasc Res. 61 (3), 448-460 (2004).
- Roffi, M., et al. 2015 ESC Guidelines for the management of acute coronary syndromes in patients presenting without persistent ST-segment elevation. Eur Heart J. 37 (3), 267-315 (2015).
- Kumar, A., Cannon, C. P. Acute Coronary Syndromes: Diagnosis and Management, Part I. Mayo Clin Proc. 84 (10), 917-938 (2009).
- Eitan, A., Nikolsky, E. Antithrombotic therapy in patients with acute coronary syndromes: how to make the right choice. Minerva Med. 104 (4), 357-381 (2013).
- Abbate, A., Bussani, R., Amin, M. S., Vetrovec, G. W., Baldi, A. Acute myocardial infarction and heart failure: role of apoptosis. Int J Biochem Cell Biol. 38 (11), 1834-1840 (2006).
- Zheng, Z., et al. Nebivolol protects against myocardial infarction injury via stimulation of beta 3-adrenergic receptors and nitric oxide signaling. PLOS ONE. 9 (5), 98179 (2014).
- Tarnavski, O., et al. Mouse cardiac surgery: comprehensive techniques for the generation of mouse models of human diseases and their application for genomic studies. Physiol Genomics. 16 (3), 349-360 (2004).
- Buitrago, S., Martin, T. E., Tetens-Woodring, J., Belicha-Villanueva, A., Wilding, G. E. Safety and Efficacy of Various Combinations of Injectable Anesthetics in BALB/c Mice. J Am Assoc Lab Anim Sci. 47 (1), 11-17 (2008).
- Kolk, M. V., et al. LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction. J Vis Exp. (32), e1438 (2009).
- Wu, Y., Yin, X., Wijaya, C., Huang, M. H., McConnell, B. K.
- Ferrera, R., Benhabbouche, S., Bopassa, J. C., Li, B., Ovize, M. One hour reperfusion is enough to assess function and infarct size with TTC staining in Langendorff rat model. Cardiovasc Drugs Ther. 23 (4), 327-331 (2009).
- Zeng, C., et al. Evaluation of 5-ethynyl-2'-deoxyuridine staining as a sensitive and reliable method for studying cell proliferation in the adult nervous system. Brain Res. 1319, 21-32 (2010).
