Introduction
Utvecklingen av nya förädlingsstrategier för laboratoriemöss är en utmanande uppgift som bidrar till uppfyllandet av 3R (ersättning, begränsning och förfining) av försöksdjursvetenskap en. Förbättringar inom förfining kan ytterligare bidra till välbefinnande av miljontals djur som används för försöksändamål. Det behövs därför en intensiv forskning inom området. Detta är också ett definierat syftet med direktiv 2010/63 i Europeiska unionen. Direktiv 2010/63 / EU påpekar att livstid erfarenhet av försöksdjur måste förbättras och att "anläggningar ska inrätta tillvänjning och utbildningsprogram som lämpar sig för djuren, försöken och projektets längd" (artikel 3.7) 2.
Försöksdjur kan uppleva många stressiga situationer medan de hålls och föds upp för experiment. Vanligtvis, interaktionen mellan arbets-Atory möss och de ansvariga personerna är ganska begränsad. Därför kan en förtroendefull relation inte utvecklas. Detta kan framkalla ökad ångest och stress som en reaktion på hantering, vilket är skadligt för beteendet och fysiologi, och därför, välbefinnande, av djuren 3, 4, 5, 6. Dessutom rutinmässigt laboratorieförfaranden som allmän hantering, fasthållning, och blod eller vävnadsprovtagning kan orsaka stressreaktioner, som kan granskas genom att mäta olika parametrar, såsom stresshormoner eller beteende 7, 8. Det har visat sig att hanteringsprogram effektivt kan minska ångesten mot utredare smågnagare 9, 10, 11. Hantering program kan därför förbättra djurensvillkor och kan bidra avsevärt till djurskydd 5.
Målet med denna studie är att införa positiv förstärkning utbildning för möss som hanterings ett särskilt program. Positiv förstärkning utbildning är en form av operant betingning som ger utredaren ett sätt att forma djurens beteende. När djuret utför ett önskat beteende, är det följs av en positiv stimulus (här, ett livsmedel belöning). Avsikten är att djuret länkar belöningen till respektive beteende. Clicker utbildning är en form av positiv förstärkning träning med en betingad sekundär förstärkare, "klick" ljudet av en klicker, och har visat sig stärka ett specifikt beteende 12.
Närmare bestämt klickljud fungerar som en "tids bro" mellan beteendet och den kommande belöning 13. Tränaren klickar exakt när djuret utför den önskadebeteende, utan tidsfördröjning 14, och sedan presenterar maten belöning. Detta stärker belönas beteende, som kommer att utföras med en högre frekvens. Klickerträning används i stor utsträckning med sällskapsdjur och har gjort sin väg in i försöksdjursvetenskap, där det har genomförts framgångsrikt med icke-humana primater 13, 15, 16. Som möss lära ganska snabbt när de utsattes för operant paradigm konditione bör införandet av en andra förstärkare inte överansträngning deras kognitiva förmågor 5, 17, 18, 19.
Genom att införa klickerträning hållande av möss, gör vi det möjligt möss att uppleva kognitiv anrikning. Utformningen av kognitiv anrikning måste göra det möjligt för mössen att använda sina kognitiva färdigheter för att sølve problem och att få kontroll över sin omgivning 20, 21. Flera studier med olika arter visar den positiva effekten av kognitiv anrikning på välfärd fångenskap djur 22, 23, 24. Förbättra förmågan hos djuren att framgångsrikt hantera miljöproblemen bidrar till deras välbefinnande 25, 26.
Dessutom, om djuren upplever låga nivåer av stress under sin livstid, de är mindre benägna att utveckla skadliga copingstrategier när de konfronteras med stressfaktorer som förekommer i den biomedicinska forskningen. Således kan ett konsekvent genomförande av kognitiv anrikning bidrar till en homogenisering av försökspersonernas fenotyper. Detta kommer att bidra till 3R-principen om minskning, eftersom det kan minska antalet ämnen som krävsmed tanke på statistiska krav 27.
Genom att utveckla en tillförlitlig protokoll som lätt kan integreras i den dagliga rutinen att hålla laboratoriemöss, kan vi avsevärt förbättra sin livstid erfarenhet av välfärd.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Etik uttalande: Hanteringen av mössen och experimentella procedurer genomfördes i enlighet med europeiska, nationella och institutionella riktlinjer för djurvård.
OBS: Protokollet omfattar fem dagar interventioner (måndag till fredag), med avbrott på helgerna (lördag och söndag). Protokollet kan lätt anpassas för att möta specifika behov.
1. Bestämma en belöning Lämplig som en andra Förstärkare
OBS: Använd matbelöningar, såsom vakuumförpackade livsmedel eller djurfoder som uppfyller standarder för livsmedelssäkerhet. Till exempel olika typer av nötter, choklad, gelékonfektyr eller torkade frukter är lämpliga.
- Sätt en liten petriskål med olika livsmedel belöningar (delar av 0,5 cm 3) i hemmaburen (Figur 1).
- Efter 10 minuter, kontrollera om resterna.
- Om alla belöningar äts efter 10 min, förkorta tidsspannet tills en preferens kan uppskattas.
- På dagarna 4 och 5 (t.ex., Thursday och fredag), tillsätt små mängder av den föredragna ( "vinnare") belöning till hemmet-bur för att upprätta en påverkan på alla möss i buren till belöning.
- Om mössen inte habituated till mus tunnlar, tillsätt en tunnel till buren (minst 2 dagar före början träning, t.ex., under helgen).
- Upprepa steg från 1,2 till 1,4 på tre dagar i följd (t.ex. måndag till onsdag).
2. dressyr
- Förberedelser inför varje träningspass
OBS: Varje gång en mus behöver lyftas upp i detta protokoll, lyfta den på ett lugnt och skonsamt sätt. Placera en hand under musen för att lyfta upp det. Under de första få gånger, kan mössen omröras, men tillvänjning processen kommer att vara färdig efter flera dagar. Om det här steget skapar svårigheter, är det lämpligt att hänvisa till protokollet för "koppning på den öppna sidan" 28.- Förbered en bur med strö.
- transfer buren av musen utbildas till en lugn plats.
- Förbered belöningen och har en timer och klickern / target stick kombination klar.
OBS: Om möss vana vid hantering och redan har ett förtroendefullt förhållande med försöksledaren, kan mössen matas för hand. Annars fästa belöning till en pinne eller tång på ett sådant sätt att mössen kan hålla ett avstånd från försöks. - Ta bort alla objekt från hemmet-buren, som nu tjänar som utbildningsområde (t.ex. mus hus, bo-byggmaterial, osv.).
- Överför buren följeslagare till en förberedd bur.
- Allmänna regler som gäller för alla utbildningar
OBS: Följande allmänna regler gäller för alla sessioner och kommer inte att nämnas igen hela protokollet.- Utbilda varje mus under 5 min. Växla mellan 30-s utbildning och 15-s break perioder.
- Låt musen gnaga på belöningen inte längre än en sekund. Sedan, ta stick (med belöningen) ut ur buren.
- Kör följande mönster av givande:
1 - 10 föreställningar av beteende: belöna varje gång.
11-21 prestanda beteende: belöna varannan gång.
Från 22 prestanda beteende på: belöna var tredje gång. - Efter 4 min av träning, är nästa prestanda hos det önskade beteendet förstärks av en jackpot belöning. Låt musen för att gnaga på matbelöning tre gånger längre än tidigare.
- Träningspass Dag 1: "Länka den sekundära förstärkare med maten belöning"
- Ställ in timern till fem minuter, tryck på start och lägg musen tunneln till hemmaburen.
OBS: Utnyttja de medfödda thigmotaxis av möss och placera tunneln intill en vägg (figur 2). För de första par sessioner, kommer detta att öka sannolikheten av musen kommer in i tunneln. - Vänta tills musen inspekterar tunneln. Så snart som den mouse kommer in i tunneln, klicka och presentera belöning i slutet av tunneln.
- Låt musen foder på belöningen när man sitter i tunneln.
- Klicka kontinuerligt under 15 sekunder medan musen sitter i tunneln.
- Så snart musen lämnar tunneln, gå tillbaka till steg 3,2.
- Ställ in timern till fem minuter, tryck på start och lägg musen tunneln till hemmaburen.
- Träningspass dagar 2-5: "går genom en tunnel"
- Ställ in timern till fem minuter, tryck på start och lägg musen tunneln till hemmaburen.
- Så snart som musen kommer in i tunneln, klicka och presentera belöningen i slutet av tunneln.
- Så länge som musen är i tunneln, klicka och omedelbart presentera belöningen på samma sätt.
- Upprepa detta för de nästa 30 s, och sedan göra en paus under 15 s för att ta tunneln ut ur buren.
- Lägga tunneln igen och klicka omedelbart när musen återinträder i tunneln.
- Presentera belöningen i slutet av tunneln.
- Låt musen för att gnaga upp till 1 s. Ta bort belöningen.
- Så snart musen startar åter in i tunneln i sig, presenterar belöningen framför slutet av tunneln (Figur 3).
- Träningspass vecka 2: "Efter ett mål stick"
- Ställ in timern till fem minuter, tryck på start och placera världen i slutet av målet stick i buren.
- Så snart som musen visar intresse för hela världen, klickar och presentera belöningen intill jordklotet (figurerna 4 och 5).
- Belöna musen endast efter det berör hela världen med sin näsa.
- När musen har kopplat den utförda åtgärder för att belöningen, ändra positionen av jordklotet under träningspasset (Figur 6).
- Vänta musen för att möta denna sista utmaning.
- Placera världen i buren.
- Strax innan musen rör om i världen, långsamt och försiktigt ändra positionen av jordklotet med 1 cm. Klicka och belöna om musen har passerat distans och berör hela världen.
- Upprepa denna procedur tills musen följer på ett tillförlitligt sätt.
- Sakta förlänga avståndet musen har att passera.
- Träningspass vecka 3: "Efter målet stick till försöks hand"
- Placera en hand i utbildningen bur medan du håller klickern / target stick kombination och belöningen med den andra handen.
- Ställ in timern till fem minuter, tryck på start och placera världen i slutet av målet pinne bredvid handen.
- Så snart som musen visar intresse för hela världen, klickar och presentera belöningen intill jordklotet.
- Så snart musen har uppfyllt denna utmaning, flytta jordklotet flera steg närmare till handen.
- Placera världen på handflatan. Klicka och belöna när musen sitter på handflatan (Figur 7).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den första och även en av de viktigaste stegen var fastställandet av en lämplig mat belöning. Därför mössen erbjuds olika typer av nötter, en sockerlösning, marmelad, och olika typer av choklad i en petriskål (Figur 1). Enligt vår erfarenhet, de möss visade en uppenbar preferens för vit choklad. Därför använde vi vit choklad för alla fortbildningsprocesser.
Den egentliga utbildningen genomfördes med en kohort av 12 BALB / c inavlade möss av vardera könet. Alla möss var mycket intresserade av utbildningen. För utvärdering av utbildning framgång, vi kontrolleras för att kunna utföra det önskade beteendet: "efter målet stick" (Figur 4). De allra flesta av de utbildade möss-alla honmöss och 83% av hanmöss-följt målet pinne (Figur 8). Honmöss uppvisade en höger motivation för träning i allmänhet och utfört respektive beteende med en högre frekvens under träningen. Efter att ha avslutat 4 dagars utbildning, följt honmöss målet stick med ett medelvärde på 64 gånger per 5 min, medan hanmöss visas detta beteende endast 50 gånger per 5 min. 5 min, var uppgiften "följande i handflatan" framförd i genomsnitt 55 gånger av honmöss och 35 gånger av hanmöss (Figur 9).
För att kontrollera om utbildningen hade en positiv effekt på välbefinnandet av utbildade möss utvärderade vi tolerans mot manipulationer efter avslutad utbildning. Därför analyserade vi ångestrelaterade beteenden medan mössen singlehandedly spända (dvs att ta tag i nackskinnet och basen av svansen med en hand) under 15 s. Spontan urinering, avföring och läte registrerades. En otränad men försiktigt hanteras cohort av 12 BALB / c-inavlade möss av varje kön fungerade som en kontrollgrupp. Utbildade möss visade en signifikant lägre frekvens av ångest relaterade beteenden än otränade möss. (Figur 10). Liknande resultat erhölls vid inspelning av vokalisering kopplad till hantering när de utför den Morris Water Maze Test (figurerna 11 och 12). Den utbildade möss pep betydligt mindre än den otränade möss (figur 11) och det totala antalet av gnissel per squeaking mus var signifikant reducerad. För att ytterligare utvärdera denna fråga, analyserade vi den flytande beteende under Morris Water Maze Test. Flytande beteende under Morris Water Maze Test beskrivs som tidsperioder när mössen inte simma, men är bara flyter på ytan. Detta depressionsrelaterade flytande beteende visade sig vara betydligt mindre i den utbildade gruppen (Figur 12).
Figur 1. Framläggande av möjliga belöningar. Sex positioner för presentation av belöningar är markerade i en petriskål.
Figur 2. Ställning mus tunneln. För att öka sannolikheten av musen kommer in i tunneln, är tunneln placeras bredvid en bur väggen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. Presentera belöningen. Lämpligt läge för att presentera belöning utanför änden av tunnel visas. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4. Utbildning framgång. En utbildad mus följer målet stick samtidigt som utbildas. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5. givande. En mus belönas bredvid målet stick under träningspasset. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 6. Alternating Target Stick positioner i den andra veckan av träning. Positionerna för utbildningen stick anges i denna schematiska ritning. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 7. Utbildning framgång. En mus har följt målet stick på hand tränare. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 8. Framgång för Training protokollet. En kohort av 12 BALB / c inavlade stammen möss av båda könen var utbildad. I slutet av träningspasset vecka 2: "Efter ett mål pinne," alla honmöss och 83% av hanmöss framgångsrikt övervann utmaningen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 9. Repetitioner för respektive beteende efter en veckas träning. En kohort av 12 BALB / c uppfödda möss av båda könen var utbildad. På den sista dagen av träningspass vecka 2: "Efter ett mål stick" och 3: "Efter målet stick till hand", var upprepningar av respektive beteende räknas under en 5-minuters träningspass. I båda veckorna, honmöss deplacementAyed den stärkta beteende med en betydligt högre frekvens än hanmöss ( "Target stick": 63,92 ± 3,72, p = 0,0300; "On hand": 54,92 ± 4,01, p = 0,0069). Frekvensen av den förstärkta beteende inte varierar kraftigt mellan honmöss från vecka två till vecka tre. Men hanmöss visade en signifikant minskning av upprepningar från vecka två till vecka tre ( "Target stick": 50,42 ± 4,48, "On hand": 35,92 ± 5, p = 0,0408). Ett Mann-Whitney U-test utfördes. Resultaten av data uttrycktes som medelvärde ± SEM Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 10. Visas beteende utlöst av Scruff Holding. En kohort av 12 BALB / c inavlade möss av varje s ex utbildades efter klickerträning protokollet. En otränad men försiktigt hanteras kohort av 12 BALB / c inavlade möss av varje kön fungerade som en kontrollgrupp. Mössen singlehandedly spända (dvs att ta tag i nackskinnet och basen av svansen med en hand) under 15 s. Spontan urinering, avföring, och läte registrerades. Det fanns en djupgående skillnad mellan det visade beteendet hos den utbildade och kontrollgruppen. Utbildade möss visade alla beteenden med en betydligt lägre frekvens än otränade möss. ( "Urinering": p <0,001; "Defecation": p <0,001; "läte": p <0,001). Ett Mann-Whitney U-test utfördes. Kolonnerna är uttryckta som procent av alla testade möss. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 8 "src =" / filer / ftp_upload / 55415 / 55415fig11.jpg "/>
Figur 11. Visas Beteenden Under Morris Water Maze Test. En kohort av 12 BALB / c inavlade möss av båda könen var utbildad efter klickerträning protokollet. En otränad men försiktigt hanteras kohort av 12 BALB / c inavlade möss av varje kön fungerade som en kontrollgrupp. En Morris Water Maze Test utfördes med alla möss efter den tredje veckan i utbildning. Flytande beteende och vokalisering kopplad till hantering registrerades. Flytande beteende inträffade signifikant mindre i tränade möss (p <0,001). Vidare fanns det en stor skillnad i den vocalization av utbildade och kontrollgruppen. Tränade möss pep betydligt mindre när de hanteras än möss av otränade kontrollgruppen (p <0,001). Ett Mann-Whitney U-test utfördes. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 12. Förekomst av Squeaks per mus. En kohort av 12 BALB / c inavlade möss av båda könen var utbildad efter klickerträning protokollet. En otränad men försiktigt hanteras kohort av 12 BALB / c inavlade möss av varje kön fungerade som kontrollgrupp. En Morris Water Maze Test utfördes med alla möss efter den tredje veckan i utbildning. Den vokalisering kopplad till hanteringen av mössen registrerades. Otränade möss knarrade betydligt oftare än utbildade möss. Otränade möss visas vocalization 1,167 ± 0,7 gånger och otränade möss 4.071 ± 0,83 gånger. Ett oparat t-test med Welch korrigering utfördes. Resultaten av data uttrycktes som medelvärde ± SEM Klicka här för att se en större version av denna siffra. <p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1">
Figur 13. Ytterligare applikationer. En mus följer ett mål pinne att passera en bro från en bur till en annan. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ett effektivt genomförande av klickerträning protokollet med en kohort av 12 BALB / c inavlade möss av båda könen visade sig vara okomplicerad. Tidigare studier har bekräftat effektiviteten av klickerträning med flera arter, och vi utökat detta till möss. Eftersom möss är de lägst utvecklade däggdjuren bland försöksdjur, deras förmåga ofta underskattas. Därför är att utbildning framgång skulle kunna uppnås med nästan alla möss mest överraskande aspekten av data.
Ett viktigt steg i detta protokoll är tidpunkten för den andra förstärkare, vilket är mycket viktigt att upprätta en förbindelse mellan den visade beteende och armeringen. Eftersom möss är mycket upprörd, är det lite svårt att markera en exakt prestanda medan de scampering runt. Ju mer erfarna tränare är, kan uppnås snabbare utbildning framgång. Vi observerade att mössen lärde ganska snabbt, även med oerfaren tågers. Även små misstag kan kompenseras inom ramen för den klickerträning protokollet. Vanliga felkällor ingår förstärker fel beteende och bristande intresse för mat belöning efter att ha klickat.
En okontrollerbar faktor är den individuella karaktär av varje mus. Även om denna studie genomfördes med inavlade möss, födda och uppvuxna under samma förhållanden, utvecklar de en mängd olika karaktärer. På grund av tidigare forskning och våra egna empiriska data, vi vet att detta inkluderar olika smaker, olika uttryck för aptit, och olika prospekterings beteende 29, 30. Den första kritiska steget var att hitta en lämplig mat belöning. Mössen erbjöds olika typer av nötter, en sockerlösning, marmelad, och olika typer av choklad. För mössen i denna studie, vit choklad visade sig vara den mest lämpliga belöning. Framgången för detta protokoll beror på interest av mössen i utbildning. Om något annat väcker deras intresse mer, utbildning når sina gränser. Ju mer utrustning som har lagts till buren för att uppfylla ett träningspass, desto mindre mössen deltog i utbildningen. Avskaffandet av alla uppseendeväckande objekt i omgivningen är viktigt (t.ex. lämnar även en liten mängd strö i buren hindra möss från grävande). Ibland mössen få mer intresse i träning efter en tillvänjning till den nya miljön i flera minuter.
Skonsam hantering protokoll redan beräknats för att gynna välbefinnandet hos möss som behandlats amicably 9, 10, 11. Resultaten av föreliggande studie indikerar att en närmare människa-djur förhållande bidrar till mus-tolerans mot behandlingar. Under manipulation, dresserade djur visade färre ångestrelaterade beteenden (i.e., urinering, avföring, och läte) 31. I Morris Water Maze test, otränade men försiktigt hanteras möss uttryckte en signifikant högre prevalens av flytande beteende. Utbildade möss visade mindre av denna depressionsrelaterade beteende 32. Det kan hävdas att de positiva resultaten berodde på ett ökat välbefinnande i de utbildade möss.
En begränsning med denna studie är att endast en stam av inavlade möss studerades. På grund av höga beteendemässiga skillnader mellan olika stammar av möss, ytterligare inavlade stammar, liksom avlade stammar bör undersökas 29. I ytterligare studier, kompletterande information om mus välbefinnande, såsom en hel beteende batteri, fysiologiska data (t.ex. kortikosteron nivåer), eller effekterna av träning på hjärnans utveckling, ska samlas.
Ytterligare tillämpningar av klickerträning kan hjälpa in de sanitära förhållandena i djuranläggningar förbättras. Genom att tillämpa klickerträning protokollet lyckades vi lära möss att följa ett mål pinne och att korsa en bro från en bur till en annan (figur 13). Om denna teknik är fulländad, gör det manuellt buren föränderliga onödig. Dessutom kan möss möjligen tränas att frivilligt gå på mätutrustning (t.ex. skala eller beteende områden). Detta skulle kunna ge ett tillförlitligt skydd mot anthropozoonotic smittspridning, som direktkontakt med djuren kommer inte längre att behövas.
Positiv förstärkning utbildning rekommenderas för djur i fångenskap, eftersom det bidrar till deras mentala hälsa 33. Om möss upplever en hög nivå av välbefinnande, visar de några individuellt olika copingstrategier. Klickerträning därför gör en anmärkningsvärt bidrag till 3RS, som tidigare arbete visar att en minskning av variaheten av möss fenotyper leder till ett minskat antal djur som krävs för att uppfylla statistikkraven 27. Denna studie har visat att klickerträning i möss korrelerar starkt med en minskad rädsla för människan möss interaktioner och tändstickor resultat som observerades i tidigare studier med olika arter 34. Klickerträning har ytterligare potential, eftersom det kan anses kognitiv anrikning. Den breda genomförande av positiv förstärkning utbildning i försöksdjursanläggningar kan ge ett värdefullt bidrag till 3R-principen, eftersom det förfinar hållande och biomedicinsk forskning av möss.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Lid for open housing | Tecniplast | GM500LID117 | |
| SealSAfe Plus top for open housing | Tecniplast | GM500400SU | |
| Type II long, filter top cages | Tecniplast | GM500PFSPC | |
| Aspen bedding material | Lab & Vet Service GmbH | H0234-300 | Environmental enrichment |
| Red polycarbonate Mouse House | Tecniplast | ACRE011 | Environmental enrichment |
| Tissue papers | Tork, SCA Hygiene Products GmbH | 290179 | Environmental enrichment |
| Food - ssniff M-H Extrudat | ssniff | V1126-000 | ad libitum |
| Target Stick with Clicker | Trixie | 2282 | |
| PVC Tube (Tunnels) | Thyssen Krupp | RTPVCU04003005 | |
| White Chocolate/ white chocolate cream | Company doesn't matter, preferable organic quality | ||
| Forceps | FineScienceTools | e.g. 11150-10 | Or any other tool to fixate chocolate |
| Prism Version 6.0 for Windows | GraphPad Software |
References
- Russell, W. M. S., Burch, R. L. The Principles of Humane Experimental Technique. , Methuen and Co., Ltd. 25-27 (1959).
- European Commission. Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes. Official Journal of the European Union. , (2010).
- Balcombe, J. P., Barnard, N. D., Sandusky, C. Laboratory routines cause animal stress. Contemporary topics in laboratory animal science / American Association for Laboratory Animal Science. 43 (6), 42-51 (2004).
- Meijer, M. K., Sommer, R., Spruijt, B. M., van Zutphen, L. F. M., Baumans, V. Influence of environmental enrichment and handling on the acute stress response in individually housed mice. Laboratory animals. 41 (2), 161-173 (2007).
- Gouveia, K., Hurst, J. L. Reducing mouse anxiety during handling: effect of experience with handling tunnels. PloS one. 8 (6), e66401 (2013).
- Meaney, M. J., Diorio, J., et al. Early environmental regulation of forebrain glucocorticoid receptor gene expression: implications for adrenocortical responses to stress. Developmental neuroscience. 18 (1-2), 49-72 (1996).
- Gärtner, K., Büttner, D., Döhler, K., Friedel, R., Lindena, J., Trautschold, I. Stress response of rats to handling and experimental procedures. Laboratory animals. 14 (3), 267-274 (1980).
- Izumi, J., Hayashi-kuwabara, Y. U., Yoshinaga, K., Tanaka, Y., Ikeda, Y. Evidence for a Depressive-like State Induced by Repeated Saline Injections in Fischer 344 Rats. Nature. 57 (4), 883-888 (1997).
- Fridgeirsdottir, G. A., Hillered, L., Clausen, F. Escalated handling of young C57BL/6 mice results in altered Morris water maze performance. Upsala journal of medical sciences. 119 (1), 1-9 (2014).
- Heredia, L., Torrente, M., Domingo, J. L., Colomina, M. T. Individual housing and handling procedures modify anxiety levels of Tg2576 mice assessed in the zero maze test. Physiology and Behavior. 107 (2), 187-191 (2012).
- Maurer, B. M., Döring, D., Scheipl, F., Küchenhoff, H., Erhard, M. H. Effects of a gentling programme on the behaviour of laboratory rats towards humans. Applied Animal Behaviour Science. 114 (3-4), 554-571 (2008).
- Skinner, B. F. How to Teach Animals. Scientific American. 185, 26-29 (1951).
- Bailey, R. E., Gillaspy, J. A. Operant psychology goes to the fair: Marian and Keller Breland in the popular press, 1947-1966. The Behavior Analyst. 28 (2), 143-159 (2005).
- McGreevy, P. D., Boakes, R. A. Carrots and sticks: principles of animal training. , Cambridge University Press. (2007).
- Gillis, T. E., Janes, A. C., Kaufman, M. J. Positive reinforcement training in squirrel monkeys using clicker training. American journal of primatology. 74 (8), 712-720 (2012).
- Schapiro, S. J., Bloomsmith, M. A., Laule, G. E. Positive reinforcement training as a technique to alter nonhuman primate behavior: quantitative assessments of effectiveness. Journal of applied animal welfare science: JAAWS. 6 (3), 175-187 (2003).
- Martin, L., Iceberg, E. Quantifying Social Motivation in Mice Using Operant Conditioning. Journal of visualized experiments : JoVE. (102), e53009 (2015).
- Sclafani, A., Ackroff, K. Operant licking for intragastric sugar infusions: Differential reinforcing actions of glucose, sucrose and fructose in mice. Physiology and Behavior. , 115-124 (2016).
- Bathellier, B., Tee, S. P., Hrovat, C., Rumpel, S. A multiplicative reinforcement learning model capturing learning dynamics and interindividual variability in mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (49), 19950-19955 (2013).
- Clark, F. E. Can cognitive challenge enhance the psychological well-being of large-brained mammals in zoos? [unpublished doctoral thesis]. , Royal Veterinary College and Institute of Zoology. London, UK. (1999).
- Shettleworth, S. J., et al. Cognition, evolution, and behavior. , Oxford University Press. Oxford, UK. (2010).
- Hagen, K., Broom, D. M. Emotional reactions to learning in cattle. Applied Animal Behaviour Science. 85 (3-4), 203-213 (2004).
- Ernst, K., Puppe, B., Schön, P., Manteuffel, G. A complex automatic feeding system for pigs aimed to induce successful behavioural coping by cognitive adaptation. Applied Animal Behaviour Science. 91, 205-281 (2005).
- Puppe, B., Ernst, K., Schn, P. C., Manteuffel, G. Cognitive enrichment affects behavioural reactivity in domestic pigs. Applied Animal Behaviour Science. 105 (1-3), 75-86 (2007).
- Zebunke, M., Puppe, B., Langbein, J. Effects of cognitive enrichment on behavioural and physiological reactions of pigs. Physiology and Behavior. 118, 70-79 (2013).
- Manteuffel, G., Langbein, J., Puppe, B. Increasing farm animal welfare by positively motivated instrumental behaviour. Applied Animal Behaviour Science. 118 (3-4), 191-198 (2009).
- Bayne, K., Würbel, H. The impact of environmental enrichment on the outcome variability and scientific validity of laboratory animal studies. Science Direct. 33 (1), 273-280 (2014).
- Hurst, J. L., West, R. S. Taming anxiety in laboratory mice. Nature Methods. 7 (10), 825-826 (2010).
- Crawley, J. N. What's Wrong With My Mouse?. , (2007).
- Loos, M., Koopmans, B., et al. Within-strain variation in behavior differs consistently between common inbred strains of mice. Mammalian genome : official journal of the International Mammalian Genome Society. 26 (7-8), 348-354 (2015).
- Seibenhener, M. L., Wooten, M. C. Use of the Open Field Maze to Measure Locomotor and Anxiety-like Behavior in Mice. Journal of visualized experiments : JoVE. (96), e1-e6 (2015).
- Can, A., Dao, D. T., Arad, M., Terrillion, C. E., Piantadosi, S. C., Gould, T. D. The Mouse Forced Swim Test. Journal of Visualized Experiments. , 4-8 (2011).
- Clayton, L. A., Tynes, V. V. Keeping the Exotic Pet Mentally Healthy. Veterinary Clinics of North America: Exotic Animal Practice. 18 (2), 187-195 (2015).
- Ward, S. J., Melfi, V. The implications of husbandry training on zoo animal response rates. Applied Animal Behaviour Science. 147 (1-2), 179-185 (2013).
