Summary
Dit video artikel vindt u een uitgebreide demonstratie van de procedures die nodig zijn om met succes de alvleesklier van een muis door dissectie voor histologisch analyse en metabole profilering.
Abstract
We hebben onderzocht de alvleesklier specifieke transcriptiefactor, 1a cre-recombinase; Lox-stop-lox-Kristen rat Sarcoom, glycine aan asparaginezuur op de 12 codon (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) stam muis als een model van menselijke pancreatic kanker. Het doel van onze lopende onderzoeken is het identificeren van de roman metabole biomarkers van pancreatic kanker progressie. Wij hebben uitgevoerd metabole profilering van urine, ontlasting, bloed, en alvleesklier weefsel extracten, evenals histologische analyses van de alvleesklier om de progressie van kanker te regisseren. De alvleesklier muis is niet een welomschreven solide orgel als bij de mens, maar is veeleer een diffuus gedistribueerde weke delen, dat is niet gemakkelijk geïdentificeerd door personen onbekend met interne anatomie van de muis of door personen die weinig of geen ervaring uitvoeren hebben muis orgel dissecties. Het doel van dit artikel is bedoeld als een gedetailleerde stapsgewijze visuele demonstratie bij beginners in de verwijdering van de alvleesklier muis door dissectie. Dit artikel moet vooral waardevol voor studenten en onderzoekers nieuw onderzoek waarvoor het oogsten van de alvleesklier muis door dissectie voor metabole profilering of histologische analyses.
Introduction
De muis heeft ontpopt als een belangrijke diermodel voor menselijke pancreatic kanker1,2. In de Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + muismodel, de Kristen rat Sarcoom (K-Ras) oncogen is geactiveerd uitsluitend in de alvleesklier, resulterend in de inleiding van voorstadia laesies in de alvleesklier, bekend als de alvleesklier geest neoplasias (PanINs), dat de vooruitgang aan alvleesklier ductaal adenocarcinomas, kortweg PDACs3. Deze muis modelsysteem biedt een van de beste beschikbare dierlijke modellen voor menselijke alvleesklierkanker4,5, met het bijkomende voordeel dat de PanINs ontstaan binnen de eerste vijf maanden van het leven en vaak vooruitgang PDAC binnen een Eén jaar4,5, overwegende dat alvleesklierkanker vaakst bij de mens 60-70 jaar oud optreedt.
Extractie van de alvleesklier door dissectie van de Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + muizen op verschillende leeftijden voorziet in gedetailleerde longitudinale histopathologisch onderzoek van de ontwikkeling van kanker in de alvleesklier, variërend van de vroegste stadia van de PanIN de progressie tot PDAC3,4 , 5. de alvleesklier oogsten op leeftijden variërend van vijf tot vijftien maanden kan ook worden gebruikt om te bereiden weefsel extracten te karakteriseren van mondiale veranderingen in de alvleesklier4 metabolisme die zich tijdens de overgang van gezond naar zieke weefsel voordoen 6,7.
Dit artikel presenteert een complete visuele gids voor de stappen die nodig zijn voor het uitvoeren van een muis alvleesklier extractie en worden richtlijnen gegeven voor de opslag van een alvleesklier voor verdere analyse. Deze handleiding zullen even waardevol zijn voor individuen uitvoeren van onderzoek naar andere alvleesklier ziekten, met inbegrip van type I diabetes, en met name nuttig voor studenten en onderzoekers nieuw voor onderzoek waarbij oogsten moeten van het gebruik van de alvleesklier van de muis dissectie voor metabole profilering of histologische analyses.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
de procedures uitgevoerd in de video hieronder beschreven zijn goedgekeurd door de institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC) aan de Universiteit van Miami.
1. voorbereiding en stimulans Test
- stellen twee verschillende gebieden voor de chirurgische ingreep, de operatietafel en de tabel na operatie. Etappe van beide gebieden met alle materialen en keukengerei die nodig zijn.
- De operationele fase tabel onder een geventileerde kap. De tabel met de apparatuur op een wijze waarmee de continue en onbelemmerde uitoefening van de procedure regelen.
- Tot stand brengen van een postoperatieve tabel in dezelfde kamer en in de buurt van de hoofdtabel van operatie. Beide tabellen als steriele omgevingen gedurende de hele procedure handhaven.
- Plaats van de volgende handelingen uit op de operatietafel leveringen: een glazen pot met deksel, een tube van 15 mL, één paar chirurgische schaar, een squeeze fles van 70% ethanol, twee schuim platen, twee pincet, twee 1 mL 21 gauge spuiten, twee buizen van 50 mL, een centrifugebuis , een cryogene flacon, vier chirurgische pads, tien pinnen, een dispenser van steriliserende doekjes en een container slijpsel.
- Plaats de volgende leveringen op de tafel na bewerking: een analytische balans, een 4 L dewar van vloeibare stikstof, een ondiepe brede mond dewar, een drijvende microtube rack, één paar chirurgische scharen, twee pincet, vier cryogene flesjes en een dispenser voor steriele doekjes.
- Vul een 50 mL en één tube van 15 mL tot 75% volume met formaline.
- Met behulp van een pin in elke hoek, brengt een chirurgische aanvullen tot een geschatte 30 x 30 cm foam board om te dienen als de dissectie van bestuur. Gebruik de resterende vier pinnen tijdens de operatie. Bereiden van een kleinere Raad van bestuur van schuim met een chirurgische pad voor het overbrengen van de organen naar de tabel post-op.
Let op: Isofluraan (99,9%) is een giftige chemische, en in een vent kap moet worden gebruikt om ervoor te zorgen het maximale niveau van veiligheid van het opruimen van afval verdoving gas 8. Aanvullende informatie over de risico's voor onderzoekers die is gekoppeld aan het gebruik van de methode van de open neerzetten met behulp van Isofluraan kan worden gevonden in een artikel door Taylor en Mook 8. - Plaats een chirurgische pad in de glazen pot en de weken met een paar druppels van Isofluraan (99,9%) en plaats een papieren handdoek over de bovenkant om te voorkomen dat direct contact van de muis met de Isofluraan. Ook het gebruik van een chirurgische pad lijn van de resterende buis en geniet met een paar druppels van Isofluraan en plaats een extra pad over de bovenkant om te voorkomen dat rechtstreeks contact tussen de muis en de Isofluraan.
- Pour vloeibare stikstof in de ondiepe brede mond dewar totdat het maximum vullen lijn is bereikt.
- Plaats de muis geselecteerd voor dissectie in de narcose kamer, dat wil zeggen de glazen pot met een zeem gedrenkt met een paar druppels Isofluraan (99,9%) bedekt met deksel, ~ 1 min.
Opmerking: Deze tijd varieert van muis tot muis. Zodra de muis bewusteloos is, verwijderen uit de kamer en plaats deze op het operationele bord. - Oriënteren de muis zodat het liegt ventrale zijde omhoog en met haar hoofd weg van de wetenschapper wees. Plaats van het hoofd in de buis bekleed met een chirurgische pad gedrenkt met een paar druppels van Isofluraan (99,9%) en een stimulans test uitvoeren door een snuifje van de voet om ervoor te zorgen dat de muis niet reageert op prikkels.
- Als deze test mislukt en de muis op de voet snuifje proef antwoordt, herhaalt u stap 1.8.
2. Eerste snede hart doorprikken en euthanasie
- Pin van de ledematen van de muis aan de chirurgische schuim van bestuur en de ventrale zijde van de muis met 70% ethanol nat.
- Knijpen de vacht/huid in de buurt van de urethrale opening met een tang en trek iets omhoog. Maak een incisie met de chirurgische schaar via de buikholte van de urethrale openstelling, de middellijn beginnend en eindigend op de kin.
- In de buurt van het beginpunt van de oorspronkelijke incisie, één zijde van de vacht/huid te grijpen met de pincet en maken een andere snede met de schaar naar beneden en diagonaal naar de achterste poot.
- Herhaal dit op dezelfde wijze aan de overkant.
Opmerking: De vacht/huid maken een grotere opening naar beneden kan worden gespeld, maar is niet noodzakelijk.
- Zoek het hart en het hartzakje, oftewel de OSS rond het hart, om te voorkomen dat de verstopping van de naald van de spuit verwijderen.
- Pak het hartzakje met de pincet en snijd het met de schaar. Uitvoeren van het hart-lek door zorgvuldig de naald van de spuit in het kloppend hart en langzaam beginnen te trekken van de plunjer.
- Voor optimale bloedinzameling, gebruiken de plunjer van de naald om te bootsen de pompwerking van het hart en voorkomen te snel tekenen.
Opmerking: Doorgaans ongeveer 1 mL bloed kunnen worden verzameld. - Na het voltooien van de collectie van het bloed, het bloed te verjagen in de centrifugebuis en gooi de injectiespuit in de container slijpsel.
- Na de punctie van het hart wordt uitgevoerd, euthanasie uitvoeren door het verwijderen van de bijlagen die het hart aansluiten.
Opmerking: Heparine, een anti-coagulant, is niet toegevoegd aan de spuit in deze procedure voorafgaand aan de punctie hart om het bloed te stollen voor serum collectie in deze specifieke studie. Echter, als de onderzoeker voorkomen dat de bloedstolling wilde voor het verzamelen van plasma, heparine konden worden toegevoegd aan de spuit vóór het hart-lek.
- Als de studie genotypering van de muis omvat, een gedeelte van het oor met de schaar snip en plaats in een centrifugebuis voor de verificatie van een genotype.
3. extractie van de pancreas
- Zoeken de maag aan de linkerzijde van de muis. Begin zachtjes (teneinde scheuren) scheiden van de alvleesklier van de maag en de twaalfvingerige darm met behulp van twee pincet.
Opmerking: Wanneer het loskoppelen van de alvleesklier van de maag en darmen, het is heel belangrijk dat de verlostang zachtjes begeleiden de alvleesklier weefsel uit de buurt van de organen te niet verpletteren of scheur de alvleesklier met de pincet zijn gebruikt.- Blijven om te scheiden van de alvleesklier van de dunne darm jejunum en ileum secties, en tot slot van het caecum van de dikke darm.
- Op het caecum, verplaatsen de verlostang en afscheiding van de alvleesklier langs de resterende colon naar het rectum blijven.
Opmerking: Op dit punt, het is handig om te knippen en het gedeelte van de maag naar de regio van de dikke darm onmiddellijk voorafgaand aan het rectum verwijderen. - Zoek de alvleesklier en milt gekoppeld. Schuif de alvleesklier naar de rechterkant van de muis. De resterende verbindingen tussen de alvleesklier en de borstholte scheidt met de Tang volledig los van de alvleesklier en aaneensluitend milt.
- Verwijderen van de alvleesklier en het verspreid voor onderzoek. Laat de milt gekoppeld aan de alvleesklier voor identificatiedoeleinden.
- Verwijderen alle bindweefsel, vet en mesenterische weefsel uit de alvleesklier.
Opmerking: Dit weefsel is witter in kleur en dus gemakkelijk kan worden onderscheiden van de alvleesklier weefsel dat is pinker in kleur. Dit is vooral belangrijk als de hele alvleesklier moet worden verwijderd. Bijvoorbeeld, als de alvleesklier moet worden afgewogen en vergeleken met lichaamsgewicht of tussen groepen van dieren. In de Ptf1a cre / +; LSL-Kras G12D / + muismodel, specifiek in de oudere maanden hard vezelig alvleesklier weefsel aanwezig kon zijn. In dit geval moet zorgvuldige verwijdering van de alvleesklier worden uitgevoerd, zoals de darmen kunnen worden geïnterlinieerd in tumor weefsel. In geavanceerde gevallen, abnormale milt en lever weefsel kunnen ook aanwezig zijn.
- Verwijderen alle bindweefsel, vet en mesenterische weefsel uit de alvleesklier.
- Desgewenst verwijderen andere organen op dit punt.
4. gegevensverzameling en -opslag
- na extractie van de organen, de monsters te verplaatsen naar de postoperatieve ruimte voor behoud.
- Wegen elk orgaan en plaats hen in hun respectieve cryogene flacon.
Opmerking: langs with de massa van elke steekproef, onregelmatigheden moeten worden geregistreerd voor toekomstige verwijzing. - Zodra de organen worden gewogen, plaats ze in de vloeibare stikstof voor module bevriezing.
- Na module bevriezing, slaan de organen bij-80 ° C voor langetermijnopslag.
- Plaatst de formaline opgeslagen monsters op de top van de Bank 's nachts en de volgende ochtend veranderen hun oplossing van formaline naar 70% ethanol.
Opmerking: Deze monsters moeten worden bewaard bij 4 ° C voor langetermijnopslag. - Voor langdurige opslag, bevriezen de punch van het bloed en oor bij-80 ° C.. Toestaan voor de verzameling van het serum uit het bloed, het bloed te stollen voor 30 min dan het centrifugeren. Het gedeelte van de serum met behulp van een precisiepipet verwijderen en op te slaan op -80 ° C.
5. Clean Up
- Sanitize alle de dissectie tools met de steriliserende doekjes. GLB de buis bekleed met de Isofluraan geweekt chirurgische pad. Vervang de chirurgische pad op het bord van schuim met een verse chirurgische zeem. Beschikken over de delen van de muis die niet werden verzameld per de faciliteit ' s dierlijke verwijdering beleid.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figuur 1 toont een overzicht van de operationele omgeving en Figuur 2 toont de post operatie gebied. Terwijl deze instelling de minimale hoeveelheid materiaal biedt en enscenering, individuen verkiezen kunnen om te veranderen dit best aan individuele behoeften. Het protocol moet worden geoptimaliseerd volgens de specifieke behoeften van het experiment. Deze procedure wordt uitgevoerd op een wijze die het leven van een muis, die goede euthanization9beëindigt. Wanneer de onderzoeker klaar is, is de muis in de anesthesie-zaal met de Isofluraan doordrenkte pads (Figuur 3) geplaatst.
Zodra de muis bewusteloos is, verwijderen van de muis en plaats het dorsale zijde op het bord. Een teen-snuifje-procedure moet worden uitgevoerd om ervoor te zorgen dat de muis niet reageert op pijn (Figuur 4). 70% ethanol te steriliseren van de oorspronkelijke incisie gebied toepassen. De loting van de terminal bloed moet eerst plaatsvinden voorafgaand aan de verwijdering van de alvleesklier, om voldoende bloed ophalen. Voorafgaand aan de verwijdering van het bloed, moet het hartzakje worden verwijderd om te voorkomen dat de verstopping van de 21 G naald openen. Na het voltooien van de terminal bloed trekken, het hart als een secundaire methode voor euthanasie is vrijstaand en de alvleesklier wordt dan verwijderd.
Beginnen met het zoeken van de maag, die een goed uitgangspunt voor alvleesklier verwijderen (Figuur 5 vormt). Opmerking: Moet Extreme voorzichtigheid worden betracht tijdens het verwijderen van de alvleesklier, die een delicate en kwetsbare weefsel is, en daarom moeten alle bewerkingen worden uitgevoerd met zachte kracht. Met behulp van Tang, de dissectie allereerst beginnen te Trek voorzichtig aan de alvleesklier uit de buurt van de maag en blijven om te scheiden van de alvleesklier weefsel van het buitenste slijmvlies van het maagdarmkanaal (GI) die werken vanuit de maag naar de twaalfvingerige darm, het jejunum en het ileum ( Figuur 6). Zodra het caecum wordt bereikt, wordt gemakkelijker verwijderen van de alvleesklier bereikt door de herpositionering van de verlostang zodat een pincet het caecum houdt en de andere verlostang wordt gebruikt om te blijven om te scheiden van de alvleesklier van de dikke darm (Figuur 7). Na verwijdering van de dikke darm, de alvleesklier wordt geplaatst aan de rechterzijde van de muis en eventuele overige bijlagen zijn afgehakte()Figuur 8).
De alvleesklier moet worden woeien uit voor inspectie en eventuele afwijkingen moeten worden geregistreerd (Figuur 9). In de Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + stam, muis de alvleesklier kan potentieel bevatten een geharde tumor (Figuur 10). Andere organen moeten ook worden onderzocht voor potentiële metastase. Zodra de alvleesklier is verwijderd, het moet worden afgewogen en het gewicht geregistreerd. Een deel van de alvleesklier moet module-ingevroren in vloeibare stikstof voor toekomstige metabole profielanalyse of andere testen en een gedeelte van de alvleesklier in formaline voor toekomstige histologische analyse moeten worden geplaatst. Figuur 11 ziet u dat de eerste opslag van de verschillende organen verzameld uit de dissectie voor gebruik in latere analyse. De organen die door de dissectie verzameld en opgeslagen voor verdere studie zal afhangen van de doelstellingen van de individuele onderzoeker.
Weefsel en bloed monsters kunnen worden gebruikt voor histologisch analyses en metabole profilering. Een voorbeeld van de histologische analyse van het weefsel alvleesklier is weergegeven in Figuur 12. Metabole profilering kan worden uitgevoerd op de module-bevroren weefselmonsters en bloedmonster. Representatieve nucleaire magnetische resonantie spectroscopie (NMR) spectra van de hydrofiele en hydrofobe bestanddelen van de alvleesklier weefsel extracten worden weergegeven in Figuur 13 bis en 13 ter, respectievelijk. Een representatieve NMR spectrum verzameld op een steekproef van de serum bereid uit bloed verzameld ten tijde van een terminal bloed trekken procedure is afgebeeld in Figuur 14.
Figuur 1 : Opvoering van het operationele gebied. Algemene lay-out van de juiste tools en werkomstandigheden voor de dissectie. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 2 : Opvoering van na operatie gebied. Algemene lay-out van de juiste tools en bedrijfsomstandigheden voor de postoperatieve procedures. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 3 : Verdoving kamer. Goede omgeving voor verdoving via Isofluraan. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 4 : Onderzoek van de stimulus. De test van de stimulans die wordt uitgevoerd op de muis voorafgaand aan de oorspronkelijke incisie om ervoor te zorgen pijn of ongemak is niet wordt doorstaan. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 5 : Begin van de verwijdering van de alvleesklier. De afdrukstand van de muis die de oorspronkelijke extractie van de alvleesklier, de locatie aangeduid van de verlostang aangeeft. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 6 : Alvleesklier extractie langs de darmen. Proces isoleren van de alvleesklier van het maag-darmkanaal. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 7 : Alvleesklier verwijderen op het Caecum. Herpositionering van de verlostang eenmaal het caecum is bereikt. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 8 : Alvleesklier verwijderen. Plaats de alvleesklier aan de rechterkant van de muis. Eventuele resterende bijlagen moeten worden gesneden als u wilt volledig verwijderen van de alvleesklier. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 9 : Onderzoek naar alvleesklier. De alvleesklier met bijgevoegde milt onderzocht na verwijdering van de muis. Milt is aangegeven met de verticale pijl en de alvleesklier wordt aangegeven door de horizontale pijl. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 10 : Onderzoek naar alvleesklier. De alvleesklier met bijgevoegde milt een alvleesklier tumor onderzocht na verwijdering van de muis weer te geven. Milt is aangegeven met de verticale pijl en de alvleesklier wordt aangegeven door de horizontale pijl. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 11 : Opslag van de organen verwijderd. Juiste opslag van organen en monsters verzameld, voorbereid voor langetermijnopslag en het toekomstige analyse. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 12 : Histologische analyse van weefsel alvleesklier. De Haematoxyline en eosine gekleurd beelden uit weefsel van de alvleesklier. A) normale alvleesklier weefsel van een Ptf1acre /-; LSL-KrasG12D /- controle muis. B) PanIN weefsel uit de alvleesklier van een Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + studie muis. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 13 : Metabole profilering analyse. Eendimensionale proton nucleaire magnetische resonantie spectroscopie (NMR) spectra van A) hydrofiele en B) hydrofobe fase componenten van extracten van de weefsel van de alvleesklier volgend weefsel homogenisering en onderworpen aan de chloroform/methanol extractie. De NMR-spectra werden verworven bij 850 MHz en zijn geschikt voor gebruik in metabole profilering analyses. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 14 : Vertegenwoordiger NMR Spectrum van Serum. Het bloed verzameld door de terminal bloed trekken procedure kan worden gebruikt voor metabole profielanalyse. Dit spectrum toont een typische eendimensionale proton 850 MHz NMR spectrum verzameld op het serum een terminal draw bloedmonster verkregen. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Betekenis ten opzichte van bestaande methoden
Terwijl andere informele video's van muis dissecties bestaan, deze video artikel levert de eerste professionele kwaliteit, peer reviewed, visuele demonstratie van alle gedetailleerde stappen nodig zijn voor de extractie en het oogsten van de alvleesklier muis door dissectie10 . Met de alvleesklier wordt een hoofdorgel voor metabole activiteit en insuline zorgt productie, dissectie en oogsten van de alvleesklier voor het behoud van de fysiologische kenmerken11. Door het isoleren van de alvleesklier, kan toekomstige analyse plaatsvinden op het monster. Deze procedure zorgt voor de vergelijking en de studie van interacties van andere weefsels binnen het hetzelfde organisme binnen hetzelfde tijdsbestek.
Beperkingen van de techniek
De grootste beperking van deze procedure is beëindiging van het leven, de waardoor longitudinale collectie en het bemonstering van meerdere weefselmonsters van de dezelfde muis van de muis. Om het analyseren van trends met betrekking tot leeftijd, geslacht, of andere kwantoren, moet een transversale bevolking worden uitgevoerd, zoals wij gedaan hebben voor onze studie van metabole biomarkers van pancreatic kanker. Een andere beperking van dit protocol is het onvermogen om te pauzeren van de procedure. Zodra de euthanization wordt gestart, moet de procedure in haar geheel worden uitgevoerd.
Kritische stappen binnen het Protocol
Uitvoering van de test van de stimulans door knijpen de achterste poot van de muis is van cruciaal belang om ervoor te zorgen dat de muis humane behandeling ontvangt. Als de muis niet op deze prikkel reageert, kan vervolgens de procedure worden uitgevoerd zoals gepland. Echter moet moet de muis weergeven een verontruste reactie als gevolg van de stimulus-test, de muis worden teruggestuurd naar de verdoving kamer voor een aanvullende periode van tijd en de test herhaald totdat een reactie op de stimulus test12niet wordt nageleefd.
Ook de terminal hart lekke band gevolgd door het verwijderen van de verbindingen naar het hart, onmiddellijk nadat de terminal bloedmonster wordt verzameld als een secundaire methode voor euthanasie zorgt voor het humane offer van de muis. Om ervoor te zorgen een efficiënte bloed-draw, moet de wetenschapper gebruiken een pompende beweging met de spuit die vergelijkbaar is met de hartslag van de muis, waardoor maximale inzameling van bloed voor analyse.
Wijzigingen en probleemoplossing
Schakelen tussen de organen van formaline tot 70% ethanol oplossingen bereidt de organen voor het insluiten proces vereist voor histologisch analyse. Verschillende opslagoplossingen mogelijk vereist moet de wetenschapper wilt uitvoeren van andere experimenten met de organen. Vóór de analyse is het belangrijk te beperken van elke potentiële ontdooien van de organen die zijn opgeslagen in de vriezer-80 ° C voor het behoud van de integriteit van het orgel.
Gebruik van de Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + muismodel minimaliseert het vóórkomen van niet-alvleesklier primaire tumoren en ziekten13. Het is dus belangrijk op te merken van de onregelmatigheden die herkenbaar aan de alvleesklier of andere organen tijdens de dissectie en de weefsel monsters voor analyse zijn.
Toekomstige toepassingen
Oogsten van de alvleesklier muis door dissectie kan voor meerdere soorten analyse te worden uitgevoerd op hetzelfde monster. De meest populaire van deze omvatten, maar zijn niet beperkt tot, fluorescentie microscopie, haematoxyline en eosine histologie, immunohistochemistry, massaspectrometrie en nucleaire magnetische resonantie spectroscopie6,7, 14 , 15. ziekten zoals diabetes, pancreatitis en alvleesklierkanker kunnen worden bestudeerd met behulp van de bovengenoemde16technieken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
MAK erkent steun voor dit werk van de National Institutes of Health / National Cancer Institute verlenen nummer - 1R15CA152985-01A1. Dit project heeft ook ondersteund door de Miami University Undergraduate Research Award Program, de Miami University Doctor-Undergraduate mogelijkheden voor Scholarship Program en de Miami University zomerprogramma geleerden.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Glass Jar | Corning | 3140-150 | The glass jar used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| Lid of Glass Jar | Corning | 9985-150 | The glass jar lid used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| 15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
| Surgical Scissors | Fisher Scientific | 9201 | |
| Squeeze bottle | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
| 100% Ethanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
| Formalin | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Foam Boards | Therapak | 562908 | |
| Forceps | Fisher Scientific | 200205SHN | |
| 1 mL 21G Syringes | BD Biosciences | 309624 | |
| 50 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339652 | |
| 2.0 mL Microcentrifuge Tubes | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
| Surgical Pads | Fisher Scientific | S67011 | |
| T-Pins Length: 2" | Advance Store Products | X32T-05 | |
| Sterilizing Wipes | Professional Disposables International Inc. | Q85084 | |
| Sharps Container | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
| Analytical Balance | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
| 4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
| Shallow Wide Mouth Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
| Floating Microtube Rack | VWR | 60986-100 | |
| Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
| Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
| Liquid Nitrogen | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
| Mouse Kras Strain | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
| Mouse Cre Strain | MMRRC | OOO435-UNC |
References
- Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).
- Jackson-Grusby, L. Modeling cancer in mice. Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).
- Heid, I., et al. Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer. Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).
- Hingorani, S. R., et al. Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse. Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).
- Shi, C., et al. KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin. Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).
- LaConti, J. J., et al. Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma. BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).
- Ludwig, M. R., et al. Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer. Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).
- Taylor, D. K., Mook, D. M. Isoflurane Waste Anesthetic Gas Concentrations Associated with the Open-Drop Method. J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (1), 61-64 (2009).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. A protocol for islet isolation from mouse pancreas. Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).
- Auer, H., et al. The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein. Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).
- Ma, J., Leung, L. S. Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics. Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).
- Ijichi, H., et al. Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-β signaling in cooperation with active Kras expression. Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).
- Abiatari, I., et al. Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer. J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).
- Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data. Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).
- Yadav, D., et al. Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection. Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).
