Summary
Denna video artikel ger en detaljerad demonstration av de förfaranden som krävs för att lyckas ta bort bukspottkörteln från en mus genom dissektion för histologisk analys och metabolisk profilering.
Abstract
Vi har undersökt den bukspottkörteln specifika transkriptionsfaktor, 1a cre-recombinase; LOX-stopp-lox-Kristen råtta sarkom, glycin till asparaginsyra på de 12 kodon (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) mus stam som en modell för mänskliga pankreascancer. Målet för våra studier är att identifiera nya metaboliska biomarkörer för pankreascancer progression. Vi har utfört metabolisk profilering av urin, avföring, blod, och bukspottkörteln vävnad extrakt, samt histologiska analyser av bukspottkörteln att stadium cancer progression. Mus bukspottkörteln är inte en väldefinierad solida organ som hos människor, utan snarare är en diffust distribuerade mjuk vävnad som inte lätt identifieras av individer som är obekanta med musen inre anatomi eller individer som har liten eller ingen erfarenhet utför mus orgel dissektioner. Syftet med denna artikel är att tillhandahålla en detaljerad överläggsgrafer visuell demonstration att vägleda nybörjare i avlägsnandet av mus bukspottkörteln genom dissektion. Denna artikel bör vara särskilt värdefull för studenter och utredarna nya forskning som kräver skörd av mus bukspottkörteln genom dissektion för metabolisk profilering eller histologiska analyser.
Introduction
Musen har vuxit fram som en viktig djurmodell av mänskliga pankreascancer1,2. I Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + musmodell, de Kristen råtta sarkom (K-Ras) onkogen aktiveras uteslutande i bukspottkörteln, vilket resulterar i inledandet av precancerösa lesioner i bukspottkörteln kallas pankreascancer intraepitelial neoplasias (PanINs), att framsteg att pankreas duktal adenokarcinom, vanligen kallad PDACs3. Detta mus modellsystem ger en av de bästa tillgängliga djurmodeller för mänskliga pankreascancer4,5, med den extra fördelen att PanINs dyka upp inom de första fem månaderna av livet och ofta framsteg att PDAC inom en enstaka år4,5, medan Pankreascancer uppstår oftast hos 60-70 år.
Utvinning av bukspottkörteln genom dissektion från Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + möss vid olika åldrar möjliggör detaljerad längsgående Histologisk undersökning av cancerutveckling i bukspottkörteln, alltifrån de tidigaste stadierna PanIN genom progressionen till PDAC3,4 , 5. avverkning bukspottkörteln i åldrar från fem till femton månader kan också användas att förbereda vävnad extrakt att karakterisera globala förändringar i bukspottkörteln4 metabolism som inträffar under övergången från frisk till sjuk vävnad 6,7.
Denna artikel presenterar en komplett visuell guide av de steg som krävs för att utföra en mus bukspottkörteln utvinning och ger riktlinjer för lagring av en bukspottkörtel för vidare analys. Denna guide kommer att vara lika värdefulla för individer som bedriver forskning på andra pankreas sjukdomar, inklusive typ I-diabetes, och bör vara särskilt användbart för studenter och utredarna nya till forskning som involverar skörd av mus bukspottkörteln med dissektion för metabolisk profilering eller histologiska analyser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
förfarandena genomförs i videon och beskrivs nedan har godkänts av den institutionella djur vård och användning kommittén (IACUC) vid Miami universitet.
1. förberedelse och stimulans Test
- upprätta två skilda områden för det kirurgiska ingreppet, operationsbordet och tabellen efter operationen. Stage båda områdena med alla material och redskap som är nödvändiga.
- Steg rörelseresultatet bord under en ventilerad huv. Ordna tabellen med utrustningen på ett sätt som tillåter kontinuerlig och obehindrat prestanda förfarandets.
- Fastställa en postoperativ i samma rum och nära huvudtabellen drift. Behålla båda tabellerna som sterila miljöer under hela förfarandet.
- Plats följande varor på operationsbordet: en glasburk med lock, en 15 mL tub, ett par av kirurgisk sax, en squeeze flaska 70% etanol, två skum styrelser, två pincett, två 1 mL 21 gauge sprutor, två 50 mL rör, ett centrifugrör , en kryogen injektionsflaska, fyra kirurgiska pads, tio stift, en dispenser av sterilisering våtservetter och en avfallsbehållare.
- Placera följande leveranser på tabellen efter operation: en Analysvåg, en 4 L dewar flytande kväve, ett grunt brett mun dewar, en flytande mikrorör rack, ett par kirurgisk sax, två pincett, fyra kryogen injektionsflaskor och en dispenser av sterila våtservetter.
- Fylla en 50 mL och en 15 mL tub till 75% volym med formalin.
- Med en PIN-kod i varje hörn, anbringa en kirurgisk pad till en ungefärlig 30 x 30 cm skum ombord som dissekering styrelsen. Använda de återstående fyra stiften under operationen. Förbereda en mindre skum ombord med en kirurgisk pad att överföra organ till tabellen Post-op.
FÖRSIKTIGHET: Isofluran (99,9%) är en giftiga kemikalier, och bör användas i en vent huva för att säkerställa maximal säkerhetsnivå från rensning av bedövningsmedel rökgaserna 8. Ytterligare information om riskerna till forskare i samband med användning av öppna-släpp metoden med isofluran kan hittas i en artikel av Taylor och Mook 8. - Placera en kirurgisk pad i glasburk och blöt med några droppar av isofluran (99,9%) och placera en pappershandduk över toppen för att förhindra direkt kontakt med musen med isofluran. Likaså använder en kirurgisk pad att rada återstående röret och blöt med några droppar av isofluran och placera en ytterligare pad över toppen för att undvika direkt kontakt mellan musen och isofluran.
- Häll flytande kväve i grunt breda munnen dewar tills maximalt Fyll linje nås.
- Plats med musen som valts för dissekering i anestesi avdelningen, dvs glasburken med en pad indränkt med några droppar isofluran (99,9%) täckt med locket, för ~ 1 min.
Obs: Denna tid varierar från mus till musen. När musen är medvetslös, ta bort den från kammaren och placera den operativa storbildsformat. - Orient musen så att det ljuger ventrala sida upp och med huvudet pekade bort från forskare. Placera huvudet inuti röret kantad med en kirurgisk pad indränkt med några droppar av isofluran (99,9%) och utföra en stimulus test av en fot nypa för att musen är inte svarar på stimuli.
- Om det här testet misslyckas och musen reagerar på foten nypa prov, upprepa steg 1,8.
2. Inledande snitt, hjärtat punktering, och dödshjälp
- fästa musen till den kirurgiska skumgummiplattan lemmar och blöt den ventrala sidan av musen med 70% etanol.
- Nyp i pälsen/huden nära urinrörets med pincett och dra något uppåt. Gör ett snitt med den kirurgiska sax genom bukhålan från urinrörets, upp mittlinjen och slutar på hakan.
- Nära startpunkten av ursprungliga snittet, ta ena sidan päls/hud med tången och gör ett annat snitt med saxen nedåt och diagonalt mot tillbaka tass.
- Upprepa detta på samma sätt på motsatt sida.
Obs: Pälsen/huden kan nålas för att skapa en bredare öppning, men är inte nödvändigt.
- Hitta hjärtat och ta bort hjärtsäck, vilket är sac runt hjärtat, för att undvika igensättning av sprutans nål.
- Greppa hjärtsäck med tången och skär den med saxen. Utföra hjärtat punkteringen av noggrant sätta in sprutans nål i pulserande hjärta och sakta börjar att dra tillbaka kolven.
- För optimal blodinsamling, använd kolven av nålen att efterlikna pumpverkan hos hjärtat och undvika ritning för snabbt.
Obs: Normalt cirka 1 mL blod kan samlas. - Efter avslutad blodinsamling, skingra blod in i centrifugröret och Kassera sprutan i behållaren för vassa föremål.
- Efter hjärtat punkteringen utförs, utföra dödshjälp genom att ta bort bilagor ansluta hjärtat.
Obs: Heparin, ett antikoagulantia, lades inte till sprutan i proceduren innan hjärtat punkteringen så att blodet koagulerar för serum samling i denna särskilda undersökning. Dock om forskaren ville förhindra koagulation för att samla plasma, heparin kunde läggas på sprutan före hjärtat punkteringen.
- Om studien omfattar genotypning av musen, knipsa en delen av örat med saxen och placera i ett centrifugrör för en genotyp verifiering.
3. bukspottkörteln utvinning
- Leta upp magen på vänster sida av musen. Börja försiktigt (för att undvika att slita) separera bukspottkörteln från magsäcken och tolvfingertarmen med hjälp av två pincett.
Obs: När du lossar bukspottkörteln från magen och tarmarna, det är mycket viktigt att tången används försiktigt vägleda bukspottkörteln vävnad från organ och för att inte krossa eller riva bukspottkörteln med tången.- Fortsätta att separera bukspottkörteln från tunntarmen jejunum och ileum avsnitten, och slutligen från blindtarmen hos tjocktarmen.
- Vid blindtarmen, flytta tången och fortsätt separation av bukspottkörteln längs återstående kolon mot ändtarmen.
Obs: Vid denna punkt, det är bekvämt att klippa och ta bort del från magen till regionen av tjocktarmen närmast före ändtarmen. - Lokalisera bukspottkörteln och bifogade mjälte. Skjut bukspottkörteln mot höger sida av musen. Separat resterande anslutningarna mellan bukspottkörteln och brösthålan med tången helt bort bukspottkörteln och intilliggande mjälte.
- Ta bort bukspottkörteln och sprida ut för granskning. Lämna mjälte bifogas bukspottkörteln i identifieringssyfte.
- Ta bort alla bindväv, fett och mesenterica vävnad från bukspottkörteln.
Obs: Denna vävnad är vitare i färgen och därmed kan lätt urskiljas från bukspottkörteln vävnad som är pinker i färg. Detta är särskilt viktigt om hela bukspottkörteln behöver tas bort. Om exempelvis bukspottkörteln måste vägas och jämfört med kroppsvikt eller mellan grupper av djur. I Ptf1a cre / +; LSL-Kras G12D / + musmodell, särskilt i de äldsta månaderna, hårda fibrösa bukspottkörtelns vävnad kunde närvara. Noggrann borttagning av bukspottkörteln måste i detta fall utföras som tarmen kunde vara sammanflätad i tumörvävnad. I avancerade fall, onormal mjälte och levervävnad kan också förekomma.
- Ta bort alla bindväv, fett och mesenterica vävnad från bukspottkörteln.
- Om du vill ta bort en andra organ på denna punkt.
4. insamling av data och lagring
- efter extraktion av organen, flytta proven till området postoperativ för bevarande.
- Väger varje orgel och placera dem i deras respektive kryogen injektionsflaska.
Obs: längs with massan av varje prov, eventuella oegentligheter bör registreras för framtida referens. - När organen vägs, placera dem i det flytande kvävgasen för snapin frysning.
- Efter snap frysning, lagra organ vid-80 ° C för långsiktig lagring.
- Placera formalin lagrade prover på bänk över natten och nästa morgon ändra deras lösning från formalin till 70% etanol.
Obs: Dessa prover ska förvaras vid 4 ° C för långsiktig lagring. - För långtidslagring, frysa blod och örat punsch vid-80 ° C.. För serum samling från blodet, Tillåt blodet att koagulera för 30 min sedan Centrifugera det. Ta bort serum del med pipett och sedan förvaras vid -80 ° C.
5. Rensa
- Sanitize alla dissektion verktyg med sterilisering våtservetter. Cap röret kantad av isofluran indränkt kirurgiska pad. Ersätta den kirurgiska pad i skum styrelsen med en ny kirurgisk rondell. Förfoga över de delar av musen som inte samlades per anläggningen ' för s djurs förfogande.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 1 visar en översikt över miljöområdet operativa och figur 2 visar området inlägg. Medan den här inställningen ger minimala mängden utrustning och iscensättning, individer kan välja att ändra detta för att passa individuella behov. Protokollet bör optimeras enligt de specifika behov av experimentet. Proceduren genomförs på ett sätt som avslutar livet av en mus, som kräver ordentlig dödshjälp9. När forskaren är redo, placeras musen in i anestesi kammaren med isofluran-indränkt pads (figur 3).
När musen är medvetslös, ta bort musen och placera det ryggsidan ombord. En tå-nypa förfarande bör utföras för att säkerställa att musen är okänslig för smärta (figur 4). Tillämpa 70% etanol för att sterilisera området inledande snitt. Det terminal blodprov måste genomföras först, före bukspottkörteln avlägsnande, att säkerställa adekvat blod hämtning. Före borttagning av blod, bör hjärtsäck tas bort för att förhindra igensättning av 21 G nålen öppning. Efter avslutad terminal blodet Rita, hjärtat är fristående som en sekundär metod för dödshjälp och bukspottkörteln avlägsnas sedan.
Börja med att lokalisera magen, vilket ger en bra utgångspunkt för bukspottkörteln borttagning (figur 5). Obs: Extrem försiktighet bör iakttas under borttagning av bukspottkörteln, som är en ömtålig och skör vävnad, och därför alla operationer bör utföras med mild kraft. Med pincett, påbörja dissekering genom att börja dra försiktigt bukspottkörteln bort från magen och fortsätta att separera bukspottskörteln vävnad från den yttre beklädnaden av gastrointestinal (GI) tarmkanalen arbeta från magen till tolvfingertarmen, jejunum och ileum ( Figur 6). När blindtarmen är nådd, uppnås enklare borttagning av bukspottkörteln genom ompositionering tången så att en pincett håller blindtarmen och andra tången används för att fortsätta att skilja bukspottkörteln från tjocktarmen (figur 7). Efter avlägsnande från tjocktarmen, bukspottkörteln är placerad på höger sida av musen och eventuella återstående bilagor är avhuggna()figur 8).
Bukspottkörteln bör vara drevs ut för inspektion och eventuella avvikelser bör registreras (figur 9). I Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + mus stam, bukspottkörteln kan potentiellt innehålla en härdad tumör (figur 10). Andra organ bör också undersökas för eventuella metastaser. När bukspottkörteln har tagits, det ska vägas och vikt registreras. En del av bukspottkörteln bör snapin-frysta i flytande kväve för framtida metabola profilanalys eller andra tester och en del av bukspottkörteln bör placeras i formalin för framtida histologisk analys. Figur 11 visar inledande lagring av olika organ som samlats in från dissektion för användning i senare analys. De organ samlas in genom dissektion och lagras för vidare studier beror på målen för den enskilda forskaren.
Vävnad och blodprov kan användas för histologiska analyser och för metabolisk profilering. Ett exempel på den histologiska analysen av bukspottkörteln vävnad visas i figur 12. Metabolisk profilering kan utföras på den snapin-fryst vävnadsprover och blodprov. Representativa kärnmagnetisk resonans (NMR) spektroskopi spectra hydrofil och hydrofobiska komponenter av bukspottkörteln vävnad utdrag visas i figur 13A och 13B, respektive. En representativ NMR spectrumen som samlas in på ett serumprov som framställts av blod som samlas in vid tidpunkten för en terminal blod draw procedur visas i figur 14.
Figur 1 : Iscensättningen av operativa område. Allmänna utformningen av rätt verktyg och driftsförhållandena för dissektion. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2 : Iscensättningen av efter operationen område. Allmänna utformningen av rätt verktyg och driftsförhållanden för postoperative förfaranden. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3 : Anestesi kammare. Rätt miljö för anestesi via isofluran. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4 : Stimulus undersökning. Är inte att vara uthärdat stimulans test utförs på musen före första snittet att säkerställa någon smärta eller obehag. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5 : Början borttagning av bukspottkörteln. Orientering av musen som anger inledande utvinning av bukspottkörteln, plats som anges av tången. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 6 : Bukspottkörteln utvinning längs tarmen. Processen att isolera bukspottkörteln från mag-tarmkanalen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 8 : Bukspottkörteln borttagning. Placera bukspottkörteln på höger sida av musen. Eventuella återstående bilagor bör klippas för att helt ta bort bukspottkörteln. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 9 : Bukspottkörteln undersökning. Bukspottkörteln med bifogade mjälten undersöks efter borttagning från musen. Mjälten indikeras av pilen vertikala och bukspottkörteln indikeras av den vågräta pilen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 10 : Bukspottkörteln undersökning. Bukspottkörteln med bifogade mjälte visar en bukspottskörteln tumör undersöks efter borttagning från musen. Mjälten indikeras av pilen vertikala och bukspottkörteln indikeras av den vågräta pilen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 11 : Lagring av organ bort. Lämplig för förvaring av organ och prover samlas in, förberedd för långsiktig lagring och framtida analys. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 12 : Histologisk analys av bukspottkörteln vävnad. Hematoxylin och eosin målat bilder från bukspottkörteln vävnad. (A) normal bukspottkörteln vävnad från en Ptf1acre /-; LSL-KrasG12D /- kontroll mus. (B) PanIN vävnad från bukspottkörteln av en Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + studie mus. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 13 : Metabolisk profilering analys. Endimensionella proton kärnmagnetisk resonans (NMR) spektroskopi spektra av A) hydrofil och B) hydrofob fas komponenter av bukspottkörteln vävnad extrakt efter vävnad homogenisering och utsätts för kloroform/metanol extraktion. De NMR-spektra förvärvades på 850 MHz och är lämpliga för användning i metabolisk profilering analyser. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 14 : Representant NMR spectrumen av Serum. Blodet samlas in av terminal blod draw förfarandet kan användas för metabola profilanalys. Detta spektrum visar en typisk endimensionell proton 850 MHz NMR spectrumen samlat på serum erhålls från en terminal blodprov oavgjort. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Betydelse med avseende på befintliga metoder
Medan andra informella videor mus dissektioner finns, denna video artikel ger den första professionell kvaliteten, referentgranskad, visuell demonstration av alla detaljerade steg krävs för utvinning och skörd av mus bukspottkörteln genom dissektion10 . Med bukspottkörteln är ett huvudsakligt organ för metabolisk aktivitet och insulin möjliggör produktion, dissektion och upptagning av bukspottkörteln bevarandet av fysiologiska kännetecken11. Genom att isolera bukspottkörteln, kan framtida analys utföras på provet. Detta förfarande möjliggör för jämförelse och studie av interaktioner från andra vävnader inom samma organism inom samma tidsram.
Begränsningar av tekniken
Den största begränsningen av detta förfarande är uppsägning av musens liv, därmed förhindra längsgående samling och provtagning av flera vävnadsprover från samma mus. För att analysera trender relaterade till ålder, kön eller andra kvantifierare, måste en tvärsnitts befolkning genomföras, som vi har gjort för vår studie av metabola markörer för cancer i bukspottskörteln. En annan begränsning i detta protokoll är oförmågan att pausa förfarandet. När dödshjälp är inlett, måste förfarandet genomföras i sin helhet.
Kritiska steg i protokollet
Utförandet av testet stimulans genom att nypa hind tass av musen är avgörande för att säkerställa att musen får human behandling. Om musen inte reagerar på denna stimulans, kan sedan förfarandet genomföras som planerat. Dock ska ska musen visas på nödställda svar till följd av testet stimulans, musen returneras till anestesi kammaren för en ytterligare period av tid och testet upprepas tills en reaktion på stimulans prov inte observeras12.
Likaså terminal hjärtat punkteringen följt av borttagning av anslutningarna till hjärtat omedelbart efter terminal blodprovet samlas som en sekundär metod för dödshjälp säkerställer humana offrandet av musen. För att säkerställa en effektiv blodprovstagning, bör forskaren använda en pumprörelse med sprutan som liknar hjärtslag av musen, vilket möjliggör maximal insamling av blod för analys.
Modifieringar och felsökning
Byta organ från formalin till 70% etanol lösningar förbereder organen för inbäddning processen krävs för histologisk analys. Olika lagringslösningar kan krävas bör forskaren väljer att utföra andra experiment med organen. Innan analysen är det viktigt att begränsa eventuella potentiella upptining av organen förvaras i-80 ° C frysen bevara organ's integritet.
Användning av Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + musmodell minimerar förekomsten av icke-bukspottskörteln primära tumörer och sjukdomar13. Därför är det viktigt att notera eventuella oegentligheter som är uppenbara för bukspottkörteln eller andra organ under dissektion och insamling av vävnadsproverna för analys.
Framtida tillämpningar
Skörd av mus bukspottkörteln genom dissektion möjliggör flera typer av analys som skall genomföras på samma prov. De mest populära av dessa inkluderar, men är inte begränsade till, fluorescensmikroskopi, hematoxylin och eosin histologi, immunohistokemi, masspektrometri och kärnmagnetisk resonans spektroskopi6,7, 14 , 15. sjukdomar som diabetes, pankreatit och pankreascancer kan studeras med hjälp av tekniker som nämns ovan16.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
MAK erkänner stöd för detta arbete från National Institutes of Health National Cancer Institute bevilja nummer - 1R15CA152985-01A1. Detta projekt har också stötts av Miami universitet Grundutbildning Research Award programmet, Miami universitet doktor-grundutbildning möjligheterna till Scholarship Program och till Miami universitet sommaren Scholars-programmet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Glass Jar | Corning | 3140-150 | The glass jar used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| Lid of Glass Jar | Corning | 9985-150 | The glass jar lid used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| 15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
| Surgical Scissors | Fisher Scientific | 9201 | |
| Squeeze bottle | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
| 100% Ethanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
| Formalin | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Foam Boards | Therapak | 562908 | |
| Forceps | Fisher Scientific | 200205SHN | |
| 1 mL 21G Syringes | BD Biosciences | 309624 | |
| 50 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339652 | |
| 2.0 mL Microcentrifuge Tubes | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
| Surgical Pads | Fisher Scientific | S67011 | |
| T-Pins Length: 2" | Advance Store Products | X32T-05 | |
| Sterilizing Wipes | Professional Disposables International Inc. | Q85084 | |
| Sharps Container | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
| Analytical Balance | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
| 4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
| Shallow Wide Mouth Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
| Floating Microtube Rack | VWR | 60986-100 | |
| Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
| Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
| Liquid Nitrogen | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
| Mouse Kras Strain | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
| Mouse Cre Strain | MMRRC | OOO435-UNC |
References
- Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).
- Jackson-Grusby, L. Modeling cancer in mice. Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).
- Heid, I., et al. Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer. Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).
- Hingorani, S. R., et al. Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse. Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).
- Shi, C., et al. KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin. Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).
- LaConti, J. J., et al. Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma. BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).
- Ludwig, M. R., et al. Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer. Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).
- Taylor, D. K., Mook, D. M. Isoflurane Waste Anesthetic Gas Concentrations Associated with the Open-Drop Method. J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (1), 61-64 (2009).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. A protocol for islet isolation from mouse pancreas. Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).
- Auer, H., et al. The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein. Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).
- Ma, J., Leung, L. S. Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics. Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).
- Ijichi, H., et al. Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-β signaling in cooperation with active Kras expression. Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).
- Abiatari, I., et al. Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer. J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).
- Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data. Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).
- Yadav, D., et al. Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection. Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).
