Summary
यहाँ, हम एक वैक्यूम निष्कर्षण ट्यूब प्रणाली का उपयोग गैर-anesthetized चूहों में एक साधारण पूंछ नस रक्त नमूना विधि का वर्णन. इस विधि से रक्त के लिए प्रत्यक्ष जोखिम के जोखिम को कम कर देता है और एक एकल venipuncture से कई नमूने लेने सरल ।
Abstract
रक्त नमूने स्थानों की एक संख्या में चूहों से एकत्र किया जा सकता है । मसलन, पूंछ नस रक्त के नमूने के लिए एक बेहतर स्थान है । हालांकि, टेल नस इतनी पतली होती है कि इसे पंचर करने में कभी-कभार ही मेहनत होती है । इसके अलावा, पूंछ नस कम रक्त प्रवाह है और एक लंबे समय नमूने के लिए पर्याप्त रक्त प्राप्त करने की आवश्यकता है । वर्तमान रिपोर्ट एक साधारण रक्त नमूना विधि का वर्णन करता है, वैक्यूम रक्त संग्रह विधि, जो आमतौर पर रोगियों से रक्त के नमूने प्राप्त करने के लिए प्रयोग किया जाता है, यहाँ गैर anesthetized चूहों के लिए इस्तेमाल किया. 22 जी तितली सुई टिप पार्श्व पूंछ की एक कोण पर लगभग 20 डिग्री की नोक से लगभग 2-3 सेमी नसों में से एक में डाला गया था, और रक्त va में तितली सुई के रबर अंत डालने के द्वारा निर्वात संग्रह ट्यूब में एकत्र किया गया था cuum रक्त संग्रह ट्यूब । वर्तमान प्रयोगात्मक परिणाम बताते है कि सफलता की दर प्रयोगात्मक समूह में ९५% और शुरुआत समूह में ९०% थी । सफलता दर और पंचर बार दो समूहों के बीच समान थे । नमूना अवधि महत्वपूर्ण शुरुआत समूह की तुलना में प्रयोगात्मक समूह में कम था । अंत में, इस वैक्यूम रक्त गैर anesthetized चूहों की पूंछ नस से नमूने अनुक्रमिक रक्त संग्रह के लिए विधि संभव है और आसान करने के लिए जानने के लिए, जो अंय पारंपरिक इस्तेमाल किया रक्त नमूना तकनीक के लिए एक विश्वसनीय विकल्प के रूप में सेवा कर सकता है चूहों.
Introduction
चूहों से रक्त का नमूना प्रयोगात्मक अध्ययन की एक विस्तृत विविधता के लिए आवश्यक है । चूहे से रक्त संग्रह के लिए तकनीक दिल के पंचर, रेट्रो कक्षीय जाल, jugular नस, saphenous नस, पूंछ रक्त वाहिकाओं, मन्या धमनी, उदर महाधमनी, और वेना कावा शामिल हैं । सबसे तकनीकों (saphenous नस और पूंछ रक्त वाहिका पंचर को छोड़कर) संज्ञाहरण1,2की आवश्यकता है । चूहे की पूंछ की नसें नियमित रूप से रक्त के नमूने और संवहनी इंजेक्शन के लिए पंचर हो जाती हैं । गर्म पानी के साथ पूंछ के इलाज के बाद, रक्त वाहिकाओं अच्छी तरह से फैली हुई है और हेरफेर के लिए उपयुक्त हैं, यहां तक कि जब चूहों anesthetized रहे हैं3.
नई और बेहतर तकनीक के विकास के बावजूद छोटे प्रयोगशाला जानवरों में रक्त के नमूने प्राप्त करने के लिए2, यह हमेशा आसान नहीं है जब छोटे जानवरों से नमूना लेने के लिए पर्याप्त रक्त प्राप्त करने के लिए । चूहों की पूंछ नस रक्त का नमूना4के लिए एक बेहतर स्थान है । हालांकि, पूंछ नस पतली है, इस प्रकार यह कई बार पंचर करने के लिए कठिन है और पर्याप्त अपने कम रक्त प्रवाह के कारण रक्त प्राप्त करने के लिए एक लंबे समय ले जाएगा । एक वैक्यूम निष्कर्षण ट्यूब प्रणाली के माध्यम से रक्त संग्रह दैनिक नैदानिक अभ्यास में एक ठेठ विधि है । रक्त एकत्रित करने के लिए यह बंद प्रणाली रक्त के लिए प्रत्यक्ष जोखिम के जोखिम को कम कर देता है और एक एकल venipuncture से कई नमूने लेने के लिए आसान बना दिया है5. वर्तमान रिपोर्ट गैर में एक साधारण पूंछ नस रक्त नमूना विधि का वर्णन anesthetized वैक्यूम निष्कर्षण ट्यूब प्रणाली का उपयोग चूहों । इस विधि मास्टर करने के लिए आसान है और चूहों में खून की एक बड़ी मात्रा को प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
Protocol
Huazhong यूनिवर्सिटी ऑफ साइंस ऐंड टेक्नोलॉजी (वुहान, चाइना) की एनिमल केयर कमेटी की ओर से Tongji मेडिकल कॉलेज काउंसिल द्वारा सभी प्रक्रियाओं को मंजूरी दी गई । पांडुलिपि आने के अनुसार तैयार किया गया था (पशु अनुसंधान: Vivo प्रयोगों में रिपोर्टिंग) दिशानिर्देश6.
1. पशुपालन
- का प्रयोग करें Sprague-Dawley (एसडी) चूहों (n = 20, 10 पुरुषों, 8 सप्ताह पुरानी, २६१ २९१ जी के लिए वजन, मतलब = २७२.८५ ± ९.०७ जी) विज्ञान और प्रौद्योगिकी के Huazhong विश्वविद्यालय के प्रायोगिक पशु केंद्र से और देखभाल और के उपयोग के लिए गाइड के अनुसार चूहों को बनाए रखने प्रयोगशाला पशु अमेरिका के राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान द्वारा प्रकाशित (NIH प्रकाशन No. 85-23, संशोधित १९९६)
- भोजन और पीने के पानी के लिए मुफ्त पहुंच के साथ मानक शर्तों के तहत घर । चूहों लकड़ी शेविंग बिस्तर के साथ ५३० cm2 पिंजरों में रखें । प्रत्येक पिंजरे में दो चूहे घर । सभी पिंजरों कमरे वातावरण के लिए खुला रखें (कोई सूक्ष्म अलगाव या हवादार caging)
- प्रायोगिक प्रोटोकॉल में शामिल कर्मचारियों को नियमित रूप से चूहों को संभालना सुनिश्चित करें ।
- 21 डिग्री सेल्सियस और 23 डिग्री सेल्सियस के बीच कमरे के तापमान बनाए रखें । अध्ययन भर में एक सामांय नमक आहार (०.३% NaCl) दरों दे ।
2. रक्त संग्रह प्रक्रिया
नोट: वैक्यूम रक्त संग्रह प्रणाली एक डबल-नुकीले सुई के होते हैं [22 जी (०.७ मिमी x 25 मिमी)], एक प्लास्टिक धारक, और वैक्यूम ट्यूब (2 एमएल) के साथ रबर डाट (चित्रा 1) की एक श्रृंखला.
- एक प्लास्टिक निरोधक धारक में चूहे प्लेस और गर्म (20-30 डिग्री सेल्सियस) पानी के साथ पूंछ धोने के लिए किसी भी दिखाई गंदगी या मल को दूर । जबकि एक सहायक एक विस्तारित स्थिति में पूंछ रखती है, ७०% इथेनॉल के साथ पूंछ पोंछ, और धुंध के साथ साफ करने के लिए नस स्पष्ट करते हैं ।
- डालें 22 जी तितली सुई टिप पार्श्व पूंछ नसों में से एक में (चारों ओर 5 मिमी) लगभग 2-3 सेमी दूर लगभग 20 डिग्री के कोण पर पूंछ की नोक से (चित्रा 2) की स्थिति में । वैक्यूम रक्त संग्रह ट्यूब (चित्रा 3) में तितली सुई के रबर अंत डालने के द्वारा वैक्यूम संग्रह ट्यूब में रक्त ले लीजिए ।
नोट: अधिक से अधिक संग्रह रक्त की मात्रा १.२ मिलीलीटर7है । - रक्त संग्रह के बाद, सुई निकालें और धीरे से 15-30 एस के लिए धुंध के साथ पंचर साइट पर दबाव लागू करने के लिए रक्त के प्रवाह को रोकने के लिए । फिर, प्लास्टिक निरोधक धारक से चूहा छोड़ें और चूहे को उसके पिंजरे में लौटा दें.
- ट्यूब है कि एक थक्कारोधी रक्त प्लाज्मा इकट्ठा करने के रूप में EDTA शामिल का प्रयोग करें । धीरे ट्यूब उल्टे कई बार रक्त में थक्कारोधी मिश्रण करने के लिए और बर्फ पर नमूने खड़ी जगह है ।
- २,००० एक्स जी में एक प्रशीतित केंद्रापसारक में रक्त नमूना संग्रह ट्यूबों 10 मिनट के लिए प्लाज्मा या सीरम अलग करने के लिए केंद्रापसारक ।
- प्लाज्मा/सीरम निकालने, ध्यान लाल और सफेद रक्त कोशिका परतों को परेशान करने के लिए नहीं ले । रक्त सीरम इकट्ठा करने के लिए, थक्कारोधी के बिना ट्यूबों का उपयोग करें । नमूना के दोनों प्रकार के तुरंत इस्तेमाल किया जा सकता है, या एक वर्ष तक के लिए-८० डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत ।
नोट: सफल रक्त संग्रह हर बार १.२ मिलीलीटर रक्त प्राप्त करने के रूप में परिभाषित किया गया था । अधिकतम पंचर समय तीन परीक्षणों के लिए निर्धारित किया गया था, अगर कुल रक्त की मात्रा तीसरे पंचर के बाद १.२ मिलीलीटर से कम था, यह एक असफल रक्त संग्रह के रूप में परिभाषित किया गया था । नमूना अवधि रक्त संग्रह के बाद तितली सुई को हटाने के लिए पूंछ नस पंचर से शुरू होता है । -
दो हफ्तों के भीतर एक बार7रक्त ले लीजिए ।
- इस विधि की व्यवहार्यता का परीक्षण और सत्यापन करने के लिए, इस रक्त संग्रह प्रोटोकॉल प्रदर्शन करने से पहले दो मेडिकल छात्रों (शुरुआती) 2 ज के लिए ट्रेन । बीस चूहों का प्रयोग करें और 2 अनुभवी साथियों द्वारा 10 चूहों से रक्त आकर्षित (प्रयोगात्मक समूह) और से 10 चूहों द्वारा 2 मेडिकल छात्रों (शुरुआत समूह).
3. सांख्यिकीय विश्लेषण
- एक मतलब मूल्य ± मानक विचलन के रूप में एक्सप्रेस डेटा और SPSS आंकड़े 17 के साथ विश्लेषण । ०.०५ का एक α मान चुना गया था, इसलिए p < 0.05 को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना गया था ।
Representative Results
दो समूहों की नमूना अवधि, शरीर द्रव्यमान, और रक्त संग्रह की मात्रा
प्रत्येक समूह में दो सप्ताह के अंदर 10 चूहों (5 नर) से रक्त एकत्र किया गया । दोनों समूहों में मतलब शरीर द्रव्यमान समान (२७२.०० ± ९.६६ जी और २७३.७० ± ८.८७ ग्राम) था । नमूना अवधि शुरुआत समूह (२.७७ ± ०.५३ मिनट बनाम ३.२८ ± ०.८३ मिनट, p < 0.05) (तालिका 1) की तुलना में प्रयोगात्मक समूह में काफी कम थी ।
सफलता दर और दो समूहों का पंचर बार
सफलता दर प्रायोगिक समूह में ९५% (19/20) और शुरुआती समूह (p > 0.05) में ९०% (18/20) थी. पंचर बार दो समूहों के बीच काफी अलग नहीं थे (१.५० ± ०.६१ मिनट बनाम १.८५ ± ०.७५ मिनट, पी > 0.05) (तालिका 2) । इन परिणामों से संकेत मिलता है इस विधि जानने के लिए आसान है, और तकनीक 2 एच के लिए प्रशिक्षण के बाद महारत हासिल किया जा सकता है ।
चित्र 1 : 2 मिलीलीटर वैक्यूम रक्त संग्रह ट्यूब (बाएं); 22 ग्राम तितली सुई (केंद्र); प्लास्टिक निरोधक धारक (दाएं) । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 2 : सुई टिप पार्श्व पूंछ नस में डाला गया था (लगभग 5 मिमी) की स्थिति लगभग 2-3 सेमी दूर पर पूंछ की नोक से लगभग 20 डिग्री के कोण । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 3 : सफल venipuncture । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
| प्रायोगिक समूह | प्रारंभकर्ता समूह | |||||||||
| लिंग | शारीरिक वजन (g) | एकत्र रक्त मात्रा (एमएल) | नमूना अवधि (min) | लिंग | शारीरिक वजन (g) | एकत्र रक्त मात्रा (एमएल) | नमूना अवधि (min) | |||
| E1-1 | पुरुष | २९१ | १.२ | ३.१२ | B1-1 | पुरुष | २८२ | १.२ | ३.१८ | |
| E1-2 | पुरुष | २९१ | १.२ | २.७३ | B1-2 | पुरुष | २८२ | १.२ | २.१८ | |
| E2-1 | पुरुष | २७६ | १.२ | २.३ | B2-1 | पुरुष | २६४ | १.२ | ३.७३ | |
| E2-2 | पुरुष | २७६ | १.२ | २.३७ | B2-2 | पुरुष | २६४ | १.२ | २.४७ | |
| E3-1 | पुरुष | २६७ | १.२ | २.७३ | B3-1 | पुरुष | २६५ | १.२ | ३.५२ | |
| E3-2 | पुरुष | २६७ | १.० | ३.८८ | B3-2 | पुरुष | २६५ | १.२ | २.५३ | |
| E4-1 | पुरुष | २६३ | १.२ | २.४१ | B4-1 | पुरुष | २८९ | १.२ | २.३२ | |
| E4-2 | पुरुष | २६३ | १.२ | २.५२ | B4-2 | पुरुष | २८९ | १.२ | ३.६२ | |
| E5-1 | पुरुष | २६५ | १.२ | ३.६१ | B5-1 | पुरुष | २७७ | १.२ | ३.४८ | |
| E5-2 | पुरुष | २६५ | १.२ | २.४२ | B5-2 | पुरुष | २७७ | १.२ | ३.१२ | |
| E6-1 | महिला | २८५ | १.२ | ३.३३ | B6-1 | महिला | २७४ | ०.९ | ४.८७ | |
| E6-2 | महिला | २८५ | १.२ | ३.०३ | B6-2 | महिला | २७४ | १.२ | ३.३७ | |
| E7-1 | महिला | २७१ | १.२ | २.८२ | B7-1 | महिला | २६८ | १.० | ३.९३ | |
| E7-2 | महिला | २७१ | १.२ | २.४२ | B7-2 | महिला | २६८ | १.२ | ३.८२ | |
| E8-1 | महिला | २६८ | १.२ | १.९३ | B8-1 | महिला | २६२ | १.२ | २.०७ | |
| E8-2 | महिला | २६८ | १.२ | ३.०५ | B8-2 | महिला | २६२ | १.२ | ३.६७ | |
| E9-1 | महिला | २७३ | १.२ | २.५२ | B9-1 | महिला | २८१ | १.२ | ४.३८ | |
| E9-2 | महिला | २७३ | १.२ | ३.१७ | B9-2 | महिला | २८१ | १.२ | ४.५७ | |
| E10-1 | महिला | २६१ | १.२ | १.८२ | B10-1 | महिला | २७५ | १.२ | २.५३ | |
| E10-2 | महिला | २६१ | १.२ | ३.२५ | B10-2 | महिला | २७५ | १.२ | २.२८ | |
| औसत | २.७७ | ३.२८ | ||||||||
| En-1: पहले रक्त संग्रह के लिए प्रयोगात्मक समूह में चूहों के सीरियल नंबर । | ||||||||||
| En-2: दूसरे रक्त संग्रह के लिए प्रयोगात्मक समूह में चूहों के सीरियल नंबर. | ||||||||||
| बीएन-1: पहले रक्त संग्रह के लिए शुरुआत समूह में चूहों के सीरियल नंबर. | ||||||||||
| बीएन-2: दूसरे रक्त संग्रह के लिए शुरुआत समूह में चूहों के सीरियल नंबर । | ||||||||||
तालिका 1: प्रयोगात्मक समूह और शुरुआत समूह में एकत्र रक्त के परिणाम.
| रक्त संग्रह बार | औसत पंचर बार | एक बार पंचर | दो बार पंचर | तीन बार पंचर | विफल | सफलता दर | |
| प्रायोगिक समूह | 20 | १.५० ± ०.६१ | 11 | 8 | 0 | 1 | ९५% |
| प्रारंभकर्ता समूह | 20 | १.८५ ± ०.७५ | 7 | 9 | 2 | 2 | ९०% |
| एक बार पंचर: पहली पंचर के बाद सफल रक्त संग्रह के साथ चूहों की संख्या | |||||||
| दो बार पंचर: दूसरे पंचर के बाद सफल रक्त संग्रह के साथ चूहों की संख्या | |||||||
| तीन बार पंचर: तीसरे पंचर के बाद सफल रक्त संग्रह के साथ चूहों की संख्या | |||||||
| विफल: तीसरे पंचर के बाद विफल रक्त संग्रह के साथ चूहों की संख्या | |||||||
तालिका 2: पंचर बार और प्रयोगात्मक समूह और शुरुआत समूह की सफलता दरों की तुलना ।
Discussion
वर्तमान रिपोर्ट का वर्णन एक आसान चूहों में रक्त संग्रह पद्धति जानने के लिए । हमारे परिणामों से पता चला है कि इस पद्धति के लिए समय बार चूहों से रक्त की एक बड़ी मात्रा इकट्ठा करने के लिए संभव है । इसके अलावा, इस विधि आसानी से एक अल्पकालिक सीखने की अवस्था के साथ महारत हासिल किया जा सकता है । यह प्रक्रिया गैर anesthetized चूहों में प्रदर्शन किया जा सकता है और केवल जानवरों के लिए न्यूनतम तनाव का कारण बनता है ।
विभिन्न स्थानों पर चूहों से रक्त एकत्रित किया जा सकता है । पूंछ नस रक्त का नमूना4के लिए एक बेहतर स्थान है । हालांकि, यह हमेशा चूहों की पतली और कम रक्त प्रवाह पूंछ नस से पर्याप्त रक्त की मात्रा प्राप्त करने के लिए आसान नहीं है । वैक्यूम रक्त संग्रह प्रणाली आमतौर पर दैनिक नैदानिक अभ्यास में रोगियों से रक्त के नमूनों को इकट्ठा करने के लिए प्रयोग किया जाता है । इस वैक्यूम रक्त संग्रह प्रणाली के रोगियों और अनुसंधान जानवरों में एक लंबे समय के लिए इस्तेमाल किया गया है8,9,10। इस प्रणाली सिलिकॉन लेपित भीतरी ट्यूब दीवार और तितली सुई के साथ एक वैक्यूम रक्त संग्रह ट्यूब के होते हैं । यह वैक्यूम नकारात्मक दबाव सिद्धांत पर आधारित था और रक्त एकत्रित करने के जोखिम के बिना रक्त की सतत ड्राइंग की अनुमति देता है, जो भी संदूषण और hemolysis11की संभावना को कम करता है । कैथेटर में रक्त के नमूने की मात्रा के बारे में ०.३ मिलीलीटर है । पूंछ नस से सुई वापस लेने के बाद, कैथेटर में अवरुद्ध रक्त वैक्यूम के कारण एकत्रित वैक्यूम ट्यूब में प्रवाह होगा । यह तरीका भी एक छोटे पंचर सुई के उपयोग के साथ १०० ग्राम से कम वजनी चूहों से रक्त एकत्रित करने के लिए लागू है ।
इस रक्त संग्रह विधि के कई फायदे हैं । इस प्रक्रिया को केवल चूहों और रक्त संग्रह के लिए ंयूनतम चोट का कारण बनता है निश्चेतक के उपयोग के बिना किया जा सकता है, इस प्रकार तनाव प्रतिक्रिया और रक्त के नमूने पर निश्चेतक के प्रभाव से बचा जा सकता है । हमारी टिप्पणियों से पता चला कि चूहों प्रक्रिया के दौरान प्लास्टिक निरोधक धारक में शांत थे और इन प्रयोगों के दौरान कोई मृत्यु हो गई । दूसरे, दोहराया रक्त संग्रह हर एक या दो दिन संभव है, जो विभिंन अनुसंधान प्रयोजनों के लिए एक पर्याप्त मात्रा के साथ रक्त की लगातार नमूना सक्षम बनाता है । अंत में, इस विधि को जानने के लिए आसान है और आसानी से एक छोटी (2 एच) सीखने की अवधि के बाद शुरुआती द्वारा महारत हासिल थी, जैसा कि इसी तरह की सफलता दर और इस रिपोर्ट में प्रयोगात्मक और शुरुआत समूहों के बीच पंचर बार द्वारा संकेत दिया । पिछली रिपोर्ट में ली एट अल. ने4चूहे की पार्श्व पूंछ नस से रक्त नमूना लेने की एक ऐसी ही विधि का प्रदर्शन किया । हमारे विधि से सरल है कि ली एट अल द्वारा रिपोर्ट । 4 में है कि हम सीधे पूंछ नस में पंचर सुई डालने और ट्यूब के दूसरे छोर सीधे रक्त का संग्रह करने के लिए वैक्यूम ट्यूब से जुड़ा हुआ है, रक्त की एक अतिरिक्त सिरिंज और मैनुअल आकांक्षा के उपयोग के बिना और ' की आवश्यकता के बिना दूध ' आईएनजी नस रक्त प्रवाह को सुविधाजनक बनाने के लिए । इस बंद व्यवस्था के साथ रक्त एकत्रित करने से रक्त संदूषण की संभावना कम हो जाती है । प्लास्टिक निरोधक धारक के प्रयोग से भी चूहे को तनाव कम होता है और पूंछ के निर्धारण की सुविधा मिलती है.
इस विधि के सफल अनुप्रयोग के लिए निंन दो चरण महत्वपूर्ण हैं । 1) पूंछ का विस्तार और पूंछ के आंदोलन से बचने के; 2) नस के माध्यम से पंचर से बचने के लिए 20 ° के एक कोण पर नस को धीरे से पंचर करें और पंचर सुई को नस में रखें ।
अंत में, चूहों में अपनाया वैक्यूम रक्त संग्रह विधि सुरक्षित, संभव है, और अभ्यास करने के लिए आसान है । इस विधि में एक पर्याप्त रक्त गैर anesthetized चूहों से प्राप्त मात्रा के साथ रक्त की लगातार नमूना सक्षम बनाता है ।
Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है
Acknowledgments
लेखकों को बनाने के लिए कोई पावती नहीं है.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| a double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 22G | (0.7×25mm) |
| vacuum tubes | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 2 ml | |
| rat restraining holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 250g rat hoder model | |
| normal salt diet for rats | Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study | ||
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. |
References
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