Summary
Nous décrivons ici une méthode de prélèvement de sang simple queue veineuse chez les rats non anesthésiés à l’aide d’un système de tube d’aspiration. Cette méthode réduit le risque d’exposition directe au sang et simplifie les prélèvements d’échantillons multiples d’une seule ponction.
Abstract
Sang peut être recueilli des rats dans un certain nombre de points d’échantillonnage. Par exemple, la veine caudale est un emplacement supérieur pour les prélèvements sanguins. Cependant, la veine caudale est mince pour qu’il soit parfois difficile à percer. En outre, la veine caudale a faible débit sanguin et nécessite un temps de prélèvement longue pour obtenir suffisamment de sang. Le présent rapport décrit une méthode d’échantillonnage de sang simple, la méthode de collecte de sang de vide, qui est habituellement utilisée pour prélever des échantillons de sang provenant de patients, utilisés ici pour des rats non anesthésiés. Pointe de l’aiguille 22 G papillon a été insérée dans l’un des nervures latérales arrière environ 2-3 cm de l’extrémité de la queue à un angle d’environ 20° et le sang a été recueilli dans le tube de prélèvement sous vide en y insérant l’extrémité en caoutchouc de l’aiguille à ailettes de l’AV cuum tube de prélèvement. Les résultats expérimentaux montrent que le taux de réussite était de 95 % dans le groupe expérimental et 90 % dans le groupe débutant. Le taux de réussite et ponction fois étaient similaires entre les deux groupes. La durée d’échantillonnage a été significativement plus courte dans le groupe expérimental par rapport au groupe de débutant. En conclusion, cette méthode de collecte de sang de vide pour l’échantillonnage séquentiel de sang de la veine caudale de non - rats anesthésiés est faisable et facile à apprendre, qui pourrait servir comme une alternative fiable aux autres utilisé classiquement les techniques d’échantillonnage de sang pour rats.
Introduction
Les prélèvements sanguins de rats est requis pour une grande variété d’études expérimentales. Techniques pour la collecte de sang de rat incluent perforation du coeur, plexus rétro-orbitaire, veine jugulaire, veine saphène, queue des vaisseaux sanguins, l’artère carotide, aorte abdominale et veine cave. La plupart des techniques (sauf la veine saphène et perforation de vaisseau sanguin de queue) exigent l’anesthésie1,2. Veines de la queue de rat sont régulièrement percés de prélèvement et d’injection vasculaire. Après avoir traité la queue à l’eau tiède, les vaisseaux sanguins sont bien dilatés et adaptés pour la manipulation, même lorsque les rats sont anesthésiés3.
Malgré le développement de techniques nouvelles et améliorées pour prélever des échantillons de sang dans le petit laboratoire animaux2, il n’est pas toujours facile à obtenir suffisamment de sang lors de l’échantillonnage pour petits animaux. La veine caudale de rats est un emplacement supérieur pour prélèvement de sang4. Cependant, la veine caudale est mince, donc il est parfois difficile de percer et prendrait beaucoup de temps pour obtenir suffisamment de sang en raison de son faible débit sanguin. Collecte de sang via un système de tube d’aspiration est une méthode typique en pratique clinique quotidienne. Ce système fermé pour recueillir le sang réduit le risque d’exposition directe au sang et rend plus facile de prendre des échantillons multiples d’une seule ponction5. Le présent rapport décrit une méthode de prélèvement de sang simple queue veineuse chez les rats non anesthésiés à l’aide du système de tube d’aspiration. Cette méthode est facile à maîtriser et peut être utilisé pour obtenir un grand volume de sang à plusieurs reprises chez le rat.
Protocol
Toutes les procédures ont été approuvées par le Conseil de collège de Tongji médicales sur l’Animal Care Comité de Huazhong University of Science et la technologie (Wuhan, Chine). Le manuscrit a été établi selon l’arrivée (Animal Research : rapports d’expériences In Vivo ) lignes directrices6.
1. l’élevage
- Utiliser des rats Sprague-Dawley (SD) (n = 20, 10 mâles, âgés de 8 semaines, 261 à 291 grammes, signifient = 272.85 ±9.07 g) de l’Université de centre des animaux expérimentaux de Huazhong de la Science et technologie et maintenir les rats conformément au Guide pour l’entretien et l’utilisation des Animaux de laboratoire, publiées par le US National Institute of Health (NIH Publication No.85-23, révisé le 1996)
- Maison dans des conditions normalisées avec libre accès à la nourriture et l’eau potable. Garder des rats dans des cages de2 530 cm avec bois-rasage literie. Maison deux rats dans chaque cage. Garder tous les carreaux ouverts à l’environnement de la salle (sans micro-isolement ou mise en cage ventilée)
- S’assurer que le personnel impliqué dans le protocole expérimental gérer régulièrement les rats.
- Maintenir la température ambiante de 21 ° C 23 ° C. Tarifs du donner une diète normale (0,3 % NaCl) tout au long de l’étude.
2. procédure de collecte de sang
Remarque : Le système de collecte de sang de vide est constitué d’une aiguille à deux pointes [22 G (0,7 mm x 25 mm)], un support en plastique et une série de tubes à vide (2 mL) avec bouchons en caoutchouc (Figure 1).
- Placez le rat dans un support en plastique restrictif et laver la queue à l’eau tiède pour enlever toute saleté visible ou les fèces (20-30 ° C). Alors qu’un assistant maintient la queue en position étendue, essuyer la queue avec l’éthanol à 70 % et nettoyer avec de la gaze à préciser la veine.
- Insérer la pointe de l’aiguille 22 G papillon dans l’une des nervures latérales arrière (environ 5 mm) à une position environ 2-3 cm de la pointe de la queue à l’angle d’environ 20 ° (Figure 2). Recueillir le sang dans le tube de prélèvement sous vide en insérant le bout de caoutchouc de l’aiguille à ailettes dans le tube de prélèvement sanguin sous vide (Figure 3).
Remarque : Le volume de sang collection maximale est 1,2 mL7. - Après le prélèvement de sang, retirer l’aiguille et exercez une légère pression sur le site de ponction avec de la gaze pour 15-30 s arrêter l’écoulement du sang. Ensuite, relâchez le rat du support plastique restrictif et retourner le rat à sa cage.
- Utiliser des tubes qui contiennent EDTA comme anticoagulant pour recueillir le plasma sanguin. Retourner doucement le tube plusieurs fois pour mélanger anticoagulant dans le sang et placer les échantillons sur glace verticalement.
- Centrifuger les tubes de prélèvement sanguin échantillon dans une centrifugeuse réfrigérée à 2 000 x g pendant 10 min séparer le plasma ou le sérum.
- Extraire le plasma/sérum, en prenant soin de ne pas pour perturber les couches de globules rouges et blancs. Pour collecter le sérum sanguin, utiliser des tubes sans anticoagulant. Les deux types d’échantillon peuvent être utilisés immédiatement, ou stockées à-80 ° C pendant un an.
NOTE : Collecte de sang avec succès a été défini comme obtenir 1,2 mL de sang chaque fois. Temps de perforation maximale a été fixée à trois essais, si le volume sanguin total était inférieur à 1,2 mL après la troisième ponction, il a été défini comme une collection de sang ayant échoué. La durée d’échantillonnage commence à partir de la ponction veineuse de queue au retrait de l’aiguille à ailettes après prélèvement sanguin. -
Recueillir le sang deux fois en deux semaines,7.
- Pour tester et vérifier la faisabilité de cette méthode, former deux étudiants en médecine (débutants) pendant 2 h avant d’effectuer ce protocole de collecte de sang. Utilisez des vingt rats et aspire le sang de 10 rats par 2 compagnons expérimentés (groupe expérimental) et de 10 rats par 2 étudiants en médecine (groupe débutant).
3. analyse statistique
- Exprimer les données comme une valeur moyenne ± écart et analyser avec SPSS Statistics 17. Une valeur α de 0,05 a été choisi, donc p < 0,05 était considérée comme statistiquement significative.
Representative Results
Durée d’un échantillonnage, masse et volume de collecte de sang des deux groupes
Sang a été prélevé de 10 rats (5 mâles) deux fois dans les deux semaines dans chaque groupe. La masse corporelle moyenne dans les deux groupes était similaire (272,00 ±9.66 et ±8.87 273.70 g). Durée d’échantillonnage a été significativement plus courte dans le groupe expérimental par rapport au groupe de débutant (2.77 ±0.53 min vs 3,28 ±0.83 min, p < 0,05) (tableau 1).
Succès note et perforer le temps de deux groupes
Le taux de réussite était de 95 % (19/20) dans le groupe expérimental et 90 % (18/20) dans le groupe débutant (p > 0,05). Ponction fois n’étaient pas significativement différents entre les deux groupes (1,50 min ±0.61 vs 1,85 ±0, 75 min, p > 0,05) (tableau 2). Ces résultats indiquent cette méthode est facile à apprendre, et la technique pouvait être maîtrisée après la formation pendant 2 h.
Figure 1 : 2 mL vide tube de prélèvement (à gauche), aiguille à ailettes 22 G (Centre), support plastique restrictif (à droite). S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 2 : La pointe de l’aiguille a été insérée dans la veine de queue latéral (environ 5 mm) à la position environ 2-3 cm de la pointe de la queue à l’angle d’environ 20 °. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 3 : Ponction réussie. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
| Groupe expérimental | Groupe débutant | |||||||||
| Entre les sexes | Poids (g) | Volume de sang (mL) | durée d’un échantillonnage (min) | Entre les sexes | Poids (g) | Volume de sang (mL) | durée d’un échantillonnage (min) | |||
| E1-1 | mâle | 291 | 1.2 | 3.12 | B1-1 | mâle | 282 | 1.2 | 3.18 | |
| E1-2 | mâle | 291 | 1.2 | 2.73 | B1-2 | mâle | 282 | 1.2 | 2.18 | |
| E2-1 | mâle | 276 | 1.2 | 2.3 | B2-1 | mâle | 264 | 1.2 | 3.73 | |
| E2-2 | mâle | 276 | 1.2 | 2.37 | B2-2 | mâle | 264 | 1.2 | 2.47 | |
| E3-1 | mâle | 267 | 1.2 | 2.73 | B3-1 | mâle | 265 | 1.2 | 3.52 | |
| E3-2 | mâle | 267 | 1.0 | 3.88 | B3-2 | mâle | 265 | 1.2 | 2.53 | |
| E4-1 | mâle | 263 | 1.2 | 2.41 | B4-1 | mâle | 289 | 1.2 | 2.32 | |
| E4-2 | mâle | 263 | 1.2 | 2.52 | B4-2 | mâle | 289 | 1.2 | 3.62 | |
| E5-1 | mâle | 265 | 1.2 | 3.61 | B5-1 | mâle | 277 | 1.2 | 3.48 | |
| E5-2 | mâle | 265 | 1.2 | 2.42 | B5-2 | mâle | 277 | 1.2 | 3.12 | |
| E6-1 | femelle | 285 | 1.2 | 3.33 | B6-1 | femelle | 274 | 0,9 | 4.87 | |
| E6-2 | femelle | 285 | 1.2 | 3.03 | B6-2 | femelle | 274 | 1.2 | 3.37 | |
| E7-1 | femelle | 271 | 1.2 | 2,82 | B7-1 | femelle | 268 | 1.0 | 3.93 | |
| E7-2 | femelle | 271 | 1.2 | 2.42 | B7-2 | femelle | 268 | 1.2 | 3.82 | |
| E8-1 | femelle | 268 | 1.2 | 1.93 | B8-1 | femelle | 262 | 1.2 | 2.07 | |
| E8-2 | femelle | 268 | 1.2 | 3.05 | B8-2 | femelle | 262 | 1.2 | 3.67 | |
| E9-1- | femelle | 273 | 1.2 | 2.52 | B9-1 | femelle | 281 | 1.2 | 4.38 | |
| E9-2 | femelle | 273 | 1.2 | 3.17 | B9-2 | femelle | 281 | 1.2 | 4.57 | |
| E10-1 | femelle | 261 | 1.2 | 1.82 | B10-1 | femelle | 275 | 1.2 | 2.53 | |
| E10-2 | femelle | 261 | 1.2 | 3.25 | B10-2 | femelle | 275 | 1.2 | 2.28 | |
| Moyenne | 2,77 | 3.28 | ||||||||
| Fr-1 : numéro de série des rats dans le groupe expérimental pour la première collecte de sang. | ||||||||||
| Fr-2 : numéro de série des rats dans le groupe expérimental pour la deuxième collection de sang. | ||||||||||
| BN-1 : numéro de série des rats dans le groupe débutant pour la première collecte de sang. | ||||||||||
| BN-2 : numéro de série des rats dans le groupe débutant pour la deuxième collection de sang. | ||||||||||
Tableau 1 : Résultats de sang recueillis dans le groupe expérimental et le groupe de débutant.
| Temps de collecte de sang | Temps moyen de ponction | Une ponction de temps | Perforer deux fois | Percer trois fois | A échoué | Taux de réussite | |
| Groupe expérimental | 20 | ±0.61 1.50 | 11 | 8 | 0 | 1 | 95 % |
| Groupe débutant | 20 | 1,85 ±0, 75 | 7 | 9 | 2 | 2 | 90 % |
| Une ponction de temps : nombre de rats avec collecte de sang avec succès après la première piqûre | |||||||
| Double ponction : nombre de rats avec collecte de sang avec succès après la deuxième piqûre | |||||||
| Trois fois ponction : nombre de rats avec collecte de sang avec succès après la troisième piqûre | |||||||
| Échec : nombre de rats avec n’a pas de collecte de sang après la troisième piqûre | |||||||
Tableau 2 : Comparaison des temps de ponction et des taux de réussite du groupe expérimental et le groupe débutant.
Discussion
Le présent rapport décrit une méthode de collecte de sang facile à apprendre chez le rat. Nos résultats ont montré que cette méthode est réalisable pour la collecte à plusieurs reprises un grand volume de sang des rats. En outre, cette méthode pourrait être facilement maîtrisée avec une courbe d’apprentissage à court terme. Cette procédure peut être réalisée chez des rats non anesthésiés et seulement cause un stress minime aux animaux.
Sanguins peuvent être collectées des rats en divers endroits. La veine caudale est un emplacement supérieur pour prélèvement de sang4. Cependant, il n’est pas toujours facile d’obtenir assez de volume sanguin de la veine de queue sang mince et faible débit des rats. Le système de collecte de sang de vide est généralement utilisé pour la collecte des échantillons de sang provenant de patients en pratique clinique quotidienne. Ce système de collecte de sang de vide a été utilisé chez les patients et les animaux de recherche pour une longue période8,9,10. Ce système se compose d’un tube de prélèvement sanguin sous vide avec aiguille de mur et papillon revêtus inner tube silicone. Il reposait sur le principe de pression négative sous vide et permet l’élaboration continue de sang sans le risque de collecte de sang, ce qui réduit également les risques de contamination et l’hémolyse11. Le volume d’échantillon de sang dans le cathéter est d’environ 0,3 mL. Après le retrait de l’aiguille de la veine caudale, le sang bloqué dans le cathéter s’écoule dans le tube d’aspiration collecte en raison de la dépression. Cette méthode est également applicable pour la collecte de sang des rats pesant moins de 100 g à l’aide d’une aiguille de ponction plus petite.
Cette méthode de collecte de sang a plusieurs avantages. Cette procédure seulement cause un préjudice minime à des rats et prélèvement sanguin peut être effectué sans l’utilisation d’anesthésiques, ainsi l’influence de la réponse au stress et anesthésiques sur l’échantillon de sang peut être évité. Nos observations ont démontré que des rats étaient calmes dans le support plastique restrictif au cours de la procédure et il n’y a aucun décès au cours de ces expériences. Deuxièmement, répété la collecte de sang tout le monde ou deux jours est possible, ce qui permet de fréquents d’échantillonnage de sang avec un volume suffisant à des fins de recherches diverses. Enfin, cette méthode est facile à apprendre et a été facilement maîtrisée par les débutants après une période d’apprentissage courte (2 h), comme en témoigne le taux de réussite similaire et ponction fois entre les groupes expérimentaux et débutant dans le présent rapport. Dans un précédent rapport, Lee et coll. ont démontré une méthode similaire de prélèvement d’échantillons de sang de la veine latérale queue du rat4. Notre méthode est plus simple que celui rapporté par Lee et al. 4 que nous insérer directement l’aiguille de ponction dans la veine caudale et l’autre extrémité du tube est directement relié au tube à vide pour la collecte du sang, sans l’utilisation d’une seringue supplémentaire et l’aspiration manuelle du sang et sans la nécessité de "lait ING' la veine afin de faciliter la circulation sanguine. Collecte de sang avec ce système fermé réduit le risque de contamination du sang. Utilisation du support plastique restrictif a également réduit le stress au rat et facilite la fixation de la queue.
Les deux étapes suivantes sont essentielles pour l’application de cette méthode. 1) prolonger la queue et éviter le mouvement de la queue ; 2) doucement ponction de la veine à un angle de 20 ° pour éviter la piqûre dans la veine et de garder l’aiguille de ponction de la veine.
En conclusion, la méthode de collecte de sang de vide adopté chez le rat est sans danger, faisable et facile à pratiquer. Cette méthode permet à fréquence d’échantillonnage de sang avec un volume de sang adéquat provenant de rats non anesthésiés.
Disclosures
Les auteurs n’ont rien à divulguer
Acknowledgments
Les auteurs n’ont aucun remerciements à faire.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| a double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 22G | (0.7×25mm) |
| vacuum tubes | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 2 ml | |
| rat restraining holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 250g rat hoder model | |
| normal salt diet for rats | Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study | ||
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. |
References
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