Summary
כאן, אנו מתארים שיטה פשוטה הזנב וריד דם הדגימה בחולדות שאינם מרדימים באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום. שיטה זו מפחיתה את הסיכון בחשיפה ישירה דם ומפשטת לקיחת דגימות מרובים venipuncture יחיד.
Abstract
ניתן לאסוף דם של עכברים במספר מיקומי הדגימה. למשל, וריד הזנב הוא מיקום מעולה עבור לקיחת דמים. אולם, וריד הזנב הוא דק כך שקשה לפעמים לנקב. בנוסף, וריד הזנב יש זרימת דם נמוך ודורש זמן הדגימה ארוך כדי לקבל מספיק דם. ח הנוכחי מתאר את שיטת דגימה דם פשוטה, שיטת איסוף דם ואקום, אשר משמש בדרך כלל כדי להשיג דגימות דם מחולים, משמש כאן חולדות שאינם מרדימים. קצה המחט פרפר 22 גרם הוכנס לתוך אחד העורקים הזנב לרוחב כ- 2-3 ס מ בקצה הזנב בזווית של 20°, ואת הדם נאסף בצינור אוסף אבק על-ידי הוספת הסוף גומי של המחט פרפר החיילים המשוחררים cuum דם אוסף שפופרת. תוצאות הניסוי הנוכחי הראה כי שיעור ההצלחה היה 95% בקבוצה ניסיוני ל- 90% בקבוצה למתחילים. שיעור ההצלחה לנקב פעמים היו דומים בין שתי הקבוצות. משך דגימת היה נמוך באופן משמעותי בקבוצת הניסוי בהשוואה לקבוצת למתחילים. לסיכום, דם ואקום אוסף שיטה זו עבור לקיחת דמים רציפים של וריד הזנב שאינם מרדימים עכברי - היא ריאלי, קל-אל-ללמוד, אשר יכול לשמש אלטרנטיבה אמינה השני בשימוש כמקובל טכניקות דגימה דם חולדות.
Introduction
לקיחת דמים של חולדות נדרש עבור מגוון רחב של מחקרים ניסיוניים. טכניקות לאיסוף דם מהחולדה כוללות ניקוב של הלב, מקלעת רטרו-מסלולית, ומוחלף, וריד saphenous, כלי הדם הזנב, העורק הראשי, העורק הראשי, הנבוב. רוב הטכניקות (למעט וריד saphenous ואת הזנב כלי דם פנצ'רים) לדרוש הרדמה1,2. ורידים של זנב החולדה הן ניקב באופן שגרתי עבור לקיחת דמים, הזרקת הדם. לאחר טיפול הזנב עם מים חמים, כלי הדם הם מורחבים טוב ומתאים מניפולציה, אפילו כאשר הם מרדימים3.
למרות ההתפתחות של טכניקות חדשות ומשופרות להשיג דגימות דם חיות מעבדה קטנה2, זה לא תמיד קל להשיג מספיק דם בעת דגימה של חיות קטנות. וריד הזנב חולדות הוא מיקום מעולה עבור דגימה דם4. אולם, וריד הזנב הוא דק, ובכך זה לפעמים קשה לנקב, היה לוקח זמן רב להגיע מספיק דם עקב זרימת דם נמוך שלו. איסוף הדם באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום היא שיטה אופיינית יומי הקלינית. זו מערכת סגורה. דם איסוף מפחיתה את הסיכון בחשיפה ישירה דם והוא עשה את זה קל יותר לקחת מספר דגימות venipuncture יחידה5. ח הנוכחי מתאר את שיטת דגימה דם וריד הזנב פשוטה בחולדות שאינם מרדימים באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום. שיטה זו קל לשלוט והוא יכול לשמש כדי לקבל כמויות גדולות של דם שוב ושוב אצל חולדות.
Protocol
כל ההליכים אושרו על ידי המועצה המכללה הרפואית טונגג'י חיה טיפול הוועדה של Huazhong האוניברסיטה למדעים וטכנולוגיה (ווהאן, סין). כתב היד הוכן לפי יגיעו (חיה מחקר: דיווח של ניסויים ב- Vivo ) הנחיות6.
1. גידול
- השתמש חולדות ספראג-Dawley (SD) (n = 20, 10 אנשים, 8 בת שבוע, שוקל 261 ל 291 g, כלומר = 272.85 ±9.07 g) מאוניברסיטת מרכז חיות הניסוי של Huazhong של המדע והטכנולוגיה ולשמור על חולדות לפי המדריך טיפול ושימוש חיות מעבדה שפרסם את בנו המכון הלאומי לבריאות (NIH הפרסום No.85-23, תוקן 1996)
- בית בתנאים סטנדרטיים עם גישה חופשית מזון ומים לשתיה. לשמור על מצעים חולדות בכלובים2 ס מ 530 עם עץ-גילוח. בית שני עכברושים בכל כלוב. פקח כל הכלובים לסביבת חדר (לא מיקרו-בידוד או שכולאת מאוורר)
- ודא הצוות מעורב פרוטוקול נסיוני לטפל באופן קבוע את החולדות.
- לשמור על טמפרטורת חדר בין 21 ° C ל- 23 ° C. תן המחירים מלח דיאטה רגילה (0.3% NaCl) לאורך כל תקופת המחקר.
2. הליך איסוף הדם
הערה: מערכת איסוף הדם ואקום מורכב מחט דו-ראשי [22 גרם (0.7 מ"מ x 25 מ"מ)], בעל פלסטיק, וסדרה של שפופרות ואקום (2 מ"ל) עם stoppers גומי (איור 1).
- מניחים את החולדה בעל הרחקה פלסטיק ולשטוף את הזנב עם מים חמים (20-30 ° C) כדי להסיר את כל הלכלוך גלוי או צואה. בעוד עוזרת מחזיקה בזנב במצב מורחב, לנגב את הזנב עם 70% אתנול, ולנקות עם גזה כדי להפוך את הווריד לנקות.
- להוסיף 22 גרם פרפר מחט לתוך אחד העורקים הזנב לרוחב (בסביבות 5 מ מ) במיקום כ 2-3 ס מ מן קצה הזנב בזווית של 20 ° (איור 2). איסוף הדם לתוך הצינור אוסף אבק על-ידי הוספת הסוף גומי של המחט הפרפר לתוך הצינור אוסף דם ואקום (איור 3).
הערה: נפח הדם אוסף המקסימלי הוא 1.2 מ ל7. - לאחר איסוף דם, הסר את המחט, בעדינות אל תפעילו לחץ על החדירה עם גזה עבור 15-30 s לעצור את זרימת הדם. לאחר מכן, לשחרר את החולדה ממחזיק הרחקה פלסטיק וחוזרים העכברוש בכלוב.
- השתמש צינורות מכילה EDTA בתור נוגדת קרישה כדי לאסוף פלזמה דם. בעדינות היפוך ברכבת התחתית מספר פעמים כדי לערבב קרישה בדם ומניחים את הדגימות על הקרח אנכית.
- Centrifuge את צינורות אוסף דגימת דם צנטריפוגה בקירור ב g x 2,000 10 דקות להפריד בין פלזמה או סרום.
- תמצית הפלזמה/הסרום, דואגת שלא להפריע את השכבות תא דם אדום ולבן. כדי לאסוף דם בסרום, השתמש צינורות ללא נוגד קרישה. שני סוגי הדגימה שאפשר שימוש באופן מיידי או לאחסן ב- 80 ° C עד שנה אחת.
הערה: איסוף דם מוצלח מוגדר כקבלת 1.2 מ ל דם בכל פעם. ניקוב מקסימלי פעם היה להגדיר שלושה ניסויים, אם נפח הדם הכולל היה נמוך יותר מ 1.2 לאחר הניקוב השלישי, הוא הוגדר כאוסף דם שנכשלו. משך דגימת מתחיל מ הניקוב וריד הזנב הסרת המחט פרפר לאחר איסוף דם. -
לאסוף דם פעמיים בתוך שבועיים7.
- כדי לבדוק ולוודא את הכדאיות של שיטה זו, הרכבת שני סטודנטים לרפואה (למתחילים) כבר שעתיים לפני ביצוע פרוטוקול אוסף זה דם. השתמש חולדות עשרים, דם של 10 חולדות על ידי העמיתים מנוסים 2 (קבוצת הניסוי) ושל 10 חולדות על ידי 2 סטודנטים לרפואה (קבוצה למתחילים).
3. ניתוח סטטיסטי
- אקספרס נתונים כמו הערך הממוצע ± סטיית תקן ולנתח עם SPSS 17 סטטיסטיקה. ערך α של 0.05 נבחר, לכן p < 0.05 נחשב משמעותי סטטיסטית.
Representative Results
משך דגימת, מסת הגוף, ונפח הדם אוסף של שתי הקבוצות
דם נאסף מתוך 10 חולדות (5 גברים) פעמיים תוך שבועיים בכל קבוצה. מסת הגוף אומר בשתי הקבוצות הייתה דומה (272.00 ±9.66 g ו g 273.70 ±8.87). משך דגימת היה נמוך באופן משמעותי בקבוצת הניסוי בהשוואה לקבוצת מתחילים (2.77 min ±0.53 לעומת 3.28 ±0.83 מין, p < 0.05) (טבלה 1).
הצלחה דרג ו לנקב פעמים של שתי הקבוצות
שיעור ההצלחה היה 95% (19/20) בתוך קבוצת הניסוי ו- 90% (18/20) בקבוצה למתחילים (p > 0.05). ניקוב פעמים לא היו שונים באופן משמעותי בין שתי הקבוצות (1.50 min ±0.61 לעומת 1.85 ±0.75 מין, p > 0.05) (טבלה 2). תוצאות אלה מצביעים על שיטה זו קל ללמוד הטכניקה יכולה להיות מומחה לאחר אימון עבור 2 h.
איור 1 : 2 מ"ל דם ואקום אוסף שפופרת (משמאל); 22 גרם פרפר המחט (מרכז); בעל הרחקה פלסטיק (מימין)- אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2 : קצה המחט היה מוכנס לתוך הווריד של הזנב לרוחב (בסביבות 5 מ מ) במיקום כ 2-3 ס מ מן קצה הזנב בזווית של ° 20 משוער. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 3 : מוצלח venipuncture. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
| קבוצת הניסוי | קבוצה למתחילים | |||||||||
| מגדר | משקל הגוף (g) | נפח הדם שנאספו (mL) | משך דגימת (שלי) | מגדר | משקל הגוף (g) | נפח הדם שנאספו (mL) | משך דגימת (שלי) | |||
| E1-1 | זכר | 291 | 1.2 | 3.12 | B1-1 | זכר | 282 | 1.2 | 3.18 | |
| E1-2 | זכר | 291 | 1.2 | 2.73 | B1-2 | זכר | 282 | 1.2 | 2.18 | |
| E2-1 | זכר | 276 | 1.2 | 2.3 | B2-1 | זכר | 264 | 1.2 | 3.73 | |
| E2-2 | זכר | 276 | 1.2 | 2.37 | B2-2 | זכר | 264 | 1.2 | 2.47 | |
| E3-1 | זכר | 267 | 1.2 | 2.73 | B3-1 | זכר | 265 | 1.2 | 3.52 | |
| E3-2 | זכר | 267 | 1.0 | 3.88 | B3-2 | זכר | 265 | 1.2 | 2.53 | |
| E4-1 | זכר | 263 | 1.2 | 2.41 | B4-1 | זכר | 289 | 1.2 | 2.32 | |
| E4-2 | זכר | 263 | 1.2 | 2.52 | B4-2 | זכר | 289 | 1.2 | 3.62 | |
| E5-1 | זכר | 265 | 1.2 | 3.61 | B5-1 | זכר | 277 | 1.2 | 3.48 | |
| E5-2 | זכר | 265 | 1.2 | 2.42 | B5-2 | זכר | 277 | 1.2 | 3.12 | |
| E6-1 | נקבה | 285 | 1.2 | 3.33 | B6-1 | נקבה | 274 | 0.9 | 4.87 | |
| E6-2 | נקבה | 285 | 1.2 | 3.03 | B6-2 | נקבה | 274 | 1.2 | 3.37 | |
| E7-1 | נקבה | 271 | 1.2 | 2.82 | B7-1 | נקבה | 268 | 1.0 | 3.93 | |
| E7-2 | נקבה | 271 | 1.2 | 2.42 | B7-2 | נקבה | 268 | 1.2 | 3.82 | |
| E8-1 | נקבה | 268 | 1.2 | 1.93 | B8-1 | נקבה | 262 | 1.2 | 2.07 | |
| E8-2 | נקבה | 268 | 1.2 | 3.05 | B8-2 | נקבה | 262 | 1.2 | 3.67 | |
| E9-1 | נקבה | 273 | 1.2 | 2.52 | B9-1 | נקבה | 281 | 1.2 | 4.38 | |
| E9-2 | נקבה | 273 | 1.2 | 3.17 | B9-2 | נקבה | 281 | 1.2 | 4.57 | |
| E10-1 | נקבה | 261 | 1.2 | 1.82 | B10-1 | נקבה | 275 | 1.2 | 2.53 | |
| E10-2 | נקבה | 261 | 1.2 | 3.25 | B10-2 | נקבה | 275 | 1.2 | 2.28 | |
| ממוצע | 2.77 | 3.28 | ||||||||
| En-1: מספר סידורי של חולדות בקבוצה ניסיוני לאיסוף הדם הראשונה. | ||||||||||
| En-2: מספר סידורי של חולדות בקבוצה ניסיוני לאיסוף הדם השני. | ||||||||||
| בסון-1: מספר סידורי של חולדות בקבוצה למתחילים לאיסוף הדם הראשונה. | ||||||||||
| בסון-2: מספר סידורי של חולדות בקבוצה למתחילים עבור האוסף השני של דם. | ||||||||||
טבלה 1: תוצאות של דם שנאסף קבוצת הניסוי וקבוצת למתחילים.
| דם אוסף פעמים | ניקוב הממוצע פעמים | ניקוב בפעם אחת | שתי פעמים לנקב | שלוש פעמים לנקב | נכשל | אחוזי הצלחה | |
| קבוצת הניסוי | 20 | 1.50 ±0.61 | 11 | 8 | 0 | 1 | 95% |
| קבוצה למתחילים | 20 | 1.85 ±0.75 | 7 | 9 | 2 | 2 | 90% |
| ניקוב הזמן אחד: מספר עכברים עם איסוף דם מוצלח לאחר הניקוב הראשון | |||||||
| ניקוב פעמיים: מספר עכברים עם איסוף דם מוצלח לאחר הניקוב השני | |||||||
| ניקוב שלוש פעמים: מספר עכברים עם איסוף דם מוצלח לאחר הניקוב השלישי | |||||||
| נכשל: מספר עכברים עם נכשל איסוף דם לאחר הניקוב השלישי | |||||||
טבלה 2: השוואה של ניקוב פעמים, אחוזי ההצלחה של קבוצת הניסוי וקבוצת למתחילים.
Discussion
ח הנוכחי מתאר את שיטת איסוף דם קל-כדי-ללמוד אצל חולדות. התוצאות שלנו הראה כי שיטה זו אפשרית לאיסוף שוב ושוב כמויות גדולות של דם של עכברים. יתר על כן, שיטה זו יכולה להיות בקלות מומחה עם עקומת למידה לטווח קצר. הליך זה יכול להתבצע בחולדות שאינם מרדימים וגורם רק לחץ מינימלי החיות.
ניתן לאסוף דם של עכברים במקומות שונים. תקחי את הזנב הוא מיקום מעולה עבור דגימה דם4. עם זאת, זה לא תמיד קל להשיג מספיק נפח הדם של וריד הזנב זרימת דם דליל ונמוך העכברושים מערכת איסוף הדם ואקום משמש בדרך כלל לאיסוף דגימות דם מחולים יומי הקלינית. זו מערכת איסוף הדם ואקום שימש בבית חולים ובעלי מחקר במשך זמן רב8,9,10. מערכת זו מורכבת צינור אוסף דם ואקום עם מחט קיר, פרפר של הצינור הפנימי מצופה סיליקון. הוא היה מבוסס על העיקרון לחץ שלילי ואקום ומאפשר את הציור רציף של דם ללא הסיכון של איסוף הדם, אשר גם מפחית את הסיכוי לזיהום וזיהום המוליזה11. אמצעי האחסון של דגימת דם הקטטר נמצא בערך 0.3 מ. לאחר נסיגתה המחט מן הווריד של הזנב, יזרום הדם החסומים הקטטר לתוך שפופרת הואקום איסוף בשל הוואקום. שיטה זו ישימה גם עבור איסוף דם של עכברים במשקל של פחות מ- 100 גרם עם השימוש של מחט דקירה קטנה יותר.
שיטה זו של אוסף דם יש מספר יתרונות. הליך זה רק גורמת פגיעה מינימלית חולדות, איסוף דם יכול להתבצע ללא השימוש בהרדמה, ובכך ניתן למנוע את השפעת תגובת המתח ואת חומרי הרדמה על דגימת הדם. התצפיות הראו כי חולדות היו שקטים, המחזיק הרחקה פלסטיק במהלך ההליך, היו מקרי מוות לא במהלך ניסויים אלה. שנית, חזר על איסוף דם כל אחד או יומיים אפשרית, אשר מאפשר בתדירות דגימה של דם עם אמצעי אחסון נאותים למטרות מחקר שונים. לבסוף, שיטה זו קל ללמוד, היה בקלות לשלוט על ידי מתחילים אחרי תקופה קצרה (2h) למידה, כפי שמציין את שיעורי הצלחה דומים והשעות לנקב בין הקבוצות ניסיוני ואני מתחיל בדו ח זה. בדוח הקודם, הוכיח לי. et al. שיטה דומה של דגימת דם וריד הזנב לרוחב העכברוש4. השיטה שלנו היא פשוט יותר מזה שדווח על ידי Lee. et al. 4 כי אנחנו ישירות להכניס את המחט לנקב את הווריד הזנב ואת הקצה השני של הצינור מחובר ישירות אל שפופרת הואקום לאיסוף הדם, ללא השימוש מזרק נוסף ושאיפה ידנית של הדם וללא הצורך של ' חלב אינג ' הווריד כדי להקל על זרימת הדם. איסוף דם עם מערכת סגורה זו מקטינה את הסיכוי לזיהום דם. שימוש של בעל הרחקה פלסטיק גם מפחית את הלחץ חולדה ואסטמה ומקילה על הקיבעון של הזנב.
שני השלבים הבאים הם קריטיים עבור היישום המוצלח של שיטה זו. 1) להרחיב את הזנב ולהימנע התנועה של הזנב; 2) בעדינות לנקב את הווריד בזווית של ° 20 כדי למנוע חדירה דרך הווריד של ולשמור את המחט לנקב בווריד.
לסיכום, שיטת איסוף דם ואקום המאומץ בחולדות הוא בטוח, ריאלי וקל להתאמן. שיטה זו מאפשרת בתדירות דגימה של דם עם אמצעי אחסון הדם המתקבל חולדות שאינם מרדימים.
Disclosures
המחברים אין לחשוף
Acknowledgments
המחברים יש אין תודות לעשות.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| a double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 22G | (0.7×25mm) |
| vacuum tubes | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 2 ml | |
| rat restraining holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 250g rat hoder model | |
| normal salt diet for rats | Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study | ||
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. |
References
- Brown, C. Blood collection from the tail of a rat. Lab Anim (NY). 35 (8), 24-25 (2006).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Staszyk, C., Bohnet, W., Gasse, H., Hackbarth, H. Blood vessels of the rat tail: a histological re-examination with respect to blood vessel puncture methods. Lab Anim. 37 (2), 121-125 (2003).
- Lee, G., Goosens, K. A. Sampling blood from the lateral tail vein of the rat. J. Vis. Exp. (99), (2015).
- WHO Guidelines on Drawing Blood: Best Practices in Phlebotomy WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. , (2010).
- Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Anim. 44 (4), 377-378 (2010).
- Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).
- Eder, J. M., Cutter, G. R. A new device for collecting cord blood. Obstet Gynecol. 86 (5), 850-852 (1995).
- Reynolds, B. S., et al. Comparison of a new device for blood sampling in cats with a vacuum tube collection system - plasma biochemistry, haematology and practical usage assessment. J Feline Med Surg. 9 (5), 382-386 (2007).
- Wiwanitkit, V. Comparison of blood specimens from plain and gel vacuum blood collection tubes. J Med Assoc Thai. 84 (5), 723-726 (2001).
- Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter. Acad Emerg Med. 20 (11), 1151-1155 (2013).
