Summary
Qui, descriviamo un metodo di prelievo di sangue della vena della coda semplice in ratti anestetizzati con non utilizzando un sistema di tubo di aspirazione. Questo metodo riduce il rischio di esposizione diretta al sangue e semplifica prendendo campioni multipli da un singolo prelievo venoso.
Abstract
Sangue può essere raccolto da ratti in un certo numero di punti di campionamento. Per esempio, la vena di coda è una posizione superiore per il prelievo di sangue. Tuttavia, vena caudale è sottile in modo che a volte è difficile perforare. Inoltre, vena caudale ha flusso sanguigno basso e richiede un tempo di campionamento lungo per ottenere sangue sufficiente. Il rapporto presente descrive un metodo di campionamento del sangue semplice, il metodo di raccolta di sangue sotto vuoto, che viene solitamente utilizzato per ottenere campioni di sangue dai pazienti, qui usati per ratti anestetizzati con non. La punta dell'ago di farfalla 22 G è stata inserita in una delle vene coda laterale circa 2-3 cm dalla punta della coda con un angolo di circa 20° e il sangue è stato raccolto nel tubo sottovuoto raccolta inserendo alla fine di gomma dell'ago farfalla il va tubo di raccolta sangue di aspirazione. I presenti risultati sperimentali mostrano che il tasso di successo era 95% nel gruppo sperimentale e il 90% nel gruppo di principianti. Il tasso di successo e puntura volte erano simili tra i due gruppi. La durata del campionamento era significativamente più breve nel gruppo sperimentale rispetto al gruppo di principianti. In conclusione, questo metodo di raccolta del sangue di vuoto per il campionamento sequenziale sangue dalla vena caudale del non - ratti anestetizzati è fattibile e facile da imparare, che potrebbe servire come un'alternativa affidabile agli altri convenzionalmente usato tecniche di campionamento di sangue per ratti.
Introduction
Prelievo di sangue da ratti è necessario per un'ampia varietà di studi sperimentali. Tecniche per la raccolta del sangue dal ratto includono puntura del cuore, plesso retro-orbitale, vena giugulare, vena safena, vasi sanguigni coda, dell'arteria carotica, aorta addominale e della vena cava. La maggior parte delle tecniche (ad eccezione della vena safena e puntura del vaso sanguigno di coda) richiedono anestesia1,2. Le vene della coda del ratto sono ordinariamente forate per il prelievo di sangue e iniezione vascolare. Dopo aver trattato la coda con acqua calda, i vasi sanguigni sono ben dilatata e adatto per la manipolazione, anche quando i ratti sono anestetizzati3.
Nonostante lo sviluppo di tecniche nuove e migliorate per ottenere campioni di sangue nel piccolo laboratorio animali2, non è sempre facile ottenere abbastanza sangue durante il campionamento da piccoli animali. La vena della coda dei ratti è una posizione superiore per sangue campionamento4. Tuttavia, la vena caudale è sottile, così a volte è difficile da forare e richiederebbe un tempo lungo per ottenere abbastanza sangue a causa del suo flusso di sangue basso. Raccolta del sangue tramite un sistema di tubo di aspirazione è un metodo tipico nella pratica clinica quotidiana. Questo sistema chiuso per la raccolta del sangue riduce il rischio di esposizione diretta al sangue e ha reso più facile prendere campioni multipli da un singolo prelievo venoso5. Il rapporto presente descrive un metodo di prelievo di sangue della vena della coda semplice in ratti anestetizzati con non utilizzando il sistema di tubo di aspirazione. Questo metodo è facile da padroneggiare e può essere utilizzato per ottenere un grande volume di sangue ripetutamente in ratti.
Protocol
Tutte le procedure sono state approvate dal Consiglio di Tongji Medical College sul animale cura Comitato di Università Huazhong di scienza e tecnologia (Wuhan, Cina). Il manoscritto è stato preparato secondo ARRIVE (Animal Research: Reporting di esperimenti In Vivo ) linee guida6.
1. allevamento
- Utilizzare ratti Sprague-Dawley (deviazione standard) (n = 20, 10 maschi, 8 settimana-vecchio, pesa 261 a 291 g, significano = 272.85 ±9.07 g) da sperimentali animali centro di Huazhong Università della scienza e della tecnologia e mantenere ratti in conformità con la guida per l'uso e la manutenzione Pubblicato da la US National Institute of Health (NIH pubblicazione No. 85-23, riveduta 1996) gli animali da laboratorio
- Casa in condizioni standard con accesso gratuito per cibo e acqua potabile. Ratti in gabbie di2 cm 530 con rasatura di legno tenere biancheria da letto. Due ratti di casa in ogni gabbia. Tenere tutte le gabbie aperte all'ambiente camera (nessuna micro-isolamento o ingabbiamento ventilato)
- Garantire il personale coinvolto nel protocollo sperimentale gestire regolarmente i ratti.
- Mantenere la temperatura ambiente tra i 21 ° C e 23 ° C. Dare tariffe una normale dieta di sale (0,3% NaCl) in tutto lo studio.
2. procedura di raccolta del sangue
Nota: Il sistema di raccolta di sangue sotto vuoto costituito da un doppia punta ago [22 G (0,7 mm x 25 mm)], un supporto di plastica e una serie di tubi a vuoto (2 mL) con tappo in gomma (Figura 1).
- Posizionare il ratto un supporto in plastica restrittivo e lavare la coda con acqua calda (20-30 ° C) per rimuovere eventuali impurità visibili o feci. Mentre un assistente tiene la coda in posizione estesa, strofinare la coda con etanolo al 70% e pulire con una garza per chiarire la vena.
- Inserire la punta dell'ago di farfalla 22g in uno delle vene coda laterale (circa 5 mm) in una posizione di circa 2-3 cm di distanza dalla punta della coda ad angolo di circa 20 ° (Figura 2). Raccogliere il sangue nella provetta sottovuoto raccolta mediante inserendo la punta di gomma dell'ago farfalla nel tubo di raccolta di sangue sotto vuoto (Figura 3).
Nota: Il volume di sangue raccolta massima è 1,2 mL7. - Dopo la raccolta del sangue, rimuovere l'ago e applicare una leggera pressione al sito della puntura con una garza per 15-30 s fermare il flusso di sangue. Quindi, rilasciare il ratto dal supporto di plastica restrittivo e tornare il ratto alla sua gabbia.
- Utilizzare le provette contenenti EDTA come anticoagulante per raccogliere il plasma sanguigno. Capovolgere delicatamente la provetta diverse volte per mescolare anticoagulante nel sangue e posizionare i campioni su ghiaccio verticale.
- Centrifugare i tubi di raccolta del campione di sangue in una centrifuga refrigerata a 2.000 x g per 10 min separare il plasma o siero.
- Estrarre il plasma/siero, facendo attenzione a non per disturbare i livelli di globuli rossi e bianchi. Per raccogliere il sangue siero, utilizzare provette senza anticoagulante. Entrambi i tipi di campione possono essere utilizzati immediatamente, o conservati a-80 ° C fino ad un anno.
Nota: Il successo del sangue è stato definito come ottenere 1,2 mL di sangue ogni volta. Foratura massima ora è stata impostata a tre prove, se il volume totale del sangue era più basso di 1,2 mL dopo la terza puntura, è stato definito come una raccolta di sangue non riuscita. La durata del campionamento inizia dalla puntura della vena della coda alla rimozione dell'ago farfalla dopo il prelievo di sangue. -
Raccogliere il sangue due volte entro due settimane7.
- Per testare e verificare la fattibilità di questo metodo, è necessario addestrare due studenti di medicina (principianti) per 2 h prima di eseguire questo protocollo di raccolta di sangue. Utilizzare venti ratti e prelevare il sangue da 10 ratti da 2 esperti compagni (gruppo sperimentale) e da 10 ratti dagli studenti medici 2 (gruppo principianti).
3. elaborazione statistica
- Esprimere i dati come un valore medio ± deviazione standard e analizzare con SPSS statistica 17. Un valore α pari a 0,05 è stato scelto, quindi p < 0,05 è stato considerato statisticamente significativo.
Representative Results
Durata di campionamento, la massa del corpo e volume di raccolta di sangue dei due gruppi
Sangue è stato raccolto da 10 ratti (5 maschi) due volte nell'arco di due settimane in ogni gruppo. La massa corporea medio in entrambi i gruppi era simile (272,00 ±9.66 g e g 273.70 ±8.87). Durata di campionamento era significativamente più breve nel gruppo sperimentale rispetto al gruppo di principianti (2,77 ±0.53 min vs 3,28 ±0.83 min, p < 0,05) (tabella 1).
Successo valuta e volte di due gruppi di foratura
Il tasso di successo era 95% (19/20) nel gruppo sperimentale e il 90% (18/20) nel gruppo di principianti (p > 0.05). Puntura volte non erano significativamente differenti fra i due gruppi (1.50 ±0.61 min vs 1,85 ±0.75 min, p > 0,05) (tabella 2). Questi risultati indicano questo metodo è facile da imparare, e la tecnica potrebbe essere masterizzata dopo l'allenamento per 2 h.
Figura 1 : 2 mL vuoto provetta da prelievo (a sinistra); ago a farfalla G 22 (centro); il supporto di plastica restrittivo (a destra). Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 2 : La punta dell'ago è stata inserita nella vena caudale laterale (circa 5 mm) in corrispondenza della posizione circa 2-3 cm di distanza dalla punta della coda ad angolo di circa 20 °. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 3 : Successo venipuntura. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
| Gruppo sperimentale | Gruppo di principianti | |||||||||
| Genere | Peso corporeo (g) | Volume di sangue prelevato (mL) | durata di campionamento (min) | Genere | Peso corporeo (g) | Volume di sangue prelevato (mL) | durata di campionamento (min) | |||
| E1-1 | uomo | 291 | 1.2 | 3.12 | B1-1 | uomo | 282 | 1.2 | 3.18 | |
| E1-2 | uomo | 291 | 1.2 | 2.73 | B1-2 | uomo | 282 | 1.2 | 2.18 | |
| E2-1 | uomo | 276 | 1.2 | 2.3 | B2-1 | uomo | 264 | 1.2 | 3,73 | |
| E2-2 | uomo | 276 | 1.2 | 2.37 | B2-2 | uomo | 264 | 1.2 | 2,47 | |
| E3-1 | uomo | 267 | 1.2 | 2.73 | B3-1 | uomo | 265 | 1.2 | 3,52 | |
| E3-2 | uomo | 267 | 1.0 | 3,88 | B3-2 | uomo | 265 | 1.2 | 2.53 | |
| E4-1 | uomo | 263 | 1.2 | 2.41 | B4-1 | uomo | 289 | 1.2 | 2.32 | |
| E4-2 | uomo | 263 | 1.2 | 2.52 | B4-2 | uomo | 289 | 1.2 | 3.62 | |
| E5-1 | uomo | 265 | 1.2 | 3,61 | B5-1 | uomo | 277 | 1.2 | 3,48 | |
| E5-2 | uomo | 265 | 1.2 | 2.42 | B5-2 | uomo | 277 | 1.2 | 3.12 | |
| E6-1 | donna | 18V | 1.2 | 3.33 | B6-1 | donna | 274 | 0.9 | 4.87 | |
| E6-2 | donna | 18V | 1.2 | 3,03 | B6-2 | donna | 274 | 1.2 | 3.37 | |
| E7-1 | donna | 271 | 1.2 | 2.82 | B7-1 | donna | 268 | 1.0 | 3,93 | |
| E7-2 | donna | 271 | 1.2 | 2.42 | B7-2 | donna | 268 | 1.2 | 3.82 | |
| E8-1 | donna | 268 | 1.2 | 1.93 | B8-1 | donna | 262 | 1.2 | 2.07 | |
| E8-2 | donna | 268 | 1.2 | 3,05 | B8-2 | donna | 262 | 1.2 | 3,67 | |
| E9-1 | donna | 273 | 1.2 | 2.52 | B9-1 | donna | 281 | 1.2 | 4,38 | |
| E9-2 | donna | 273 | 1.2 | 3.17 | B9-2 | donna | 281 | 1.2 | 4,57 | |
| E10-1 | donna | 261 | 1.2 | 1.82 | B10-1 | donna | 275 | 1.2 | 2.53 | |
| E10-2 | donna | 261 | 1.2 | 3.25 | B10-2 | donna | 275 | 1.2 | 2.28 | |
| Media | 2,77 | 3.28 | ||||||||
| It-1: numero di serie dei ratti nel gruppo sperimentale per la prima raccolta di sangue. | ||||||||||
| It-2: numero di serie dei ratti nel gruppo sperimentale per la seconda raccolta di sangue. | ||||||||||
| BN-1: numero di serie dei ratti nel gruppo di principianti per la prima raccolta di sangue. | ||||||||||
| BN-2: numero di serie dei ratti nel gruppo di principianti per la seconda raccolta di sangue. | ||||||||||
Tabella 1: Risultati del sangue raccolti nel gruppo sperimentale e il gruppo di principianti.
| Tempi di raccolta del sangue | Media puntura volte | Una sola puntura tempo | Puntura di due volte | Puntura di tre volte | Non riuscita | Tasso di successo | |
| Gruppo sperimentale | 20 | 1.50 ±0.61 | 11 | 8 | 0 | 1 | 95% |
| Gruppo di principianti | 20 | ±0.75 1.85 | 7 | 9 | 2 | 2 | 90% |
| Una sola puntura tempo: numero di ratti con successo del sangue dopo la prima puntura | |||||||
| Due volte la puntura: numero di ratti con successo del sangue dopo la puntura secondo | |||||||
| Tre volte la puntura: numero di ratti con successo del sangue dopo la terza puntura | |||||||
| Non riuscita: numero di ratti con errore prelievo di sangue dopo la terza puntura | |||||||
Tabella 2: Confronto dei tempi di puntura e tassi di successo del gruppo sperimentale e il gruppo di principianti.
Discussion
Il rapporto presente descrive un metodo di raccolta di sangue facile da imparare in ratti. I nostri risultati hanno mostrato che questo metodo è fattibile per la raccolta ripetutamente un grande volume di sangue dai ratti. Inoltre, questo metodo potrebbe essere imparato facilmente con una breve curva di apprendimento. Questa procedura può essere eseguita in ratti anestetizzati con non e solo causa di minimo stress agli animali.
Sangue può essere raccolto da ratti in varie località. La vena della coda è una posizione superiore per sangue campionamento4. Tuttavia, non è sempre facile da ottenere abbastanza volume di sangue dalla vena sangue sottile e basso flusso coda dei ratti. Il sistema di raccolta di sangue sotto vuoto viene solitamente utilizzato per la raccolta di campioni di sangue dai pazienti nella pratica clinica quotidiana. Questo sistema di raccolta di sangue sotto vuoto è stato utilizzato in pazienti e ricerca gli animali per un lungo periodo di tempo8,9,10. Questo sistema è costituito da un tubo di raccolta di sangue sotto vuoto con ago di farfalla e parete tubo interno rivestito in silicone. Essa si basava sul principio di pressione negativa di vuoto e permette il disegno di sangue senza il rischio di raccolta di sangue, che inoltre riduce il rischio di contaminazione ed emolisi11continuo. Il volume di campione di sangue nel catetere è di circa 0,3 mL. Dopo aver ritirato l'ago dalla vena della coda, il sangue bloccato nel catetere scorrerà nel tubo di aspirazione raccolta a causa del vuoto. Questo metodo è anche applicabile per la raccolta di sangue da ratti che pesano meno di 100 g con l'uso di un ago puntura più piccolo.
Questo metodo di raccolta di sangue ha diversi vantaggi. Questa procedura provoca solo lesioni minime ai ratti e raccolta del sangue può essere eseguita senza l'uso di anestetici, così si può evitare l'influenza della risposta allo stress e anestetici sul campione di sangue. Le nostre osservazioni hanno mostrato che ratti erano tranquille sul supporto in plastica restrittivo durante la procedura e non ci erano morti durante questi esperimenti. In secondo luogo, ripetuto il prelievo di sangue ogni uno o due giorni è possibile, che consente il campionamento frequente di sangue con un volume adeguato per vari scopi di ricerca. Infine, questo metodo è facile da imparare e facilmente è stato masterizzato da principianti dopo un periodo di apprendimento brevi (2 h), come indicato dai simili tassi di successo e puntura volte tra i gruppi sperimentali e principiante in questo rapporto. In una precedente relazione, Lee et al hanno dimostrato un simile metodo di campionamento di sangue dalla vena laterale della coda di ratto4. Il nostro metodo è più semplice di quello riportato da Lee et al. 4 in che inseriamo direttamente l'ago puntura in vena caudale e l'altra estremità del tubo è collegato direttamente al tubo a vuoto per la raccolta del sangue, senza l'uso di una siringa supplementare e manuale di aspirazione del sangue e senza la necessità di ' latte ING' la vena per facilitare il flusso sanguigno. Raccolta di sangue con questo sistema chiuso riduce la probabilità di contaminazione del sangue. Uso del supporto di plastica restrittivo anche riduce lo stress al ratto e facilita la fissazione della coda.
I due passaggi seguenti sono fondamentali per la riuscita applicazione di questo metodo. 1) estendere la coda ed evitare il movimento della coda; 2) delicatamente forare la vena con un angolo di 20 ° per evitare la puntura attraverso la vena e mantenere la puntura dell'ago nella vena.
In conclusione, il metodo di raccolta sangue vuoto adottato nei ratti è sicuro, fattibile e facile da praticare. Questo metodo consente frequente prelievo di sangue con un volume di sangue adeguato ottenuto da ratti non anestetizzati.
Disclosures
Gli autori non hanno nulla a rivelare
Acknowledgments
Gli autori non hanno nessun ringraziamenti a fare.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| a double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 22G | (0.7×25mm) |
| vacuum tubes | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 2 ml | |
| rat restraining holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 250g rat hoder model | |
| normal salt diet for rats | Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study | ||
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. |
References
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