Summary
حمل السريع تضخم الكبد باستخدام "ربط قسم الكبد" وربط الوريد البابي لظهرت أقام قد اقترح (البس) لاستئصال أورام الكبد ريسيكتابل الشريط الحدودي. هذا النموذج يمكن توضيح الآليات التي تشارك في تضخم سريع ويسمح لاختبار المخدرات التي تعزز أو كتلة التعجيل بالتجديد.
Abstract
البيانات السريرية الأخيرة تدعم نهج جراحية عدوانية لاورام الكبد الأولية والمنتشر على حد سواء. لبعض المؤشرات، مثل الانبثاث الكبد القولون والمستقيم، خلف كمية أنسجة الكبد بعد استئصال الكبد أصبح العامل الرئيسي الذي يحد من ريسيكتابيليتي كبيرة أو عدة أورام الكبد. كمية ضئيلة من أنسجة وظيفية مطلوب لتجنب المضاعفات الشديدة لوظيفة-ظهرت فشل الكبد، التي لديها ارتفاع معدلات الاعتلال والوفيات. حفز نمو الكبد من بقايا المحتملين قبل بتر تصبح أكثر أنشأت في جراحة الكبد، أما في شكل الانصمام الوريد البابي بالأشعة التداخلية أو في شكل ربط الوريد البابي عدة أسابيع قبل الاستئصال. في الآونة الأخيرة، تبين أن تجديد الكبد أكثر اتساعاً وسرعة، عندما تتم إضافة ترانسيكشن متني إلى ربط الوريد البابي في مرحلة أولى ومن ثم، وبعد أسبوع واحد فقط من الانتظار، بتر أداؤها في مرحلة ثانية (اقتران الكبد القسم وربط الوريد البابي لظهرت أقام = البس). البس سرعان ما أصبحت شعبية عبر العالم، ولكن تعرض للانتقاد لأن الوفيات المرتفعة المحيطة بالجراحة. إليه للنمو المتسارع وواسعة النطاق الناجمة عن هذا الإجراء غير مفهومة جيدا. -تم تطوير نماذج حيوانية استكشاف الآليات الجزيئية والفيزيولوجية لتسريع تجديد الكبد في البس كلا. ويعرض هذا البروتوكول نموذج الفئران التي يسمح آليا إلى استكشاف التجديد المتسارع.
Introduction
حدود حجم بقايا الكبد ريسيكتابيليتي أورام الكبد. 1 في العام، عند أقل من 25% الكبد الأنسجة تركت وراءها، والمريض في زيادة خطر الوفاة من فشل الكبد الحاد بسبب عدم وجود وظيفة التمثيل الغذائي للكائن الحي كامل ("صغير جداً بالنسبة حجم متلازمة"). 2 هذا المنصب-ظهرت فشل الكبد هو مضاعفات مدمرة للغاية بعد استئصال الكبد. ولذلك حاولت الأطباء للحث على تجديد الكبد قبل بتر الكبد عن طريق التلاعب في تدفق الوريد البابي. 3 وجد أنه حالما يتم تغطي الوريد البابي، الجزء المتبقي مع تدفق الوريد البابي يبدأ في النمو بمعدل بطيء، ويمكن وبالتالي زيادة تصل إلى 60 في المائة في حجم. 4 الربط الجراحي5 أو الوريد البابي التداخلية الانسداد سواء سريرياً وأنشئت. 4 الزيادة في حجم ووظيفة الكبد يمكن الاعتماد عليها، ولكن معدل النمو في الكبد بعد انسداد المدخل فقط حوالي خمس مقارنة بنمو الكبد بقايا بعد ظهرت جزئية. 6
الوقت اللازم للكبد ينمو أسابيع إلى أشهر على الرغم من تجديد الكبد بمعدل أسرع من ذلك بكثير بعد بتر. على هذا النحو، الكبد هو الجهاز الوحيد الذي ينمو مرة أخرى إلى وظيفة طبيعية بعد إزالة جزء منه. 7 إجراء رواية حفز التجدد الكبد بوتيرة مماثلة بعد هيباكتيكتومي الجزئية ووضعت مجموعة من الجراحين الذين اكتشفت أنه إضافة ترانسيكتيون بين المغطى ويدفع الجزء غير تغطي الكبد الكبد تضخم نفس معدل النمو بعد استئصال الكبد، ولكن قبل الاستئصال. 9 يبدأ الإجراء السريع تضخم 80% داخل بقايا أسبوع كبد في المستقبل، مما يسمح استئصال الأورام واسعة النطاق، أونريسيكتابل أساسا، والكبد في غضون أسبوع. تم استدعاء الإجراء "أسوسياتينج ربط قسم الكبد والوريد البابي لظهرت أقام = البس" وأصبحت سرعة شعبية عبر العالم. 10 تقارير متعددة تدعم توسع في ريسيكتابيليتي من الشريط الحدودي أورام الكبد ريسيكتابل حققتها تقنية جديدة،11 أثناء العملية الجراحية المعقدة كما وجهت انتقادات لمعدل المضاعفات عالية. 12 , 13
تطوير القوارض، وأيضا نماذج حيوانية كبيرة من تضخم بطيئة وسريعة قد سعت منذ نشر البس في عام 2012 للسماح توصيف النسيجي أفضل وفهم الآليات واختبار تأثيرات المخدرات على معدلات نمو مختلفة من أنسجة الكبد في الحيوانات. وكان نموذج الحيوان الأول الذي وضع نموذج الفئران. في هذا النموذج، تسارع تضخم سريع بعد ترانسيكشن متني بين الحق والجزء الأيسر من الفص المتوسط التجديد للفص اليمين الوسط. 14 قدم نموذجا مختلفاً في وقت لاحق في الماوس. في هذا النموذج هو مستأصل الفص الجانبي الأيسر، وكانت مرتبطة فروع الوريد البابي إلى كل فص من الكبد إلا متوسط الفص الأيسر. 15 وفي الوقت نفسه، نماذج حيوانية كبيرة لالبس في الخنازير وقد وصف كذلك. 16
لدراسة الآليات الفيزيولوجية مثل التغييرات التدفق والضغط في الوريد البابي ونضح والأوكسجين لانسجة الكبد، نموذج الفئران متفوقة على نموذج لالبس في الفئران. ميزة أخرى من الفئران على الطراز مورين هو أن هناك لا ضرورة لاستئصال للفص الجانبي الأيسر،15 التي قد تلوث آثار استئصال الكبد مع تلك التي لالبس في نموذج الفئران. نموذج الفئران في المقابل لا تقلل الكبد الخلية كتلة. يستخدم نموذج خنزير الفص الخلفي حق كفلقة المتنامي، ولكن الكبد الخنزير لوبولاتيد عالية. ولذلك، من الصعب إنشاء طائرة ترانسيكشن في أنسجة رقيقة فعلا الجسر بين الخلفي الأيسر والفص الأمامي اليمين. وفي المقابل، الفص المتوسط في الفئران تتألف من جزأين التي تم توفيرها بشكل منفصل بالوريد البابي كل ويمكن بسهولة إنشاء طائرة ترانسيكشن متني بينهما باستخدام تقنيات ميكروسورجيكال. يسمح توافر الكمبيوتر الحيوانات الصغيرة التصوير المقطعي (CT) و/أو الرنين المغناطيس التصوير (التصوير بالرنين المغناطيسي) التحديد الكمي الدقيق جداً للنمو الحجمي بين ربط الوريد البابي وحدها وربط الوريد البابي وأضاف ترانسيكتيون، وهو أمر مهم للتحقق من أي نموذج السريع تضخم الكبد.
ويصف البروتوكول المعروضة هنا تقنية جراحية والإجراءات المستخدمة للتحقق من صحة الحجمي وتوصيف الفيزيولوجية من طراز تضخم بطيء وسريع بعد ربط الوريد البابي وربط الوريد البابي مع ترانسيكشن، على التوالي، بالنسبة للفئران.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
جميع التجارب في هذا البروتوكول كانت أقرتها "السلطات البيطرية" لكانتون زوريخ، سويسرا (رقم 60/2014). علاوة على ذلك، تم تنفيذ كافة الخطوات التجريبية في الامتثال الصارم للمبادئ التوجيهية بشأن تجارب مع الحيوانات بالأكاديمية السويسرية للعلوم الطبية (سامز) والمبادئ التوجيهية للاتحاد من الأوروبية مختبر الحيوان العلوم الجمعيات (فيلاسا) .
1-تربية الحيوانات ومعدات غرفة العمليات والصكوك، والتخدير
- تبقى الذكور ويستار وزنها 250-300 جم في أقفاص التهوية تحت ظروف خالية من مسببات الأمراض القياسية في دائرة ضوء/الظلام ح 12/12. تعطي الحيوانات حرية الوصول إلى الغذاء والماء في درجة حرارة المحيطة من 22 ± 1 درجة مئوية.
- حمل التخدير في مربع، حيث يتم مسح isoflurane الدخول 5 المجلد % لمدة 30 ثانية (الشكل 1A)، متبوعاً بتركيز 3 المجلد % إيسوفلوراني حتى الحيوان تحت التخدير العميق. تأكيد مستوى التخدير بواسطة منعكس تو-قرصه.
- توفير تطبيق التسكين تحت الجلد باستخدام البوبرينورفين (0.01 مغ/كغ) أثناء التدخل الجراحي، تليها 0.02 مغ/كغ كل ح 12 في مرحلة ما بعد الجراحة ح 48.
- نقل الحيوانات إلى مكان العمل، حيث أنهم عفويا تتعرض لخليط غاز من 1.0-2.5 المجلد % إيسوفلوراني في الأكسجين في التنفس (تدفق: 600 مل/دقيقة).
- إغلاق عيون الحيوانات واستخدام مرهم لحماية العيون. حقن المحلول الملحي 5 مل تحت الجلد، ونصفها على كل جانب من البطن، تليها الأتروبين 0.1 مغ.
- إجراء عمليات جراحية باستخدام مجهر جراحي في غرفة الجراحة.
- الحفاظ على هذا الحيوان تحت التخدير المتطايرة استخدام قناع تهوية تتكون من غشاء مطاط (الشكل 1B)، من خلالها يتم الضغط على الآنف للفئران. إصلاح الأطراف مع الشريط (الشكل 1B).
- وضع الأدوات الجراحية في أزياء العقيمة على طاولة جانبية: المياه المالحة وتدين غارقة الأسفنج (الشكل 2A)، البطن الجدار الكامشات (الشكل 2) فضلا عن خيوط 3-0 لسحب جدار البطن والرهابه، مقص، أدزون الملقط، ودفع غرامة ميكروفورسيبس نصائح مستقيم ومنحني وقبل قطع العلاقات الحرير 6-0 لإجراء عملية ربط (الشكل 2).
- استخدام غير الخلاف بين القطبين ميكروفورسيبس ترانسيكشن للحمة الكبد. إغلاق جدار البطن والجلد باستخدام خيوط الحرير 3-0 مع الإبر SH-1 و 5-0 Maxon (الشكل 2D). استخدام ملقط من قطبين للارقاء.
2-بدء عملية جراحية
- يحلق في البطن للحيوان مع ماكينة قص شعر حيوانات صغيرة من الرهابه إلى الأعضاء التناسلية مع جانبية منطقة 2 سم من خط الوسط. دقة إزالة الشعر.
- تطهير هذه المنطقة 3 مرات مع الأسفنج تدين بالدماء.
- تنفيذ شق خط الوسط باستخدام مشرط للجلد ومن ثم استخدام مقص الجراحة بفتح البطن.
- التراجع عن الحق وجدار البطن الأيسر والرهابه مع خيوط الحرير 3-0 (الشكل 3A).
- التراجع عن المعدة والقولون والأمعاء من الرباط هيباتودودينال من الفئران بسلك صغير عصامي الكامشات (الشكل 3B).
3-الوريد البابي ربط (PVL)
- الوصول إلى الوريد البابي وفروعه بسحب الأفقي للمعدة والأمعاء (الشكل 3B).
- تشريح الوريد البابي صراحة بالتقاط الصفاق مع ميكروفورسيبس وتقشير ببطء من ميديالى.
-
تشريح فروع الوريد البابي خارج (الشكل 3) في التسلسل التالي: فرع الخلفي (1) الحق، (2) ترك فرع الوسط الأفقي الأيمن والأيسر معا، وكودات (3).
- أولاً، تقشر الصفاق مع التحركات الصغيرة، ليست نشطة جداً لتجنب تمزيق فروع الشرايين الصغيرة الفصوص الكبد التي تعمل مباشرة تحت تغطية البريتوني.
- حالما يتم تجريد الوريد البابي الرئيسي، تطويق الفروع مع بطء دفع إلى الأمام وانتشار الحركات، ومن ثم سحب قطعة 1 سم من الحرير 6-0 التعادل حول الوريد البابي كل الفرع واضطر أنه.
-
اضطر فرع الفص الخلفي اليمين. (الشكل 3) الصعوبة التقنية فرع الخلفي حق يتمثل في حقيقة أن يشغل الشريان إلى الفص الخلفي اليمين عبر الفرع الخلفي حق الوريد البابي.
- سحب الشريان cranially جنبا إلى جنب مع الصفاق لفضح فرع الحق الوريد البابي مع ميكروفورسيبس منحنية.
- اضطر فرع الفص الخلفي اليمين مع قطع قبل التعادل الحرير 6-0. الفص الخلفي حق يتحول واضح شاحب مرة واحدة هي متصلة الوريد البابي.
- تجنب دفع ضد المقاومة أثناء الدوران منع تمزق الشريان أو الوريد البابي. في حالة حدوث نزيف، ممارسة الضغط لمدة دقيقة واحدة على الأقل مع مسحه القطن معقمة وثم إعادة تقييم. إذا لم يتوقف النزيف، التضحية بالحيوان.
-
اضطر الجانبي الأيسر (التعلم مدى الحياة) والفص الأيسر الوسيط (حب حياتي) فروع. هذه الفروع قد جذع مشترك واحد. (الشكل 3). فرع الفص المتوسط الأيسر ينشأ من الوريد البابي داخل لحمه للتعلم مدى الحياة.
- سد الوريد البابي مما يؤدي إلى التعلم مدى الحياة على حد سواء، وكذلك الحب بلادي فرع الحياة معا باستخدام قطع قبل التعادل الحرير 6-0.
- تجنب وقوع إصابات في الشرايين المؤدية إلى التعلم مدى الحياة والحب حياتي، قيد التشغيل ضمن الطبقة البريتوني. طالما هي مقشرة الصفاق مرة أخرى بعناية، أنها تبقى سليمة. التعلم مدى الحياة والحب حياتي بدوره واضح شاحب مرة واحدة هي متصلة الفروع.
-
اضطر فرع الفص كودات (الشكل 3). الوريد البابي مما يؤدي إلى إلى حد ما الفصوص كودات منفصلة في الفئران تقلع من الوريد البابي الرئيسي، ديستالي وميديالي لاقلاع فرع الفص الأيمن من الوريد البابي الرئيسي (مثل عدم دقة إينفيريورلي في البشر أو الحيوانات الكبيرة).
- تشريح بها وتطويق ذلك برفع الغشاء البريتوني بالإضافة إلى القناة الصفراوية والشرايين من الوريد البابي الرئيسي.
- تطويق فرع كودات الوريد البابي مع ميكروفورسيبس منحنى قادمة من أفقياً. الفصوص كودات اثنين دورة بالي واضح، مجرد فرع الفص كودات هي متصلة مع الحرير 6-0.
- ربط هذه ثلاثة فروع الوريد البابي يؤدي إلى نضح الوريد البابي الحصري للفص اليمين الوسط (RML)، الذي يكون مرئياً بخط ترسيم الحدود متميزة بين الفص المتوسط الأيمن والأيسر.
4-الوريد البابي ربط مع ترانسيكشن (PVL + T)
- أداء ترانسيكشن على طول الخط الفاصل بين RML وحب حياتي بعد PVL (3D الشكل).
- استخدام ملقط فضة قطبين غير الشائكة مع تلميح الجراحة العصبية جيد جداً إلى بريكاوتيريزي نسيج الكبد خلق قطاع الكي 1 ملم على طول خط ترسيم الحدود.
- استخدام مقص لقطع الأنسجة بريكاوتيريزيد بعناية. من الصعب جداً تقييم عمق ترانسيكشن بشكل صحيح. الهدف هو الحصول على مقربة من الوريد الأجوف قدر الإمكان، الذي يعمل إينتراهيباتيكالي في الفئران. ويرافق إصابة الوريد الأجوف نزيف واسعة النطاق، التي عادة ما لا يمكن وقفها.
- في حالة الإصابة تطبيق ضغط لطيف باستخدام مسحه القطن، ولكن إذا لم توقف نزيف داخل دقيقة 3-4، التضحية بالحيوان. المحاولات الرامية إلى إصلاح في الوريد الأجوف استخدام خيوط عموما لم تكلل بالنجاح. الفئران حساسة جداً للجوية الانسداد، الذي قد يحدث في بعض الأحيان ويؤدي إلى سكتة قلبية.
5-المضاعفات قياس ضغط الوريد البابي وحجم التدفق
- تقييم ضغط الوريد البابي عن طريق كانوليشن المباشر بإبرة G30 متصل بجهاز ضغط (الشكل 4 أ).
- استخدام وضع المسبار تدفق حجم 2 مم أفقياً متصلاً بجهاز تدفق للقياس المباشر لحجم المدخل تدفق ما يزيد على 2 دقيقة (الشكل 4 باء). سجل البيانات فقط مع نوعية القياس مستقرة كما هو مبين في عرض الجهاز.
- تقييم تدفق الوريد البابي والضغط بشكل منفصل بعد مجموعة الخطوات التي تحدد الإجراءات الخاصة بكل منها، أي ربط الخروج من ثلاثة فروع الوريد البابي أو ربط الخروج من ثلاثة فروع الوريد البابي بالإضافة إلى أداء ترانسيكشن متني بين RML والحب حياتي.
6-الخطوات النهائية لعملية جراحية
- تأكد من أن يتم وضع الأمعاء في تجويف البطن قبل أن يغلق بشكل صحيح.
- إغلاق الصفاق وجدار البطن مع خيوط الحرير 3-0 مع الإبر SH-1.
- وأخيراً خياطة الجلد باستخدام Maxon 5-0.
- تطهير الجلد مرة أخرى.
- تطبيق مرة أخرى الملحية 5 مل تحت الجلد في جانبية النسيج تحت الجلد في البطن.
7-فولوميتري الكبد في الفئران باستخدام الأشعة المقطعية الحيوانات الصغيرة
- 24 ساعة قبل التصوير المقطعي الأولى ضخ 200 ميكروليتر من عامل التباين في الوريد الذيل عن طريق قسطرة الوريدية G26.
- استخدام ط م الجزئي لتفحص الفئران. وضع الحيوان في صندوق زجاجي للحث على التخدير العام (أولاً تدفق الدخول 5 المجلد % ل 30 ق، متبوعاً بتركيز إيسوفلوراني من 2-3 المجلد % حتى الحيوان تحت التخدير والحفاظ عليه طوال المسح الضوئي عبر نظام أنابيب). للحصول على جودة الصورة المثلى، مزامنة الأشعة المقطعية مع تنفس الحيوان.
- تصدير بالتصوير الرقمي والاتصالات في الطب (DICOM) الملفات وتحليلها باستخدام المجال العام التصوير منصة أوسيريكس 8.0. استخدم أداة "المضلع مغلقة" لرسم الحدود الفص استناداً إلى راديودينسيتيي التباين نانوحبيبات في الكبد واستخدام منطقة القائمة الفائدة (ROI) لحساب حجم الكبد الجزئي (انظر الشكل 2 ألف في شادي et al. 17)
- في النموذج القياسي، والسماح للكبد لتنمو على مدى 3 أيام والحصول عليها يوميا الأشعة المقطعية لتقييم حجم الزيادة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ربط الوريد البابي اثنين من الإجراءات الجراحية المختلفة (PVL) و PVL مع ترانسيكشن (PVL + T) النتيجة في حركية النمو اختلافاً واضحا. PVL يدفع زيادة معتدلة في الحجم في غضون 3 أيام، بينما يمكن أن يكون فص اليمين الوسط أكبر بكثير (RML) في PVL + T رأيت (الشكل 5). ويمكن التحقق من ذلك فولوميتري اليومية. حجم RML يتضاعف تقريبا في غضون 3 أيام في PVL، بينما كان ثلاثة أمثاله في PVL + ت.17
قياسات تدفق في الوريد البابي تكشف عن تدفق ثابت، على الرغم من منطقة انخفاض تدفق في PLV وأيضا PVL + T (انظر الشكل 3 ألف في شادي et al. 17). وهذا يشير إلى أن موجه تدفق حجم الدم المدخل كامل من خلال ما يقرب من 26 في المائة حمة الكبد السابق، مما تسبب في "بوابة هايبرفلوو".
قياس الضغط داخل الوريد البابي يكشف عن زيادة حادة في ضغط الوريد البابي يعني من 5 ملم زئبق إلى 9 ملم زئبقي في PVL و PVL + T (انظر الشكل 3B في شادي et al. 17). وهذا الأرجح نتيجة هايبرفلوو المدخل. ترانسيكشن وحدها لا يؤدي إلى زيادة حدة ضغط مدخل، نظراً لأنه لم يتم خفض حجم أنسجة الكبد. 17 القياسات المتكررة تظهر أن زيادة الضغط لا يزال مستقرا ل 24 h.17
الشكل 1 : التخدير. (أ) بعد مسح مربع مع إيسوفلوراني (المجلد 5 في المائة) للحث على التخدير للحيوان، isoflurane المتبخرة (600 مل الأوكسجين/دقيقة) للمحافظة على التخدير العام. (ب) الحيوانات هي تركز اهتمامها على سطح تشغيل عقيمة تحت مجهر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 : المعدات المعقمة. (أ) الأسفنج رطبة العقيمة للتعرض وتراجع. (ب) سلك الجرارات متصلة بالاربطة المطاطية. (ج) بين القطبين الملقط، بوتس مقص؛ وتستخدم لتشريح لفروع الوريد البابي منحنى ميكروفورسيبس، ميكروديسيكتورس على التوالي. مقص أكبر (د) وأصحاب إبرة والإبر تستخدم لفتح وإغلاق. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 : تشريح- (أ) يتم سحبه جانبي البطن والرهابه مع خيوط الحرير 3-0 بعد فتح البطن خط الوسط. (ب) بتراجعه في المعدة، يمكن أن تتعرض الأمعاء الصغيرة والكبيرة أفقياً في الرباط قصور في الفئران وهيلم الكبد. (ج) في ربط الوريد البابي (PVL)، فرع الوريد البابي إلى الفصوص الحق (1)، الفص الجانبي الأيسر (2)، والفصوص كودات (3) متصلة مع 6-0 الحرير العلاقات (إلى اليسار). في PVL مع ترانسيكشن (PVL + T)، بالإضافة إلى ذلك، الخط الفاصل الدماغية بين الفص اليمين الوسط (RML) والفص الأيسر الوسيط (حب حياتي) هو بحف (يمين). (د) الصورة يظهر خط ترسيم الحدود متميزة بين حب حياتي و RML (يسار). ويتبع هذا الخط ترانسيكشن استخدام ميكروفورسيبس قطبين ل PVL + T (يمين). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4 : قياس ضغط الوريد البابي وتدفق حجم المضاعفات. (أ) أثناء الإجراء، يتم إدراج محول ضغط إبرة في الوريد البابي المكشوفة. (ب) مم 2 حجم تدفق مسبار يستخدم لقياس حجم التدفقات في الوريد البابي الرئيسي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 5 : فولوميتري الكبد. الزيادات الكبد أكثر في الحجم بعد PVL + T من بعد PVL وحدها. ويوضح الشكل فولوميتري اليومية التي يؤديها في التصوير الرقمي والاتصالات في الطب (DICOM) الملفات التي تم الحصول عليها مع الجزئي الفئران الماسح الضوئي CT واستخدام المجال العام التصوير منصة. بينما الفرق الواضح في الصور المحوري، فولوميتري الكمية كما يؤديها في تقرير سابق17، ويبين فرقا كبيرا في حركية النمو. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ويقدم هذا البروتوكول نموذج حيوان لالبس مع تضخم السريع فعل PVL + T، الذي تضاعف تقريبا حجم الزيادة في غضون 3 أيام PVL وحدها بالمقارنة. 17 الفص الكبدي الأوسط الحق يستخدم كفلقة نموذجية لزراعة كبد سبب الفص الكبدي الأوسط كتلة متني متجاورة واحدة تم توفيره بواسطة الأوردة مدخل منفصل إلى اليسار وإلى الجانب الأيمن، كما هو مبين في الشكل 1 في الآونة الأخيرة الأعمال المنشورة. 17 مقارنة بغيرها من التقارير، ويقدم النموذج بعض المزايا. تشريحيا، يمثل اختيار الفص الأوسط أفضل الكبد البشري ككتلة واحدة متني المتجاورة التي تسمح ترانسيكشن ومن ثم محو تدفق الجانبية. المتفرعة من الوريد البابي إلى الفص المتوسط الأيسر (حب حياتي) داخل الفص الجانبي الأيسر (التعلم مدى الحياة) يسمح ربط مجتمعة الحب حياتي والتعلم مدى الحياة.
هناك الفئران المختلفة ووصف نموذج مورين واحد لالبس. 18 العديد من الفئران نماذج19،20 وفقط الماوس النموذجي15 وصف يتطلب تخفيض كتلة كبد. الحد الشامل قد يؤدي إلى تضخم معززة بشكل مستقل. هذا على النقيض لدينا17 ونماذج الفئران مشابهة. 14 , 21 , 22 , ويمكن الاستفادة من نموذج مورين 23 استخدام الحيوانات المحورة وراثيا. بدلاً من ذلك إلى هذه النماذج الحيوانية الصغيرة، نموذج خنزير قد وضعت،16 باستخدام تقنية جراحية مماثلة كما هو الحال في البشر، وأسفر عن معدلات نمو مماثلة. على الرغم من الحقيقة، أن هذا ربما آخر يشبه العملية الجراحية البشرية، النماذج الحيوانية الصغيرة قد تكون مهمة جداً لأنها أسرع وأسهل لأداء، والسماح لعدد أكبر من الحيوانات في كل مجموعة وهي أقل تكلفة.
فسيولوجيا، يسمح نموذج الفئران دراسة تدفق الدم، والضمانات الاحتياطية والأوكسجين بسهولة أكثر من نموذج ماوس. هذه الدراسة هي الأول من استخدم نفس المنهجية المستخدمة سريرياً في البشر لتقييم التغييرات في الحجم في الكبد، وهي: CT فولوميتري. وعلى النقيض من بعض الدراسات الأخرى، التي لم تشمل مجموعة عنصر تحكم (مثلاً في نموذج خنزير البس24) بعد تولي حركية النمو البس، نحن التحقق من صحة تضخم بمقارنة PVL مع PVL + T. بينما تحت PVL RML يتضاعف في غضون 3 أيام، PVL + T زيادة تضخم بشكل ملحوظ. هذا تسارع تضخم بعد 3 أيام من ترانسيكشن وأضاف يعكس تماما الوضع الإنساني، حيث سجلت زيادة بنسبة 46% حجم في تحليل تلوي كبيرة PVE وزيادة 86 في المائة في البس بعد 10 أيام في التقرير الأول عن التسجيل اللبس كبيرة 202 من المرضى. 25 كلا الفئران الإجراء PVL + T والإنسان البس مضاعفة مقدار تضخم المحرز في أطرها وقت كل منهما لأنواع الإجراءات اثنين.
وتشمل الخطوات الحاسمة في إطار هذا البروتوكول التشريح لفروع الوريد البابي في PVL وترانسيكشن من الفص المتوسط في PVL + ت. خلال التشريح لفروع الوريد البابي، من المهم للإخلال بطبقة رقيقة من الغشاء البريتوني الذي يغطي في الرباط هيباتودودينال كامل ولا لدفع الصكوك ضد المقاومة. عرضي المسيل للدموع في الوريد البابي تكون قد توقفت بالضغط باستخدام القطن-مسحات وحدها، بل قد يمكن إصلاحه وتتطلب التضحية بالحيوان. وبصفة عامة، فإنه يجب التأكيد على، أنه ينبغي استبعاد الحيوانات التي تعاني من فقدان دم أكثر ما يقدر 10% من حجم الدم للحيوان، من الدراسة، وبما أن هذا قد تغير نتائج الدراسة وسبب معاناة الحيوانات لا داعي لها.
ويمكن تحقيق ترانسيكشن الفص المتوسط بالكي حذراً من نسيج الكبد باستخدام الملقط القطبين الفضية الجميلة ويكفي المالحة تتساقط، متبوعاً بقطع بسيطة من الأنسجة كوتيريزيد باستخدام مقص. ترانسيكشن يجب أن يمكن وقفها قبل تواجه الأجوف فينا، الذي يمتد داخل الكبد في القوارض، لتجنب نزيف وانسداد الهواء إلى الوريد الأجوف. دخول الهواء إلى الدورة الدموية الرئوية يؤدي إلى توقف القلب المفاجئ في الفئران.
استكشاف الأخطاء وإصلاحها لهذا البروتوكول يمكن أن تشمل جميع التعديلات التي تؤدي إلى زيادة التوتر الفسيولوجي للحيوانات، مثل انخفاض ضغط الدم الناجم عن أوفيرسيديشن، انخفاض حرارة الجسم، وزيادة فقدان الدم ومرات المنطوق منذ فترة طويلة جداً. يجوز تعديل هذا البروتوكول أيضا لأنواع أخرى من القوارض مثل الفئران. وقد أجرينا بنجاح الأسلوب الموصوفة في هذا البروتوكول في الفئران C57BL/6 (البيانات لا تظهر).
حد من هذا البروتوكول هو الاستخدام الحصري لهذا البروتوكول لدراسة آليات السريع مقابل تضخم بطيء؛ لذلك المرحلة الثانية من الإجراءات "البس"، استئصال أنسجة الكبد ديبورتاليزيد كافة باستثناء الكبد لامداده، وهو ليس المبينة في هذا البروتوكول. هذا الاستئصال إلا يمكن بسهولة تحقيق اتباع الأسلوب القياسي لاستئصال الكبد في القوارض، استخدام ربط خياطة، ومن ثم إزالة فصوص الكبد باستخدام مقص.
وعموما، يسمح هذا النموذج الحالي تجارب توضيح إليه تضخم الكبد السريع واختبار الأدوية والتدخلات. باستخدام هذا النموذج، فإنه تم مؤخرا أظهرت أن السريع يمكن أيضا فعل تضخم RML بربط الوريد البابي بالتزامن مع نقص مما يشير إلى استخدام مثبطات بروليل-hydroxylase، مما يوحي بأن نقص إشارات بلدي اللعب بدور هام في التحوير لحركية النمو الكبد. اختبار المخدرات مثل مثبطات بروليل-hydroxylase يجوز التعجيل بتجديد الكبد وينبغي زيادة. 17 , 26 تطبيقات المستقبل لهذا النموذج يمكن أن يمكن اختبار دور وكلاء العلاج الكيميائي التقليدي والرواية ويمكن توضيح أثرها على الإسراع بتجديد الكبد كذلك. يوفر الطراز أيضا الفرصة لدراسة وظائف الكبد باستخدام على سبيل المثال إيندوسيانيني الخضراء (ICG) أو مضان (HIDA) حمض إيمينودياسيتيك من الكبد في الفئران لأنه في نهاية المطاف سيكون تغيرات حجمية بطيئة وسريعة توضع في سياق تجديد الكبد الوظيفية منذ وظيفة الكبد أكثر أهمية من حجم الكبد. 27 , 28 تقييمات البس مرضى ICG29 و30،مضان هيدا31 حتى الآن فقط تم اختبارها في دراسات الأتراب الاستعادية، ولكن لا تزال هذه قد تكون أدوات هامة جداً للإجابة على السؤال ما إذا كانت تغيير حجم أو وظيفة مماثلة أو متشابهة في تجديد الكبد السريع.
وباختصار، نحن نقدم نموذجا جيدا تتسم وموحدة لتجديد الكبد سريعة وبطيئة، التي سوف تسمح للدراسات المستقبلية في جراحة الكبد التجدد.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
المؤلفين قد لا شكر وتقدير.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane, 250 mL bottles | Attane, Piramal, Mumbai, India | LDNI 22098 | Standard vet. equipment |
| Tec-3 Isofluorane Vaporizer | Ohmeda, GE-Healthcare, Chicago, IL | not available anymore | Standard vet. equipment |
| Buprenorphine (Temgesic) | Indivior, Baar, Switzerland | 7680419310353 | GTIN-number |
| Vitamine A ointment | Bausch&Lomp, Zug, Switzerland | 7680223980247 | GTIN-number |
| Atropine sulfate 0.5 mg/mL | Sintetica SA, Mendrisio, Switzerland | 7680565330045 | GTIN-number |
| Microsurgery microscope | Olympus, Tokio, Japan | SZX10 | Standard vet. equipment |
| Betadine | Mundipharma, Basel, Switzerland | 7680342821377 | GTIN-number |
| Sponges | Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Germany | NK83.1 | Mini-sponges |
| Abdominal Wall retractors | N/A | N/A | Self-made from paper clips and Q-Tips |
| 3-0 silk | Ethicon, Sommerville, NJ | K872H | Standard surgical |
| Scissors | World precision instruments (WPI), Sarasota, FL | 503371 | Standard microsurgical |
| Adson forceps | World precision instruments (WPI), Sarasota, FL | 501244-G | Standard microsurgical |
| Fine tips microforceps | World precision instruments (WPI), Sarasota, FL | 501976 | Tips need to be polished regularly |
| Curved fine tips microforceps | World precision instruments (WPI), Sarasota, FL | 504513 | Essential to go around the portal vein branches |
| 6-0 LOOK black braided silk | Surgical Specalities Corporation, Wyomissing, PA | SP114 | Spool, precut prior to the procedure |
| 2-0 silk sutures | Ethicon, Sommerville, NJ | K833 | Standard surgical |
| 5-0 maxon sutures | Covidien, Dublin, Ireland | 6608-21 | Standard surgical |
| Bipolar microforceps | Sutter, Freiburg, Germany | 780148SGS | Essential for parenchymal transection |
| Q-tips small | Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Germany | EH11.1 | Standard surgical |
| Q-tips big | Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Germany | XL54.1 | Standard surgical |
| G30 needle | Terumo, Tokyo, Japan | NN-3013R | Standard anesthesia equipment |
| 2 mm volume flow probe | Transonic Systems, Ithaca, NY | MA-2PS | Smallest available probe for HAT-311 flow meter |
| Transonic flow meter | Transonic Systems, Ithaca, NY | HAT-311 Transsonic flow QC meter | One of the first generation flow flow meters for surgery |
| ExiTron nano 12,000 | Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Germany | 130-095-698 | Nanomoloecular contrast medium that opacifies liver and spleen |
| G26 intravenous catheter | Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ | 391349 | Standard anesthesia equipment |
| Quantum FX MicroCT | Perkin Elmer, Waltham, MA | N/A | Standard small animal CT scanner at the institute of physiology, University of Zürich |
| OsiriX 8.0 | Pixmeo Sarl, Geneva, Switzerland | N/A | Public domain software : www.pixmeo.com |
References
- She, W. H., Chok, K. Strategies to increase the resectability of hepatocellular carcinoma. World J Hepatol. 7 (18), 2147-2154 (2015).
- Vauthey, J. N., et al. Standardized measurement of the future liver remnant prior to extended liver resection: methodology and clinical associations. Surgery. 127 (5), 512-519 (2000).
- Kinoshita, H., et al. Preoperative portal vein embolization for hepatocellular carcinoma. World J Surg. 10 (5), 803-808 (1986).
- van Lienden, K. P., et al. Portal Vein Embolization Before Liver Resection: A Systematic Review. Cardiovasc Intervent Radiol. , (2012).
- Kianmanesh, R., et al. Right portal vein ligation: a new planned two-step all-surgical approach for complete resection of primary gastrointestinal tumors with multiple bilateral liver metastases. J Am Coll Surg. 197 (1), 164-170 (2003).
- Nadalin, S., et al. Volumetric and functional recovery of the liver after right hepatectomy for living donation. Liver Transpl. 10 (8), 1024-1029 (2004).
- Michalopoulos, G. K., DeFrances, M. C. Liver regeneration. Science. 276 (5309), 60-66 (1997).
- Fulop, A., et al. Alterations in hepatic lobar function in regenerating rat liver. J Surg Res. 197 (2), 307-317 (2015).
- Schnitzbauer, A. A., et al. Right portal vein ligation combined with in situ splitting induces rapid left lateral liver lobe hypertrophy enabling 2-staged extended right hepatic resection in small-for-size settings. Ann Surg. 255 (3), 405-414 (2012).
- de Santibanes, E., Clavien, P. A. Playing Play-Doh to prevent postoperative liver failure: the "ALPPS" approach. Ann Surg. 255 (3), 415-417 (2012).
- Schadde, E., et al. Monosegment ALPPS hepatectomy: extending resectability by rapid hypertrophy. Surgery. 157 (4), 676-689 (2015).
- Dokmak, S., Belghiti, J. Which limits to the "ALPPS" approach? Ann Surg. 256 (3), e6 (2012).
- Aloia, T. A., Vauthey, J. N. Associating liver partition and portal vein ligation for staged hepatectomy (ALPPS): what is gained and what is lost? Ann Surg. 256 (3), e9 (2012).
- Yao, L., et al. Establishment of a rat model of portal vein ligation combined with in situ splitting. PLoS One. 9 (8), e105511 (2014).
- Schlegel, A., et al. ALPPS: from human to mice highlighting accelerated and novel mechanisms of liver regeneration. Ann Surg. 260 (5), 839-846 (2014).
- Croome, K. P., et al. Characterization of a porcine model for associating liver partition and portal vein ligation for a staged hepatectomy. HPB (Oxford). 17 (12), 1130-1136 (2015).
- Schadde, E., et al. Hypoxia of the growing liver accelerates regeneration. Surgery. 161 (3), 666-679 (2017).
- Moris, D., et al. Mechanistic insights of rapid liver regeneration after associating liver partition and portal vein ligation for stage hepatectomy. World J Gastroenterol. 22 (33), 7613-7624 (2016).
- Garcia-Perez, R., et al. Associated Liver Partition and Portal Vein Ligation (ALPPS) vs Selective Portal Vein Ligation (PVL) for Staged Hepatectomy in a Rat Model. Similar Regenerative Response? PLoS One. 10 (12), e0144096 (2015).
- Shi, H., et al. A preliminary study of ALPPS procedure in a rat model. Sci Rep. 5, 17567 (2015).
- Almau Trenard, H. M., et al. Development of an experimental model of portal vein ligation associated with parenchymal transection (ALPPS) in rats. Cir Esp. 92 (10), 676-681 (2014).
- Dhar, D. K., Mohammad, G. H., Vyas, S., Broering, D. C., Malago, M. A novel rat model of liver regeneration: possible role of cytokine induced neutrophil chemoattractant-1 in augmented liver regeneration. Ann Surg Innov Res. 9, 11 (2015).
- Wei, W., et al. Establishment of a rat model: Associating liver partition with portal vein ligation for staged hepatectomy. Surgery. 159 (5), 1299-1307 (2016).
- Tschuor, C., et al. Salvage parenchymal liver transection for patients with insufficient volume increase after portal vein occlusion - an extension of the ALPPS approach. Eur J Surg Oncol. 39 (11), 1230-1235 (2013).
- Schadde, E., et al. Early survival and safety of ALPPS: first report of the International ALPPS Registry. Ann Surg. 260 (5), 829-836 (2014).
- Harnoss, J. M., et al. Prolyl Hydroxylase Inhibition Enhances Liver Regeneration Without Induction of Tumor Growth. Ann Surg. , (2016).
- Olthof, P. B., et al. Comparable liver function and volume increase after portal vein embolization in rabbits and humans. Surgery. 161 (3), 658-665 (2017).
- Olthof, P. B., van Gulik, T. M., Bennink, R. J. Optimal use of hepatobiliary scintigraphy before liver resection. HPB (Oxford). 18 (10), 870 (2016).
- Lau, L., Christophi, C., Muralidharan, V. Intraoperative functional liver remnant assessment with indocyanine green clearance: another toehold for climbing the "ALPPS". Ann Surg. 261 (2), e43-e45 (2015).
- Cieslak, K. P., et al. Assessment of Liver Function Using (99m)Tc-Mebrofenin Hepatobiliary Scintigraphy in ALPPS (Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy). Case Rep Gastroenterol. 9 (3), 353-360 (2015).
- Truant, S., et al. Drop of Total Liver Function in the Interstages of the New Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy Technique: Analysis of the "Auxiliary Liver" by HIDA Scintigraphy. Ann Surg. 263 (3), e33-e34 (2016).
