Summary
कई दृष्टि धमकी नेत्र रोगों बेकार रेटिना microvessels के साथ जुड़े रहे हैं । इसलिए, रेटिना arteriole प्रतिक्रियाओं की माप अंतर्निहित pathophysiological तंत्र की जाँच करने के लिए महत्वपूर्ण है. यह आलेख वर्णन करता है कि माउस रेटिना arteriole आइसोलेशन और संवहनी व्यास पर vasoactive पदार्थों के प्रभाव का आकलन करने के लिए तैयारी के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल.
Abstract
संवहनी कमी और सामान्य रेटिना छिड़काव में परिवर्तन विभिन्न दृष्टि के रोगजनन के लिए प्रमुख कारकों में से हैं-इस तरह के मधुमेह रेटिनोपैथी, ग्रस्त रेटिनोपैथी, और संभवतः मोतियाबिंद के रूप में नेत्र रोगों, धमकी । इसलिए, रेटिना microvascular तैयारी शारीरिक और औषधीय अध्ययन के लिए अंतर्निहित pathophysiological तंत्र को चित्रित करने के लिए और रोगों के लिए चिकित्सा डिजाइन करने के लिए निर्णायक उपकरण हैं । नेत्र अनुसंधान में माउस मॉडल के व्यापक उपयोग के बावजूद, रेटिना संवहनी जेट पर अध्ययन इस प्रजाति में दुर्लभ हैं । इस विसंगति का एक प्रमुख कारण यह है कि इन रेटिना रक्त वाहिकाओं के छोटे आकार के कारण चुनौतीपूर्ण अलगाव की प्रक्रिया है, जो ~ चमकदार व्यास में ≤ 30 µm है । कार्यात्मक अध्ययन के लिए इन रेटिना microvessels के प्रत्यक्ष अलगाव की समस्या को दरकिनार करने के लिए, हम एक अलगाव और तैयारी तकनीक है कि सक्षम बनाता है की स्थापना की पूर्व vivo के अंतर्गत माउस रेटिना का अध्ययन vasoactivity के पास-शारीरिक स्थितियों . हालांकि वर्तमान प्रायोगिक तैयारी विशेष रूप से माउस रेटिना धमनियों का उल्लेख होगा, इस पद्धति को आसानी से चूहों से microvessels को नियोजित किया जा सकता है ।
Introduction
रेटिना छिड़काव में गड़बड़ी मधुमेह रेटिनोपैथी, ग्रस्त रेटिनोपैथी, और मोतियाबिंद1,2,3के रूप में विभिन्न नेत्र रोगों, के रोगजनन में फंसाया गया है. इस प्रकार, रेटिना में संवहनी जेट को मापने के उद्देश्य से अध्ययन इन रोगों के pathophysiology को समझने के लिए और नए उपचार दृष्टिकोण विकसित करने के लिए महत्वपूर्ण हैं.
murine जीनोम में जीन हेरफेर की संभावना के कारण, माउस हृदय प्रणाली4के अध्ययन के लिए एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जानवर मॉडल बन गया है । हालांकि, रेटिना रक्त वाहिकाओं के छोटे आकार (≤ 30 µm) के कारण, माउस रेटिना में संवहनी जेट की माप चुनौतीपूर्ण है । उदाहरण के लिए, vivo माप में के लिए stereomicroscopic तकनीक उनके ऑप्टिकल संकल्प में सीमित है और इसलिए केवल वास्तव में व्यास या कम ≤ से 30 µm व्यास के छोटे रक्त में रक्त के प्रवाह में परिवर्तन का पता लगाने की अनुमति जब से सुसज्जित इस तरह के एक फोकल माइक्रोस्कोप फ्लोरोसेंट रंजक या अनुकूली प्रकाशिकी प्रकाश Ophthalmoscope5,6स्कैनिंग का उपयोग कर के रूप में अतिरिक्त परिष्कृत उपकरणों, । इसके अलावा, vivo में व्याख्या रेटिना रक्त वाहिकाओं में स्थानीय संकेतन तंत्र की पहचान करने के उद्देश्य से माप anaesthetics द्वारा, प्रणालीगत रक्तचाप में परिवर्तन और retrobulbar रक्त वाहिकाओं के प्रभाव को स्थापित किया जा सकता है ।
इसलिए, हम उच्च ऑप्टिक संकल्प पूर्व vivoके साथ माउस रेटिना रक्त वाहिकाओं के प्रतिक्रियाओं को मापने के लिए एक विधि विकसित की है । इस के साथ साथ प्रस्तुत तकनीक रेटिना धमनियों के माध्यम से प्रेषित प्रकाश माइक्रोस्कोपी के दृश्य की अनुमति देता है. इस विधि है, जो भी चूहों में इस्तेमाल किया जा सकता है, नेत्र संवहनी अनुसंधान में जीन लक्ष्यीकरण प्रौद्योगिकी के लाभ के लिए उपयोग प्रदान करता है ।
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Protocol
इस अध्ययन की प्रायोगिक प्रक्रियाओं को Rhineland-Palatinate, जर्मनी की एनिमल केयर कमेटी ने मंजूरी दी थी । पशु देखभाल नेत्र और दृष्टि अनुसंधान में पशुओं के उपयोग के लिए संस्थागत दिशानिर्देशों और दृष्टि और नेत्र विज्ञान (ARVO) बयान में अनुसंधान के लिए एसोसिएशन के अनुरूप है । पशु यूरोपीय संघ के निर्देश 2010/63/यूरोपीय संघ के अनुसार पशुओं के प्रयोगों के लिए इलाज किया गया । पुरुष C57BL/6J चूहों (जैक्सन प्रयोगशाला, बार हार्बर, मुझे, संयुक्त राज्य अमरीका) 3-4 महीने आयु वर्ग के प्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया गया । पशु मानक शर्तों के तहत स्थित थे (तापमान 23 ± 2 ° c, आर्द्रता रेंज ५५ ± 10% और 12 ज प्रकाश/अंधेरे चक्र), और मानक माउस चाउ और पानी विज्ञापन libitumके लिए उपयोग किया था ।
1. माउस रेटिना का अलगाव
- तैयारी तालिका पर विच्छेदन यंत्र रखें और जांच करें कि क्या सभी उपकरण एक त्वरित तैयारी को सक्षम करने के लिए पूर्ण हैं ।
- 2 साँस लेना सह द्वारा माउस बलिदान ।
- Decapitate स्टील कैंची के साथ माउस, कैंची की एक ही जोड़ी का उपयोग कर दो हिस्सों में खोपड़ी sagitally में कटौती और त्वचा और आंख कैंची का उपयोग कर मस्तिष्क को हटाने (चित्रा 1) ।
- आंख कैंची का उपयोग करके केवल कक्षीय हड्डी छोड़ने के लिए खोपड़ी की हड्डी में कटौती ।
- एक लकीर बर्फ ठंड Krebs-Henseleit बफर युक्त डिश में कक्षा स्थानांतरण ।
- बर्फ पर विच्छेदन पकवान रखो या बफर हर 10 मिनट बदल जाते हैं ।
- नेत्र कैंची का उपयोग कर कक्षीय हड्डी में कटौती और धीरे प्रकार 4 परिशुद्धता चिमटी और छात्र Vannas स्प्रिंग कैंची (चित्रा 2) का उपयोग कर कक्षीय ऊतक के साथ आंख ग्लोब को दूर.
- धीरे Harderian ग्रंथि, संयोजी ऊतक, और extraocular मांसपेशियों प्रकार का उपयोग कर निकालें 5 परिशुद्धता चिमटी और Vannas capsulotomy कैंची, देखभाल करने के लिए नेत्र धमनी की मुख्य शाखा को नुकसान नहीं.
- Ligate नेत्र धमनी की परिक्रमा शाखाओं और अंततः नेत्र धमनी का उपयोग 10-0 नायलॉन टांके की मुख्य शाखा के समीपस्थ अंत (चित्रा 3) ।
- एक पेट्री डिश में आंख ग्लोब स्थानांतरण 10 एस के लिए ७०% इथेनॉल युक्त प्रकार 4 परिशुद्धता चिमटी का उपयोग कर । आंख ग्लोब वापस विच्छेदन डिश में प्लेस और नए Krebs समाधान के साथ बफर की जगह । कॉर्निया इथेनॉल जोखिम के बाद सफेद दिखाई देगा ।
- एक 30 गेज सुई के साथ परिधीय कॉर्निया पंचर और Vannas capsulotomy कैंची का उपयोग कॉर्निया काटना । धीरे आईरिस ऊतक काट, रंजित और रेटिना के बीच Vannas capsulotomy कैंची के एक तेज बिंदु जगह है, और बंद धमनियां और श्वेतपटल में कटौती । ऑप्टिक तंत्रिका (चित्रा 4) के आसपास कुछ scleral ऊतक छोड़ दें ।
2. छिड़काव चैंबर में रेटिना बढ़ते
नोट: रेटिना arteriole प्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया छिड़काव चैंबर घर बनाया है. यह एक में और बहिर्वाह ट्यूब (चित्रा 5) के साथ एक पारदर्शी जलाशय के होते हैं । एक सिलिकॉन ट्यूब के एक छोर histoacryl चिपकने वाला और दूसरे एक तीन तरह से टोंटी से जुड़ी अंत के साथ चैंबर के नीचे से चिपके हुए है । तीन तरह टोंटी करने के लिए एक ताजा Krebs बफर युक्त सिरिंज कनेक्ट और बफर के साथ ट्यूब भरें ।
- एक सुई धारक के साथ एक गिलास micropipette ले लो और छिड़काव चैंबर के तल पर ट्यूब के अंत में यह धक्का । तो प्रकार के साथ micropipette के टिप तोड़ 4 कैंची १०० µm व्यास के एक टिप प्राप्त करने के लिए ।
- micropipette की नोक पर ध्यान केंद्रित करने और इसे ट्यूब से जुड़े सिरिंज के माध्यम से फ्लश । ध्यान रखें कि केशिका मलबे से occluded नहीं है । रोड़ा के मामले में, इसे दूर, टयूबिंग फ्लश और एक और micropipette डालें ।
- शीत Krebs बफर के साथ छिड़काव चैंबर भरें और एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप के तहत चैंबर डाल दिया ।
- छिड़काव चैंबर में एक पारदर्शी प्लास्टिक प्लेटफॉर्म रखें । इस मंच ऑप्टिक तंत्रिका और नेत्र धमनी के लिए १.८ mm चौड़ाई का एक इंडेंट है और १.६ मिमी व्यास के दो इस्पात तारों पर रखा गया है । फिर, मंच पर २.८ मिमी भीतरी व्यास और ४.० मिमी बाहरी व्यास के एक स्टेनलेस स्टील की अंगूठी जगह है ।
- ऑप्टिक तंत्रिका और एक चंमच का उपयोग कर चरम देखभाल के साथ छिड़काव कक्ष में विच्छेदन कक्ष से संलग्न नेत्र धमनी के साथ रेटिना स्थानांतरण । इस कदम के ऊतकों की क्षमता खींच को रोकने के रूप में यह प्रयोग करने के लिए हानिकारक हो सकता है महत्वपूर्ण है ।
- नेत्र धमनी के समीपस्थ अंत के टांका हिस्सा काट, micropipette पर 10-0 नायलॉन टांका के दो अनुरूप छोरों जगह है, और micropipette के साथ नेत्र धमनी cannulate है । micropipette (चित्रा 6) के लिए धमनी टाई और ठीक सूत्री चिमटी का उपयोग कर पारदर्शी मंच पर रेटिना जगह है ।
- धीरे से दो ठीक बात चिमटी के साथ पूर्वकाल लेंस capsula खुला आंसू, बाहर लेंस खींच, और microscissors का उपयोग कर capsula पूरे लेंस काट ।
- इसके बाद, रेटिना में चार रेडियल चीरा बनाने के लिए प्लाना पार्स से आधा दूरी ऑप्टिक तंत्रिका और जगह एक स्टेनलेस स्टील की अंगूठी पर रेटिना के लिए इसे ठीक करने के लिए नीचे. रेटिना अब प्रयोग (चित्रा 7) के लिए तैयार है ।
3. प्रयोग के लिए रेटिना धमनियों की तैयारी
- एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत छिड़काव चैंबर प्लेस । उद्देश्य एक 100X जल-विसर्जन उद्देश्य लेंस है ।
- में और बाहर एक pericyclic पंप करने के लिए प्रवाह के लिए दो टयूबिंग कनेक्ट और ९५% हे2 के साथ Krebs बफर oxygenated के साथ चैंबर परिचालित और 5% सह के साथ कार्बोनेटेड2 ३७ डिग्री सेल्सियस पर । १०० और १२० मिलीलीटर के बीच एक प्रवाह दर का उपयोग करें/
- सिलिकॉन ट्यूब, जो micropipette से जुड़ा है कनेक्ट एक तीन तरह टोंटी के माध्यम से एक जलाशय सिलिकॉन नली के लिए । फिर, Krebs बफर के साथ जलाशय ५० mm पारा करने के लिए इसी ऊंचाई को भरने लेकिन तीन तरह से टोंटी अभी तक नहीं खोल ।
- माइक्रोस्कोप के उद्देश्यों के माध्यम से देखो और रेटिना की सतह पर ध्यान केंद्रित. रक्त वाहिकाओं या लाल रक्त कोशिकाओं के लिए खोज । यह संभव है कि रक्त वाहिकाओं पूरी तरह से ढह जाती हैं, इसलिए कभी-कभार ही कुछ लाल रक्त कोशिकाएं दिखाई देती हैं ।
- जब कोई रक्त वाहिका मिलती है तो उस पर ध्यान दें और तीनों तरह के टोंटी को खोलें । पोत के व्यास तुरंत वृद्धि करनी चाहिए और लाल रक्त कोशिकाओं को या तो केंद्रापसारक कदम, अगर यह एक arteriole है, या एक venule के मामले में centripetally । धमनियों व्यास में एक ही क्रम के venules की तुलना में छोटे हैं ।
- एक बार एक अच्छी तरह से दिखाई दीवार के साथ एक रक्त वाहिका पाया जाता है, यह 30 मिनट (चित्रा 8) के एक equilibration अवधि के बाद प्रयोगों के लिए नियोजित किया जा सकता है. equilibration अवधि के दौरान, धमनियों चमकीले व्यास की कमी के 10% से कम में जिसके परिणामस्वरूप केवल कमजोर आंतरिक टोन विकसित करना ।
4. प्रयोग प्रदर्शन
- thromboxane mimetic के साथ जहाजों की व्यवहार्यता का परीक्षण करें 9, 11-dideoxy-9α, 11α-methanoepoxy प्रोस्टाग्लैंडीन F2α (U46619) यह स्नान समाधान करने के लिए जोड़कर । इस एजेंट के बारे में ५०% से ≥ 10 की सांद्रता पर व्यास आराम से माउस रेटिना धमनियों कसना-6 एम ।
- एक बार पोत व्यवहार्य पुष्टि की है, स्नान के बाहर एगोनिस्ट धोने पंप घूम और स्नान में ताजा Krebs बफर आपूर्ति ।
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Representative Results
U-४६६१९ उत्पादित एकाग्रता-निर्भर vasoconstrictor प्रतिक्रियाओं में रेटिना धमनियों से C57Bl/6J पृष्ठभूमि के जंगली प्रकार चूहों । 10-6 मीटर की एकाग्रता में, चमकदार व्यास में कमी ≈ व्यास से ५०% थी । चित्रा 9A एक प्रतिनिधि एकाग्रता से पता चलता है-एक रेटिना arteriole की प्रतिक्रिया वक्र. U46619 के साथ धमनियों preconstricted में, acetylcholine पैदा एकाग्रता-निर्भर बढ़ जाती है की संचई प्रशासन ≈ व्यास से 25% preconstricted करने के लिए 10-5 मीटर, एक बरकरार संवहनी नाड़ी का संकेत endothelium ( चित्रा 9B).
चित्रा 1: माउस खोपड़ी के विच्छेदन. decapitated माउस सिर पर त्वचा आंखें और कक्षीय गुहा का पर्दाफाश करने के लिए हटा दिया जाता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 2: आंख ग्लोब और कक्षीय ऊतक के अलगाव । कक्षीय हड्डी आंख कैंची और आंख ग्लोब retrobulbar ऊतकों और ऑप्टिक तंत्रिका के साथ एक साथ काट दिया गया था ध्यान से अलग । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 3: आंख ग्लोब और नेत्र धमनी की तैयारी । एक बार आसपास के कक्षीय ऊतकों ठीक microscissors के साथ विच्छेदित किया गया, नेत्र धमनी ध्यान से उजागर किया गया था और उनकी छोटी शाखाओं 10-0 नायलॉन monofilament टांके के साथ ligated । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 4: नेत्र संरचनाओं के विच्छेदन । रेटिना की कल्पना करने के लिए श्वेतपटल और uvea को Vannas capsulotomy कैंची से विच्छेदित किया गया. ऑप्टिक तंत्रिका के आसपास कुछ scleral ऊतक नेत्र धमनी की क्षति से बचने के लिए छोड़ दिया गया था । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 5: वास्तविक समय वीडियो माइक्रोस्कोपी के लिए अंग चैंबर. चैंबर बना घर था. यह एक में और बाहर प्रवाह ट्यूब के साथ १०० mm व्यास का एक पेट्री पकवान शामिल थे । ट्यूबों histoacryl चिपकने के साथ चिपके हुए थे । बाह्य oxygenated और कार्बोनेटेड Krebs-Henseleit बफर इन ट्यूबों के माध्यम से एक सिकुड़नेवाला पंप द्वारा प्रसारित किया गया था । एक सिलिकॉन ट्यूब के एक छोर चैंबर और दूसरे एक तीन तरह टोंटी से जुड़ी अंत के नीचे से चिपके हुए था । ट्यूब के अंत में, १०० µm के एक टिप के साथ एक गिलास micropipette डाला गया था, जो नेत्र धमनी के cannulation के लिए कार्य किया । सिलिकॉन ट्यूब के माध्यम से, नेत्र संचलन ५० mm पारा करने के लिए इसी स्तर के लिए एक Krebs बफर के साथ एक सिलिकॉन ट्यूब भरने के द्वारा दबाव था । इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.
चित्रा 6: नेत्र धमनी के Cannulation । नेत्र धमनी ग्लास micropipette के साथ cannulated और एक 10-0 नायलॉन सीवन के साथ टांका गया था । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 7: नेत्र धमनी का Cannulation । पारदर्शी मंच पर रेटिना रखने के बाद, संपुटी बैग के साथ लेंस हटा दिया गया था, रेटिना में चार रेडियल चीरा किया गया, और २.८ मिमी भीतरी व्यास और ४.० मिमी बाहरी व्यास की अंगूठी का एक स्टेनलेस स्टील रेटिना पर रखा गया था यह बी को ठीक करने के लिए ottom । इसके बाद रेटिना को प्रयोग के लिए तैयार किया गया । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 8: रेटिना रक्त वाहिकाओं के दृश्य. एक अनुकरणीय रेटिना के अंदर लाल रक्त कोशिकाओं के साथ arteriole.
चित्र 9: कार्यात्मक अध्ययन वीडियो माइक्रोस्कोपी का उपयोग. प्रतिनिधि एकाग्रता प्रतिक्रिया एक एकल रेटिना arteriole से घटता है. (क) एकाग्रता-प्रतिक्रिया वक्र के लिए vasoconstrictor, U46619 (१०-९ से १०-६ एम), और (ख) endothelium-आश्रित vasodilator के लिए, acetylcholine (१०-८ से १०-५ मीटर). कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
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Discussion
माउस रेटिना में संवहनी प्रतिक्रियाओं की माप रेटिना रक्त वाहिकाओं के छोटे आकार के कारण चुनौतीपूर्ण है. प्रस्तुत तकनीक के साथ, रेटिना धमनियों प्रकाश माइक्रोस्कोपी प्रेषित द्वारा कल्पना कर रहे हैं. यह संभव है, क्योंकि पृथक रेटिना पारदर्शी है । तकनीक का लाभ उच्च ऑप्टिकल संकल्प है । परिकलित स्थानिक संकल्प 11 पिक्स/µm है । हालांकि, सफेद रोशनी का उपयोग करने वाले इस ऑप्टिकल सिस्टम के लिए असली रिजॉल्यूशन २०० और ३०० एनएम के बीच है, जिसे अब्बे विवर्तन लिमिट से समझाया गया है । माउस रेटिना धमनियों की पहली शाखा के बाद से 20 से 30 µm के एक आंतरिक व्यास है, लगभग 1% के व्यास परिवर्तन इस प्रणाली के साथ जासूसी कर रहे हैं । वहाँ अतिरिक्त तकनीकी उपकरणों या फ्लोरोसेंट रंजक की कोई जरूरत नहीं है के रूप में अन्य अध्ययनों में रिपोर्ट करने के लिए छोटी रेटिना धमनियों5,6,7. तकनीक का एक नुकसान लंबी तैयारी समय है, जो ९० से १२० मिनट के बीच प्रशिक्षित जांचकर्ताओं द्वारा है । तैयारी समय १८० मिनट से अधिक है, तो endothelial फ़ंक्शन तनु होना करने के लिए प्रारंभ होता है ।
इस तकनीक में कई प्रमुख अहम कदम हैं । सबसे पहले, यह सभी retrobulbar धमनी शाखाओं को अच्छी तरह से ligate के लिए महत्वपूर्ण है । यदि बंधाव अधूरा है, रेटिना धमनियों रिसाव के कारण दबाव नहीं होगा । दूसरा, 10 एस के लिए इथेनॉल में आंख ग्लोब खोलने से पहले विसर्जन के लिए नेत्र धमनी की चिकनी मांसपेशी जेट निष्क्रिय महत्वपूर्ण है । हम पहले दिखा दिया है कि ७०% इथेनॉल में 10 एस के लिए विसर्जित पूरी तरह से नेत्र धमनी चिकनी मांसपेशियों को निष्क्रिय कर देता है8। इसके विपरीत, रेटिना धमनियों सीधे इथेनॉल से प्रभावित होने की संभावना नहीं है, क्योंकि वे bulbar दीवार द्वारा संरक्षित कर रहे हैं. यदि यह चरण छोड़ा जाता है, तो नेत्र धमनी में व्यास परिवर्तन रेटिना के छिड़काव को प्रभावित कर सकता है । ध्यान दें, नेत्र धमनी की प्रतिक्रिया के स्पष्ट रूप से एक ही एगोनिस्ट9,10के जवाब में रेटिना धमनियों की है कि से अलग हो सकता है । तीसरा, नेत्र धमनी की मरोड़ से बचें । विशेष रूप से, जबकि मंच पर रेटिना तैयारी बढ़ते, नेत्र धमनी मुड़ हो, लुमेन के रोड़ा में जिसके परिणामस्वरूप हो सकता है । इसके अलावा, ध्यान से जांच करें कि कांच केशिका की नोक रेटिना धमनियों के प्रणा सक्षम करने के लिए occluded नहीं है । हम अधिक से अधिक तीन लगातार एकाग्रता-प्रतिक्रिया घटता एक ही रेटिना तैयार करने में प्रदर्शन नहीं करने का सुझाव है, क्योंकि हमने देखा कि acetylcholine के लिए प्रतिक्रियाओं कमजोर हो गया जब एकाग्रता-प्रतिक्रिया curves से अधिक तीन बार के लिए दोहरा । हालांकि, वहां एकाग्रता की पुनरावृत्ति के बारे में मतभेद-प्रतिक्रिया लागू एजेंट के आधार पर घटता है और हो सकता है, इस प्रकार, व्यक्तिगत रूप से परीक्षण किया जाना चाहिए ।
हम अपने अध्ययन में औषधीय एजेंटों extraluminally लागू है, हालांकि intraluminal छिड़काव एक इमदादी नियंत्रण पंप का उपयोग भी संभव है । के बाद से तकनीक को चूहों और चूहों सहित छोटे प्रयोगशाला जानवरों के रेटिना में संवहनी जेट के स्थानीय तंत्र के लिए उपाय करने के लिए अनुमति देता है, आनुवंशिक रूप से संशोधित जानवरों का उपयोग करके जीन लक्ष्यीकरण प्रौद्योगिकी के लाभ इस विधि के साथ पहुँचा जा सकता है .
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Disclosures
लेखकों की कोई होड़ वित्तीय हितों की नहीं है ।
Acknowledgments
यह काम अर्नस्ट und Berta Grimmke Stiftung और ड्यूश Ophthalmologische Gesellschaft (डॉग) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Steel Scissors | Carl Roth GmbH | 3576.1 | 1x 140 mm |
| Eye Scissors | Geuder | G-19390 | 1x straight, 10.5 cm |
| Precision tweezers, straight with fine tips | Carl Roth GmbH | LH68.1 | 2x type 4 |
| Precision tweezers, straight with extra fine tips | Carl Roth GmbH | LH53.1 | 2x type 5 |
| Vannas capsulotomy scissors | Geuder | 19760 | 1x straight, 77 mm |
| Student Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 91501-09 | 1x curved, |
| Barraquer Needle Holder | Geuder | G-17500 | 1x curved, 120 mm |
| Needle | Becton, Dickinson and Company | 305128 | 1x 30 G |
| Glass Capillaries (for producing micropipettes) | Drummond Scientific Company | 9-000-1211 | 1x (1.2 x 0.8 mm; outer/inner diameter) |
| Nylon Suture | Alcon | 198001 | 1x 10-0 |
| Nunclon cell culture dish | Thermo Fisher Scientific | 153066 | 1x 35 mm diameter |
| Nunclon cell culture dish | Thermo Fisher Scientific | 172931 | 1x 100 mm diameter |
| Discofix C | Braun | 16500C | 10 cm |
| Histoacryl adhesive | B. Braun Surgical, S.A. | 1050052 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Pericyclic pump (CYCLO II) | Carl Roth GmbH | EP76.1 | 1x |
| Vertical Pipette Puller Model 700C | David Kopf Instruments | 1x | |
| Microscope (Vanox-T AH-2) | Olympus | 1x | |
| Water immersion objective LUMPlanFL, 1.0 NA | Olympus | 1x | |
| Digital camera (TK-C1381) | JVC | 1x | |
| Perfusion chamber | self-made | 1x | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Drugs and Solutions | |||
| Ethanol | Carl Roth GmbH | K928.4 | |
| Calcium chloride dihydrate (CaCl2) | Carl Roth GmbH | 5239.1 | |
| Kalium chloride (KCl) | Carl Roth GmbH | 6781.1 | |
| Kalium dihydrogen phosphate (KH2PO4) | Carl Roth GmbH | 3904.2 | |
| Magnesium sulphate (MgSO4) | Carl Roth GmbH | 261.2 | |
| Sodium chloride (NaCl) | Carl Roth GmbH | 9265.2 | |
| Sodium hydrogen carbonate (NaHCO3) | Carl Roth GmbH | 0965.3 | |
| α-(D)-(+)- Glucose monohydrate | Carl Roth GmbH | 6780.1 | |
| 9,11-dideoxy-9α,11α-methanoepoxy prostaglandin F2α (U-46619) | Cayman Chemical | 16450 | |
| Acetylcholine chloride | Sigma-Aldrich | A6625-25G |
References
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