Summary
두 슬라이드를 간단 하 게 스냅 하 여 교차 reactivity 무료 다중화 샌드위치 immunoassays를 수행 하기 위한 스냅 칩 기술을 설명 합니다. 스냅 기구 시 약 microarray microarray에서 안정적으로 전송 하는 데 사용 됩니다. 어떤 생 화 확 적인 반응을 교차 오염 없이 다른 시 약의 colocalization를 요구에 대 한 스냅 칩을 사용할 수 있습니다.
Abstract
멀티플렉스 단백질 분석 우수한 진단 민감도 단일 단백질에 비해 정확도 보이고 있다. 항 체 microarrays는 단일 칩에 동시에 수행 하는 마이크로 스케일 immunoassays의 수천 수 있습니다. 샌드위치 분석 결과 형식 두 항 체, 각 목표를 감지 하 여 분석 결과 특이성을 향상 하지만 분 따라서 그들의 멀티플렉싱 기능을 제한 하는 시 약 사이에서 겪고 있다. 항 체 colocalization microarray (ACM) 교차 reactivity 무료 다중화 단백질 검출에 대 한 개발 되었습니다 하지만 microarray 제조 분석 실험 중에 비싼 반점을 찍는 현장. 이 작품에서는 단순히 맞춤 2 칩 함께, 따라서 아무 정찰 병 샘플 인큐베이션 및 탐지 항 체 (dAbs) 시의 후속 응용 프로그램 필요에 의해 microarray microarray에서 시 약을 전송 하는 스냅 칩 기술 시연 미리 발견된 슬라이드, 슬라이드 준비 분석 결과 실행에서 해리의 스토리지. 두 메서드 모두 단일 및 이중 전송 두 microarrays 사이 정확한 줄 맞춤을 달성 하기 위해 제공 됩니다 그리고 두 방법에 대 한 슬라이드 제작 설명. 결과 < 40 μ m 맞춤 이중 전송, 625 명소/c m2의 배열 밀도 도달 달성 되었습니다. 50 plexed immunoassay 다중화 단백질 분석에 스냅 칩의 유용성을 설명 하기 위해 실시 되었습니다. 35 단백질의 검출 한계 범위의 pg/ml에서는 이다입니다.
Introduction
높은 감도 특이성 암1,2등 복잡 한 질병의 진단에 단일 바이오 마커 보다 여러 단백질을 구성 하는 바이오 마커의 패널 제공할 수 있습니다. 효소 연결 된 immunosorbent 분석 결과 (ELISA) 골드 표준 기술 플라즈마, 낮은 pg/mL에 탐지의 제한 하지만 분석 결과3,,45당 하나의 대상에 한계를 달성 하는 임상 실험실에서 사용 되었습니다. 항 체 microarrays는 단일 현미경 슬라이드6,,78에 병렬로 실시 소형된 분석 실험의 수천을 수용에 대 한 개발 되었습니다. 그러나,이 방법의 멀티플렉싱 기능 dAbs, 혼합물의 응용 프로그램에서 발생 하는 시 약 기반 분으로 제한 하 고 대상9,10 의 증가 함께 더 많은 문제가 된다 , 11. Pla 외. 다중 샌드위치 분석 실험의 결과 취약점 확장 4N(N-1)로 N은 대상12의 수 명시 된 있다.
항 체 microarrays 항 체 colocalization microarray에에서 분 완화 (ACM) 멀티플렉스 샌드위치 분석 결과12에 대 한 우리의 실험실에서 개발 되었습니다. 캡처 항 체 (택시) microarray 정찰 병으로 기판에 발견 됩니다. 차단 샘플 표면에 적용 된 다음 개별 dAbs 택시-항 원 복합체와 같은 명소에 발견 후에. 항 체와 항 원 간의 모든 분 시나리오 ACM, 함께 완화 될 수 있습니다 그리고 pg/mL에 탐지의 한계 달성 되었습니다. 그러나 준비 하 고 비싸고 시간이 소모 되는 정렬 목적에 대 한 높은 정밀도 함께 현장 microarray 정찰 병을 사용 하 여,이 넓은 응용 프로그램 제한 실험 동안에 dAbs 안보 분석 결과 프로토콜에서 요구 하는, 다른 실험실입니다. 스냅 칩 라는 휴대용 ACM 개발 되었습니다 교차 reactivity 무료 고 샌드위치 immunoassays13,,1415다중화 정찰 병 무료. 택시와 dAbs는 사전 분석 결과 슬라이드와 microarray 형태로 각각 전송 슬라이드에 발견 하 고 저장. 분석 결과, 동안 슬라이드를 검색 하 고 dAbs microarray 단순히 함께 두 개의 칩을 스냅 하 여 분석 결과 슬라이드에 집단적으로 전송 됩니다. 스냅인 장치는 신뢰할 수 있는 시 약 전송을 위해 사용 됩니다. 그러나 니트로 코팅 슬라이드는 비교적 큰 항 체 바인딩 용량 액체 작은 물방울을 흡수 분석 결과 슬라이드로 사용 되 고 전송 시 약을 촉진,, 슬라이드는 더 비싼 보다 일반 유리 슬라이드와 microarray 비-투명 슬라이드와 호환 스캐너 신호 수집 필요 합니다.
이 작품에서 스냅 칩 다중 샌드위치 immunoassay 수행 프로토콜을 설명 합니다. 새로운 스냅인 장치 microarray microarray에서 보다 편리 하 고 믿을 수 있는 시 약 전송을 위해 개발 되었습니다. 중요 한 것은, 여기 우리가 시 전송 방법 스냅 칩 일반 유리 슬라이드에 설립 했다. 1024 명소 했다 성공적으로 전송 되 고 크게 확대 대부분 실험실에서이 기술 사용 하 여 유리 슬라이드에 정렬 됩니다.
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Protocol
1. 스냅 칩 제조 및 저장
- 이전 방법 ( 그림 1a)
- 자리 cAb 솔루션 400 µ g/mL 항 체를 포함 하 고 20% 글리세롤 인산 염 버퍼 염 분에 (PBS)을 nitrocellulose (또는 기능성된 유리)에는 잉크젯 microarray 정찰 병 13 60%의 상대 습도에서 분석 결과 슬라이드 (1.2 각 명소에 대 한 nL) 800 µ m 센터-센터 간격. 슬라이드 한 구석에 따르면 정찰 병 갑판에 고정 되어 있는지 확인 (여기, 왼쪽 아래 사용 되었다).
- 60%의 상대 습도와 1 시간 실 온에서 발견된 분석 결과 슬라이드를 품 어.
- 클램프 16 구획 16 우물으로 그것을 분할 하는 분석 결과 슬라이드에 슬라이드 모듈 가스 켓. 0.1%를 포함 하는 PBS의 80 µ L을 추가 하 여 슬라이드 세 번 씻어 트윈-20 (PBST) 각 잘 떨고 통, 5 분 각 시간에 450 rpm으로.
- 차단 솔루션을 각각 잘 고 450 rpm에서 1 h에 대 한 동요의 추가 80 µ L.
- 개 스를 제거 하 고 건조 한 질소의 스트림 분석 결과 슬라이드.
- 정찰 병 갑판에 전송 슬라이드를 해결 하 고 정찰 병 갑판의 하단 왼쪽된 모서리에 대 한 슬라이드의 왼쪽 아래를 밀어. 잉크젯 택시에 대 한 것과 동일한 레이아웃으로 정렬 표시 (폴리스 티 렌 마이크로-비즈 솔루션)의 배열을 자리.
- 건조 맞춤 표시 하자. 이전 슬라이드를 대칭 이동 하 고 하단 왼쪽된 모서리에 대 한 고정 정찰 병 갑판에 그것을 다시 넣어.
- 20 µ g/mL 항 체, 20% 글리세롤과 1 %BSA 포함 하는 솔루션을 발견 하는 소량 준비.
- 는 정찰 병을 사용 하 여 ' s 카메라, 맞춤 마크의 사진을. 이 그림을 표준으로 탐지 프로그램으로 구현 하 고 가장 상단 왼쪽된 마크를 식별 하기 위해 잉크젯 정찰 병의 이미지 인식 시스템. 좌표를 사용 하 여 dAb 배열의 첫 번째 장소. 드롭릿 800 µ m의 센터-센터 간격 당 자리 8 nL.
- 이중 전송 방법 ( 그림 1b)
- 전송 슬라이드 1 왼쪽된 하단에 대 한 잉크젯 정찰 병 갑판에 배치. 택시 솔루션, 포함 된 400 µ g/mL 항 체 20% 글리세롤, PBS에서 1 %BSA 60%의 상대 습도 잉크젯 microarray 정찰 병으로 슬라이드에 자리 (0.4 각 명소에 대 한 nL 및 ~ 200 µ m 직경에서). 센터-센터 간격은 400 µ m.
- 스냅 스냅 장치 ( 그림 2)를 사용 하 여 분석 결과 슬라이드에 택시 물방울 전송 전송 슬라이드 코팅 nitrocellulose (또는 기능성된 유리) 분석 결과 슬라이드.
- 차례 모든 6 버튼 잠금 열림 위치에서 모든 plungers를 90도 스냅 기구 측면. 잘린 모서리 고정된 포고 핀을 직면 하 고 그것의 소켓에서 슬라이드 홀더에 전송 슬라이드를 삽입 합니다. 3 개의 버튼으로 황금 포고 핀 plungers를 슬라이드 맞춤 핀에 대 한 적용 됩니다 있는지 확인 하십시오의 첫 번째 집합 설정.
- 스냅 기구 거꾸로 앉아 4 포고 핀에에 니트로-코팅 슬라이드를 삽입 합니다. 실버 핀 plungers를 슬라이드 맞춤 핀에 대 한 적용 됩니다 있는지 확인 하는 3 개의 버튼의 두 번째 세트를 차례로.
- 가기 셸 슬라이드 홀더 맞춤 기둥 구멍을 사용 하 여 정확한 위치에 배치 하 여 맞춤 장치를 닫습니다.
- 그것의 감 금으로 닫힌된 스냅 기구를 삽입 하 고 밀어 폐쇄 탭 완전히 microarrays 적절 한 압력을 적용 하는 동안 얼굴을가지고. 1 분에 대 한 폐쇄 유지
- 슬라이드를 분리. 60%의 상대 습도와 1 시간 실 온에서 분석 결과 슬라이드를 품 어. 세척, 차단, 및 단계 1.1.3-1.1.5에에서 설명 된 대로 분석 결과 슬라이드 건조.
- 는 잉크젯 정찰 병 갑판에 밀어 하단 왼쪽된 모서리에 대 한 또 다른 전송 슬라이드를 배치합니다. 자리 dAb 솔루션 50 또는 100 µ g/mL의 항 체 (표 1 참조), 20% 글리세롤과 PBS에서 1 %BSA 포함. 각 자리 0.8 인지 확인 nL와 관광 명소의 센터-센터 간격은 400 µ m.
- 분석 결과 및 이전 슬라이드를 저장합니다. 분석 결과 전송 슬라이드 시키는 포함 하는 밀폐 봉지에 밀봉 하 고는-20 ° C 냉동 실에 넣어.
2. 스냅 칩 immunoassays 다중화
- 검색 냉장고에서 분석 결과 슬라이드. 슬라이드는 실내 온도에 올 때까지 30 분 동안 봉인 가방 두고.
- 준비 7-포인트 시리얼 단백질 0.05%를 포함 하는 PBS에 급상승 하 여 샘플 솔루션을 희석 트윈 20.
참고: 여기, 5 희석 요소 사용 됩니다. 각 단백질에 대 한 시작 농도 표 1에 나와 있습니다. - 적절 한 준비 샘플 솔루션입니다. 예를 들어 PBST 버퍼에 4 번 인간의 혈 청을 희석.
- 분석 결과 슬라이드에 16 실 가스 켓을 클램프.
- Pipetting으로 7 단백질 희석 솔루션 및 단백질-무료 PBST 버퍼 솔루션 8 우물의 한 열을 입력합니다. 같은 슬라이드에 다른 8 우물에서 샘플 솔루션을 플라스틱.
참고: 각에 들어갈 수 있는 80 µ L 솔루션 잘. 필요한 경우 추가 샘플을 측정 하 더 많은 슬라이드를 사용할 수 있습니다. - 실 온에서 1 h 또는 4 ° C. 세척 슬라이드 세 번 450 rpm, 5 분 때마다 통에 PBST에서 하룻밤을 위해 450 rpm에서 통에 샘플을 품 어. 개 스를 제거 하 고 건조 한 질소 가스의 스트림 아래 슬라이드.
- 는 냉장고에서 dAbs과 전송 슬라이드를 검색합니다. 실 온에서 30 분 동안 봉인 가방을 유지. 그런 다음 60% 습도 안정화 구슬 재에 대 일 분을 포함 하는 닫힌된 챔버 (예: 빈 팁 박스)에 슬라이드를 품 어.
- 는 DAb 물방울 전송 스냅 장치 ( 그림 2)를 사용 하 여 분석 결과 슬라이드와 전송 슬라이드 스냅. 1.2.2 스냅 기구 운영에 대 한 섹션을 참조 하십시오.
- 슬라이드를 구분합니다. 품 어 60% 습도 안정화 구슬 1 h. 클램프 16 구획 가스 켓과 분석 결과 슬라이드를 포함 하는 닫힌된 챔버에 분석 결과 슬라이드와 슬라이드 4 번 린스 450 rpm, 5 분 때마다 통에 PBST를 사용 하 여.
- 피펫은 80 µ L의 각 음에 PBS에 2.5 µ g/mL streptavidin fluorophore 포함 하는 솔루션. 450 rpm에서 통에 20 분 동안 품 어.
- 450 rpm에서 통에 3 번과 PBST 슬라이드와 증류수 한 번 씻어. 개 스를 제거 하 고 건조 한 질소 가스를 사용 하 여 슬라이드.
3. 검색 및 데이터 분석 슬라이드
- 635 nm 레이저를 사용 하 여 형광 microarray 스캐너로 분석 결과 슬라이드를 스캔.
- 추출 분석 소프트웨어 (예: 배열 프로 분석기) 16를 사용 하 여 각 자리의 순 강도.
- 통계 소프트웨어를 사용 하 여 각 단백질의 탐지 (LOD)의 계산 하 고 샘플에서 단백질 농도 결정.
주: LOD cu 표준의 Y 절편으로 정의 됩니다.rve 3 번 3 개의 독립적인 분석의 표준 편차 증가.
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Representative Results
단일 및 이중 전송 방법에 대 한 분석 결과 절차는 그림 1에 표시 됩니다. 단일 전송, 분석 결과 슬라이드에 직접 택시를 발견 하 고는 dAbs 분석 결과 슬라이드 거울 패턴의 택시 (그림 1a)에서 사용 시에 전송 됩니다. 하나의 전송 절차는 필요, 하지만이 방법은 주로 슬라이드와 잉크젯 갠트리 (그림 2) 사이 모 난 부정합으로 인 한 두 microarrays 사이의 부정합에서 겪고 있다. 이 문제를 해결 하기 위해 한 가지 방법은 택시와 분석 결과 슬라이드에 순차적으로 dAbs 구경, 그리고 스냅 장치에 슬라이드를 제대로 수정 후 전송 하는 것입니다 (그림 1b). 이 메서드를 사용 하 여 두 microarrays는 정확한 동일한 위치로 전송 됩니다. 아니 이미지 인식 시스템 또는 맞춤 마커는 이중 전송 방법에 대 한 필요 합니다. 관광 명소의 98%에 대 한 오차는 41 µ m,14의 이전 방법 비해 6-fold 개선 이내 했다.
스냅 장치는 어떤 훈련을 하지 않고 사용 하기 편리 하 고 배열 부정합의 위험을 최소화 설계 되었습니다. 슬라이드는 분석 결과 전송 슬라이드에 공통 맞춤 핀 덕분에 정확한 위치와 함께 주어진 다. 전송 슬라이드 분석 결과 슬라이드 스냅 기구 닫힐 때까지 포고 핀에 의해 일시 중지 될 때 아래에 맞게 약간 작습니다. 스페이서는 유리 슬라이드에 신뢰할 수 있는 작은 물방울 전송 허용 마이크로미터 크기의 간격을 유지 하는 전송 슬라이드에 포함 되어 있습니다. 마지막으로, 감 금 소 및 그 폐쇄 탭 설계를 재현할 수, 높은 품질의 전송에 대 한 모든 스냅인에서 전송에 필요한 압력. 스냅 기구 사진 그림 3에 표시 됩니다.
니트로 슬라이드 및 유리 슬라이드에 시 약의 결과 설명 하는 대표적인 이미지는 그림 4에 나와 있습니다. 알 렉 사 532 IgGs 표시 된 첫 번째 시 약으로 사용 되었다 그리고 알 렉 사 647 IgGs 라는 두 번째 시 약으로 사용 되었다. 전송 후 슬라이드 532와 검색 및 635 nm 레이저. 결과 보여 줍니다 (대 한 니트로 슬라이드) 3136 또는 1024 (유리 슬라이드)에 대 한 마이크로 분석 결과 슬라이드에 제로 실패와 전송 및 교차 오염 없이 전송 하는 두 번째 시에 관찰 되었다. 유리 슬라이드를 사용 하면 그것은 더 많은 소수 성 표면 기능화, 따라서 각 스팟의 크기를 감소 하 고 감소 하는 관광 명소의 많은 수를 전송 하기 위한 반점 거리에 의해 만들 수 있습니다. 이 작품은 일반적으로 사용 되는 유리 기판에 스냅 칩 기술의 응용 프로그램을 확장합니다.
50-플렉스 immunoassay 대상 유방암의 표준 곡선 관련 단백질 그림 5, 해당 날짜 분 없이 최대 멀티플렉스 샌드위치 항 체 microarray 하에서 설명 된다. 슬라이드 검색, 그리고 형광 강도 표준 곡선을 생성 하기 위해 계량,이 분석 결과에 이중 전송 방법 사용. 35 중 50 단백질 pg/mL에서 Lod를 도달 (하십시오 표 1 참조) 시험 조건 최적화를 통한 더욱 향상 될 수 있습니다. Colocalization 시 약의 분 없이 단일 슬라이드에 여러 항 체의 사용을 용이 하 게 하 고 다른 쌍12에 방해 없이 독립적으로 각 쌍의 최적화를 허용 한다. 이러한 결과 스냅 칩은 멀티플렉스 단백질 정량화에 사용할 수 있는 확장 가능한 기술 나타냅니다.
그림 1입니다. (A) 단일 및 (b) 이중 전송 방법 비교 분석 결과 절차의 도식. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2입니다. 차이 사이의 단일 및 이중 전송 보여주는 도식. (a) 전송 시 약의 미러링 슬라이드와 잉크젯 XY 스테이지 사이 모 난 부정합을 증폭 시키고 있다. (b) 이중 전송 메서드 각도 오차를 극복 한다. 허가 기준 14 에서 적응. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3입니다. 스냅 기구 사진. (a) 열된 장치입니다. (b) 폐쇄 장치입니다. (c) 관점 장치 보기 간단히, (i) 전송 슬라이드 슬라이드 홀더에 배치 되며 plungers에 장착 된 pogopin를 사용 하 여 정렬 핀에 대 한 밀어. (ii) 분석 결과 슬라이드는는 pogopins 위에 배치 하 고 두 번째 집합이 plungers 사용 하 여 맞춤 핀에 대 한 밀어. (iii) 최고 쉘 슬라이드 홀더 위에 배치 하 고 감 금 소에 삽입 합니다. 압력은 압축 하는 pogopin 고 슬라이드를 함께 폐쇄 탭을 사용 하 여 적용 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4입니다. 스냅 칩을 사용 하 여 관광 명소의 양도. 532를 사용 하 여 형광 스캔 및 전송 (a) 니트로에 항 체를 보여 633 nm 레이저 슬라이드 (허가 기준 14 에서 적응) 및 (b) 유리 슬라이드. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 5입니다. 이중 전송 메서드를 사용 하 여 병렬로 측정 분석 결과 슬라이드의 형광 이미지 및 50 단백질의 표준 곡선. (표준 곡선을 생성 하기 위한 분석 결과 슬라이드의 a) 형광 이미지. (b)는 배열의 클로즈업. 눈금 막대 = 50 단백질에 대 한 2. (c) 표준 곡선. 오차 막대는 3 개의 독립적인 실험에서 표준 편차로 계산 했다. 허가 기준 14 에서 적응. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
| 단백질 이름 | 시작 하는 농도 (ng/ml) | LOD (pg/ml) | 단백질 이름 | 시작 하는 농도 (ng/ml) | LOD (pg/ml) |
| ANG2 | 500 | 1.3 × 104 | 일리노이-6b | 1 | 2.1 × 102 |
표 1. 단백질 농도 그리고 50-플렉스 분석 결과에서 버퍼에 Lod. CA 15-3에 대 한 LOD U/ml (*)입니다. 허가 기준 14 에서 적응.
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Discussion
이 작품에서는, 우리는 기본적인 실험 설치 연구자 멀티플렉스 교차 reactivity 무료 immunoassays 널리 이용할 수 있게 하는 스냅 칩 기술을 제시 했습니다. 다른 기존 항 체 microarrays, 아니 microarray 정찰 병은 최종 사용자를 위해 필요 합니다. 단일 및 이중 전송 방법을 시연 하 고 이중 전송 월급 우수한 정렬 정확도 ~ 40 μ m 63 µ m14의 가장 큰 오차와 98%의 관광 명소에 대 한. 새로운 스냅 기구가이 기술 연구에 액세스할 수 만들기, 일관 된 압력으로 두 개의 슬라이드를 편리 하 게 개발 되었다. 신뢰할 수 있는 시 약 전송 nitrocellulose-코팅 슬라이드에 뿐만 아니라 일반 유리 슬라이드에이 기술의 광범위 한 훈련의 필요 없이 응용 프로그램을 크게 확대 실현 된다. 단백질의 70% 범위의 pg/mL14에서 Lod를 달성 및 스냅 칩의 유용성을 보여 50-플렉스 immunoassay 미리 발견 하 고 저장 된 슬라이드를 사용 하 여 실시 했다. DAbs 혼합으로 적용 되는 기존 멀티플렉스 immunoassays에 비해, ACM 및 스냅 칩 기술의 중요 한 이점은 이다 칩 분석 실험은 서로 독립 되므로 추가 하거나 제거 하지 않고 어떤 항 체 쌍 다른 쌍 방해. 단백질의 수백 수만 스냅 칩, 따라서 각 항 체 17의 직렬 응용 프로그램을 필요로 하는 순차적 외피에 의해 자동된 연속 측정 등 다른 방법에 비해 시험 시간을 단축 동시에 측정할 수 있습니다. 각 항 체의만 하위-nanoliter 스냅 칩 제조, 기존의 immunoassays 보다 더 경제 만들기에 필요 합니다.
사용 하는 항 체 농도 및 항 원 부 화 단계는 분석 결과 높은 감도 달성 하기 위해 중요 합니다. 스냅 칩의 제조, 항 체 농도 분석 결과 슬라이드 (니트로 또는 니트로 비)의 유형과 항 체 쌍의 선호도 따라 최적화할 수 있습니다. 각 항 체 자리 볼륨 정찰 병 용량 및 정렬 정확도에 따라 조정 될 수 있다 그리고 관광 명소 센터-센터 간격 그에 따라 변경 될 수 있습니다. 분석 결과 슬라이드에 택시를 전송 후 우리 실 온에서 분석 결과 슬라이드를 incubated 하는 4 ° C에서 1 h. 하룻밤 인큐베이션 더 나은 항 체 바인딩 용량을 줄 수도 있습니다. BSA 무료 안정제 솔루션 (재료의 표 참조)를 사용 하 여기 택시 잠복기 후 분석 결과 슬라이드를 차단. 동물 혈 청 또는 우유 등 다른 차단 시 약 또한이 응용 프로그램에 대 한 작동 수 있습니다.
멀티플렉스 immunoassays에서 비 니트로 슬라이드 다른 표면 화학에 대 한 프로토콜 개발 고 최적화 될 수 있습니다. 다른 희석 요소 대상 단백질에 따라 표준 곡선을 만들기 위해 사용할 수 있습니다. 다른 fluorophores dAbs, 라벨을 사용할 수 있습니다 그리고 신호 컬렉션에 대 한 다른 파장에서 레이저를 사용 하 여 슬라이드를 검색할 수 있습니다.
현재, 625 명소/c m2 의 밀도와 이중 전송 방법14달성 되었습니다. 추가로 스냅 칩의 멀티플렉싱 기능을 개선 하기 위해, 여러 전략 있습니다. 첫째, 관광 명소, 관광 명소 및 증가 배열 밀도 사이의 짧은 센터에 센터 거리에 대 한 되므로의 크기를 줄이기 위해 작은 볼륨을 사용할 수 있습니다. 둘째, 한 점 크기를 줄이기 위해 더 많은 소수 성 표면 전송 슬라이드를 선택할 수 있습니다. 셋째, 두 microarrays 사이 더 나은 맞춤 잉크젯 정찰 병의 정밀한 조정을 수행 하 고 더 노즐 및 슬라이드 표면 사이의 거리 등 탐지 매개 변수를 최적화 하 여 얻을 수 있습니다.
모든 항 체 기반 immunoassays 관해서는 스냅 칩 immunoassay의 성능 여부 및 항 체의 품질입니다. 스냅 칩은 높은 감도 특이성 다른 epitopes를 대상으로 하는 항 체에의 한 쌍의 듀얼, 순차적 바인딩에서 여유 때문 애 란에서 가장 널리 사용 되는 분석 결과 형식, 샌드위치 분석 결과 형식을 사용 하 여 작동 하지만 그것은 의존 캡처 및 대상 단백질의 검출에 필요한 호환 항 체에의 한 쌍의 가용성.
스냅 칩 기술의 값 immunoassays에 대 한 설정 되 고 교차 오염18,19 없이 다른 시 약을 적용 해야 하는 모든 화학 및 생화학 반응에 사용 될 수 있습니다. , 20 , 21 , 22. 실제로, 스냅 칩 일반적인 솔루션을 제공 하는 microarray-하-microarray, 따라서 분리 분석 결과 절차와 칩 제조에서에서 다양 한 사전 발견된 시 약을 제공 하 고 따라서 해결 하는 데 도움이 합니다 " 매크로 마이크로 "인터페이스23을도전 한다. 예를 들어, 스냅 칩 정확한 타이밍, 및 대량 실험14비교 결과 128 조건 분석 4-플렉스 동종 효소 저해 분석 결과 대 한 사용 되었습니다. 그것은 또한 멀티플렉스 조직 얼룩에 대 한 적용 되었습니다. 또한, 그것은 다른 박테리아 또는 단일 세포 분석21,24, 세포에 화학 물질의 수천을 테스트 하거나 단일 또는 여러 단계의 화학에 다른 조건을 테스트 응용 프로그램을 차단 하는 약물에 기여할 수 있는 반응입니다.
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Disclosures
맥 길 대학교는 발명가로 Huiyan Li와 데이비드 융 커와 함께이 작품의 몇 가지 측면에 특허 출원을 제기 했다.
Acknowledgments
우리는 잉크젯 정찰 병의 사용에 대 한 박사 롭 Sladek을 감사합니다. 우리는 최종 지원 캐나다 기관에서 건강 연구 (CIHR), 자연 과학 및 캐나다 엔지니어링 연구 위원회 (NSERC), 캐나다 암 학회 연구소 및 캐나다 재단에 대 한 혁신 (CFI)에 대 한 인정합니다. Dj가 감사 합니다 캐나다 연구의 자에서 지원합니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Phosphate buffered saline tablet | Fisher Scientific | 5246501EA | |
| Streptavidin-conjugated Cy5 | Rockland | s000-06 | |
| Tween-20 | Sigma-Aldrich | p1379 | |
| Bovine serum albumin | Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc | 001-000-162 | |
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G5516 | |
| Blocking solution: BSA-free StabilGuard Choice Microarray Stabilizer | SurModics, Inc | SG02 | |
| Nitrocellulose coated slides | Grace Bio-Laboratories, Inc | 305116 | |
| Aminosilane coated slides | Schott North America | 1064875 | |
| Snap Device | Parallex BioAssays Inc. | PBA-SD01 | |
| Inkjet microarray spotter | GeSiM | Nanoplotter 2.0 | |
| Slide module gasket | Grace Bio-Laboratories, Inc | 204862 | |
| Humidity Stabilization Beads | Parallex BioAssays Inc. | PBA-HU60 | |
| Array-Pro Analyzer software | Media Cybernetics | Version 4.5 | |
| Fluorescence microarray scanner | Agilent | SureScan Microarray Scanner | |
| Biostatistics software | GraphPad Software | GraphPad Prism 6 | |
| Endoglin capture antibody | R&D Systems | MAB10972 | |
| Endoglin protein | R&D Systems | 1097-EN | |
| Endoglin detection antibody | R&D Systems | BAF1097 | |
| IL-6a (see Table 1) | R&D Systems | ||
| IL-6b (see Table 1) | Invitrogen |
References
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