Målet med protokollen er at forberede keratin hydrolysat fra kylling fjer ved alkaline-enzymatisk hydrolyse og teste, om tilføjelse af keratin hydrolysat i en kosmetik salve base forbedrer hudens barriere funktion (hvilket øger hydrering og faldende transepidermal vandtab). Tests er udført på mænd og kvinde frivillige.
Keratin hydrolysater (KHs) er etableret standardkomponenter i hår kosmetik. Forstå de fugtgivende effekt på KH er fordelagtige for hudpleje kosmetik. Målene for protokollen er: (1) at behandle kylling fjer i KH ved alkaline-enzymatisk hydrolyse og rense det ved dialyse, og (2) hen til overhøre selv tilføje KH i en salve base (OB) øger hydrering af huden og forbedrer hudens barriere funktion ved faldende transepidermal vandtab (TEWL). Under alkaline-enzymatisk hydrolyse inkuberes fjer først ved en højere temperatur i et alkalisk miljø og derefter under milde betingelser, hydrolyseres med proteolytiske enzym. Løsning af KH er dialysebehandling, vakuum tørres og formales til et fint pulver. Kosmetiske formuleringer bestående af olie i vand emulsion (O/W) der indeholder 2, er 4 og 6 vægtprocent af KH (baseret på vægten af OB) forberedt. Test de fugtgivende egenskaber for KH er udført på 10 mænd og 10 kvinder med gang intervaller af 1, 2, 3, 4, 24 og 48 h. testet formuleringer er spredt på affedtede volar underarmen websteder. Huden hydrering af stratum corneum (SC) vurderes ved at måle kapacitans af huden, som er en af de mest verdensomspændende anvendte og enkle metoder. TEWL er baseret på at måle mængden af vandet transporteres pr. et afgrænset område og periode fra huden. Begge metoder er fuldstændig ikke-invasiv. KH gør for en fremragende okklusiv; afhængigt af tilsætning af KH i OB bringer det en 30% reduktion i TEWL efter ansøgning. KH også fungerer som en fugtighedsbevarende middel, da det binder vand fra de lavere lag af epidermis til SC; ved optimal KH tilføjelsen i OB opstår op til 19% stigning i hydrering i mænd og 22% stigning i kvinder.
Slagterier, fødevareindustrien og garvning industri producere årligt enorme mængder af solid keratin biprodukter-uld, fjer, børster, klove, kløer, horn og lignende. Ifølge seneste statistiske data er den samlede levende vægt af høns, kalkuner, ænder og andre slagtede fjerkræ i USA 62,5 milliarder pund pr. år1; i EU er det ca. 28,7 milliarder pund om året. I betragtning af at fjer gøre op til 8,5% af den samlede fjerkræ vægt, producerer USA alene årligt ca. 5,3 milliarder pounds af affald fjer2.
Keratin er et protein, udstiller høj kemisk resistens, fordi det er stærkt krydsbundet med disulfidbroer, at gengive dens forarbejdning vanskeligt. At opnå opløselige produkter kræver holde cross-links og eventuelt gennemføre hydrolyse af peptidbindinger3. Spaltning af disulfidbroer kan fortsætte gennem en reaktion af thiol anion efter følgende mønster4,5:
Set– + – SbSc-↔ – Sb– + – SenSc–
Med en meget høj pH-niveau vises hydrolyse af disulfidbroer også, efter mønster6
-SS– + OH– → – S– + – SOH
Under milde forhold (pH ca. 8) sted selv sulfitolysis finder efter følgende mønster:
-SS – + HSO3– → – SH + -SSO3–
Den mest økonomiske måde nedværdigende keratin er mikrobiel nedbrydning, som er karakteriseret ved mild reaktionsbetingelser under forarbejdning og høj opdeling effektivitet (ca. 90%)7,8. Keratinases er produceret af visse bakterier isoleret fra jord og keratin affald9. Mikrobielle keratinases hydrolyserer stive og stærkt krydsbundet keratin strukturer10 og den resulterende KH forberedt er rig på opløselige proteiner, uden tab i essentielle aminosyrer opdaget i det11.
For at indarbejde en protein i kosmetiske præparater (f.eks., emulsioner, cremer og geler), sikre kravet om at at sådanne proteiner er opløseligt i vand, de givne systemer er gennemsigtige, og at re sammenlægning af peptider er undgået grund hydrofobe interaktioner. En fælles praksis er derfor at anvende hydrolysater af proteiner, som hydrolyseret kollagen, elastin og keratin. Når du tilføjer hydrolysater i kosmetiske emulsioner, taget skridt til at sikre, at hydrolysat først opløses i vand. I nogle tilfælde er det ønskeligt, at protein (eller hydrolysat) er opløseligt i alkohol eller andre organiske opløsningsmidler12.
KH er normalt kendetegnet i shampoo, balsam, cremer og nærende serum for hår, samt mascaras, neglelak og eye make-up agenter. KH effekter erklæret normalt omfatter danner en beskyttende film, udglatning hår eller negle struktur, øget plasticitet og udseende af de behandlede formation, regulering af sammenhængen i produkter, og at fremme dannelsen af skum13 , 14. det fremgår også, at KH nedsætter overfladespænding, dermed tilskud i kosmetik kan lette reduktion i mængden af emulgator tilføjet for at stabilisere cremer. KH begrænse virkningerne af irritation udløst af rengøringsmidler (overfladeaktive stoffer) til hud, øjne og hår, hvorved nogen potentielle bivirkninger af rengøringsmidler på væv (f.eks, dehydrering af huden, hårdhed og nedsat barriere funktion af hud). Den høje buffer kapacitet af hydrolysater også udnyttes til at stabilisere pH af kosmetik; peptider af kortere længde har en større Bufferkapacitet virkning15,16. Selvom KHs har blive etableret som standard komponenter i hår og negle kosmetik samt ved at blive udnyttet i produkter til hudpleje, undersøgelser af fugtgivende virkningerne af KH ikke vises i moderne litteratur.
Alkaline-enzymatisk teknologi er blevet udviklet til forarbejdning keratin biprodukter til KH og aktive test er i processen om virkningerne af en række kosmetiske additiver17,18,19,20 , 21 , 22. fordelen, at to-trins alkaline-enzymatisk hydrolyse ved hjælp af mikrobielle proteaser for kylling fjer opnår høj effektivitet mild reaktion betingelser og kvaliteten af KH er meget høj i modsætning til hydrolyse ansat i stærke syrer eller baser. I den første fase inkuberes fjer ved en højere temperatur i et alkalisk miljø, som delvist forstyrrer keratin struktur og svulmer fjer; efter justering af pH, er fjer hydrolyseret med et proteolytisk enzym milde betingelser i anden fase. Den dialyzed KH besidder et højt indhold af proteiner.
Anvendelsen af metoden beskrevet her forarbejdning fjerkræfjer til en KH gennem alkaline-enzymatisk hydrolyse og teste effekten af fugtgivende egenskaber af KH anvendes til O/W kosmetiske emulsion. De fugtgivende egenskaber er undersøgt af medvirkende ikke-invasive metoder i vivo. De hyppigste metoder til måling hud hydrering og barriere funktion af SC omfatter måling af elektriske egenskaber af huden (konduktans eller kapacitans). Forskellige metoder for at undersøge SC hydrering omfatter nær infrarød multispektrale at forestille sig metode (NIM), Kernemagnetisk resonans-spektroskopi, optisk kohærens tomografi eller forbigående termotransfer23. Barriere funktion af SC korrelerer til TEWL SC og det er målt ved ventileret kammer metode, unventilated kammer metode og åben kammer metode24.
Egenskaber af model formuleringer bestemmes ved hjælp af Multi sonde adapter MPA 5 med tre typer af sonder. Den først én, corneometer CM 825 foranstaltninger hud hydrering ved at vurdere ændringerne i den elektriske kapacitet på hudens overflade; den måling kondensator viser ændringer i kapacitans af hudens overflade i corneometric enheder. Corneometer giver kun en relativ vurdering af huden hydrering25. For TEWL, der den anden sonde, tewameter TM 300, bruges til måling tæthed farveforløb af vand fordampning (i en åben kammer instrument baseret på Fick’s diffusion lov) fra huden indirekte af de to par af følere (temperatur og relativ fugtighed) angiver mængden vand der transporteres pr. et afgrænset område og periode (g/m2h). Denne metode kan registrere selv de mindste forstyrrelser af hud barriere funktion26. Hud pH-værdien er en indikator for barriere og anti-mikrobielle funktion af SC27. Surhedsgraden i huden kappen blev målt af en (tredje) hud PH 905 probe tilsluttet MPA 5 station. Denne specialdesignet sonden består af en flad top glas elektrode til fuld hudkontakt, tilsluttet et voltmeter. Systemet måler potentielle ændringer som følge af aktiviteten af hydrogen kationer omkring den meget tynde lag af halvfaste former målt på toppen af sonden. Ændringer i spænding vises som pH28.
Vi præsenterer forsøg opdelt i tre dele: (1) forberedelse af KH fra kylling fjer af to-trins alkaline-enzymatisk hydrolyse og dets rensning af dialyse (at fjerne salte og lav-Molekylær fraktioner), (2) udarbejdelse af kosmetiske formuleringer, der indeholder 2, 4 og 6% KH, og (3) test egenskaberne for KH ved at måle hud hydrering, TEWL, og hud pH. Test blev udført på 10 kvinder med en gennemsnitlig alder af 27,2 år og 10 mænd med en gennemsnitlig alder af 26,2 år. Metoden til udvælgelse af frivillige og selve testen blev gennemført i overensstemmelse med internationale etiske principper for bio-medicinske forskning udnytte forsøgspersoner29; alle personer, der gav deres informeret samtykke forud for optagelse i undersøgelsen. Før testning påbegyndt, frivillige blev bedt om at udfylde et spørgeskema om deres sundhedsstatus. De frivillige er forpligtet til at undgå at anvende et kosmetisk produkt til forsøgssteder og omkringliggende områder i løbet af 24 timer forud for og under testperioden; Derudover var de kun tilladt korte aften vasker med rindende vand.
Fordelen ved alkaline-enzymatisk hydrolyse er, at det kan blive ændret efter fremtidige anvendelser af KH. For eksempel, i hårpleje kosmetik applikationer, hvor en let brunlig farve af et produkt ikke er en hindring, kan en højere temperatur i hydrolyse anvendes fører til et højere udbytte af KH. Derudover den længere behandlingstid i begge faser af proceduren for teknologiske væsentligt påvirker den overordnede proces effektivitet – udbytte af KH stiger til 85%.
Resultater for hydre…
The authors have nothing to disclose.
Denne artikel blev skrevet med støtte til projektet IGA/FT/2017/007 af Tomas Bata University i Zlin.
Material or chemicals | |||
LIPEX 100T | Novozymes | LJP30020 | Lipex – enzyme produced by submerged fermentation of a genetically-modified microorganism, activity 100 KLU/g |
Savinase Ultra 16L | Novozymes | PXN40001 | Savinase – enzyme produced by submerged fermentation of a genetically-modified microorganism, activity 16 KNPU-S/g |
Potassium hydroxide, KOH | Sigma-Aldrich | 302510289 | Potassium hydroxide, KOH, 97,0 %, Mr 56,11 |
Phosphoric acid solution, H3PO4 | Sigma-Aldrich | W290017 | Phosphoric acid solution, H3PO4, 85 wt. % concentration in water, Mr 98,00 |
Sodium chloride physiological solution | Sigma-Aldrich | 52455 | Tablets of BioUltra NaCl physiological solution; 1 tablet in 1000 mL of water yields 0.9 % NaCl |
Sodium hydroxide, NaOH | Penta s.r.o. | 40216 | Sodium hydroxide, NaOH, 97,0 %, Mr 40,00 |
AmiFarm (Cremor base-A) | Fagron | 608425 | Hydrophilic oil in water (O/W) cream base; the composition: aqua, paraffin, paraffin liquid, cetearyl alkohol, Laureth 4, sodium hydroxide, carbomer, methylparaben, propylparaben. |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Equipment | |||
IKA EUROSTAR POWER control-visc stirrers | IKA-labortechnik | Z404020 | Digital laboratory stirrer, for tasks up to the high viscosity range, 230V, 1/cs |
IKA Propeller stirrer, 3-bladed | IKA-labortechnik | R 1381 | Propeller stirrer, 3-bladed, stirrer Ø: 45 mm, shaft Ø: 8 mm, shaft length: 350 mm |
Dialysis tubing closures | Sigma-Aldrich | Z371017-10EA | Dialysis tubing closures, red, size 110 mm |
Dialysis tubing cellulose membrane | Sigma-Aldrich | D9402-100FT | Dialysis tubing cellulose membrane, average flat width 76 mm (3.0 in.) |
DOMO Pot with stailess, LCD | DOMO Elektronic | DO42325PC | Preserving boiler stainless steel, 2000 W, 27-L container (diameter 37 cm, height 30 cm), temperature control 30-100 ° C, operation LCD display |
Hettich zentrifugen Universal 32 | Gemini bv | 2770 GS1R | Mid bench centrifuge, speed 18000 rpm |
LT 3 shaking device | Fischer Scientific | 6470.0002 | Orbital shaking device |
KERN 440-47N | Kern | 440-47N | Laboratory balance |
KERN 770 | Kern | 770 -N | Laboratory analytical balance |
VENTICELL 222 – Komfort | BMT, MMM Group | C 131749 | Drying oven, temperature control 30-100 ° C, air circulation control |
Vacucell 55 – EVO | BMT, MMM Group | B 050328 | Vacuum drying oven, temperature control 30-100 ° C |
PULVERISETTE 19 | Fritsch | 19.1030.00 | Universal cutting mill, rotor with V-cutting edges and fixed knives |
Multi Probe Adapter System MPA 5 | Courage & Kazaka Electronic | 10225237 | MPA 5 Station – equipment for measurement hydratation, TEWL and pH |
Skin pH-meter PH 905 probe | Courage & Kazaka Electronic | Probe to specifically measure the pH on the skin surface or the scalp | |
Corneometer CM 825 probe | Courage & Kazaka Electronic | Probe to determine the hydration level of the skin surface (Stratum corneum). | |
Tewameter TM 300 | Courage & Kazaka Electronic | Probe for the assessment of the transepidermal water loss (TEWL) | |
Heidolph RZR 2020 | Heidolph | 13-225-007-03-1 | Overhead stirrer, mechanical speed setting and stepless transmission; speed range 40-2000 rpm |
Heidolph mechanical stirrer BR 10 | Heidolph | Z336688-1EA | Blade impeller crossed stirrer |
Fagor FS 12 | Fagor | BTT-138 | Laboratory refrigerator with freezer space |
WTW bench pH/mV meter | WTW | Z313165 | High-performance bench pH and pH/conductivity meters for routine and high precision laboratory measurements in research or quality control laboratories |
Container | RPC Superfos | 13-L plastic bucket, diameter 26 cm, height 26 cm | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Software | |||
Microsoft Office 2010 | Microsoft | ||
C+K software | Courage and Khazaka Electronic GmbH | MPA 5 station operating software |