Summary
Aqui, apresenta-se um protocolo envolvendo transplante hepático parcial de re-arterialized de rato. Especificamente, 70% fígado foi ressecado na vivo usando uma técnica atualizada de hepatectomy orientada a embarcação. A artéria hepática foi reconstruída em uma forma de ponta-a-lado. A técnica de punho foi modificada para encurtar o tempo de anastomose da veia cava infrahepatic.
Abstract
Divisão de transplante hepático e transplante de fígado fígado doador vivo foram desenvolvidos na clínica de utilizar órgãos fígados de forma mais eficiente. Para entender melhor o mecanismo por trás desses procedimentos cirúrgicos, estabeleceu-se um modelo de transplante hepático parcial (PLTx) de rato para estudos cirúrgicos relevantes. Devido à complexidade do modelo de PLTx de rato, um protocolo com descrições detalhadas é necessário. Um artigo publicado anteriormente relatados um protocolo em que ex vivo hepatectomy foi usado para atingir 50% rat PLTx. Em contraste com este protocolo, introduzimos uma re-arterialized PLTx com um hepatectomy 70% na vivo . Um atualizado hepatectomy orientada a embarcação foi incorporado o rato PLTx para refinar o procedimento microcirúrgico. Portal de veias e artérias hepáticas do lobo lateral esquerdo e o lóbulo mediano individualmente foram dissecadas e ligadas antes da remoção do parênquima hepático, diminuindo assim a probabilidade de hemorragia no coto de fígado remanescente. Além disso, uma anastomose fim-a-lado de navio entre a artéria hepática comum e a artéria hepática adequada alargada foi introduzida para re-arterialize a artéria hepática. Usando esta técnica de anastomose final para o outro navio, o diâmetro da anastomose foi ampliado, assim, diminuindo a dificuldade de sutura de mão e mantendo uma alta taxa de patência anastomótica. Além disso, a anastomose da veia cava infrahepatic manguito foi ligeiramente modificado. Uma secção do parênquima hepática circunferencial ao redor da veia cava de um destinatário foi preservada durante a anastomose de manguito para manter a forma tridimensional do lúmen vascular. Esta secção do parênquima hepática foi removida depois de completar a anastomose. Com essa modificação, foi omitida a etapa que envolve a colocação de suturas de estadia, assim, ainda mais, encurtando o tempo de anastomose do manguito. Usando este protocolo de rato PLTx, um nível baixo de enzimas hepáticas, uma arquitetura lobular hepática intacta e uma taxa de sobrevivência de alta foram alcançados após microcirurgia.
Introduction
Atualmente, há uma grande discrepância entre o número de órgãos doados hepáticas e o número de pacientes esperando por um fígado doado. A escassez de órgãos fígados é um problema global. Para expandir o pool de doadores, dividir o transplante hepático (LTx) e dador vivo LTx foram desenvolvidos para usar um fígado parcial como um enxerto1.
Para investigar o mecanismo por trás do transplante hepático parcial (PLTx), modelos animais relevantes foram estabelecidos2,3,4,5. Em rat PLTx, os lóbulos do fígado são ressecadas in vivo e ex vivo de imitar as condições do dador vivo LTx e dividir LTx, respectivamente, em humanos. Um artigo publicado no Journal of Experiments visualizado apresentou um protocolo detalhado envolvendo um rato 50% PLTx usando um ex vivo hepatectomy5. No entanto, um rato PLTx com um hepatectomy na vivo ainda não foram relatado na literatura visualizada.
Além a diferença entre hepatectomies in vivo e ex vivo , a técnica de realizar uma hepatectomy em si também desempenha um papel importante na determinação do resultado da PLTx... atualmente, em muitos estudos cirúrgicos utilizando o rato PTLx modelo, o fígado, os lobos foram ressecados depois de colocar uma simples ligadura no pedículo do lóbulo do fígado,2,3,6,7,8,9. No entanto, colocar uma ligadura simples antes de ressecção não é adequada para todos os lobos de fígado, como lobos de fígado diferentes têm diferentes formas e tamanhos. Uma simples ligadura na base do lobo mediano carrega um alto risco de causar uma obstrução da veia cava, que eventualmente pode afetar o fluxo do enxerto hepático parcial10,11. Portanto, uma técnica de hepatectomy de atualização com base no conhecimento da anatomia hepática rato é necessário no campo de rato PTLx.
O protocolo descrito neste estudo, um atualizado orientada a embarcação 70% hepatectomy foi incorporado o procedimento do rato PLTx. O portal de veias e artérias hepáticas do lobo esquerdo lateral (LLL) e lóbulo mediano (ML) foram dissecadas e divididas individualmente antes da remoção do parênquima hepático. Então, as veias hepáticas do LLL e ML foram ligadas pela perfuração suturas. Usando a ligadura individuais e múltiplas suturas penetrantes em vez de colocar uma ligadura simples, o coto remanescente do ML foi capaz de espalhar sobre a veia cava. Daí, a constrição da veia cava infrahepatic, causada por uma ligadura cirúrgica foi evitada. Além disso, a oclusão da fonte de sangue do LLL e ML por ligadura individuais antes de remoção do parênquima hepático diminuiu a taxa de sangramento no coto de fígado remanescente, minimizando assim a influência da perda de sangue sobre as experiências de11.
Para microsurgeons, é um desafio significativo para reconstruir a artéria hepática adequada (PHA) de um enxerto de fígado por causa do extremamente pequeno diâmetro deste navio. Embora a questão de se re-arterialization em LTx é verdadeiramente necessário é ainda em debate12,13,14, inúmeras técnicas microcirúrgicos para reconstruir a artéria hepática têm sido propostos14 . Aqui, apresentamos uma nova técnica para re-arterialization do enxerto hepático, que se anastomosa com a artéria hepática comum (CHA) para o PHA alargada em forma de ponta-a-lado. Usando esta técnica de fim-a-lado, duas artérias hepáticas são conectadas com uma anastomose de maior diâmetro. Quanto maior for o diâmetro da anastomose, a sutura de mão mais fácil é executar e quanto maior for a melhoria a patência de anastomose torna-se.
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Protocol
Todos os procedimentos seguiram as diretrizes da cirurgia do roedor aprovado pela Wenzhou Medical University Animal Comitê de política e bem-estar dos 15.
1. os animais
- Use ratos Lewis machos pesando de 250-350 g como doadores e receptores.
2. operacional ambiente
- Execute todos os procedimentos microcirúrgicos sob um microscópio cirúrgico com uma ampliação variando de 7 X 20 X. Esterilize todos os instrumentos cirúrgicos antes do uso em operação.
Nota: A sala de cirurgia e mesa de operações são limpas, mas não estéril.
3. básicas manobras microcirúrgicos
- Grátis, dissecar e mobilizar o navio.
- Primeiro, use micropinça reta para levantar o tecido circundante a bordo do navio.
- Em segundo lugar, repetidamente e delicadamente abra e feche as pontas da pinça-micro curvada tal que as dicas bem podem cortar e descascar o tecido circundante na parede anterior do navio.
- Em terceiro lugar, use o micropinça reta para braçadeira e levantar o navio para expor o espaço posterior. Em seguida, use as pontas da pinça-micro curvada para descascar o tecido circundante na parede posterior do navio. Finalmente, um navio careca sem qualquer tecido circundante conectado deve ser apresentado.
- Dividir ou dobro ligate e dividir uma embarcação ou tecido.
- Em primeiro lugar, dar dois nós de praça no navio ou no tecido usando dois microfórceps16. Em segundo lugar, corte o vaso ou o tecido entre os dois nós de Praça usando microtesoura.
4. preparação do manguito e Stent biliar
- Fazer as algemas da veia porta e infrahepatic veia cava usando cateteres intravenosos calibre 12 e 14 mm, respectivamente, enquanto o stent biliar usado é um cateter intravenoso de calibre 22. As algemas consistem em uma parte do corpo e parte do identificador. Use uma cilíndrica na parte do corpo para proteger a parede do vaso para o punho (Figura 1).
5. anestesia e fixação dos ratos
- Coloque delicadamente o rato Lewis em uma caixa de indução com 5% de isoflurano misturado com oxigênio de 0,5 L/min para induzir anestesia por inalação. Monitore a frequência respiratória do rato para evitar a morte inesperada causada por uma overdose de isoflurano. Reduza a concentração de isoflurano para 2% para manter a anestesia, quando o rato não responde a estímulos de dor.
- Mova o rato para uma tábua de carvalho 30 cm x 30 cm, coberta por uma toalha de esteira cirúrgica esterilizada e coloque o rato em uma posição supina. Amarrar os quatro membros do rato usando fita medial e posteriormente fixar a fita com quatro tachinhas. Desinfectar a pele com álcool a 70% um tempo e Iodóforos três vezes.
6. o doador operação
- Expondo o campo operatório
- Corte uma pequena incisão transversal no abdômen superior ao transecto os navios epigástrico inferiores bilaterais usando um Coagulador elétrica.
- Estenda a incisão transversa perto da margem costal no abdômen superior com uma tesoura cirúrgica.
- Reverter e corrigir a parede do abdômen superior e o processo xifoide, respectivamente, para o lado cranial.
- Mova o intestino fora da cavidade abdominal com duas varas de algodão molhado. Cobrir o intestino usando um pedaço molhado de gaze.
- Cortar os ligamentos e aparar o suprahepatic veia cava (SHVC)
- Corte o ligamento falciformal, ligamento coronário e ligamento triangular em sequência.
- Livre a veia diafragmática esquerda do diafragma usando microfórceps. Em seguida, duplo ligate usando suturas de seda 6-0.
Nota: Não divida essa veia nesta etapa. - Corte o ligamento menor usando microtesoura para libertar o lobo caudado inferior e o ligamento hepatoesophageal e a artéria.
- Obstruindo o suprimento de sangue do LLL e ML antes de ressecção (Figura 2)
- Primeiro, use pinça curvada para dissecar cuidadosamente a parede posterior do tronco comum do PV que fornece o LLL e lóbulo mediano esquerdo (LML) do parênquima. Em segundo lugar, dobro ligate e dividi-lo com o correspondente ducto biliar e artéria hepática juntos.
- Dissecar e dividir o PV da RML suavemente porque esta veia adere intimamente para o parênquima hepático.
Nota: recomenda-se 14 ampliação de X. Não feri o PV do lobo superior direito, que é perto do PV da RML. - Identificar a artéria hepática e ducto biliar da RML, localizado entre os PVs da RML e amo a minha vida. Dupla ligate e dividir a artéria hepática e ducto biliar da RML usando suturas de seda 6-0.
Nota: Uma mudança na cor da LLL e ML de vermelho escuro vermelho é um indicador de sucesso oclusão do suprimento sanguíneo. Conhecimento profundo da anatomia vascular é essencial para identificar e dissecar os vasos correspondentes. Um estudo anterior em rat claramente ilustrado da anatomia hepática por corrosão lança10.
- Cortar a LLL
- Ligate pedículo do LLL usando um circunferencial sutura de seda 3-0 para obstruir o fluxo de sangue da veia hepática lateral esquerdo. Usando microtesoura, corte o fígado imediatamente acima a ligadura para remover a massa de fígado.
- Cortar o amor de minha vida
- Fixe a veia hepática mediana esquerda pela pinça hemostática mosquito, colocada ao longo da fissura mediana (Figura 3A). Remova todo o parênquima hepático do amor minha vida imediatamente acima a pinça usando microtesoura.
- Lugar uma sutura penetrante que penetra o parênquima hepático imediatamente sob a pinça que cercam a mediana esquerda hepática veia. Em seguida, um nó quadrado para ligate-lo antes de liberar o fórceps.
- Coloque outra duas suturas penetrante sob a pinça para cercar o resto da incisão aberta do amor de minha vida. Então, dê dois nós de praça para fechar o resto da incisão. Lançamento a pinça hemostática mosquito para verificar se há sangramento.
- Cortar o RML (Figura 4)
- Coloque uma pinça hemostática mosquito para cercar a base da RML a uma distância de 0,5 cm para o SHVC (Figura 4B). Em seguida, grampear a base usando a pinça hemostática mosquito para obstruir a veia hepática direita mediana.
- Usando microtesoura, remova todo o parênquima hepático da RML ao longo da superfície superior da pinça. Certifique-se de trabalhar muito perto da superfície da pinça, deixando um tronco liso e fino do ML.
- Lugar a primeira sutura penetrante penetrando o parênquima hepático sob a pinça para cercar a média mediana hepática veia. Em seguida, um nó quadrado para ligate veia hepática média mediana. Coloque a segunda sutura penetrante para ligate a veia hepática direita mediana usando o mesmo método. Coloque outra duas suturas penetrante perto do resto da incisão seguindo a descrição em 6.5.2.
- Aparar a cava de infrahepatic (IHVC)
- Abri o retroperitônio para expor a IHVC. Use micropinça curva para liberar o IHVC e a veia renal direita no tecido circundante. Dissecar e ligate a veia adrenal direita, que drena para o IHVC da parte traseira.
- Execute uma Nefrectomia direita após ligar as veia renal direita e artéria renal direita para salvar o comprimento suficiente vascular para instalar a braçadeira para o IHVC em uma etapa posterior.
- Instalando o stent biliar
- Mobilize o ducto biliar comum (CBD) da primeiro Hilo hepático usando microfórceps. Ligate CDB no ponto de Cruz da veia pilórica e CBD usando uma sutura de seda 6-0.
- Corte uma incisão transversal na parede anterior da CDB no lado proximal da ligadura. Inserir um stent biliar, feito de um cateter intravenoso de calibre 22, no lúmen do CDB através da incisão. Fixe o stent biliar com um circunferencial sutura seda 6-0. Transecto CDB entre as duas suturas de seda 6-0.
- Aparar o PV
- Ligate veia pilórica utilizando uma sutura de seda 6-0 distal para o PV. Em seguida, ligate veia pilórica utilizando uma sutura de polipropileno de 7-0 perto do PV. Transecto veia entre estes dois ligadura pilórica. Dupla ligate e dividir a veia esplênica da mesma forma.
Nota: Use uma sutura de polipropileno de 7-0 para ligate no navio para fazer um nó de ligadura menor comparado com o de sutura seda 6-0. Um grande nó pode interferir com a instalação de braçadeira na última etapa. A parede vascular da veia pilórica e veia esplênica é fina, então manipulações suaves são essenciais durante a dissecção. Um artigo publicado anteriormente com técnicas mais descrições e ilustrações sobre dissecando e dividindo a veia esplênica e pilórica veia deve ser lidas antes de operação17.
- Ligate veia pilórica utilizando uma sutura de seda 6-0 distal para o PV. Em seguida, ligate veia pilórica utilizando uma sutura de polipropileno de 7-0 perto do PV. Transecto veia entre estes dois ligadura pilórica. Dupla ligate e dividir a veia esplênica da mesma forma.
- Aparar a artéria hepática comum (CHA)
- Livre cuidadosamente o CHA e suas duas bifurcações, o PHA e a artéria gastroduodenal (GDA), o tecido circundante, usando dois microfórceps. Dupla ligate a GDA usando suturas de seda 6-0 na bifurcação do CHA de GDA.
- Heparinizing e perfusing o enxerto hepático
- Injete 50 UI de heparina em 1 mL de solução salina através da veia peniana. Espere por 5 min alcançar a heparinização sistémica.
- Grampear o PV, IHVC e CHA usando três curvas micro-serrefines para obstruir o fluxo sanguíneo hepático. Realize uma pequena incisão na parede anterior do PV para inserir um cateter de calibre 22. Perfundir o enxerto hepático parcial com solução salina a 4 ° C, através do cateter sob uma pressão de 20 cmH2O.
- Rapidamente, abrir a cavidade torácica e intratorácicos veia cava, usando tesouras cirurgia para drenar o sangue e o perfusato. Não parem a perfusão até a cor da prótese parcial fígado inteiro torna-se uniformemente amarela.
- Explanting o enxerto parcial do fígado
- Transecto veia diafragmática esquerda entre as dois ligadura (descrito em 6.2.2) usando microtesoura.
- Em seguida, transecto a SHVC perto do diafragma para manter o comprimento vascular tanto quanto possível. Transecto o PV a nível da veia esplênica usando microtesoura. Dividir o GDA entre a dupla ligadura e transecto o CHA perto do tronco celíaco.
- Transecto os vasos adrenais no lado distal do seda ligadura colocada em 6.7.2 6-0. Transecto a IHVC a nível da veia renal esquerda com uma tesoura cirúrgica.
- Impostos especiais de consumo e transferência do fígado parcial para um prato de costas-mesa (placa de cultura de 30 mm) preenchido com solução salina a 4 ° C.
7. tabela de back-operação (preparação)
- Instalando as algemas vasculares (Figura 5)
- Puxe o PV através do lúmen de uma braçadeira feita com um cateter intravenoso calibre 12 usando microfórceps. Corrigi temporariamente o punho punho e PV juntos usando uma pinça de navio. Parede do vaso Evert o PV para cobrir a superfície externa do manguito. Fixe a parede do vaso e o punho em posição com uma sutura de seda 6-0 circunferencial.
Nota: Não torça o navio. O identificador do manguito deve ser mantido na direção de 12:00. - Instale a braçadeira IHVC seguindo as descrições em 7.1.1.
- Puxe o PV através do lúmen de uma braçadeira feita com um cateter intravenoso calibre 12 usando microfórceps. Corrigi temporariamente o punho punho e PV juntos usando uma pinça de navio. Parede do vaso Evert o PV para cobrir a superfície externa do manguito. Fixe a parede do vaso e o punho em posição com uma sutura de seda 6-0 circunferencial.
- Predisposição as duas estadia suturas para o SHVC
- Penetrar a parede do vaso do SHVC de fora para dentro usando dois 7-0 polipropileno suturas ao longo das 03:00 e 09:00 direções, respectivamente.
Nota: Não faça um nó.
- Penetrar a parede do vaso do SHVC de fora para dentro usando dois 7-0 polipropileno suturas ao longo das 03:00 e 09:00 direções, respectivamente.
- Preservando o enxerto
- Mergulhe o enxerto hepático parcial em solução salina a 4 ° C para preservação após a operação de costas-tabela.
8. destinatário operação
- Repita os procedimentos 6.1-6.2 e 6,7, exceto a nefrectomia direita, do receptor, para expor o campo operatório, transecto os ligamentos e os vasos da guarnição.
- Preparando o IHVC, ducto biliar, artéria hepática e veia porta do receptor
- Primeiro, mobilize a seção do IHVC até a veia renal direita. Em segundo lugar, ligar os vasos bem adrenais usando uma sutura de seda 6-0. Em terceiro lugar, mobilize o CBD de Hilo hepático primeiro usando microfórceps.
Nota: Não retire o tecido adiposo em torno da CBD. - Transeção da CDB na primeira bifurcação no hilo hepático após ligadura dupla usando uma sutura de seda 6-0. Em seguida, transecto o PHA usando microtesoura após a ligadura dupla usando uma sutura de seda 6-0. Mobilize a seção do PV de Hilo hepático na veia pilórica.
- Primeiro, mobilize a seção do IHVC até a veia renal direita. Em segundo lugar, ligar os vasos bem adrenais usando uma sutura de seda 6-0. Em terceiro lugar, mobilize o CBD de Hilo hepático primeiro usando microfórceps.
- Mobilizando a retaguarda do fígado
- Retrai o destinatário fígado ao lado esquerdo, usando duas varas de algodão. Então, corte o ligamento na parte traseira do fígado do SHVC na veia adrenal direita conforme descrito em um anterior artigo visualizado18. Depois disso, apresente uma faixa de borracha através do espaço traseiro do SHVC.
- Preparar os instrumentos e os materiais durante a fase de anhepatic
- Verificar a disponibilidade de todos os instrumentos e os materiais exigidos na fase de anhepatic, tais como uma seringa de 5 mL com agulha curvada, titular microtesoura, agulha de micro, micropinça, duas pinças micro-hemostático, suturas polipropileno dois 7-0 e 6-0 material de sutura de seda.
Nota: À procura de materiais ou instrumentos pode prolongar a fase de anhepatic.
- Verificar a disponibilidade de todos os instrumentos e os materiais exigidos na fase de anhepatic, tais como uma seringa de 5 mL com agulha curvada, titular microtesoura, agulha de micro, micropinça, duas pinças micro-hemostático, suturas polipropileno dois 7-0 e 6-0 material de sutura de seda.
- Excisão do fígado do receptor
- Grampear o IHVC imediatamente acima da veia renal, usando uma pinça de embarcação e o PV imediatamente acima da veia pilórica. Registre a duração da fase de anhepatic, a partir deste momento até o grampo na PV é liberado.
- Reduza a concentração de isoflurano para 0,5% imediatamente.
- Baixem o SHVC e diafragma da banda de borracha predefinidos. Prenda as partes do diafragma juntamente com a veia cava intratorácica, usando uma pinça Bulldog, mantendo uma distância de 0,5 cm para o SHVC.
Nota: Não fixe o pulmão do rato. - Usando microtesoura, corte a parede do vaso do SHVC cuidadosamente ao longo da borda superior do parênquima hepático para manter a máximo possível de parede vascular.
- Transecto o PV na primeira bifurcação no hilo hepático usando microtesoura. Em seguida, transecto a veia cava inferior no parênquima do lobo inferior direito, em vez de na parede do vaso, deixando o parênquima hepático circunferencial ao redor da veia cava. Mantenha a ponta do lobo inferior direito, a uma distância de 4 mm para o IHVC. Depois cruza os vasos, mova o fígado inteiro fora da cavidade abdominal.
- Reconstruindo o SHVC
- Coloque o enxerto parcial de fígado em orthotopically a cavidade abdominal. Perfure a parede do vaso do SHVC de dentro para fora ao longo as 03:00 e 09:00 direções usando duas suturas estadia predefinidos. Puxe as suturas de dois estadia para a direita e esquerda, depois eles estão ligados em um nó com seus próprios fins.
- Pierce SHVC parede do vaso de fora para dentro perto do nó no sentido de introduzir a agulha de sutura estadia certa do lúmen vascular 03:00.
- Anastomose da parede posterior do SHVC por uma sutura executando dentro do lúmen vascular da direção 03:00 para a direção de 09:00.
- Na esquina da direção de 09:00, fure a parede do vaso de dentro para fora perto do nó para introduzir a agulha fora do lúmen vascular.
- Use esta sutura para anastomosar parede anterior usando uma sutura execução fora do lúmen vascular da direção de 09:00 a 3 a horas de direção. Finalmente, amarrar a sutura com seu próprio final 3 vezes (Figura 6).
Nota: Injete o lúmen do SHVC reconstruído para expulsar as bolhas de ar antes do último pontos 2-3 3-5 mL de solução salina. Uma descrição mais detalhada de anastomose SHVC pode ser encontrada no artigo por Delriviere et al 19.
- Reconstruindo o PV
- Coloque duas suturas de polipropileno estadia de 7-0 no final do PV do destinatário seguindo a descrição no ponto 7.2. Puxe duas suturas de estadia na direção oposta para estender a parede do vaso. Corrigi duas suturas de estadia usando dois micro-mosquito pinça hemostática.
- Injete o lúmen vascular do PV do receptor, para expulsar as bolhas de ar, aproximadamente 1 mL de solução salina. Inserir rapidamente a braçadeira da veia porta no lúmen vascular de PV do receptor para forçar quando ele é aberto usando microfórceps. Fixe a anastomose de manguito usando uma sutura de seda 6-0 circunferencial. Grampear o CHA.
- Reperfusão hepática enxerto
- Desbloquear as mordaças no SHVC e PV em sequência para reperfusão do enxerto hepático. Registrar o tempo da fase de anhepatic. Verifique se há sangramento da anastomose. Aumente a concentração de isoflurano a 1-2% de acordo com a reação do rato para o estímulo de dor.
- Reconstruindo o IHVC
- Injecte 1 mL de solução salina no lúmen vascular do IHVC do receptor, para expulsar as bolhas de ar. Insira o punho do lúmen vascular cilíndrico do IHVC, que é apoiado pelo parênquima hepático circunferencial (Figura 7). Introduza uma sutura de seda 6-0 através do espaço traseiro do IHVC. Rapidamente segura a anastomose de manguito usando uma sutura de seda 6-0.
- Lançamento do navio dois grampos no IHVC para reiniciar a perfusão. Retire o parênquima hepático circundante cuidadosamente acima da sutura de seda circunferencial usando microtesoura.
- Reconstruindo a artéria hepática
- Penetrar a parede do vaso do CHA no fígado enxerto de fora para dentro usando duas polipropileno 11-0 suturas nas 03:00 e 09:00 indicações, respectivamente. Obstrua o fluxo de sangue do CHA e GDA em destinatário usando duas curvas micro-serrefines.
- Transecto o PHA do destinatário na sua raiz para expor o lúmen vascular usando microtesoura. Amplie o lúmen vascular do PHA do receptor, por parte de corte da parede do vaso longitudinalmente para acomodar o diâmetro do CHA no enxerto hepático.
- Se anastomosam o CHA do enxerto hepático para o PHA alargada em forma de fim-a-lado, utilizando a execução técnica de sutura descrita para a anastomose SHVC (8.6.2-8.6.7).
Nota: Ilustrações detalhadas podem ser encontradas no artigo pelo Huang et al.14.
- Reconstruindo o CBD
- Volte o intestino para a cavidade abdominal para reduzir a distância entre as duas extremidades do ducto biliar. Realize uma incisão transversal na parede anterior do ducto biliar do receptor.
- Puxe-o stent biliar no fígado enxerto parcial para inseri-lo no lúmen do ducto biliar do receptor, através de incisão transversa. Fixe o stent usando uma sutura de seda circunferencial de 6-0.
- Amarre as duas suturas seda 6-0-circunferencial no ducto biliar uns aos outros para reduzir a tensão da anastomose.
- Fechando o abdômen
- Feche o abdômen em duas camadas usando sutura de seda 3-0 no padrão de sutura de execução.
9. pós-operatório tratamentos (Analgesia e antibióticos)
- Trate todos os destinatários com buprenorfina 0,1 mg/kg por via subcutânea. Administre cefuroxima (16 mg/kg) por via subcutânea, além de drogas analgésicas. Oferece água da torneira e padrão de laboratório animal comida para os ratos ad libitum.
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Representative Results
No total, 31 casos de rato arterialized syngeneic PLTx foram concluídos usando este protocolo. Todos os destinatários sobreviveram até o final do tempo de observação. O peso corporal dos destinatários começou a se recuperar após dia pós-operatório (POD) 4. A inclinação do peso corporal foi próximo ao de um rato normal de Lewis após 6 POD (Figura 8), que indiretamente implicou a recuperação do destinatário. Histologicamente, observou-se uma ligeira proliferação do ducto biliar nos destinatários, e a arquitetura lobular hepática dos destinatários estava intacta. Não há necrose ou dilatação sinusoidal óbvia foi observada (Figura 9). O nível sérico da alanina aminotransferase (ALT) estava dentro da normalidade no POD 30 (Figura 10). Não há casos de urina amarela causada pela icterícia foram observados nesses destinatários, que foi indicada, verificando a gaiola, roupa de cama diariamente, indicando a abertura do stent biliar. O nível de soro normal de bilirrubina em POD 30 confirmada a reconstrução bem sucedida do ducto biliar (Figura 11). A patência da artéria hepática foi verificada por cruza o PHA no lado proximal da anastomose durante o sacrifício. Sangramento do PHA foi observada em todos os destinatários, implicando a patência de anastomose. Todos estes resultados sugeriram que os transplantes de fígado funcionavam bem.
A duração média da fase de anhepatic foi 23,03 ± 2,3 min. A anastomose do manguito de PV levou 4.68 ± 0,77 min, enquanto a anastomose do manguito do IHVC levou apenas 2.05 ± 0,71 min. comparado com a anastomose do manguito de PV, a anastomose do manguito do IHVC salvou a etapa de colocação de suturas de estadia e desse modo mais encurtado os anas tempo de tomosis (tabela 1).
Dois casos de hemorragia no coto remanescente da ML durante a hepatectomy 70% foram observados entre os 31 casos de hepatectomy orientada a embarcação. Em uma experiência anterior, hemorragia no coto remanescente do ML foi observada em 8 de 18 casos de preservação de parênquima hepatectomy orientada em navio (Figura 12). Este resultado indicou uma taxa mais baixa de sangramento no coto de fígado remanescente do ML após o uso orientado a embarcação hepatectomy de 70%.
Figura 1 . As algemas e stent biliar.
(A, C) O tamanho dos punhos. (B) o fillister na braçadeira. (D) a parte do corpo e parte do punho da manga. (E) (a) braçadeira IHVC; (b) punho PV. (F) stent biliar. Barra de escala = 5 mm. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2 . Para ocluir o suprimento de sangue da LLL e ML.
(A) O tronco comum do PV, artéria hepática e biliar adesiva da LLL e amo a minha vida.
(B) A descoloração da LLL e amo a minha vida depois que cruza o tronco comum.
(C) A veia porta da RML.
(D) Todos os PVs, artérias hepáticas e vias biliares da LLL e o ML foram seccionadas.
Barra de escala = 5 mm. abreviaturas: LLL deixou lóbulo lateral, lóbulo mediano ML, amo minha vida mediana lobo esquerdo, RML lobo bem mediano, RSL direito lóbulo superior, RIL lobo inferior direito, lobo caudado superior de SCL. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3 . A ressecção do lobo mediano esquerdo.
(A) ressecar a massa hepática do amor minha vida imediatamente acima o fórceps.
(B) Coloque três suturas penetrantes na incisão. (
)
Barra de escala = 5 mm. abreviaturas: RML direito lóbulo mediano, RSL superior direita lobo, RIL direito inferior lobo, lobo caudado superior de SCL. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4 . A ressecção do lóbulo direito mediano (RML).
(A) A base da RML.
(B) Coloque a pinça de hemostasia mosquito em torno da base da RML.
(C) Ressecar o parênquima hepático de RML imediatamente acima o fórceps.
(D) Deixe uma camada lisa e fina do tecido hepático remanescente sobre o SHVC.
Barra de escala = 5 mm. abreviaturas: lóbulo mediano de ML, RSL direito lóbulo superior. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 5 . Para instalar o manguito.
(A) Puxe o PV através do lúmen de um manguito.
(B) fixe o punho punho e PV juntos por uma pinça de navio.
(C) evert da parede vascular PV para cobrir a superfície externa do manguito.
(D) fixe a parede vascular e o punho em posição.
Barra de escala = 5 mm. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 6 . Para reconstruir o SHVC.
(A & B) Puxe duas suturas de estadia para a direita e esquerda, respectivamente.
(C) se anastomosam a parede posterior do SHVC por uma sutura executando no lúmen vascular.
(D) se anastomosam parede anterior do SHVC fora do lúmen vascular.
Barra de escala = 5 mm. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 7 . Para reconstruir o IHVC.
(A) um lúmen vascular cilíndrico do IHVC do receptor.
(B) assegurar a anastomose do manguito do IHVC.
(C) iniciar a reperfusão.
(D) Retire o parênquima hepático circundante acima da sutura circunferencial de seda.
Barra de escala = 5 mm. abreviaturas: veia porta de PV, IHVC inferior infrahepatic veia cava, RIL direito lóbulo inferior. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 8 . Recuperação de peso do corpo no pós-operatório.
O peso corporal de destinatários começou a se recuperar após o 4º dia de pós-operatório. A inclinação do peso corporal foi próximo ao de um rato normal de Lewis após dia pós-operatório 6, que indiretamente implicou a recuperação do destinatário.
Figura 9 . Histologia do fígado enxerto após 30 dias.
Em histologia, observou-se uma ligeira proliferação do ducto biliar nos destinatários, e a arquitetura lobular hepática de destinatários estava intacta. Não há necrose ou dilatação sinusoidal óbvia foi observada (400 X). Barra de escala = 20 hum por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 10 . Nível sérico de Alt.
O nível sérico de ALT foi dentro da normalidade em POD 30. (* *, P < 0,05).
Figura 11 . Nível sérico de bilirrubina.
O nível sérico de bilirrubina em POD 30 foi comparável de um rato normal de Lewis (P > 0,05).
Figura 12 . Sangramento taxas de diferentes métodos de hepatectomy.
Uma menor taxa de sangramento no coto de fígado remanescente do ML foi observada no método usando o hepatectomy 70% orientada no navio.
| Procedimentos | Remoção do fígado | Anastomose SHVC | Anastomose de PV | Anastomose IHVC | Tempo de Anhepatic |
| Tempo (minutos) | 2.62±0.46 | 15.73±2.05 | 4.68±0.77 | 2.05±0.71 | 23.03±2.30 |
| Os dados foram expressos em Mean±SD | |||||
Tabela 1. Tempo de procedimentos cirúrgicos individuais durante a fase de anhepatic
Tabela 2. Diferença entre dois protocolos visualizados do rato PLTx. Clique aqui para ver uma versão maior desta tabela.
Materiais complementares
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Discussion
PLTx rato é um procedimento microcirúrgico sofisticado com um programa de treinamento que é alta no custo e tempo de duração:20. A complexidade do rato PLTx protocolo impediu pesquisadores de usando este modelo animal. Comparado com o rato em tamanho LTx, rato PLTx apresenta o micro-cirurgião não só com o desafio de um procedimento de transplante, mas também com o desafio de ressecção hepática em um animal pequeno. Portanto, um protocolo microcirúrgico visualizado descrevendo todo o processo em detalhes é essencial para o estabelecimento deste modelo complexo. Um artigo anteriormente visualizado relatado por Nagai et al apresentou um protocolo de 50% parcial ortotópico LTx com reconstrução arterial hepática em ratos5 (tabela 2). Este protocolo utilizado um hepatectomy ex vivo , que é clinicamente semelhante ao procedimento de dividir LTx.
Em comparação com separação LTx, vivendo doador LTx resseca o enxerto hepático parcial do dador vivo, em vez de dividir o fígado na operação da tabela-back. A ressecção em vivo hepática pode levar a lesões de isquemia quente ainda mais para o enxerto hepático parcial, mais hipertensão portal e manipulações cirúrgicas mais. Daí, vários rato PLTx modelos utilizando na vivo hepatectomy foram estabelecidos em estudos relevantes6,8,21,22. Muitos protocolos envolvem a ressecção dos lóbulos fígados após simples ligadura no pedículo ou base2,3,6,8,21,23. No entanto, diferentes lóbulos hepáticas são de diferentes formas. O ML do rato tem uma ampla base que rodeia semi a veia cava10,24. Colocação de uma ligadura simples na base do ML facilmente contrai a veia inferior. Para evitar a constrição da veia cava, Madrahimov et al desenvolveram um parênquima-preservando orientada a embarcação hepatectomy para remover o ML em 2 etapas após quatro suturas penetrantes no parênquima foram feitas, deixando o coto remanescente da ML liso 10. no entanto, os PVs dos lóbulos fígados ligados pelas suturas penetrantes estavam escondidos no parênquima. Sangramento no coto remanescente causado pela falta ou ferindo os pequenos ramos do PV não pode ser completamente evitada 11. Em nosso protocolo, a correspondentes PVs e a artéria hepática foram mais dissecada primeiro. Então, o fornecimento de sangue dos lóbulos fígados ressecados individualmente foi obstruído por ligadura antes da ressecção. Portanto, a taxa de sangramento no coto remanescente foi abaixada usando nosso protocolo (Figura 10). A técnica de colocação de quatro suturas penetrantes no cotoco do ML também foi empregada em nosso protocolo para ligate as veias hepáticas, mas não o PV e artérias hepáticas. Com estes ligadura usando múltiplas suturas penetrantes e uma ressecção passo a passo, foi mantida a forma plana do coto remanescente fígado, que evitou a constrição da veia cava.
Para a reconstrução de IHVC, uma ligeira modificação foi feita para a anastomose de manguito descrita por Kamada et al 25. a veia cava inferior do destinatário foi seccionada no parênquima do lobo inferior direito, em vez do navio de IHVC, que deixou uma parênquima hepática circunferencial ao redor da veia cava. O parênquima hepático ao redor da veia cava ajudou a manter uma forma cilíndrica do fim vascular do IHVC do destinatário, em vez de uma forma plana. Daí, o lúmen do IHVC naturalmente foi aberto sem a ajuda de suturas de estadia e fórceps. Esta modificação ajudou a salvar a etapa de colocação de suturas de estadia e facilitou a inserção do manguito IHVC no lúmen vascular do destinatário. Além disso, essa modificação prolongada o comprimento vascular de IHVC, reduzindo assim a tensão entre as duas extremidades durante a anastomose do manguito.
Com a vantagem de anastomose vascular rápido, a técnica de dois-manguito é frequentemente usada no rato ortotópico LTx para anastomosando-se o PV e IHVC. Miyata et al . mesmo proposto um protocolo envolvendo uma técnica de três-braçadeira para anastomosar o PV, IHVC e SHVC. No entanto, a técnica de punho também tem suas desvantagens. Primeiro, uma braçadeira com um tamanho fixo não pode caber perfeitamente o tamanho do vaso correspondente. Além disso, a técnica de manguito perturba o fluxo de sangue, resultando em uma maior incidência de trombose e reação de corpo estranho para o punho26. O SHVC, uma nave principal em ratos, mostra o fluxo de sangue elevado. Qualquer constrição ou trombose neste navio pode causar graves complicações pós-operatórias. Portanto, em nosso protocolo de PLTx, nós escolhemos usar a técnica de sutura de mão para reconstruir o SHVC, que permite o ajuste da anastomose tão perto como possível à configuração física. No entanto, anastomose de alta qualidade SHVC concluído pela técnica de sutura de mão requer alta habilidade microcirúrgica. Para iniciantes, a técnica de triangulação do Carrel é recomendada para anastomosando-se vasos 27. Usando esta técnica, estadia três suturas são colocadas em intervalos regulares, em torno da circunferência da SHVC. A forma 3D do SHVC é mantida por retrai que estes três ficar suturas ao longo de três direções, o que podem impedir o SHVC de estenose durante a anastomose.
Re-arterialization do enxerto hepático é um tema controverso. Em nossa opinião, re-arterialization não é o passo fundamental para assegurar uma taxa de sobrevivência elevada do destinatário, mas pode ser o passo fundamental para assegurar um enxerto de fígado de alta qualidade. No protocolo tradicional do rato LTx envolvendo a técnica de dois-punho, a artéria hepática não foi reconstruída, como a falta de perfusão da artéria hepática não afetou o resultado do rato LTx12. Além disso, foi realizado um estudo anterior sobre mouse LTx para investigar o efeito de re-arterialization na sobrevivência do enxerto a longo prazo, alterações histológicas, lesão hepática isquêmica e início de vias de ativação imunológica13. Os pesquisadores concluíram que o re-arterialization de fígado enxertos não possuía um grande efeito sobre a taxa de sobrevivência ou o grau de ativação imunológica. No entanto, um estudo recente relatado por Huang et al sugere que re-arterialization é importante para a recuperação do parênquima hepática submetida a hepatectomy, especialmente com a obstrução da saída28. Non-arterialization do enxerto hepático parcial agravada danos ao fígado e atrasar a recuperação de necrose focal. Portanto, recomenda-se re-arterialization do enxerto hepático parcial. Conforme ilustrado aqui, uma técnica de anastomose fim-a-lado foi usada para reconstruir a artéria hepática, que foi descrita anteriormente por um dos nossos autores 14. A vantagem desta técnica é a escolha que se anastomosam duas artérias grossas, o CHA e GDA, ao invés do PHA fina, o que reduz a dificuldade de reconstruir a artéria hepática e mantém uma alta taxa de patência de anastomose.
O rato clássico LTx protocolo proposto pela Kamada et al sugere que controlando a fase de anhepatic tal que é menos de 26 min, como nenhum animal sobrevivido quando a fase de anhepatic durou mais que 26 min25. Nossa experiência é consistente com esta sugestão, embora anteriormente observamos vários casos de sobrevivência com um anhepatic tempo de fase mais de 26 min. Em nossa opinião, uma fase estável anhepatic tem prioridade sobre uma fase de anhepatic mais curta na pesquisa cirúrgica. No nosso grupo, a fase de anhepatic é controlada precisamente para dentro de um tempo específico. A fase de anhepatic não é interrompida até que o tempo de anhepatic predefinido é alcançado, embora a anastomose do SHVC e PV poderia ser concluída muito mais cedo. No entanto, em um projeto de formação, uma fase de anhepatic mais curta é incentivada.
Embora muitas melhorias foram feitas para encurtar a fase de formação e eliminar operações desnecessárias, rato LTx e PLTx são ainda complexas operações microcirúrgica20. Portanto, além de um protocolo visualizado, um protocolo de treinamento passo a passo baseado em ciclo de plano--Check-Action é importante para a concretização de uma operação de alta qualidade e taxa de sobrevivência de alta. Nossa experiência preliminar em usar este protocolo de treinamento mostrou que 40-73 operações foram necessárias para dominar o rato ortotópico LTx. Um adicional de 9-13 operações eram obrigadas a dominar o rato re-arterialized PLTx. O protocolo de treinamento proposto por Czigány et al afirma que 50-60 LTxs são suficientes para dominar o ortotópico LTx e o PLTx29.
Em nosso protocolo de treinamento de plano--Check-Action, controle de qualidade em cada etapa de formação e em cada manipulação individual deve ser enfatizado, especialmente em tal modelo complexo. Uma taxa de sobrevivência de alta não equivale a um procedimento de alta qualidade. Nos resultados do representante, vários critérios para avaliar a qualidade da microcirurgia foram listados, incluindo histologia, enzimas hepáticas, recuperação do peso de corpo, icterícia (soro bilirrubina e amarelo urina), duração da fase de anhepatic e a abertura da artéria hepática. Alta qualidade é alcançada somente quando todos os critérios forem atendidos.
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Disclosures
Todos os autores têm sem interesses conflitantes para divulgar.
Acknowledgments
Esta pesquisa foi apoiada pela Fundação Nacional de ciências naturais da China (Grant no. 81501382) e Zhejiang Provincial Natural Science Foundation da China (Grant no. LQ13H100003 e LQ16H100002).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical microscope | Möller-Wedel, Germany | 654359 | |
| Light source | OSRAM (China) Lighting Co., Ltd | 64627 | |
| Isoflurane Vaporizer | MIDMARK Corporation | VIP3000 | |
| Isoflurane | Baxter Healthcare Corporation | 40032609 | For Inhalation anesthesia |
| Normal Saline | Zhejiang Tianrui Pharmaceutical Co., Ltd. | 716092103 | |
| Povidone Iodine Solution | HANGZHOU MINSHENG PHARMACEUTICAL | H33021567 | For disinfection |
| Hemostatic forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | J31020 | |
| Surgical scissors | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | JC2116 | |
| Needle-holder | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | J32030 | |
| Dressing Forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | J42020 | |
| Mosquito hemostatic forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | W40340 | For liver resection; For retracting the stay sutures. |
| Micro-scissors | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA1040 | |
| Micro needle-holder | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA2060 | |
| Curved micro typing forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA3061 | |
| straight micro typing forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA3060 | |
| Micro hemostatic forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA3020 | |
| Bulldog clamp | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | XEC350 | |
| Vessel clamps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | W40160 | |
| Micro Serrefine-curved | Fine Science Tools, Inc | 18055-05 | |
| Dacryosyrinx | Shi Zhuo medical instruments Co., Ltd. | 5# curve | Use as the curved needle for forcing out the air bubbles in the vascular lumen |
| Sterilized gauze swabs | Fuqing Health & Integral Medical | 20230R | |
| 5mL syringe | Zhejiang Yusheng Medical Instrument Co.,Ltd | 811932416 | |
| 18G needles | Shanghai Kindly Enterprise Development Group Co., Ltd | 01-014 | For fixing the upper abdomen wall |
| Intima II 22G intraveous catheter | Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. | 383207y | For making biliary stent; For infusing perfusate |
| 7-0 polypropylene sutures | Ningbo Medical Needle Co., Ltd | 151026 | For SHVC anastomsis |
| 6-0 silk suture | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd | 2650182 | For ligation |
| Culture dish (100mm) | Corning Incorporated | 430165 | used in back table for storage ice. The back table dish was placed on it. |
| Culture dish (30 mm) | Corning Incorporated | 3296 | As a vessel for organ preservation |
| Angiocath 12G intravenous catheter | Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. | 382277 | For making a IHVC cuff |
| Angiocath 14G intravenous catheter | Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. | 382269 | For making a PV cuff |
| Buprenorphine (hydrochloride) | Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Pharmaceutical Co., Ltd | H12020275 | For analgesic |
| Cefuroxime sodium for injection | Esseti FarmaceuticiS.r.l | H20160013 | As an antibiotics |
References
- Yan, J. Q., Becker, T., Peng, C. H., Li, H. W., Klempnauer, J. Split liver transplantation: a reliable approach to expand donor pool. Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 4, 339-344 (2005).
- Xia, R., Emond, J. C. Orthotopic partial liver transplantation in the rat: a model of 70% hepatectomy and reduced size liver transplantation. Transplantation. 56, 1041-1043 (1993).
- Omura, T., Ascher, N. L., Emond, J. C. Fifty-percent partial liver transplantation in the rat. Transplantation. 62, 292-293 (1996).
- Foss, A., et al. Function of reduced-size liver transplant in the rat. Res Exp Med (Berl). 197, 91-99 (1997).
- Nagai, K., Yagi, S., Uemoto, S., Tolba, R. H. Surgical procedures for a rat model of partial orthotopic liver transplantation with hepatic arterial reconstruction. J Vis Exp. , e4376 (2013).
- Sun, J., Qin, G., Wu, L., Wang, C., Sheil, A. G. Antigenic load and peripheral chimeric levels in entire and partial liver allograft recipients. Microsurgery. 21, 183-187 (2001).
- Ninomiya, M., et al. Deceleration of regenerative response improves the outcome of rat with massive hepatectomy. Am J Transplant. 10, 1580-1587 (2010).
- Yamanaka, K., et al. Effect of olprinone on liver microstructure in rat partial liver transplantation. J Surg Res. 183, 391-396 (2013).
- Wang, W., et al. Mesenchymal stem cells promote liver regeneration and prolong survival in small-for-size liver grafts: involvement of C-Jun N-terminal kinase, cyclin D1, and NF-kappaB. PLoS One. 9, e112532 (2014).
- Madrahimov, N., Dirsch, O., Broelsch, C., Dahmen, U. Marginal hepatectomy in the rat: from anatomy to surgery. Ann. Surg. 244, 89-98 (2006).
- Martins, P. N., Theruvath, T. P., Neuhaus, P. Rodent models of partial hepatectomies. Liver Int. 28, 3-11 (2008).
- Kamada, N., Sumimoto, R., Kaneda, K. The value of hepatic artery reconstruction as a technique in rat liver transplantation. Surgery. 111, 195-200 (1992).
- Steger, U., Sawitzki, B., Gassel, A. M., Gassel, H. J., Wood, K. J. Impact of hepatic rearterialization on reperfusion injury and outcome after mouse liver transplantation. Transplantation. 76, 327-332 (2003).
- Huang, H., et al. A novel end-to-side anastomosis technique for hepatic rearterialization in rat orthotopic liver transplantation to accommodate size mismatches between vessels. Eur Surg Res. 47, 53-62 (2011).
- Bernal, J., et al. Guidelines for rodent survival surgery. J.Invest Surg. 22, 445-451 (2009).
- Johnson, A. J., Stulting, R. D. Ophthalmic Microsurgical Suturing Techniques. Macsai, M. S. , Springer. Berlin Heidelberg. 21-28 (2007).
- Delriviere, L., et al. Detailed modified technique for safer harvesting and preparation of liver graft in the rat. Microsurgery. 17, 690-696 (1996).
- Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. Orthotopic liver transplantation in rats. J Vis Exp. , (2012).
- Delriviere, L., et al. Technical details for safer venous and biliary anastomoses for liver transplantation in the rat. Microsurgery. 18, 12-18 (1998).
- Jin, H., et al. Preliminary experience of a PDCA-cycle and quality management based training curriculum for rat liver transplantation. J Surg Res. 176, 409-422 (2012).
- Selzner, N., Selzner, M., Tian, Y., Kadry, Z., Clavien, P. A. Cold ischemia decreases liver regeneration after partial liver transplantation in the rat: A TNF-alpha/IL-6-dependent mechanism. Hepatology. 36, 812-818 (2002).
- Tanaka, H., Hashizume, K., Enosawa, S., Suzuki, S. Successful transplantation of a 20% partial liver graft in rats: a technical innovation. J Surg Res. 110, 409-412 (2003).
- Bockhorn, M., et al. Erythropoietin treatment improves liver regeneration and survival in rat models of extended liver resection and living donor liver transplantation. Transplantation. 86, 1578-1585 (2008).
- Martins, P. N., Neuhaus, P. Surgical anatomy of the liver, hepatic vasculature and bile ducts in the rat. Liver Int. 27, 384-392 (2007).
- Kamada, N., Calne, R. Y. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation. 28, 47-50 (1979).
- Kashfi, A., et al. A review of various techniques of orthotopic liver transplantation in the rat. Transplant.Proc. 37, 185-188 (2005).
- Wain, R. A. J., Hammond, D., McPhillips, M., Whitty, J. P. M., Ahmed, W. Surgical Tools and Medical Devices. Ahmed, W., Jackson, M. J. , Springer International Publishing. 545-562 (2016).
- Huang, H., et al. Hepatic arterial perfusion is essential for the spontaneous recovery from focal hepatic venous outflow obstruction in rats. Am J Transplant. 11, 2342-2352 (2011).
- Czigany, Z., et al. Improving Research Practice in Rat Orthotopic and Partial Orthotopic Liver Transplantation: A Review, Recommendation, and Publication Guide. Eur Surg Res. 55, 119-138 (2015).
