Re-Arterialized transplante de fígado parcial de rato com na vivo orientado a embarcação 70% Hepatectomy
Summary
Aqui, apresenta-se um protocolo envolvendo transplante hepático parcial de re-arterialized de rato. Especificamente, 70% fígado foi ressecado na vivo usando uma técnica atualizada de hepatectomy orientada a embarcação. A artéria hepática foi reconstruída em uma forma de ponta-a-lado. A técnica de punho foi modificada para encurtar o tempo de anastomose da veia cava infrahepatic.
Abstract
Divisão de transplante hepático e transplante de fígado fígado doador vivo foram desenvolvidos na clínica de utilizar órgãos fígados de forma mais eficiente. Para entender melhor o mecanismo por trás desses procedimentos cirúrgicos, estabeleceu-se um modelo de transplante hepático parcial (PLTx) de rato para estudos cirúrgicos relevantes. Devido à complexidade do modelo de PLTx de rato, um protocolo com descrições detalhadas é necessário. Um artigo publicado anteriormente relatados um protocolo em que ex vivo hepatectomy foi usado para atingir 50% rat PLTx. Em contraste com este protocolo, introduzimos uma re-arterialized PLTx com um hepatectomy 70% na vivo . Um atualizado hepatectomy orientada a embarcação foi incorporado o rato PLTx para refinar o procedimento microcirúrgico. Portal de veias e artérias hepáticas do lobo lateral esquerdo e o lóbulo mediano individualmente foram dissecadas e ligadas antes da remoção do parênquima hepático, diminuindo assim a probabilidade de hemorragia no coto de fígado remanescente. Além disso, uma anastomose fim-a-lado de navio entre a artéria hepática comum e a artéria hepática adequada alargada foi introduzida para re-arterialize a artéria hepática. Usando esta técnica de anastomose final para o outro navio, o diâmetro da anastomose foi ampliado, assim, diminuindo a dificuldade de sutura de mão e mantendo uma alta taxa de patência anastomótica. Além disso, a anastomose da veia cava infrahepatic manguito foi ligeiramente modificado. Uma secção do parênquima hepática circunferencial ao redor da veia cava de um destinatário foi preservada durante a anastomose de manguito para manter a forma tridimensional do lúmen vascular. Esta secção do parênquima hepática foi removida depois de completar a anastomose. Com essa modificação, foi omitida a etapa que envolve a colocação de suturas de estadia, assim, ainda mais, encurtando o tempo de anastomose do manguito. Usando este protocolo de rato PLTx, um nível baixo de enzimas hepáticas, uma arquitetura lobular hepática intacta e uma taxa de sobrevivência de alta foram alcançados após microcirurgia.
Introduction
Atualmente, há uma grande discrepância entre o número de órgãos doados hepáticas e o número de pacientes esperando por um fígado doado. A escassez de órgãos fígados é um problema global. Para expandir o pool de doadores, dividir o transplante hepático (LTx) e dador vivo LTx foram desenvolvidos para usar um fígado parcial como um enxerto1.
Para investigar o mecanismo por trás do transplante hepático parcial (PLTx), modelos animais relevantes foram estabelecidos2,3,4,5. Em rat PLTx, os lóbulos do fígado são ressecadas in vivo e ex vivo de imitar as condições do dador vivo LTx e dividir LTx, respectivamente, em humanos. Um artigo publicado no Journal of Experiments visualizado apresentou um protocolo detalhado envolvendo um rato 50% PLTx usando um ex vivo hepatectomy5. No entanto, um rato PLTx com um hepatectomy na vivo ainda não foram relatado na literatura visualizada.
Além a diferença entre hepatectomies in vivo e ex vivo , a técnica de realizar uma hepatectomy em si também desempenha um papel importante na determinação do resultado da PLTx… atualmente, em muitos estudos cirúrgicos utilizando o rato PTLx modelo, o fígado, os lobos foram ressecados depois de colocar uma simples ligadura no pedículo do lóbulo do fígado,2,3,6,7,8,9. No entanto, colocar uma ligadura simples antes de ressecção não é adequada para todos os lobos de fígado, como lobos de fígado diferentes têm diferentes formas e tamanhos. Uma simples ligadura na base do lobo mediano carrega um alto risco de causar uma obstrução da veia cava, que eventualmente pode afetar o fluxo do enxerto hepático parcial10,11. Portanto, uma técnica de hepatectomy de atualização com base no conhecimento da anatomia hepática rato é necessário no campo de rato PTLx.
O protocolo descrito neste estudo, um atualizado orientada a embarcação 70% hepatectomy foi incorporado o procedimento do rato PLTx. O portal de veias e artérias hepáticas do lobo esquerdo lateral (LLL) e lóbulo mediano (ML) foram dissecadas e divididas individualmente antes da remoção do parênquima hepático. Então, as veias hepáticas do LLL e ML foram ligadas pela perfuração suturas. Usando a ligadura individuais e múltiplas suturas penetrantes em vez de colocar uma ligadura simples, o coto remanescente do ML foi capaz de espalhar sobre a veia cava. Daí, a constrição da veia cava infrahepatic, causada por uma ligadura cirúrgica foi evitada. Além disso, a oclusão da fonte de sangue do LLL e ML por ligadura individuais antes de remoção do parênquima hepático diminuiu a taxa de sangramento no coto de fígado remanescente, minimizando assim a influência da perda de sangue sobre as experiências de11.
Para microsurgeons, é um desafio significativo para reconstruir a artéria hepática adequada (PHA) de um enxerto de fígado por causa do extremamente pequeno diâmetro deste navio. Embora a questão de se re-arterialization em LTx é verdadeiramente necessário é ainda em debate12,13,14, inúmeras técnicas microcirúrgicos para reconstruir a artéria hepática têm sido propostos14 . Aqui, apresentamos uma nova técnica para re-arterialization do enxerto hepático, que se anastomosa com a artéria hepática comum (CHA) para o PHA alargada em forma de ponta-a-lado. Usando esta técnica de fim-a-lado, duas artérias hepáticas são conectadas com uma anastomose de maior diâmetro. Quanto maior for o diâmetro da anastomose, a sutura de mão mais fácil é executar e quanto maior for a melhoria a patência de anastomose torna-se.
Protocol
Representative Results
Discussion
PLTx rato é um procedimento microcirúrgico sofisticado com um programa de treinamento que é alta no custo e tempo de duração:20. A complexidade do rato PLTx protocolo impediu pesquisadores de usando este modelo animal. Comparado com o rato em tamanho LTx, rato PLTx apresenta o micro-cirurgião não só com o desafio de um procedimento de transplante, mas também com o desafio de ressecção hepática em um animal pequeno. Portanto, um protocolo microcirúrgico visualizado descrevendo todo o p…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Esta pesquisa foi apoiada pela Fundação Nacional de ciências naturais da China (Grant no. 81501382) e Zhejiang Provincial Natural Science Foundation da China (Grant no. LQ13H100003 e LQ16H100002).
Materials
| Surgical microscope | Möller-Wedel, Germany | 654359 | |
| Light source | OSRAM (China) Lighting Co., Ltd | 64627 | |
| Isoflurane Vaporizer | MIDMARK Corporation | VIP3000 | |
| Isoflurane | Baxter Healthcare Corporation | 40032609 | For Inhalation anesthesia |
| Normal Saline | Zhejiang Tianrui Pharmaceutical Co., Ltd. | 716092103 | |
| Povidone Iodine Solution | HANGZHOU MINSHENG PHARMACEUTICAL | H33021567 | For disinfection |
| Hemostatic forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | J31020 | |
| Surgical scissors | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | JC2116 | |
| Needle-holder | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | J32030 | |
| Dressing Forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | J42020 | |
| Mosquito hemostatic forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | W40340 | For liver resection; For retracting the stay sutures. |
| Micro-scissors | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA1040 | |
| Micro needle-holder | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA2060 | |
| Curved micro typing forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA3061 | |
| straight micro typing forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA3060 | |
| Micro hemostatic forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA3020 | |
| Bulldog clamp | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | XEC350 | |
| Vessel clamps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | W40160 | |
| Micro Serrefine-curved | Fine Science Tools, Inc | 18055-05 | |
| Dacryosyrinx | Shi Zhuo medical instruments Co., Ltd. | 5# curve | Use as the curved needle for forcing out the air bubbles in the vascular lumen |
| Sterilized gauze swabs | Fuqing Health & Integral Medical | 20230R | |
| 5mL syringe | Zhejiang Yusheng Medical Instrument Co.,Ltd | 811932416 | |
| 18G needles | Shanghai Kindly Enterprise Development Group Co., Ltd | 01-014 | For fixing the upper abdomen wall |
| Intima II 22G intraveous catheter | Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. | 383207y | For making biliary stent; For infusing perfusate |
| 7-0 polypropylene sutures | Ningbo Medical Needle Co., Ltd | 151026 | For SHVC anastomsis |
| 6-0 silk suture | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd | 2650182 | For ligation |
| Culture dish (100mm) | Corning Incorporated | 430165 | used in back table for storage ice. The back table dish was placed on it. |
| Culture dish (30 mm) | Corning Incorporated | 3296 | As a vessel for organ preservation |
| Angiocath 12G intravenous catheter | Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. | 382277 | For making a IHVC cuff |
| Angiocath 14G intravenous catheter | Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. | 382269 | For making a PV cuff |
| Buprenorphine (hydrochloride) | Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Pharmaceutical Co., Ltd | H12020275 | For analgesic |
| Cefuroxime sodium for injection | Esseti FarmaceuticiS.r.l | H20160013 | As an antibiotics |
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