Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

أرتيرياليزيد إعادة "زرع الكبد الجزئي الفئران" مع في فيفو المنحى السفينة 70% ظهرت

Published: April 8, 2018 doi: 10.3791/56392
Automatic Translation
1, 2, 3, 3, 4, *1, *3
1Department of Surgery, The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, 2Reproductive Center, The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, 3Department of Transplantation, The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, 4Department of Surgery, Perelman School of Medicine at the University of Pennsylvania
* These authors contributed equally

Summary

ويرد هنا، بروتوكول التي تنطوي على الفئران أرتيرياليزيد إعادة زرع الكبد الجزئي. على وجه التحديد، كان الكبد 70% مستأصل في فيفو باستخدام أسلوب تحديث لظهرت السفينة المنحى. الشريان الكبدي الذي أعيد بطريقة نهاية-إلى-جانب. تعديل أسلوب الكفة لتقصير وقت ملامسة الأجوف فينا إينفراهيباتيك.

Abstract

تم وضع تقسيم زرع الكبد وزرع الكبد الكبد المانحين الذين يعيشون في العيادة استخدام أجهزة الكبد بطريقة أكثر كفاءة. أنشئ نموذج فأر زرع كبد جزئي (بلتكس) لفهم أفضل لهذه الآلية وراء هذه الإجراءات الجراحية، دراسات الجراحية ذات الصلة. بسبب تعقيد الطراز بلتكس الفئران، مطلوب بروتوكولا مع أوصاف مفصلة. وأفادت مقال نشر سابقا بروتوكول الذي كان يستخدم السابقين فيفو ظهرت لتحقيق 50% الفئران بلتكس. وعلى النقيض من هذا البروتوكول، قدمنا بلتكس إعادة أرتيرياليزيد مع ظهرت 70% في فيفو . تحديث ظهرت السفينة المنحى أدمج في الفئران بلتكس صقل هذا الإجراء ميكروسورجيكال. بوابة الأوردة والشرايين الكبدية الفص الجانبي الأيسر والفص المتوسط تم تشريح منفردة ومتصلة قبل إزالة لحمه الكبد، مما يقلل من احتمال النزيف في عقب السيجارة بقايا الكبد. وعلاوة على ذلك، بدأ ملامسة نهاية إلى جانب سفينة بين الشريان الكبدي شيوعاً والشريان الكبدي السليم الموسع إعادة أرتيرياليزي الشريان الكبدي. باستخدام هذا الأسلوب ملامسة نهاية إلى جانب السفينة، وتم توسيع قطر ملامسة، وبالتالي تقليل صعوبة خياطة اليد والحفاظ على معدل مرتفع من سالكيه أناستوموتيك. وعلاوة على ذلك، تعديل طفيف ملامسة الكفة من الأجوف فينا إينفراهيباتيك. وقد حافظت قسم من حمة الكبد كفافى حولها الوريد الأجوف مستلم أثناء ملامسة الكفة للحفاظ على الشكل ثلاثي الأبعاد التجويف الأوعية الدموية. تمت إزالة هذا المقطع للحمة الكبد بعد الانتهاء ملامسة. مع هذا التعديل، أسقطت بالخطوة التي تنطوي على وضع خيوط البقاء، وبالتالي تقصير الوقت ملامسة الكفة. باستخدام هذا البروتوكول للفئران بلتكس، تحققت على مستوى منخفض من إنزيم كبد وبنية مفصص كبد سليمة ومعدل بقاء عالية بعد الجراحة.

Introduction

وهناك حاليا تفاوت كبير بين عدد الأجهزة الكبد المتبرع بها وعدد المرضى الذين ينتظرون كبد المتبرع بها. النقص في أجهزة الكبد مشكلة عالمية. لتوسيع قاعدة المانحين، وتقسيم زرع الكبد (LTx) والمانحين الذين يعيشون LTx وضعت لاستخدام كبد جزئي ك الاختلاس1.

لمواصلة التحقيق الآلية وراء زرع الكبد الجزئي (بلتكس)، كانت نماذج حيوانية ذات الصلة المنشأة2،3،،من45. في الفئران بلتكس، هي الفصوص الكبد مستأصل في فيفو و السابقين فيفو تحاكي ظروف المعيشة المانحة LTx وتقسيم LTx، على التوالي، في الإنسان. قدمت ورقة نشرت في مجلة تجارب تصور بروتوكول مفصلة التي تنطوي على الفئران 50% بلتكس استخدام السابقين فيفو ظهرت5. ومع ذلك، فأر بلتكس مع ظهرت في فيفو لا بعد أبلغ في الأدب تصور.

بالإضافة إلى الفرق بين هيباتيكتوميس في فيفو و السابقين فيفو ، أسلوب أداء ظهرت نفسها تلعب أيضا دوراً هاما في تحديد نتائج بلتكس. حاليا، في العديد من دراسات العمليات الجراحية باستخدام الفئران تل النموذجي، والكبد كانت مستأصل الفصوص بعد وضع ربط بسيط في بيديكلي للكبد الفص2،3،6،7،،من89. ومع ذلك، وضع ربط بسيط قبل بتر ليست مناسبة لجميع الفصوص الكبد، الفصوص الكبد مختلفة قد أشكال وأحجام مختلفة. ربط بسيط في القاعدة من الفص المتوسط ينطوي على مخاطر عالية تسبب انقباض من الأجوف فينا، مما قد يؤثر في نهاية المطاف على تدفق10،الفساد الكبد الجزئي11. ولذلك، مطلوب أسلوب ظهرت تحديث استناداً إلى المعرفة بتشريح الكبد في الفئران في ميدان فأر تل.

في البروتوكول، المذكورة في هذه الدراسة، أدمج المنحى السفينة ظهرت 70% حدثت في إجراء الفئران بلتكس. بوابة الأوردة والشرايين الكبدية الفص الجانبي الأيسر (التعلم مدى الحياة) والفص المتوسط (ML) تم تشريح وتقسيم على حدة قبل إزالة لحمه الكبد. ثم، كانت متصلة الأوردة الكبدية للتعلم مدى الحياة ومل بثقب خياطة الجروح. باستخدام ليجيشنز الفردية وخيوط خارقة متعددة بدلاً من وضع ربط بسيط، تمكن السيجارة بقايا مل منتشرة الوريد الأجوف. ومن ثم، تم تفادي انقباض الأجوف فينا إينفراهيباتيك تسببها ربط العمليات جراحية. بالإضافة إلى ذلك، انسداد إمدادات الدم للتعلم مدى الحياة، ومل من ليجاتيونس الفردية قبل إزالة لحمه الكبد انخفض معدل النزيف في عقب السيجارة بقايا الكبد، وبالتالي تقليل تأثير فقدان الدم على تجارب11.

ميكروسورجيونس، يشكل تحديا كبيرا لإعادة بناء الشريان الكبدي السليم (فا) من طعم الكبد بسبب قطر صغير للغاية من هذه السفينة. على الرغم من أن مسألة ما إذا كانت إعادة أرتيرياليزاتيون في LTx ضروري حقاً لا يزال قيد المناقشة12،،من1314، كان العديد من التقنيات ميكروسورجيكال لإعادة بناء الشريان الكبدي المقترحة14 . وهنا، نقدم تقنية جديدة لإعادة أرتيرياليزيشن للابتزاز الكبد، الذي أناستوموسيس الشريان الكبدي الشائعة (تشأ) فا الموسع بطريقة نهاية-إلى-من جانب. باستخدام هذا الأسلوب في النهاية إلى جانب، اثنين من الشرايين الكبدية مرتبطة ملامسة قطرها أكبر. قطر ملامسة أكبر وخياطة اليد أسهل من القيام بأكبر يصبح التحسن الذي طرأ السالكيه لملامسة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

كافة الإجراءات التي اتبعت المبادئ التوجيهية لجراحة القوارض التي أقرتها الجامعة الطبية ونتشو الحيوان السياسة ولجنة الرعاية الاجتماعية 15.

1-الحيوانات

  1. استخدام ذكور الفئران لويس وزنها 250-350 غ كالجهات المانحة والمتلقية.

2-منطوق البيئة

  1. تنفيذ جميع الإجراءات microsurgical تحت مجهر جراحي مع تكبير تتراوح بين 7 X 20 X. تعقيم كل الأدوات الجراحية قبل استخدامها في العملية.
    ملاحظة: غرفة العمليات والتشغيل الجدول نظيفة ولكن ليست عقيمة.

3-الأساسية من المناورات ميكروسورجيكال

  1. مجاناً وتشريح وتعبئة السفينة.
    1. أولاً، استخدام الملقط الصغير على التوالي لرفع الأنسجة المحيطة على متن السفينة.
    2. ثانيا، مرارا وتكرارا ولطف فتح وإغلاق النصائح من المنحنى الصغير-الملقط أن هذه النصائح الجميلة يمكن قص مفتوحة وقشر الأنسجة المحيطة على الجدار الأمامي للسفينة.
    3. ثالثا، استخدام الملقط الصغير على التوالي على المشبك ورفع السفينة لفضح الفضاء الخلفي. ثم استخدم النصائح من المنحنى الصغير-الملقط لقشر الأنسجة المحيطة على الجدار الخلفي للسفينة. وأخيراً، ينبغي أن تعرض سفينة أصلع دون أي الأنسجة المحيطة متصلة.
  2. تقسيم أو ضعف سد وتقسيم سفينة أو الأنسجة.
    1. أولاً، هما ساحة عقده التعادل في السفينة أو الأنسجة باستخدام الملقط الصغير16. ثانيا، قطع السفينة أو الأنسجة بين عقده ساحة اثنين باستخدام مقص الصغرى.

4-إعداد الكفة وتركيب دعامات الصفراوية

  1. جعل الأصفاد الوريد البابي وإينفراهيباتيك الوريد الأجوف استخدام القسطرة الوريدية عيار 12 وعيار 14، على التوالي، في حين تستخدم دعامات الصفراوية قسطرة الوريدية عيار 22. الأصفاد تتألف من جزء من الجسم والتعامل مع جزء. استخدام رأس محدبة في الجزء الأساسي لتأمين جدار الوعاء على الكفة (الشكل 1).

5-التخدير والتثبيت من الفئران

  1. مع 5% isoflurane مختلطة مع الأكسجين 0.5 لتر في الدقيقة للحث على التخدير استنشاق مكان بلطف الفئران لويس في مربع التعريفي. رصد وتيرة التنفس من الفئران لمنع الوفاة غير متوقعة من جراء جرعة زائدة من إيسوفلوراني. خفض تركيز isoflurane إلى % 2 للمحافظة على التخدير عند الفئران لم يستجب لتحفيز الألم.
  2. نقل الفئران إلى لوح 30 سم × 30 سم بلوط تغطيها منشفة حصيرة تعقيم جراحي، ووضع الفئران في موقف ضعيف. ربط أطرافه الأربعة من الفئران باستخدام الشريط الآنسي، وفيما بعد إصلاح الشريط مع أربعة ثومبتاكس. تطهير الجلد الكحول 70% واحد باستخدام الوقت وإيودوفورس ثلاث مرات.

6-الجهات المانحة العملية

  1. يعرض الحقل من المنطوق
    1. قص شق عرضية صغيرة في الجزء العلوي من البطن قطاع السفن شرسوفي أدنى الثنائية باستخدام كواجولاتور كهربائية.
    2. تمديد شق عرضية قريبة من الهامش الساحلي في الجزء العلوي من البطن باستخدام مقص جراحي.
    3. عكس وإصلاح عملية جدار البطن العلوي والرهابه، على التوالي، إلى جانب الجمجمة.
    4. نقل الأمعاء خارج تجويف البطن مع اثنين من العصي القطن الرطب. تغطي الأمعاء باستخدام قطعة مبللة من الشاش.
  2. قطع الأربطة والتشذيب الأجوف فينا سوبراهيباتيك (شفك)
    1. قطع فالسيفورمال الرباط، الرباط الشريان التاجي والرباط الثلاثي في التسلسل.
    2. مجاناً وعلى المنوال حجابي اليسرى من الحجاب الحاجز باستخدام الملقط الصغير. ثم، اضطر مزدوجة باستخدام خيوط الحرير 6-0.
      ملاحظة: لا تقسم ومن هذا المنطلق في هذه الخطوة.
    3. قطع في الرباط جاستروهيباتيك استخدام مقص الصغرى الفص كودات أقل شأنا والرباط هيباتويسوفاجيل والشريان مجاناً.
  3. أوككلودينج إمدادات الدم للتعلم مدى الحياة ومل قبل بتر (الشكل 2)
    1. أولاً، استخدام منحنى ملقط تشريح الجدار الخلفي لجذع مشترك الكهروضوئية التي لوازم التعلم مدى الحياة، والفص الأيسر الوسيط (حب حياتي) من حمة بعناية. ثانيا، ضعف سد وتقسم مع القناة الصفراوية المقابلة والشريان الكبدي معا.
    2. تشريح وتقسيم الكهروضوئية RML برفق لأنه من هذا المنطلق تلتزم لحمه الكبد عن كثب.
      ملاحظة: ينصح 14 X التكبير. لا تجرح الكهروضوئية الفص حق متفوقة، الذي يقع بالقرب من الكهروضوئية RML.
    3. تحديد الشريان الكبدي والقناة الصفراوية من RML الواقعة بين المحاضر الحرفية RML وأحب حياتي. ضعف سد وتقسيم الشريان الكبدي والقناة الصفراوية من RML استخدام خيوط الحرير 6-0.
      ملاحظة: تغيير اللون للتعلم مدى الحياة، ومل من الأحمر اللون الأحمر للظلام مؤشرا من مؤشرات التغطية الناجحة لإمدادات الدم. المعرفة الدقيقة بتشريح الأوعية الدموية من الضروري تحديد وتشريح السفن المقابلة. دراسة سابقة في الفئران يبين بوضوح في تشريح الكبد بالتآكل يلقي10.
  4. ريسيكتينج التعلم مدى الحياة
    1. سد بيديكلي للتعلم مدى الحياة استخدام كفافى خياطة الحرير 3-0 إلى أوككلودي تدفق الدم الوريد الكبدي الجانبي الأيسر. باستخدام مقص الصغرى، قطع الكبد مباشرة فوق ربط لإزالة كتلة الكبد.
  5. ريسيكتينج الحب حياتي
    1. المشبك على المنوال كبدي الوسط الأيسر ملقط مرقئ البعوض يوضع على طول الشق الوسيط (الشكل 3A). قم بإزالة كافة لحمه الكبد من الحب حياتي أعلاه مباشرة الملقط استخدام مقص الصغرى.
    2. المكان خياطة ثقب التي تخترق لحمه الكبد فورا تحت الملقط المحيطة بالوسط الأيسر كبدي الوريد. ثم، قرانهما ساحة سد ذلك قبل الإفراج الملقط.
    3. مكان آخر خيوط ثقب اثنين تحت الملقط لتطويق بقية شق مفتوحة للحب في حياتي. ثم، عقده ساحة اثنين لإغلاق بقية الشق التعادل. الإصدار ملقط مرقئ البعوض للتحقق من النزيف.
  6. ريسيكتينج RML (الشكل 4)
    1. ضع ملقط مرقئ البعوض لتطويق قاعدة RML على مسافة 0.5 سم شفك (الشكل 4 باء). ثم، عبر المشبك قاعدة استخدام ملقط مرقئ البعوض إلى أوككلودي الوريد الكبدي يمين الوسط.
    2. باستخدام مقص الصغرى، إزالة كافة لحمه الكبد من RML على طول السطح العلوي الملقط. من المؤكد أن العمل جداً قريبة من سطح الملقط، ترك السيجارة عادي ورقيقة مل.
    3. مكان خياطة ثقب أول اختراق لحمه الكبد تحت الملقط لتطويق الوسيط الأوسط كبدي الوريد. ثم، قرانهما ساحة سد الوريد الكبدي الوسيط الأوسط. مكان خياطة ثقب الثانية لسد الوريد الكبدي يمين الوسط باستخدام نفس الأسلوب. مكان آخر خيوط ثقب اثنين قريبة من بقية شق بعد الوصف في 6.5.2.
  7. تقليم الأجوف فينا إينفراهيباتيك (إيهفك)
    1. قص فتح ريتروبيريتونيوم لفضح إيهفك. استخدام الملقط الصغير منحنى على إيهفك والوريد الكلوي الحق من الأنسجة المحيطة بالمجان. تشريح واضطر على المنوال حق الغدة الكظرية، مما يستنزف في إيهفك من الخلف.
    2. القيام استئصال حق بعد ليجاتينج بالوريد الكلوي الحق وشريان كلوي حق لحفظ ما يكفي طول الأوعية الدموية لتثبيت الرباط على إيهفك في خطوة لاحقة.
  8. تركيب دعامات الصفراوية
    1. تعبئة القناة الصفراوية المشتركة (اتفاقية التنوع البيولوجي) من هيلم كبدي أول استخدام الملقط الصغير. اضطر اتفاقية التنوع البيولوجي في هذه النقطة عبر الوريد البواب واتفاقية التنوع البيولوجي باستخدام خياطة حرير 6-0.
    2. قص شق عرضية على الجدار الأمامي لاتفاقية التنوع البيولوجي في الجهة الدانية من الربط. قم بإدراج دعامات الصفراوية، مصنوعة من عيار 22 القسطرة الوريدية، في التجويف اتفاقية التنوع البيولوجي عن طريق الشق. تأمين تركيب دعامات الصفراوية مع كفافى خياطة الحرير 6-0. قطاع التنوع البيولوجي بين خيوط الحرير اثنين في 6-0.
  9. تقليم الكهروضوئية
    1. سد الوريد البواب استخدام خياطة حرير 6-0 القاصي إلى الكهروضوئية. بعد ذلك، اضطر على المنوال البواب استخدام 7-0 خياطة البوليبروبيلين قريبة من الكهروضوئية. قطاع على المنوال البواب بين هذه ليجاتيونس اثنين. ضعف سد وتقسم على المنوال الطحال بنفس الطريقة.
      ملاحظة: استخدم خياطة البوليبروبيلين 7-0 لسد السفينة جعل عقده ربط أصغر بالمقارنة بخياطة الحرير 6-0. عقده كبيرة قد تتداخل مع التثبيت الكفة في الخطوة الأخيرة. جدار الأوعية الدموية الوريد البواب والطحال المنوال رقيقة، حيث تلاعب لطيف ضرورية أثناء التشريح. وينبغي قراءة مقالة منشورة سابقا مع الوصف أكثر تقنية، والرسوم التوضيحية حول تشريح وتقسيم الوريد البواب والطحال المنوال قبل العملية17.
  10. قطع الشريان الكبدي الشائعة (تشأ)
    1. مجاناً بعناية تشأ وبه بيفوركيشنز اثنين، فا وقصور الشريان (GDA)، من الأنسجة المحيطة باستخدام الملقط الصغير اثنين. ضعف سد GDA استخدام خيوط الحرير 6-0 في التشعب تشأ إلى GDA.
  11. هيبارينيزينج وبيرفوسينج الاختلاس الكبد
    1. حقن 50 وحدة دولية من الهيبارين في 1 مل من المحلول الملحي عن طريق الوريد القضيب. انتظر لمدة 5 دقائق لتحقيق هيبارينيزاتيون النظامية.
    2. عبر المشبك الكهروضوئية، إيهفك وتشا استخدام مايكرو منحنى ثلاثة-سيريفينيس إلى أوككلودي تدفق الدم الكبد. إجراء شق صغير في الجدار الأمامي من الكهروضوئية لإدخال قسطرة عيار 22. نتخلل الاختلاس الكبد الجزئي مع المالحة عند 4 درجة مئوية عن طريق القسطرة تحت ضغط من 20 غروهارلم2o.
    3. سرعة قطع فتح تجويف الصدر والوعائي الوريد الأجوف باستخدام المقص الجراحي لاستنزاف الدم وبيرفوساتي. لا تتوقف التروية حتى يصبح لون الاختلاس الكبد الجزئي كامل موحد الأصفر.
  12. اكسبلانتينج الاختلاس الكبد الجزئي
    1. قطاع على المنوال حجابي الأيسر بين ليجيشنز اثنين (المبين في 6.2.2) باستخدام مقص الصغرى.
    2. وبعد ذلك، قطاع شفك قريبة من الحجاب الحاجز للحفاظ على طول الأوعية الدموية أطول وقت ممكن. قطاع الكهروضوئية على مستوى الوريد الطحال باستخدام مقص الصغرى. تقسيم GDA بين ليجيشنز مزدوجة، وقطاع تشأ القريبة من الجذع الزلاقي.
    3. قطاع سفن الغدة الكظرية في الجهة البعيدة من ربط الحرير توضع في 6.7.2 6-0. قطاع إيهفك على مستوى الوريد الكلوي الأيسر استخدام المقص الجراحي.
    4. المكوس ونقل الكبد الجزئي لطبق الظهر-الجدول (طبق الثقافة 30 ملم) مملوءة بالمياه المالحة في 4 درجات مئوية.

7-مرة أخرى--الجدول تشغيل (الإعداد للابتزاز)

  1. تركيب الأصفاد والأوعية الدموية (الشكل 5)
    1. سحب الكهروضوئية من خلال التجويف الرباط قسطرة الوريدية 12-قياس استخدام الملقط الصغير. مؤقتاً إصلاح مقبض الكفة والكهروضوئية معا باستخدام المشبك سفينة. جدار الوعاء إيفرت الكهروضوئية لتغطية السطح الخارجي للرباط. تأمين جدار الوعاء والكفة في الموقف مع خياطة حرير كفافى 6-0.
      ملاحظة: لا تطور السفينة. ينبغي أن يوضع المؤشر الكفة في اتجاه 12:00 م.
    2. تثبيت الرباط إيهفك بعد الوصف في 7.1.1.
  2. التعيين المسبق خيوط البقاء سنتين على شفك
    1. اختراق جدار السفينة شفك من خارج إلى الداخل باستخدام اثنين 7-0 بولي بروبلين خياطة الجروح على طول 03:00 ص واتجاهات 09:00 ص، على التوالي.
      ملاحظة: لا يتم ربط عقده.
  3. الاحتفاظ الاختلاس
    1. تزج الاختلاس الكبد الجزئي في المحلول الملحي في 4 درجات مئوية للحفاظ عليها بعد العملية الجدول مرة أخرى.

8-المستفيدة من العملية

  1. كرر الإجراءات الموجودة في 6.1-6-2 و 6-7، باستثناء استئصال الحق، في المستلم لفضح ميدان المنطوق، قطاع الأربطة وتقليم السفن.
  2. إعداد إيهفك والقناة الصفراوية والشريان الكبدي والوريد البابي في المتلقي
    1. أولاً، تعبئة مقطع إيهفك وصولاً إلى الوريد الكلوي الحق. وثانيا، اضطر السفن الغدة الكظرية حق استخدام خياطة حرير 6-0. وثالثاً، تعبئة اتفاقية التنوع البيولوجي من هيلم كبدي أول استخدام الملقط الصغير.
      ملاحظة: القطع لا قبالة الأنسجة الدهنية حول اتفاقية التنوع البيولوجي.
    2. قطاع التنوع البيولوجي في التشعب الأولى في هيلوم كبدي بعد ربط مزدوجة تستخدم خياطة حرير 6-0. ثم قطاع فا استخدام مقص الصغرى بعد ربط مزدوجة تستخدم خياطة حرير 6-0. تعبئة المقطع الكهروضوئية من هيلم الكبدية إلى الوريد البواب.
  3. تعبئة الجزء خلفي الكبد
    1. سحب المتلقي الكبد إلى الجانب الأيسر باستخدام اثنين من العصي القطن. ثم قطع في الرباط في الجزء خلفي الكبد من شفك على المنوال حق الغدة الكظرية كما هو موضح في تصور المادة سابقة18. بعد ذلك، يعرض شريط المطاطي عبر الفضاء مرة أخرى من شفك.
  4. إعداد الأدوات والمواد مرحلة أنهيباتيك
    1. إعادة فحص توافر جميع الأدوات والمواد المطلوبة في المرحلة أنهيباتيك، مثل حقنه 5 مل بإبرة منحنية وحامل المقص الصغير، الإبرة الدقيقة، الملقط الصغير، الملقط الصغير-مرقئ اثنين، وخيوط البولي بروبلين اثنين 7-0 و 6-0 مواد خياطة الحرير.
      ملاحظة: البحث عن مواد أو أدوات قد تطيل في مرحلة أنهيباتيك.
  5. نسق الكبد في المتلقي
    1. عبر المشبك إيهفك مباشرة فوق الوريد الكلوي باستخدام المشبك سفينة والكهروضوئية مباشرة فوق الوريد البواب. تسجيل مدة المرحلة أنهيباتيك من هذه اللحظة وحتى يتم الإفراج عن المشبك في الكهروضوئية.
    2. خفض تركيز isoflurane إلى 0.5 في المائة فورا.
    3. سحب شفك والحجاب الحاجز إلى أسفل بالفرقة المطاط مسبقاً. المشبك في الأجزاء من الحاجز إلى جانب الأجوف فينا الوعائي باستخدام المشبك لدغ، الحفاظ على مسافة 0.5 سم شفك.
      ملاحظة: لا المشبك في الرئة للفئران.
    4. باستخدام المقص الصغير، قطع جدار السفينة شفك بعناية على طول الحافة العلوية من حمة الكبد للحفاظ على الأوعية الدموية الجدار أطول وقت ممكن.
    5. قطاع الكهروضوئية في التشعب الأولى في هيلم الكبد باستخدام مقص الصغرى. ثم قطاع الأجوف فينا أقل شأنا في حمة الفص حق أدنى بدلاً من جدار الوعاء، ترك لحمه الكبد كفافى حولها الوريد الأجوف. تبقى حافة القطع في الفص اليمين السفلي على مسافة من 4 مم إلى إيهفك. بعد ترانسيكتينج السفن، نقل الكبد كله خارج تجويف البطن.
  6. إعادة إعمار شفك
    1. ضع الاختلاس الكبد الجزئي في أورثوتوبيكالي تجويف البطن. اختراق جدار السفينة شفك من داخل إلى خارج على طول التوجيهات 03:00 ص و 09:00 ص باستخدام خيوط الإقامة مسبقاً اثنين. سحب خيوط البقاء اثنين إلى اليمين واليسار بعد يتم تقييدهم إلى عقده مع غاياتها الخاصة.
    2. بيرس شفك السفينة الجدار من خارج إلى داخل قريبة من العقدة في اتجاه 03:00 ص لإدخال إبرة خياطة حق الإقامة في التجويف الأوعية الدموية.
    3. أناستوموسي الجدار الخلفي شفك واسطة خياطة قيد تشغيل داخل التجويف الأوعية الدموية من اتجاه 03:00 ص في اتجاه 09:00 ص.
    4. في زاوية باتجاه 09:00 ص، بيرس السفينة الجدار من داخل إلى خارج قريبة من عقده لإدخال الإبرة خارج التجويف الأوعية الدموية.
    5. استخدم هذا الخياطة ل anastomose الجدار الأمامي باستخدام خياطة قيد تشغيل خارج التجويف الأوعية الدموية من اتجاه 09:00 ص إلى 3 اتجاه الساعة. أخيرا، إدراك التعادل الخياطة مع نهاية الخاصة به 3 مرات (الشكل 6).
      ملاحظة: حقن 3-5 مل من المحلول الملحي في التجويف شفك أعيد القوة إلى فقاعات الهواء قبل الأخير 2-3 غرز. يمكن الاطلاع على وصف أكثر تفصيلاً لملامسة شفك في المقالة التي ديلريفيري et al. 19.
  7. إعمار الكهروضوئية
    1. ضع اثنين خيوط البولي بروبلين إقامتهم 7-0 في نهاية الكهروضوئية المستلم بعد الوصف في 7-2. سحب اثنين البقاء خياطة الجروح في الاتجاه المعاكس لتمديد جدار الوعاء. إصلاح اثنين خيوط إقامتهم استخدام ملقط مرقئ الصغرى-البعوض اثنين.
    2. ضخ حوالي 1 مل من المحلول الملحي في التجويف الأوعية الدموية الكهروضوئية في المستلم بالقوة إلى فقاعات الهواء. بسرعة إدراج الكفة الوريد البابي في التجويف الأوعية الدموية الكهروضوئية في المستلم بقوة عند فتحه باستخدام الملقط الصغير. تأمين ملامسة الكفة استخدام خياطة حرير كفافى 6-0. عبر المشبك تشأ.
  8. ضخه إلى الابتزاز الكبد
    1. الإفراج عن المشابك على شفك والكهروضوئية في تسلسل ريبيرفوسي الاختلاس الكبد. تسجيل الوقت لمرحلة أنهيباتيك. تحقق من وجود النزيف لملامسة. زيادة تركيز إيسوفلوراني % 1-2 ووفقا لرد فعل الفئران على تحفيز الألم.
  9. إعادة بناء إيهفك
    1. حقن 1 مل من المحلول الملحي في التجويف الأوعية الدموية إيهفك في المستلم بالقوة إلى فقاعات الهواء. إدراج الكفة في التجويف الأوعية الاسطوانية إيهفك، الذي يدعمه لحمه الكبد كفافى (الشكل 7). وضع خياطة حرير من خلال الفضاء مرة أخرى إيهفك 6-0. بسرعة تأمين ملامسة الكفة استخدام خياطة حرير 6-0.
    2. الإفراج عن السفينة اثنين المشابك في إيهفك إلى إعادة تشغيل التروية. تقليم قبالة لحمه الكبد المحيطة بعناية أعلاه خياطة الحرير كفافى استخدام مقص الصغرى.
  10. إعادة بناء شريان كبدي
    1. اختراق جدار السفينة تشأ في الاختلاس الكبد من خارج إلى الداخل باستخدام اثنين 11-0 بولي بروبلين خياطة الجروح في 03:00 ص واتجاهات 09:00 ص، على التوالي. أوككلودي تدفق الدم تشأ و GDA في المتلقي استخدام اثنين المنحنى الصغير-سيريفينيس.
    2. قطاع فا للمستلم في جذوره فضح التجويف الأوعية الدموية باستخدام مقص الصغرى. توسيع الأوعية الدموية التجويف فا في المستلم بقطع جزء من الجدار السفينة طوليا لاستيعاب قطر تشأ في الاختلاس الكبد.
    3. أناستوموسي تشأ الاختلاس الكبد إلى فا الموسع بطريقة نهاية إلى جانب استخدام الأسلوب تشغيل خياطة الجروح الموصوفة لملامسة شفك (8.6.2-8.6.7).
      ملاحظة: يمكن الرسوم التوضيحية مفصلة في المقالة هوانغ وآخرون14.
  11. إعمار اتفاقية التنوع البيولوجي
    1. نقل الأمعاء مرة أخرى في تجويف البطن لتقليل المسافة بين طرفي القناة الصفراوية. تنفيذ شق عرضية على الجدار الأمامي للقناة الصفراوية في المتلقي.
    2. هدم دعامات الصفراوية في الاختلاس الكبد الجزئي لإدراجه في التجويف القناة الصفراوية في المتلقي عبر شق عرضية. تأمين تركيب دعامات استخدام خياطة حرير كفافى 6-0.
    3. ربط خيوط الحرير كفافى اثنين 6-0 في القناة الصفراوية لبعضها البعض للحد من التوتر لملامسة.
  12. إغلاق البطن
    1. إغلاق البطن في طبقتين باستخدام 3-0 خياطة الحرير في نمط خياطة قيد التشغيل.

9-بعد العملية الجراحية علاجات (التسكين والمضادات الحيوية)

  1. معاملة كافة المستلمين مع 0.1 مغ/كغ البوبرينورفين تحت الجلد. إدارة سيفروكسيم (16 مغ/كغ) تحت الجلد بالإضافة إلى الدواء مسكن. توفر مياه الحنفية والمختبرات القياسية تشاو الحيوان للفئران libitum الإعلانية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

وفي المجموع، أنجزت 31 حالة من الفئران أرتيرياليزيد سينجينيك بلتكس استخدام هذا البروتوكول. كافة المستلمين على قيد الحياة حتى نهاية فترة المراقبة. وزن الجسم من المستلمين بدأت في الانتعاش بعد يوم بعد العملية الجراحية (جراب) 4. كان منحدر وزن الجسم قريب من الفئران لويس العادية بعد 6 قرنة (الشكل 8)، مما يعني استعادة المستلم غير مباشر. الأشيع، لوحظ انتشار الصفراوية طفيف في المتلقين، وبنية مفصص الكبد من المستلمين سليمة. وقد لوحظ لا نخر أو توسيع جيبية واضحة (الشكل 9). وكان مستوى المصل ألانين aminotransferase (ALT) ضمن النطاق الطبيعي في جراب 30 (الشكل 10). أي حالات البول أصفر الناجمة عن اليرقان لوحظت في هذه المستلمين، الذي أشير إليه عن طريق التحقق من قفص الفراش يوميا، مما يشير إلى السالكيه دعامات الصفراوية. وأكد مستوى البيليروبين في 30 جراب المصل العادي كذلك إعادة ناجحة في القناة الصفراوية (الشكل 11). تم فحص سالكيه الشريان الكبدي قبل ترانسيكتينج فا في الجهة الدانية من ملامسة خلال التضحية. نزيف من فا لوحظ في كافة المستلمين، مما يعني ضمناً سالكيه ملامسة. واقترح كل من هذه النتائج أن الطعوم الكبد تعمل بشكل جيد.

وكان متوسط مدة المرحلة أنهيباتيك 23.03 ± 2.3 دقيقة. أخذت ملامسة الكفة الكهروضوئية 4.68 ± دقيقة 0.77، حين ملامسة الكفة إيهفك فقط أخذت ± 2.05 دقيقة 0.71 مقارنة مع ملامسة الكفة من الكهروضوئية، ملامسة الكفة من إيهفك المحفوظة في خطوة لوضع إقامتهم خياطة الجروح وتقصير مما يزيد أنس وقت توموسيس (الجدول 1).

ولوحظ حالتين من حالات النزيف في السيجارة بقايا مل خلال ظهرت 70% من بين الحالات ال 31 من المنحى السفينة ظهرت. في تجربة سابقة، ونزيف في السيجارة بقايا مل لوحظ في 8 من أصل 18 حالات ظهرت السفينة المنحى الحفاظ على لحمه (الشكل 12). وبينت هذه النتيجة انخفاض معدل النزيف في السيجارة بقايا الكبد مل بعد استخدام المنحى السفينة ظهرت 70%.

Figure 1
الشكل 1 . بالأصفاد وتركيب دعامات الصفراوية.
(أ، ج) حجم الأصفاد. (ب) رأس محدبة في الرباط. (د) على جزء من الجسم والتعامل مع جزء من الرباط. (ﻫ) (أ) الكفة إيهفك؛ (ب (PV الكفة. (و) الصفراوية تركيب دعامات. شريط المقياس = 5 ملم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 2
الشكل 2 . إلى إمدادات الدم للتعلم مدى الحياة، ومل أوككلودي.
(أ) الجذع المشترك الكهروضوئية، والشريان الكبدي والصفراء لاصق للتعلم مدى الحياة وأحب حياتي.
(ب) تلون التعلم مدى الحياة والحب حياتي بعد ترانسيكتينج الجذع المشترك.
(ج) وعلى المنوال بوابة RML.
(د) جميع PVs وشرايين الكبد والقناة الصفراوية للتعلم مدى الحياة وحركة التحرير كانت بحف.
شريط مقياس = 5 مم-المختصرات: التعلم مدى الحياة ترك الفص الجانبي، مل الفص المتوسط، أحب بلادي الحياة متوسط الفص الأيسر، RML الحق حق متوسط الفص، RSL متفوقة الفص، RIL الفص حق أقل شأنا، والفص SCL كودات متفوقة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 3
الشكل 3 . إلى الالتئام في متوسط الفص الأيسر.
(أ) يرسخ كتلة الكبد من الحب حياتي فورا أعلاه الملقط.
(ب) وضع ثلاثة خيوط ثقب في الشق. (Image 1)
شريط المقياس = 5 مم-المختصرات: RML الحق متوسط الفص، RSL متفوقة حق الفص، RIL الحق أدنى الفص، الفص caudate متفوقة SCL. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 4
الشكل 4 . إلى الالتئام الفص اليمين الوسط (RML).
(أ) قاعدة RML.
(ب) ضع ملقط الأرقاء البعوض حول قاعدة RML.
(ج) يرسخ لحمه الكبد من RML فورا أعلاه الملقط.
(د) ترك طبقة عادية ورقيقة من الأنسجة بقايا الكبد على شفك.
شريط المقياس = 5 مم-المختصرات: مل متوسط الفص، RSL الحق الفص متفوقة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 5
الشكل 5 . لتثبيت الرباط.
(أ) سحب الكهروضوئية من خلال التجويف الرباط.
(ب) إصلاح مقبض الكفة والكهروضوئية معا بالمشبك سفينة.
(ج) إيفرت الكهروضوئية جدار الأوعية الدموية لتغطية السطح الخارجي للرباط.
(د) تأمين جدار الأوعية الدموية والرباط في الموقف.
شريط المقياس = 5 ملم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 6
الرقم 6 . إلى إعادة بناء في شفك-
(أ وب) سحب اثنين البقاء خيوط لليمين واليسار، على التوالي.
(ج) anastomose الجدار الخلفي من شفك واسطة خياطة قيد تشغيل في التجويف الأوعية الدموية.
(د) anastomose الجدار أمامي من شفك خارج التجويف الأوعية الدموية.
شريط المقياس = 5 ملم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 7
الشكل 7 . لإعادة بناء إيهفك-
(أ) أسطواني تجويف الأوعية الدموية إيهفك في المتلقي.
(ب) تأمين ملامسة الكفة إيهفك.
(ج) البدء ضخه.
(د) تقليم قبالة لحمه الكبد المحيطة أعلاه خياطة الحرير كفافى.
شريط المقياس = 5 مم-المختصرات: الوريد البابي PV، إيهفك إينفراهيباتيك أدنى الوريد الأجوف، RIL الحق الفص السفلي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 8
الشكل 8 . استعادة وزن الجسم بعد العملية الجراحية.
وبدأ وزن الجسم من المتلقين للتعافي بعد الجراحة يوم 4. وكان منحدر وزن الجسم قريب من الفئران لويس العادي بعد الجراحة يوم 6، مما يعني استعادة المستلم غير مباشر.

Figure 9
الرقم 9 . علم الأنسجة من الكبد الاختلاس بعد 30 يوما-
في علم الأنسجة، لوحظ انتشار الصفراوية طفيف في المتلقين، وبنية مفصص الكبد من المستلمين سليمة. وقد لوحظ لا نخر أو توسيع جيبية واضحة (400 X). شريط المقياس = 20 أم الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 10
الرقم 10 . مستوى المصل من البديل
وكان مستوى المصل البديل داخل النطاق العادي في جراب 30. (* *، ف < 0.05).

Figure 11
الرقم 11 . مستوى مصل البيليروبين.
مستوى مصل البيليروبين في 30 جراب كان مماثلاً للفئران لويس العادية (P > 0.05).

Figure 12
الرقم 12 . نزيف معدلات أساليب مختلفة ظهرت.
لوحظ انخفاض معدل النزيف في السيجارة بقايا الكبد مل في أسلوب استخدام ظهرت 70% المنحى السفينة.

إجراءات إزالة الكبد مفاغره شفك ملامسة PV مفاغره إيهفك الوقت أنهيباتيك
الوقت (بالدقائق) 2.62±0.46 15.73±2.05 4.68±0.77 2.05±0.71 23.03±2.30
وأعرب عن البيانات في Mean±SD

الجدول 1. الوقت لكل العمليات الجراحية خلال المرحلة أنهيباتيك

Table 2
الجدول 2. الفرق بين هذين البروتوكولين تصور من الفئران بلتكس. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الجدول.


المواد التكميلية

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

بلتكس الجرذ هو إجراء microsurgical متطورة مع برنامج تدريب الذي ارتفاع في التكلفة وطويل في مدة20. تعقد الفئران بروتوكول بلتكس منعت الباحثين من استخدام هذا النموذج الحيواني. بالمقارنة مع الحجم الكامل الفئران LTx، يعرض الفئران بلتكس ميكروسورجيون ليس فقط مع التحدي المتمثل في إجراء الزرع ولكن أيضا مع التحدي المتمثل في استئصال الكبد في حيوانات صغيرة. ولذلك، بروتوكول microsurgical تصور وصف الإجراء بأكمله بالتفصيل ضروري لإنشاء هذا النموذج المعقد. عرض مادة سبق تصور عنها ناغاي et al. بروتوكول 50% أورثوتوبيك جزئية LTx مع التعمير الشرياني الكبد في الفئران5 (الجدول 2). هذا البروتوكول يستخدم السابقين فيفو ظهرت، الذي يشبه سريرياً بالإجراءات تقسيم LTx.

بالمقارنة مع تقسيم ريسيكتس LTx، تعيش المانحة LTx الاختلاس الكبد الجزئي من الجهة المانحة العيش بدلاً من تقسيم الكبد في عملية العودة-الجدول. قد يؤدي بتر في فيفو الكبد إلى المعالجات الجراحية أكثر وأطول من ارتفاع ضغط الدم المدخل، وحتى أكثر الإصابات الاسكيمية الحارة للاختلاس الكبد الجزئي. ومن ثم، عدة الفئران بلتكس تم إنشاء نماذج تستخدم في فيفو ظهرت في الدراسات ذات الصلة6،،من821،22. وتشمل العديد من البروتوكولات استئصال الفصوص الكبد بعد ربط بسيط في بيديكلي أو في الأساس2،3،6،8،،من2123. ومع ذلك، الفصوص الكبد مختلفة الأشكال المختلفة. وقد مل الفئران واسعة القاعدة أن يحيط شبه الوريد الأجوف10،24. وضع ربط بسيط في قاعدة مل بسهولة يقلص فينا أقل شأنا. لتجنب انقباض الوريد الأجوف، وضعت مادراهيموف et al. ظهرت السفينة المنحى الحفاظ على لحمه لإزالة مل في الخطوات 2 بعد أن قدمت أربعة خيوط خارقة في حمة، وترك السيجارة بقايا مل شقة 10-بيد PVs الفصوص الكبد متصلة بخيوط خارقة كانت مخبأة في حمة. نزيف في عقب السيجارة بقايا الناجمة عن المفقودين أو إصابة فروع الكهروضوئية الصغيرة لا يمكن تجنبها تماما 11. في البروتوكول، ولدينا PVs المقابلة والشرايين الكبدية كانت كذلك تشريح أولاً. ثم، كان فردياً تغطي إمدادات الدم الفصوص الكبد ريسيكتيد من ليجاتيونس قبل بتر. ولذلك، تم خفض معدل النزيف في عقب السيجارة بقايا استخدام لدينا بروتوكول (الشكل 10). أيضا استخدمت تقنية وضع أربعة خيوط ثقب في عقب السيجارة مل لدينا بروتوكول سد الأوردة الكبدية ولكن لا الكهروضوئية والشرايين الكبدية. مع هذه ليجاتيونس باستخدام خيوط خارقة متعددة واستئصال تدريجي، أبقى على شكل مسطح السيجارة بقايا الكبد، الذي تجنب انقباض الوريد الأجوف.

لإعادة بناء إيهفك، وقدم تعديلاً طفيفا بملامسة الكفة تصفها كامارا et al. 25-بحف كان الأجوف فينا أقل شأنا من المستلم في حمة الفص أدنى حق، بدلاً من التركيز على السفينة إيهفك، الذي غادر لحمه كبد كفافى حولها الوريد الأجوف. لحمه الكبد حولها الوريد الأجوف ساعدت على الحفاظ على شكل أسطواني من نهاية الأوعية الدموية إيهفك للمتلقي وليس شكل مسطح. ومن ثم، بطبيعة الحال افتتح التجويف إيهفك دون المساعدة من خيوط إقامتهم والملقط. ساعد على إنقاذ خطوة لوضع إقامتهم خيوط هذا التعديل وتسهيل إدخال الرباط إيهفك في التجويف الأوعية الدموية للمستلم. وعلاوة على ذلك، هذا التعديل لفترات طويلة طول الأوعية الدموية إيهفك، مما يقلل من التوتر بين طرفي أثناء ملامسة الكفة.

مع استفادة ملامسة سريعة والأوعية الدموية، يستخدم غالباً تقنية الكفة اثنين في الفئران أورثوتوبيك LTx أناستوموسينج PV وإيهفك. مياتا et al. ، بل اقترحت بروتوكول التي تشمل تقنية ثلاثة-الكفة ل anastomose الكهروضوئية، وإيهفك وشفك. ومع ذلك، قد الأسلوب الكفة أيضا عيوبها. أولاً، الكفة مع حجم ثابت لا تناسب تماما حجم السفينة المقابلة. وباﻹضافة إلى ذلك، تقنية صفعة تزعج تدفق الدم، وأسفر عن وقوع أعلى تجلط الدم ورد فعل جسم غريب على الكفة26. شفك، سفينة رئيسية في الفئران، يظهر تدفق الدم عالية. أي انقباض أو تجلط الدم في هذه السفينة قد يسبب حدوث مضاعفات خطيرة بعد العملية الجراحية. لذلك، لدينا بروتوكول بلتكس، نختار لاستخدام تقنية خياطة اليد لإعمار شفك، الذي يسمح لتعديل ملامسة أقرب وقت ممكن للإعداد البدني. ومع ذلك، يتطلب ملامسة شفك عالية الجودة الانتهاء من تقنية خياطة اليد عالية المهارة ميكروسورجيكال. للمبتدئين، ينصح التثليث تقنية في كاريل أناستوموسينج سفن 27. باستخدام هذا الأسلوب، يتم وضع إقامتهم ثلاثة خيوط على فترات منتظمة حول محيط شفك. هؤلاء الثلاثة البقاء خياطة الجروح على طول ثلاثة اتجاهات، التي يمكن أن تمنع شفك من تضيق في أثناء ملامسة الشكل الثلاثي الأبعاد شفك صيانة تراجعه.

أرتيرياليزيشن إعادة للاختلاس الكبد موضوع مثير للجدل. وفي رأينا، أرتيرياليزاتيون إعادة ليست خطوة رئيسية لضمان بقاء ارتفاع معدل المستلم، ولكن قد يكون خطوة رئيسية لضمان طعم كبد عالية الجودة. في البروتوكول التقليدي من الفئران LTx التي تنطوي على الأسلوب الثاني-الرباط، أعيد لا الشريان الكبدي، كما لا يؤثر نقص التروية الشريان الكبدي نتيجة الفئران LTx12. وعلاوة على ذلك، أجريت دراسة سابقة على الماوس LTx للتحقيق أثر إعادة أرتيرياليزيشن على بقاء الفساد على المدى الطويل، والتعديلات غذائها والدماغية تلف في الكبد و مسارات التنشيط المناعية المبكرة13. واختتمت الباحثون أن أرتيرياليزيشن إعادة الطعوم الكبد لم يكن لها تأثير كبير على معدل البقاء على قيد الحياة أو درجة التنشيط المناعية. ومع ذلك، تقترح دراسة حديثة عنها هوانغ et al. المهم أن أرتيرياليزيشن إعادة للاسترداد لحمه الكبد يتعرضون لظهرت، لا سيما مع عرقلة تدفق28. أرتيرياليزاتيون عدم من الاختلاس الكبد الجزئي تفاقم تلف في الكبد، وتأخر الانتعاش من نخر المحورية. ولذلك، يوصي بإعادة أرتيرياليزاتيون للابتزاز الكبد الجزئي. كما هو موضح هنا، استخدمت أسلوب ملامسة نهاية إلى جانب إعادة بناء الشريان الكبدي، الذي وصف سابقا بواحد من المؤلفين لدينا 14. وميزة هذا الأسلوب هو الخيار أناستوموسي اثنين من الشرايين سميكة وتشا و GDA، بدلاً من فا رقيقة، مما يقلل من صعوبة إعادة بناء الشريان الكبدي، ويحافظ على معدل مرتفع سالكيه ملامسة.

وتقترح الفئران الكلاسيكية LTx البروتوكول المقترح من كامارا et al. السيطرة في المرحلة أنهيباتيك أن أقل من 26 دقيقة، كالحيوان لا نجا عند مرحلة أنهيباتيك استغرق وقتاً أطول من 26 دقيقة25. أن تجربتنا يتسق مع هذا الاقتراح، على الرغم من أننا لاحظنا سابقا عدة حالات البقاء على قيد الحياة مع أنهيباتيك المرحلة الزمنية أطول من 26 دقيقة. وفي رأينا، مرحلة مستقرة أنهيباتيك الأولوية على مرحلة أنهيباتيك أقصر في بحوث العمليات الجراحية. في مجموعتنا، يتم التحكم في مرحلة أنهيباتيك إلى التحديد خلال فترة زمنية محددة. لم يتوقف في مرحلة أنهيباتيك حتى يتم الوصول إلى الوقت أنهيباتيك مسبقاً، على الرغم من ملامسة شفك والكهروضوئية يمكن أن تنجز قبل ذلك بكثير. ومع ذلك، في مشروع تدريبي، يشجع مرحلة أنهيباتيك أقصر.

على الرغم من أن قد أدخلت تحسينات كثيرة لتقصير مرحلة التدريب والقضاء على عمليات لا داعي لها، الفئران LTx وبلتكس هي عمليات معقدة لا تزال microsurgical20. لذلك، بالإضافة إلى بروتوكول تصور، بروتوكول تدريب تدريجي على أساس الدورة الخطة-دو-الاختيار-عمل مهم لتحقيق معدل بقاء عالية وعملية عالية الجودة. تجربتنا الأولى في استخدام هذا البروتوكول التدريب أظهر أن 40-73 العمليات المطلوبة لإتقان أورثوتوبيك الفئران LTx. إعادة أرتيرياليزيد إضافية العمليات 9-13 مطالبون بإتقان الفئران بلتكس. بروتوكول التدريب المقترحة من Czigány et al. يدعى أن 50-60 لتكسس تكفي للسيطرة على أورثوتوبيك LTx و بلتكس29.

لدينا بروتوكول التدريب خطة-دو-الاختيار-العمل، يجب التأكيد مراقبة الجودة في كل خطوة من خطوات التدريب وفي كل التلاعب الفردية، لا سيما في مثل هذا نموذج معقد. معدل البقاء على قيد الحياة مرتفعة لا يعني إجراء عالية الجودة. في النتائج التمثيلية، وأدرجت عدة معايير لتقييم نوعية الجراحة الدقيقة، بما في ذلك علم الأنسجة، إنزيم الكبد، واستعادة وزن الجسم، واليرقان (مصل البيليروبين والأصفر البول)، ومدة المرحلة أنهيباتيك وسالكيه من الشريان الكبدي. جودة عالية يتحقق فقط عندما يتم استيفاء جميع المعايير.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

جميع المؤلفين قد لا المصالح المتضاربة الكشف عن.

Acknowledgments

هذا البحث ودعم مؤسسة العلوم الطبيعية الصينية الوطنية (المنحة رقم 81501382) وتشجيانغ المقاطعة العلوم الطبيعية مؤسسة من الصين (رقم المنحة LQ13H100003 و LQ16H100002).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Surgical microscope Möller-Wedel, Germany 654359
Light source OSRAM (China) Lighting Co., Ltd 64627
Isoflurane Vaporizer MIDMARK Corporation VIP3000
Isoflurane Baxter Healthcare Corporation 40032609 For Inhalation anesthesia
Normal Saline Zhejiang Tianrui Pharmaceutical Co., Ltd. 716092103
Povidone Iodine Solution HANGZHOU MINSHENG PHARMACEUTICAL H33021567 For disinfection
Hemostatic forceps Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd J31020
Surgical scissors Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd JC2116
Needle-holder Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd J32030
Dressing Forceps Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd J42020
Mosquito hemostatic forceps Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd W40340 For liver resection; For retracting the stay sutures. 
Micro-scissors Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd WA1040
Micro needle-holder Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd WA2060
Curved micro typing forceps Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd WA3061
straight micro typing forceps Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd WA3060
Micro hemostatic forceps Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd WA3020
Bulldog clamp Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd XEC350
Vessel clamps Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd W40160
Micro Serrefine-curved  Fine Science Tools, Inc 18055-05
Dacryosyrinx Shi Zhuo medical instruments Co., Ltd. 5# curve Use as the curved needle for forcing out the air bubbles in the vascular lumen
Sterilized gauze swabs Fuqing Health & Integral Medical 20230R
5mL syringe Zhejiang Yusheng Medical Instrument Co.,Ltd 811932416
18G needles Shanghai Kindly Enterprise Development Group Co., Ltd 01-014 For fixing the upper abdomen wall
Intima II 22G intraveous catheter Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. 383207y For making biliary stent; For infusing perfusate
7-0 polypropylene sutures Ningbo Medical Needle Co., Ltd 151026 For SHVC anastomsis
6-0 silk suture Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd 2650182 For ligation
Culture dish (100mm) Corning Incorporated 430165 used in back table for storage ice. The back table dish was placed on it. 
Culture dish (30 mm) Corning Incorporated 3296 As a vessel for organ preservation
Angiocath 12G intravenous catheter Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. 382277 For making a IHVC cuff
Angiocath 14G intravenous catheter Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. 382269 For making a PV cuff
Buprenorphine (hydrochloride) Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Pharmaceutical Co., Ltd H12020275 For analgesic
Cefuroxime sodium for injection Esseti FarmaceuticiS.r.l H20160013 As an antibiotics

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Yan, J. Q., Becker, T., Peng, C. H., Li, H. W., Klempnauer, J. Split liver transplantation: a reliable approach to expand donor pool. Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 4, 339-344 (2005).
  2. Xia, R., Emond, J. C. Orthotopic partial liver transplantation in the rat: a model of 70% hepatectomy and reduced size liver transplantation. Transplantation. 56, 1041-1043 (1993).
  3. Omura, T., Ascher, N. L., Emond, J. C. Fifty-percent partial liver transplantation in the rat. Transplantation. 62, 292-293 (1996).
  4. Foss, A., et al. Function of reduced-size liver transplant in the rat. Res Exp Med (Berl). 197, 91-99 (1997).
  5. Nagai, K., Yagi, S., Uemoto, S., Tolba, R. H. Surgical procedures for a rat model of partial orthotopic liver transplantation with hepatic arterial reconstruction. J Vis Exp. , e4376 (2013).
  6. Sun, J., Qin, G., Wu, L., Wang, C., Sheil, A. G. Antigenic load and peripheral chimeric levels in entire and partial liver allograft recipients. Microsurgery. 21, 183-187 (2001).
  7. Ninomiya, M., et al. Deceleration of regenerative response improves the outcome of rat with massive hepatectomy. Am J Transplant. 10, 1580-1587 (2010).
  8. Yamanaka, K., et al. Effect of olprinone on liver microstructure in rat partial liver transplantation. J Surg Res. 183, 391-396 (2013).
  9. Wang, W., et al. Mesenchymal stem cells promote liver regeneration and prolong survival in small-for-size liver grafts: involvement of C-Jun N-terminal kinase, cyclin D1, and NF-kappaB. PLoS One. 9, e112532 (2014).
  10. Madrahimov, N., Dirsch, O., Broelsch, C., Dahmen, U. Marginal hepatectomy in the rat: from anatomy to surgery. Ann. Surg. 244, 89-98 (2006).
  11. Martins, P. N., Theruvath, T. P., Neuhaus, P. Rodent models of partial hepatectomies. Liver Int. 28, 3-11 (2008).
  12. Kamada, N., Sumimoto, R., Kaneda, K. The value of hepatic artery reconstruction as a technique in rat liver transplantation. Surgery. 111, 195-200 (1992).
  13. Steger, U., Sawitzki, B., Gassel, A. M., Gassel, H. J., Wood, K. J. Impact of hepatic rearterialization on reperfusion injury and outcome after mouse liver transplantation. Transplantation. 76, 327-332 (2003).
  14. Huang, H., et al. A novel end-to-side anastomosis technique for hepatic rearterialization in rat orthotopic liver transplantation to accommodate size mismatches between vessels. Eur Surg Res. 47, 53-62 (2011).
  15. Bernal, J., et al. Guidelines for rodent survival surgery. J.Invest Surg. 22, 445-451 (2009).
  16. Johnson, A. J., Stulting, R. D. Ophthalmic Microsurgical Suturing Techniques. Macsai, M. S. , Springer. Berlin Heidelberg. 21-28 (2007).
  17. Delriviere, L., et al. Detailed modified technique for safer harvesting and preparation of liver graft in the rat. Microsurgery. 17, 690-696 (1996).
  18. Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. Orthotopic liver transplantation in rats. J Vis Exp. , (2012).
  19. Delriviere, L., et al. Technical details for safer venous and biliary anastomoses for liver transplantation in the rat. Microsurgery. 18, 12-18 (1998).
  20. Jin, H., et al. Preliminary experience of a PDCA-cycle and quality management based training curriculum for rat liver transplantation. J Surg Res. 176, 409-422 (2012).
  21. Selzner, N., Selzner, M., Tian, Y., Kadry, Z., Clavien, P. A. Cold ischemia decreases liver regeneration after partial liver transplantation in the rat: A TNF-alpha/IL-6-dependent mechanism. Hepatology. 36, 812-818 (2002).
  22. Tanaka, H., Hashizume, K., Enosawa, S., Suzuki, S. Successful transplantation of a 20% partial liver graft in rats: a technical innovation. J Surg Res. 110, 409-412 (2003).
  23. Bockhorn, M., et al. Erythropoietin treatment improves liver regeneration and survival in rat models of extended liver resection and living donor liver transplantation. Transplantation. 86, 1578-1585 (2008).
  24. Martins, P. N., Neuhaus, P. Surgical anatomy of the liver, hepatic vasculature and bile ducts in the rat. Liver Int. 27, 384-392 (2007).
  25. Kamada, N., Calne, R. Y. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation. 28, 47-50 (1979).
  26. Kashfi, A., et al. A review of various techniques of orthotopic liver transplantation in the rat. Transplant.Proc. 37, 185-188 (2005).
  27. Wain, R. A. J., Hammond, D., McPhillips, M., Whitty, J. P. M., Ahmed, W. Surgical Tools and Medical Devices. Ahmed, W., Jackson, M. J. , Springer International Publishing. 545-562 (2016).
  28. Huang, H., et al. Hepatic arterial perfusion is essential for the spontaneous recovery from focal hepatic venous outflow obstruction in rats. Am J Transplant. 11, 2342-2352 (2011).
  29. Czigany, Z., et al. Improving Research Practice in Rat Orthotopic and Partial Orthotopic Liver Transplantation: A Review, Recommendation, and Publication Guide. Eur Surg Res. 55, 119-138 (2015).

Tags

الطب، 134 قضية، زرع الكبد، ظهرت، أرتيرياليزيشن إعادة، الفئران، السفينة الكبدية، الاختلاس الكبد الجزئي، السفينة التوجه، الكفة، وملامسة
أرتيرياليزيد إعادة "زرع الكبد الجزئي الفئران" مع <em>في فيفو</em> المنحى السفينة 70% ظهرت
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chen, X., Yu, R., Xu, Z.,… More

Chen, X., Yu, R., Xu, Z., Zhang , Y., Liu, C., Chen, B., Jin, H. Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy. J. Vis. Exp. (134), e56392, doi:10.3791/56392 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter