Summary

एक चूहा एक कार्यात्मक पुनर्जीवित करने के लिए अग्रणी मॉडल में व्याकुलता आस्टियोजेनेसिस के लिए एक कुशल और प्रतिलिपि प्रोटोकॉल फीमर

Published: October 23, 2017
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Summary

इस अध्ययन में व्याकुलता आस्टियोजेनेसिस (DO) के लिए एक नए विकसित बाहरी निर्धारणकर्ता का उपयोग करते हुए एक प्रतिलिपि और विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन करता है जो बाह्य निर्धारणकर्ता को हटाने के बाद पशु द्वारा शारीरिक भार को प्रभावित करने वाले ऊरु चूहा मॉडल में अनुमति देता है ।

Abstract

इस प्रोटोकॉल एक चूहे ऊरु मॉडल में व्याकुलता आस्टियोजेनेसिस के लिए एक नव विकसित बाह्य निर्धारणकर्ता के उपयोग का वर्णन करता है । व्याकुलता आस्टियोजेनेसिस (DO) एक शल्य चिकित्सा एक शल्यचिकित्सा के बाद हड्डी पुनर्जनन के लिए अग्रणी तकनीक है । osteotomized उग्रवादी एक दूसरे से क्रमिक व्याकुल होकर दूर तक वांछित बढ़ाव तक पहुँचने में चले जाते हैं. इस प्रक्रिया को व्यापक रूप से कम और ऊपरी अंग लंबा के लिए मनुष्यों में प्रयोग किया जाता है, एक हड्डी संघ के बाद उपचार, या अस्थि ट्यूमर उत्पादीकरण के लिए सर्जरी के बाद एक हड्डी दोष के उत्थान, साथ ही मैक्सिलोफैशियल पुनर्निर्माण में. केवल कुछ अध्ययनों से स्पष्ट रूप से एक कार्यात्मक पुनर्जीवित अस्थि प्राप्त करने में अपने प्रोटोकॉल की दक्षता प्रदर्शित करता है, यानी, हड्डी है कि शारीरिक वजन का समर्थन करेंगे बाह्य निर्धारणकर्ता को हटाने के बाद फ्रैक्चर के बिना असर । इसके अलावा, के लिए प्रोटोकॉल भिंन है और reproducibility जानकारी की कमी से सीमित है, अध्ययन मुश्किल के बीच तुलना कर रही है । इस अध्ययन का उद्देश्य एक प्रतिलिपि को एक विस्तृत शल्य चिकित्सा तकनीक है कि शारीरिक वजन-बाहरी को हटाने के बाद पशु द्वारा असर परमिट के साथ चूहा अंग के लिए एक उपयुक्त बाहरी निर्धारण डिजाइन शामिल प्रोटोकॉल विकसित किया गया लगानेवाला.

Introduction

व्याकुलता आस्टियोजेनेसिस (DO) एक शल्य चिकित्सा तकनीक है व्यापक रूप से इस्तेमाल किया नैदानिक1,2,3,4 मनुष्यों में कम1के लिए,2 और ऊपरी3 अंग लंबा, एक हड्डी संघ के बाद उपचार, या अस्थि ट्यूमर उत्पादीकरण के लिए सर्जरी के बाद एक हड्डी दोष के पुनर्जनन के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मैक्सिलोफैशियल पुनर्निर्माण में4. हड्डी और शल्यचिकित्सा में एक बाहरी निर्धारण के स्थान के बाद अस्थि पुनर्जनन की ओर जाता है । osteotomized अतिवादी एक दूसरे से क्रमिक व्याकुलता2 से दूर स्थानांतरित करने के लिए वांछित बढ़ाव तक पहुंच रहे हैं । एक समेकन अवधि इस प्रकार है, जिसके दौरान कोई और अधिक बढ़ाव है ।

क्या प्रक्रिया तीन अलग चरणों में विभाजित है: विलंबता, व्याकुलता, और समेकन । सामांयतया, 7-दिन की लेटेंसी अवधि केवल शल्यचिकित्सा4के बाद प्रारंभ होती है । यह हड्डी की मरंमत चिकित्सा प्रक्रिया4के प्रारंभिक चरण शुरू करने के लिए अनुमति देता है । विलंबता अवधि एक व्याकुलता अवधि के बाद है, जहां कर्षण बलों को पुनर्जीवित घट्टा और आसपास के कोमल ऊतकों1,2,4के लिए लागू कर रहे हैं । जब वांछित बढ़ाव तक पहुंच जाता है, व्याकुलता रोकता है और समेकन की अवधि शुरू होता है । इस अवधि के दौरान बाह्य निर्धारणकर्ता जब तक पुनर्जीवित हड्डी इसके हटाने का समर्थन करने के लिए पर्याप्त कार्यात्मक है बनाए रखा है ।

विभिंन मापदंडों की लंबाई और लंबी की दर के रूप में हड्डी की मरंमत को प्रभावित करते हैं, बाह्य निर्धारण के प्रकार, व्याकुलता की आवृत्ति, समेकन की अवधि की लंबाई, या यांत्रिक तनाव के प्रकार विचलित घट्टा के लिए लागू होता है । एक उदाहरण के रूप में, दर और लंबी की आवृत्ति या तो समय से पहले समेकन करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं5 या घट्टा6,7के भीतर गल ऊतक या अल्सर की तरह गैर वसूली क्षति बनाने के द्वारा इस प्रक्रिया के विघटन ।

कई प्रोटोकॉल अलग पशु मॉडल के लिए लागू किया गया है8,9,10 हड्डी की मरंमत प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए और हड्डी समेकन को अधिकतम करने के लिए । चूहों में, सबसे अध्ययन11,12,13,14,15 कैसे घट्टा समेकन को तेजी से कर प्रोटोकॉल को छोटा करने पर ध्यान केंद्रित किया । इन प्रयोगात्मक अध्ययनों से कुछ पहले से ही व्यावसायिक रूप से मानव नैदानिक अनुप्रयोगों के लिए5,13,15,16के लिए उपलब्ध बाहरी निर्धारणों का इस्तेमाल किया । हालांकि, बाहरी निर्धारण के इन प्रकार के लिए उपयुक्त नहीं है चूहे फीमर, जो मानव फीमर से विभिंन संरचनात्मक विशेषताओं का प्रदर्शन पर है । इसके अलावा, केवल कुछ अध्ययनों से स्पष्ट रूप से एक कार्यात्मक पुनर्जीवित अस्थि7,16प्राप्त करने में अपने प्रोटोकॉल की क्षमता प्रदर्शित करता है । इसलिए विभिंन अध्ययनों से परिणामों की तुलना करना कठिन है, उनके भिंन प्रोटोकॉल और बाह्य निर्धारण के संबंध में जानकारी की कमी के कारण12,13,14,17

इस प्रकार, इस अध्ययन का उद्देश्य एक चूहा मॉडल, एक कार्यात्मक पुनर्जीवित हड्डी की ओर जाता है कि फीमर पर करने के लिए एक कुशल और प्रतिलिपि प्रोटोकॉल में, वर्णन करने के लिए किया गया था । इस अंत करने के लिए, हम विशेष रूप से चूहे फीमर, जो हम इस प्रोटोकॉल में विस्तार से वर्णन किया है के लिए एक घर का बना और आसान करने के लिए उपयोग बाहरी निर्धारण के लिए बनाया है । इस उपकरण के लिए तकनीकी विनिर्देशों का मसौदा तैयार करने में, हम यांत्रिक तनाव का एक अच्छा वितरण के लिए सभी बुनियादी बाधाओं को खाते में ले लिया और अवशिष्ट तनाव के उत्पादन से परहेज । तकनीकी विनिर्देश इस उपकरण के लिए एक उपयुक्त ज्यामिति शामिल हड्डियों और आसपास के ऊतकों पर शुद्ध कर्षण बल, पशु की चाल के लिए एक उचित वजन की अनुमति, अस्थि बढ़ाव की लंबाई के नियंत्रण, और हड्डी क्षेत्रों का एक अच्छा संरेखण पिन और हड्डी के चौराहे पर कतरनी तनाव के उत्पादन के बिना । इसके अलावा, इस उपकरण के लिए व्याकुलता के दौरान पशु की बेहोशी, संगत के दौरान बिना प्रयोग करने योग्य हो गया था, और निष्फल क्षति के बिना । समेकन के 7 सप्ताह के बाद, चूहे फीमर पर करने के लिए इस प्रोटोकॉल के लिए एक कार्यात्मक पुनर्जीवित हड्डी के नेतृत्व में, ‘ जानवरों शारीरिक वजन-पुनर्जीवित घट्टा के फ्रैक्चर के बिना असर बाहरी निर्धारणकर्ता को हटाने के बाद द्वारा प्रदर्शन किया । जानवरों की शारीरिक चाल वास्तुकला पुनर्जीवित घट्टा और एक्स-रे विश्लेषण के माइक्रो-सीटी विश्लेषण से प्राप्त मापदंडों के अनुरूप था ।

Protocol

सभी प्रक्रियाओं का वर्णन ऐक्स-मार्सैय संस्थागत पशु परिचर्या और उपयोग समिति और फ्रांसीसी अनुसंधान मंत्रालय द्वारा अनुमोदित किया गया था और मार्सैय चिकित्सा संकाय के परम्परागत पशु घर में प्रदर्शन क?…

Representative Results

एक्स-रे को समेकन के अंत तक शल्य प्रक्रिया के अंत से लिया छवियों फीमर में आधा लड़ी पिरोया पिन की कोई ढीला दिखाया, स्थिर anchorage का संकेत है । पिन समानांतर और अच्छी तरह से संरक्षित थे । osteotomized उग्रवा?…

Discussion

इस अध्ययन के एक प्रतिलिपि प्रोटोकॉल एक विस्तृत शल्य चिकित्सा तकनीक है कि शारीरिक वजन-जानवर द्वारा बाहरी निर्धारणकर्ता को हटाने के बाद असर परमिट के साथ, चूहा अंग लंबी के लिए एक उपयुक्त बाहरी निर्धारण ड…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

इस काम का समर्थन और CNRS Mecabio चैलेंज द्वारा वित्त पोषित किया गया ।

लेखक प्रक्रिया भर में पशुओं की देखभाल करने के लिए पशु देखभाल तकनीशियन धंयवाद । लेखक भी IVTV केंद्रीय ल्यों स्वीकार करते हैं, थियरी हॉक के माध्यम से । भाषा संशोधन के लिए मार्जोरी Sweetko के लिए धन्यवाद.

हम इस प्रायोगिक अध्ययन के लिए उनके योगदान के लिए Marylène Lallemand, Cécile Génovésio, और पैट्रिक लौरेंत के लिए महान हैं ।

Materials

Kétamine Renaudin 578 540-2 Supply by animal house
Médétomidine Virbac 6799091 Supply by animal house
Sevoflurane Centravet 567 477-2 Supply by animal house
Buprenorphine Indivor France 3400932731060 Supply by animal house
Enrofloxacine ChannelPharmaceutical Facturing FR/V/4955220 Supply by animal house
Piezotome Satelec Acteon F57510
Heating pet pad Therasage AL8365936 Supply by the animal house
Dental X-ray S.A.R.L Innovation médicales et dentaires WYZ – BLUEX
Winiwix Software Softys Dental PFT
Micro-CT system nanoScan SPECT/CT GEIT-31105EN (05/14) Subcontract by IVTV central Lyon
Micro-CT analysis Software phoenix datos X2 reconstruction none Free software
Electric razor Brawn GT415 Supply by animal house
Senn’s retractors Word Precision Instruments 501718 Blunt version
Betadine Solution Mundipharma Medical Company D08AG02 Supply by animal house
Resorbable suture thread (5.0) Ethicon JV1023 Supply by animal house
Rugine Word Precision Instruments 503406
Mayo-Hegar needle holder Word Precision Instruments V503382
Metal drill Beuterlock V020944018003
Micro Olsen-Hegar Needle-holder Word Precision Instruments 501989
Mayo scissor Word Precision Instruments 501752
Scalpel Word Precision Instruments 500236
Sprague-Dawley Janvier none 12 weaks and male

References

  1. Jauregui, J. J., Ventimiglia, A. V., Grieco, P. W., Frumberg, D. B., Herznberg, J. E. Regenerate Bone stimulation following limb lengthening: a meta-analysis. BMC Musculoskelet Disord. 17 (1), 407 (2016).
  2. Morcos, M. W., Al-Jallad, H., Hamdy, R. Comprehensive review of Adipose Stem Cells and Their Implication in Distraction Osteogenesis and Bone Regeneration. Biomed Res Int. 2015 (842975), 1-20 (2015).
  3. Cansü, E., Ünal, M. B., Parmaksizoglu, F., Gürcan, S. Distraction lengthening of the proximal phalanx in distal thumb amputations. Acta Orthop Traumatol Turc. 49 (3), 227-232 (2014).
  4. Singh, M., Vashistha, A., Chaudhary, M., Kaur, G. Biological Basis of Distraction Osteogenesis – A Review. J Oral Maxillofac Surg Med Pathol. 28 (1), 1-7 (2016).
  5. Sailhan, F., Gleyzolle, B., Parot, R., Guerini, H., Viguier, E. Rh-BMP-2 in Distraction Osteogenesis: Dose Effect and Premature Consolidation. Injury. 41 (7), 680-686 (2010).
  6. Schiller, J. R., Moore, D. C., Ehrlich, M. G. Increased Lengthening Rate Decreases Expression of Fibroblast Growth Factor 2, Platelet-Derived Growth Factor, Vascular Endothelial Growth Factor, and CD31 in a Rat Model of Distraction Osteogenesis. J Pediatr Orthop. 27 (8), 961-968 (2007).
  7. Aronson, J., Shen, X. C., Skinner, R. A., Hogue, W. R., Badger, T. M., Lumpkin, C. K. Rat Model of Distraction Osteogenesis. J Orthop Res. 15 (2), 221-226 (1997).
  8. Aida, T., Yoshioka, I., Tominaga, K., Fukuda, J. Effects of latency period in a rabbit mandibular distraction osteogenesis. Int J Oral Maxillofac Surg. 32, 54-62 (2003).
  9. Lammens, J., Liu, Z., Aerssend, J., Dequeker, J., Fabry, G. distraction Bone Healing Versus Osteotomy Healing: A Comparative Biochemical Analysis. J Bone Miner Res. 13 (2), 279-286 (1998).
  10. Isefuku, S., Joyner, C. J., Simpson, A. H. R. W. A Murine Model of Distraction Osteogenesis. Bone. 27 (5), 661-665 (2000).
  11. Eberson, C. P., Hogan, K. A., Moore, D. C., Ehrlich, M. G. Effect of Low-Intensity Ultrasound Stimulation on Consolidation of the Regenerate Zone in a Rat Model of Distraction Osteogenesis. J Pediatr Orthop. 23 (1), 46-51 (2003).
  12. Özdel, A., Sarisözen, B., Yalçinkaya, U., Demirag, B. The Effect of HIF Stabilizer on Distraction Osteogenesis. Acta Orthop Traumatol Turc. 49 (1), 80-84 (2015).
  13. Takamine, Y., et al. Distraction Osteogenesis Enhanced by Osteoblastlike Cells and Collagen Gel. Clin Orthop Relat Res. 399, 240-246 (2002).
  14. Wang, X., Zhu, S., Jiang, X., Li, Y., Song, D., Hu, J. Systemic Administration of Lithium Improves Distracted Bone Regeneration in Rats. Calcif Tissue Int. 96 (6), 534-540 (2015).
  15. Xu, J., et al. Human Fetal Mesenchymal Stem Cell Secretome Enhances Bone Consolidation in Distraction Osteogenesis. Stem Cell Res Ther. 7 (1), (2016).
  16. Yasui, N., et al. Three Modes of Ossification during Distraction Osteogenesis in the Rat. Bone Joint J. 79 (5), 824-830 (1997).
  17. Chang, F., et al. Stimulation of EP4 Receptor Enhanced Bone Consolidation during Distraction Osteogenesis. J Orthop Res. 25 (2), 221-229 (2007).
  18. Nyman, J. S., et al. Quantitative Measures of Femoral Fracture Repair in Rats Derived by Micro-Computed Tomography. J Biomech. 42 (7), 891-897 (2009).
  19. Hsu, J. T., Wang, S. P., Huang, H. L., Chen, Y. J., Wu, J., Tsai, M. T. The assessment of trabecular bone parameters and cortical bone strength: a comparison of micro-CT and dental cone-beam CT. J Biomech. 46, 2611-2618 (2013).
  20. Xue, J., et al. NELL1 Promotes High-Quality Bone Regeneration in Rat Femoral Distraction Osteogenesis Model. Bone. 48 (3), 485-495 (2011).
  21. Mark, H., Bergholm, J., Nilsson, A., Rydevik, B., Strömberg, L. An External Fixation Method and Device to Study Fracture Healing in Rats. Acta Orthop. 74 (4), 476-482 (2003).

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Pithioux, M., Roseren, F., Jalain, C., launay, F., Charpiot, P., chabrand, P., Roffino, S., Lamy, E. An Efficient and Reproducible Protocol for Distraction Osteogenesis in a Rat Model Leading to a Functional Regenerated Femur. J. Vis. Exp. (128), e56433, doi:10.3791/56433 (2017).

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