Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

מבוסס על בלון פציעה לזירוז היפרפלזיה Myointimal באבי העורקים בטן העכבר

Published: February 7, 2018 doi: 10.3791/56477
Automatic Translation
1,2,3, 1,2,3,4, 4, 1,2,3,4, 1,2,3,4
1Transplant and Stem Cell Immunobiology Lab, University Heart Center, 2Department of Surgery, Transplant and Stem Cell Immunobiology Lab, University of California San Francisco (UCSF), 3Cardiovascular Research Center (CVRC) and DZHK German Center for Cardiovascular Research, 4Cardiovascular Surgery, University Heart Center

Summary

מאמר זה מדגים מודל מאתר ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointimal (MH) לאחר פציעה בלון אבי העורקים.

Abstract

השימוש במודלים חיוני לצורך הבנה טובה יותר של MH, אחד הגורמים העיקריים עבור היצרות העורקים. במאמר זה נדגים מודל חסיפה מאתר בלון, אשר ניתן להשוות עם כלי ויצר מודלים פגיעה בבעלי חיים גדולים. דגם חסיפה העורקים עם אחרים-קטטרים מחקה את ההגדרה הקלינית ומוביל שינויים דומים pathobiological, פיזיולוגיים. בקצרה, לאחר ביצוע חתך אופקי ב אבי העורקים abdominalis, קטטר בלון להיות מוכנס לתוך הכלי, מנופח, הציג retrogradely. האינפלציה של הבלון יוביל אינטימה פציעה, overdistension של כלי השיט. לאחר הסרת הקטטר, החתך אבי העורקים תהיה סגורה עם אוקיי יחיד. המודל המוצג במאמר זה הוא לשחזור, קל לביצוע, ולא ניתן להקים במהירות ובאמינות. הוא מתאים במיוחד להערכת יקר סוכני טיפולית ניסיוני, אשר יכול להיות מיושם באופן חסכוני. באמצעות זנים נוקאאוט-עכבר, וצריך להעריך את ההשפעה של גנים שונים על פיתוח MH.

Introduction

היצרות עורקים בתוך העורקים הכליליים והיקפי יש השפעה גדולה על התחלואה ואת התמותה של חולים1. אחד כבסיס מנגנון פתולוגי הוא myointima היפרפלזיה (MH), אשר מאופיין על ידי התפשטות מוגברת, הגירה, סינתזה של חלבונים מטריצה חוץ-תאית השריר החלק בכלי הדם תאים (SMC)2. התקן SMC ממוקמים בשכבת המדיה של כלי השיט ולהעביר על גירוי על פני השטח של לומן. אותות מופחתים כוללים גורמי גדילה, ציטוקינים, תא-תא מגע, ליפידים, מטריצה חוץ-תאית רכיבים ו הטיה מכני ולמתוח כוחות3,4,5,6. פציעות של הקיר כלי, פתולוגי או iatrogenic, תאי אנדותל לגרום נזק תאי שריר חלק, לעורר תגובות דלקתיות, ובכך להוביל MH7.

מודלים בבעלי חיים שונים זמינים כעת ללמוד פגיעה עורקית ו היפרפלזיה myointima. חיות גדולות כמו חזירים או כלבים יש את היתרון של שיתוף, עורק דומה ו אנטומיה כלילית עם בני אדם, מתאימות במיוחד עבור מחקרים חוקרת אנגיופלסטיה טכניקות, הליך והתקני8. עם זאת, חזיר הדגמים יש החיסרון של9,גבוהה יותר thrombogenicity10, בעוד כלבים יש רק בתגובה כלי פציעה11מתון. בנוסף, כל הדגמים בעלי חיים גדולים דורשים דיור מיוחדים, ציוד ו צוות, אשר מחוברים עם עלויות גבוהות, אינם זמינים ב מוסד. הדגמים בעלי חיים קטנים כוללים חולדות ועכברים. בהשוואה לחולדות, עכברים יש את היתרונות של עלות נמוכה יותר את קיומו של מגוון רחב של דגמים מדהימה. המודל המתואר בסרטון הזה יכול להיות משולב עם ספקיות-/-עכברים שקיבלו עם דיאטה מערבית לחקות מקרוב את ההגדרה הקלינית של אנגיופלסטיה כלי טרשת עורקים12. דגמים קודמים המושרה פגיעה בכלי הדם דרך תיל פציעה13, לייבוש הנוזלים14, האביב15או פציעה השרוול16. מאז מהות הפגיעה ישפיע במידה רבה את הפיתוח ואת חוקת MH, באמצעות צנתר בלון כדי לגרום לפציעה כלי היא הדרך הטובה ביותר כדי לחקות את ההגדרה הקלינית.

במאמר זה אנו מתארים שיטה לזירוז MH עם קטטר בלון בעכברים. השימוש של קטטר בלון (1.2 מ"מ x 6 מ"מ) עם יציאת RX (איור 1 א') מאפשר גירוד השכבה intimal, במקביל, תנאי הגיוס של overdistension של כלי השיט. שני הגורמים הללו הם גורמים חשובים עבור התפתחות MH. הזמן תצפית עבור דגם זה הוא 28 יום17.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

בעלי חיים קיבל טיפול אנושי בדרישות המדריך העקרונות של חיות מעבדה, שהוכנו על ידי המכון של מעבדה חיה המשאבים, שפורסם על ידי מכוני הבריאות הלאומיים. כל הפרוטוקולים בעלי חיים אושרו על ידי הרשות המקומית אחראית (' Amt לדנציג Gesundheit und Verbraucherschutz, Hansestadt (משרד הבריאות, הגנת הצרכן) המבורג ').

1. קטטר הכנה

הערה: עיין טבלה של חומרי מידע לגבי הצנתר.

  1. סעו צנתר בעל צנתר.
  2. משוך את guidewire של לומן דרך היציאה דיסטלי החוצה.
  3. לשים טיפה של דבק מגע דבק בקצה הדיסטלי של קטטר.
    התראה: ללבוש לטקס או nitrile כפפות.
  4. מניחים את guidewire בנמל RX של הקטטר, לקדם את זה דרך לומן לנמל דיסטלי. לאחר מכן, תחזיר את guidewire מעט להשאיר רווח של ~ 5 מ מ עד הסוף
  5. המתן 5 דקות כדי לאפשר את דבק יבש.
  6. להעביר את guidewire, זה יתוקן. אם זה עדיין ניידים, חזור על השלבים 1.3-1.6.
  7. ממלאים מזרק 3-mL עם סליין 0.9% 1.5 מ ל וחבר אותו ליציאת האינפלציה בלון.
  8. לחצו הבוכנה מזרק כדי לבדוק את הבלון האינפלציה. השאר 0.6 מ"ל מלוחים במזרק.

2. העכבר הכנה

  1. להשיג עכברים זכרים בגיל 14 שבועות במשקל של 30 גרם.
    הערה: השתמשנו חיות מתקבל מן המכון של חיות מעבדה. השתמשנו C57BL/6J כאן.
  2. השתמש תא אינדוקציה כדי להרדים את העכבר עם 2.0-2.5% isofurane (קצב הזרימה חמצן 500 mL/min).
  3. הנח את העכבר על גבו על כרית החימום ולתחזק הרדמה עם facemask לכסות את הפה והאף של העכבר. בדוק עומק מספיק של הרדמה על ידי צובט את הרגליים האחוריות וזנב כדי לוודא העדר רפלקסים.
  4. להסיר את השיער בבטן באמצעות מכונת תספורת לשיער.
  5. אפשק את הרגליים האחוריות ולתקן את עמדתם באמצעות הקלטת.
  6. לחטא את אזור הבטן באמצעות povidone-יוד, ואחריו 80% אתנול. חזור על שלב זה פעמיים נוספות.
  7. השתמש תלוי כירורגית כדי להבטיח באתר כירורגית לא ללקות. פתח את שכבות העור והשריר לאורך לינאה אלבה עם מספריים (או סכין) לחשוף את אברי הבטן.
  8. נעוץ המעיים כפפה saline 0.9% לחות, לעטוף כדי לשמור על לחות.
  9. להשתמש מלקחיים בסדר שני כדי להסיר את רקמת שומן מעל העורק הראשי.
  10. באמצעות על מזרק אינסולין (30 גרם), להזריק µL 250 של הפארין פתרון (50 U/mL) לתוך נחות הנבוב (IVC) ולא לחכות 3 דקות על תפוצתו מערכתית. הפארין לדכא את hemostasis ומניעת קרישת רצויה במהלך הניתוח.
  11. בעזרת מלקחיים שני, לנתח העורקים מתחת לכליות לרדת שלו נגע הסתעפות ואת הקערות ענף היוצא.
  12. מאתרים ומפסיקים את כלי הדם צד, אשר צפויים להיות ממוקם באזור בחוזקה, עם cauterizer טמפרטורה גבוהה.
  13. לעצור את זרימת הדם על ידי מחבר חובק למעקה העורקים מתחת לכליות ישירות מתחת העורקים כליות.
  14. המקום השני מלחציים במיקום דיסטלי מעל ההסתעפות של אבי העורקים.
  15. לבצע חתך אופקי קטן באמצעות מספריים אל נקודת האמצע בין התפסים לאורך הספינה.
    הערה: גודל החתך צריך להיות שקול ל- 1/3 של ההיקף של כלי השיט.
  16. הכנס מזרק עם מחט (30 גרם) לתוך החתך ותורידי את העורקים עם µL 250 הפארין פתרון (50 U/mL).
  17. בעזרת תפרים 10-0, מקם קשר יחיד אחד בכל צד של החתך.
  18. מתרחבים העורקים על-ידי הוספת מרחיב את כלי החיתוך ולהפיץ את הכלי מעט. חזור על התרחבות פי 2 עד פי 3.
  19. לחות הבלון-הקטטר עם סליין 0.9%.
  20. להכניס הבלון-הצנתר שעברו שיטוח העורקים ולקדם אותו לעבר המלחציים proximal על העורקים.
  21. כשמגיעים את המלחציים צינתור, בזהירות פתח את המלחציים צינתור, לנפח את הבלון כדי למנוע דליפת דם, על ידי הזרקת ~0.6 מ"ל של תמיסת מלח.
    הערה: היחס של הבלון המנופח לכלי הוא 1.5:1.
  22. לקדם הקטטר רטרוגרדית עבור 2 ס מ.
  23. למשוך את הצנתר מורחבת, תוך מרוקן את הבלון במעט על ידי שחרור את המזרק.
  24. לחבר מחדש את המלחציים proximal כאשר הקטטר מגיע החתך של אבי העורקים. השטחת קצה הבלון לחלוטין ולהסיר אותו.
  25. לשטוף את העורקים עם µL 250 הפארין פתרון (50 U/mL) בעזרת מזרק 30 גרם.
  26. סגירת החתך אבי העורקים בעזרת תפרים 10-0. המקום התפרץ תפרים בכל צד לרוחב, ואחריו תפרים אחד או שניים על הצד הבטני.
  27. פתח את המלחציים דיסטלי. במקרה של דימום, לסגור את המלחציים שוב ולמקם על תפרים נוספים.
  28. פתח את המלחציים proximal בקפידה.
  29. במקום שתי דגימות על התפר לתמוך בה ולעצור את מדממת.
  30. במקום ועוצרי דימום שנספג על התפר כדי לקיים אותו.
    הערה: את הדופק של אבי העורקים צריך להיות גלוי רחוק מן החתך.
  31. מקם את המעיים בחזרה לתוך הבטן.
  32. יש לשטוף את חלל הבטן עם סליין 0.9% סטרילי, אשר כבר מראש ומחוממת ל- 37 מעלות צלזיוס.
  33. סגור את השכבה שריר הבטן בעזרת תפרים פועל 6-0.
  34. סגור את העור עם התפרים פועל 5-0.
  35. להזריק 4-5 מ"ג/ק"ג Carprofen subcutaneously מתנים את העכבר כדי להתעורר. לנטר את החיה עד זכה להכרה, לשמור על recumbency בחזה ובצלעות. לשמור את החיה לבד בכלוב עד החלמה מלאה.
  36. הוסף דיפירון למים (50 מ"ג/100 מ"ל) משכחי כאבים במשך 3 ימים ולעקוב אחר בעל החיים מדי יום. בדרך כלל עכברים כמו סוויט הטעם של דיפירון, להתחיל לשתות מיד אחרי הניתוח. אם מועדף, סוכנים להזרקה שחרור-מתמשכת יכול לשמש במקום דיפירון.
    הערה: תקופת התצפית של מודל זה הוא 28 יום.

3. histopathology

  1. הקציר העורקים נפגע בלון לאחר 28 יום על-ידי הכנת העכברים כמתואר בצעדים 2.2 ל 2.9.
  2. להשתמש במספריים כדי להסיר את העורקים נפגע בלון (בין נגע הסתעפות 0.3 מ מ מעל כלי כליות), המתת חסד העכבר על ידי גזירה החוצה את הלב שלה.
  3. ריקון לומן של כלי השיט עם 0.9% NaCl.
  4. את הספינה שנקטפו ב 4% paraformaldehyde (PFA) בן לילה, מייבשים אותו להגדיל את ריכוזי אתנול, החל אתנול 70% עבור 2 שעות, 80% אתנול למשך שעה, אתנול 95% עבור שעתיים, אתנול 100% עבור 5 שעות. לאחר מכן, דגירה הדגימות של קסילן 2 שעות 3 פעמים, לפני שחדר הדגימות עם פרפין.
    הערה: במקום שטיפה הספינה שנקטפו עם 0.9% NaCl, ניתן לרוקן את זה עם 4% מחברים.
    התראה: PFA קסילן רעילים, צריך להיות מטופל עם טיפול מיוחד.
  5. להטביע את הדגימה פרפין וחותכים לפרוסות של עובי 5 מיקרומטר, שימוש של מיקרוטום.
  6. Deparaffinize השקופיות עם קסילן 3 פעמים במשך 5 דקות.
  7. נוזלים ברקמות שקופיות באמצעות סדרה יורדת של אתנול. להתחיל עם 100% אתנול 2 פעמים במשך 5 דקות, ואחריו 3 דקות של אתנול 95%, 80% ו- 70%.
  8. כתם על השקופיות עם צביעת trichrome מאסון, כפי שמתואר18.
  9. מייבשים שקופיות מוכתם אתנול 100% 2 פעמים למשך 10 דקות לכל. נקה עם קסילן 2 פעמים למשך 10 דקות כל והר במדיום הרכבה.
  10. הצגת השקופיות עם מיקרוסקופ שדה בהיר. להשתמש עדשה עם 5 x הגדלה של מספרי הצמצם של 0.12 תמונה סקירה או עדשה עם 20 x הגדלה עם צוהר המספרי של 0.35 להשגחה מפורט.

4. immunofluorescence מיקרוסקופ

  1. נוזלים ברקמות שקופיות באמצעות סדרה יורדת של אתנול. להתחיל עם 100% אתנול 2 פעמים במשך 5 דקות, ואחריו 3 דקות של אתנול 95%, 80% ו- 70%.
  2. לבצע אחזור אנטיגן על ידי חימום השקופיות בפתרון אנטיגן-אחזור בבאניה כעשרים דקות.
  3. ומצננים את השקופיות עד לטמפרטורת החדר.
  4. לאחר כביסה השקופיות עבור שלוש פעמים בתמיסת פוספט buffered (PBS), להחיל פתרון חסימה אנטיגן על חלקים למשך 30 דקות.
  5. רחץ שקופיות שלוש פעמים במשך חמש דקות עם PBS.
  6. דגירה מקטעים עם נוגדן ראשוני מעורבבת עם diluent הראשית נוגדן.
    הערה: ריכוז, דגירה המתאים צריכה להיבחר בנפרד עבור כל נוגדן.
  7. רחץ שקופיות שלוש פעמים במשך חמש דקות עם PBS להסיר נוגדן לא מאוגד.
  8. דגירה מקטעים עם נוגדנים משניים מראש מצומדת מעורבבת עם diluent משני נוגדן.
    הערה: ריכוז, דגירה המתאים צריכה להיבחר בנפרד עבור כל נוגדן.
  9. הסר נוגדנים לא מאוגד ע י שטיפת השקופיות עבור 5 דקות שלוש פעמים.
  10. Counterstain את גרעין התא באמצעות 4', 6-diamidino-2-phenylindole (דאפי) למשך 15 דקות; ריכוז דאפי הסופי צריך להיות 350 ננומטר.
  11. הר שקופיות ב immunofluorescence תואם הרכבה פתרון.
    הערה: באמצעות הפתרון הלא הרכבה מאפילה את האות זריחה.
  12. הצגת שקופיות עם מיקרוסקופ זריחה. השתמש עדשת הגדלה 40 x עם הפתח המספרי של 1.3.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

חסיפה בלון הוא מודל מתאים ללמוד את התפתחות MH בעכברים. חיות להתאושש טוב הניתוח והצג פוסט-פעולה מצב גופני מעולה. הקמנו מודל זה בעכברים 50 עם פחות משיעור המוות 3% עקב הליך כירורגי. דמויות 1B -C הצג את השלבים החשובים כירורגי. לאחר חתך בעור לאורך לינאה אלבה, לזהות את אבי העורקים abdominalis. במקום מלחציים השתלה (איור 1B). עושים חתך קטן באמצע אב העורקים, לקבוע צנתר בלון לתוך כלי הקיבול שקופיות הוא ייסוג, נגד כיוון זרימת הדם (איור 1C). התנועה של הבלון המנופח מוביל גירוד של אינטימה, באותו הזמן, overdistension של כלי השיט. החתך של אבי העורקים ייסגרו עם אוקיי יחיד. הדופק אבי העורקים צריך להיות גלוי רחוק מן החתך.

MH מתפתח בהדרגה השתל לאורך זמן. היסטולוגית מכתים עם מאסון trichrome מדגים myointima היווצרות בתוך הנדן אלסטית פנימית (איור 2 א). נגעים Myointimal כללה בעיקר חיובי הסלולר רכיבים עבור SM22 ורכיבים מסוימים-מטריצה חוץ-תאית (איור 2B). Myointimal תאים מוערכות עוד יותר על-ידי immunofluorescence מכתים. האוכלוסייה העיקרית myointima מורכב של תאי שריר חלק (שריר חלק אקטין (SMA) חיובי) ותאים (פיברובלסט הפעלת חלבון (FAP) חיובי) myofibroblasts (איור 2B).

Figure 1
איור 1. . השרטוטים של הקטטר, ההשתלה שלו (א) תכנון מפורט של הקטטר. יציאת הדיסטלי, בלון, יציאה מהירה exchange (RX-יציאה), guidewire, יחיד לומן ל RX-יציאה, כפול לומן מנמל-RX בלון, רכזת, בלון האינפלציה יציאה. (B) איור סכמטי של הליך כירורגי. זרימת הדם אבי העורקים abdominalis מופסק עם שני תופסנים מיקרו, מבוצע חתך קטן. ג קטטר המנופח בתוך העורקים abdominalis. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
באיור 2. Myointima צורה בתוך הנדן אלסטית פנימית. (א) Denuded עכבר aortas נקצרים, פרפין מוטבע, חתך רוחב נציג מוצג צביעת trichrome. (B) כפול immunofluorescence מכתים של בלון-חשופה aortae מוצג. בשורה העליונה מתארת נגעים myointimal צבעונית עבור SM22 וקולגן III. בשורה התחתונה, כלי מוכתמים עבור SMA ו- FAP. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

מאמר זה מדגים מודל מאתר ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointimal ומאפשרת חקר התהליכים הפתולוגיים כבסיס ובדיקות של תרופות חדשות או אפשרויות טיפוליות.

השלב הקריטי ביותר ב פרוטוקול זה הוא חסיפה של אבי העורקים. טיפול מיוחד צריך להיות משולם במהלך שלב זה, כפי חסיפה מופרז יוביל היווצרות מפרצת וכישלון מודל. מצד שני, אם חסיפה מבוצע דיו, יפתחו myointima קטן מדי. לכן, האינטנסיביות של השלב חסיפה חיונית התוצאה ואת ההצלחה של מודל זה בעל חיים.

לגבי הליך כירורגי, חיוני שתי החומות של כלי השיט לא חורים על-ידי הגדרת אוקיי, אשר עלול לגרום כשל מוקדם של patency כלי השיט. בעבר תארנו דגם העכבר שבו אנחנו המושרה כלי היצרות של העורק הראשי של עכברים18. עם זאת, זו, רוב הדגמים האחרים מספקים רק כמויות קטנות מאוד של רקמות לצורך ניתוח. היתרון בשיטה זו הוא כמות גדולה יחסית של רקמות שהושג (מקטע כלי ~ 1 ס מ). השתלה לספינה אחת ניתן יהיה ובכך יתחלק לחלקים מרובים, המשמש עבור ניתוחים שונים, ביעילות הפחתת מספר חיות ניסוי הנדרש.

יתר על כן, חיות מעלף מתאימים ניתן ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointima בתנאים מחלות שונות. הרקע הגנטי יכול גם להיות משולב עם מודל זה בעל חיים כדי להבין את המנגנונים של היפרפלזיה myointimal מגוון הגדרות או את ההשפעה של גנים מסוימים.

לסיכום, המודל המתואר כאן הוא לשחזור, קל לביצוע, ולא ניתן להקים במהירות ובאמינות. הטיפול בהצלחה נבדקו אפשרויות במודל זה יכול להיות עוד יותר אישר חיה גדולה מודלים19.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

המחברים מודים כריסטיאן Pahrmann על סיוע טכני שלה.

D.W. נתמכה על ידי קרן kade ב Max. סמטת קיבלו מענקים מן Fondation Kröner אחר (2012_EKES.04) פתוח (DE2133/2-1_. ס ס קיבל מענקי מחקר פתוח (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
10-0 Ethilon suture Ethicon 2814G
3 mL Syringe BD Medical 309658
37% HCl Sigma-Aldrich H1758
5-0 prolene suture Ethicon EH7229H
6-0 prolene suture Ethicon 8706H
Acid Fuchsin Sigma-Aldrich F8129-25G Trichrome staining
Antigen retrieval solution Dako S1699
Azophloxin Waldeck 1B-103 Trichrome staining
Bepanthen Eye and Nose ointment Bayer 1578675 Eye ointment
Betadine Solution Betadine Purdue Pharma NDC:67618-152
C57BL/6J Charles River Stock number 000664
Clamp applicator Fine Science Tools 18056-14 JAW DIMS: 4 x 0.75 mm LENGTH: 13 mm
Collagen 3 abcam ab7778 Antibody
DAPI Thermo Fischer D1306
Donkey anti-Goat IgG AF555 Invitrogen A21432 Secondary antibody
Donkey anti-Rabbit IgG AF488 Invitrogen A21206 Secondary antibody
Donkey anti-Rabbit IgG AF488 Invitrogen A11055 Secondary antibody
Donkey anti-Rabbit IgG AF555 Invitrogen A31572 Secondary antibody
Ethanol 70% Th. Geyer 2270
Ethanol 96% Th. Geyer 2295
Ethanol absolute Th. Geyer 2246
FAP abcam ab28246 Antibody
Forceps fine Fine Science Tools 11251-20
Forceps standard Fine Science Tools 11023-10
Glacial Acetic Acid Sigma-Aldrich 537020
Hair clipper WAHL 8786-451A ARCO SE
Heparin Rotexmedica PZN 3862340 25.000 I.E./mL
High temperature cautery kit Bovie 18010-00
Image-iT FX Signal Enhancer Invitrogen I36933 Blocking solution
Light Green SF Waldeck 1B-211 Trichrome staining
Microsurgical clamp Fine Science Tools 18055-04 Micro-Serrefine - 4mm
MINI TREK Coronary Dilatation Catheter 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange Abbott 1012268-06U
Molybdatophosphoric acid hydrate Merck 1.00532.0100 Trichrome staining
NaCl 0,9% B.Braun PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160
Needle holder Fine Science Tools 12075-14
Novaminsulfon Ratiopharm PZN 03530402 Metamizole
Orange G Waldeck 1B-221 Trichrome staining
Paraffin Leica biosystems REF 39602004
PBS pH 7,4 Gibco 10010023
PFA 4% Electron Microscopy Sciences #157135S
Ponceau S solution Serva Electrophoresis 33427 Trichrome staining
Primary antibody diluent Dako S3022
Prolong Gold Mounting solution Thermo Fischer P36930 Mounting solution for immunofluorescence stained slides
Replaceable Fine Tip Bovie H101
Resorcin-Fuchsin Weigert Waldeck 2E-30 Trichrome staining
Rimadyl Pfizer 400684.00.00 Carprofen
Scissors Fine Science Tools 14028-10
Scissors Vannas-style Fine Science Tools 15000-03
Secondary antibody diluent Dako S0809
Fast acting Adhesive MINIS 3x1g UHU 45370 Cyanoacrylate
Slide Rack Ted Pella 21057
SM22 abcam ab10135 Antibody
SMA abcam ab21027 Antibody
Staining dish Ted Pella 21075
Surgical microscope Leica M651
Tabotamp fibrillar Ethicon 431962 Absorbable hemostat
Transpore Surgical Tape 3M 1527-1
U-100 Insulin syringe BD Medical 324825
Vessel Dilator Fine Science Tools 18603-14
Vitro-Clud Langenbrinck 04-0001
Weigerts iron hematoxylin Kit Merck 1.15973.0002 Trichrome staining
Xylene Th. Geyer 3410

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. Deaths: final data for 2009. Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).
  2. Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. Intimal proliferation of smooth muscle cells as an explanation for recurrent coronary artery stenosis after percutaneous transluminal coronary angioplasty. J Am Coll Cardiol. 6 (2), 369-375 (1985).
  3. Greenwald, S. E., Berry, C. L. Improving vascular grafts: the importance of mechanical and haemodynamic properties. J Pathol. 190 (3), 292-299 (2000).
  4. Majesky, M. W., Schwartz, S. M. Smooth muscle diversity in arterial wound repair. Toxicol Pathol. 18 (4 Pt 1), 554-559 (1990).
  5. Owens, G. K. Regulation of differentiation of vascular smooth muscle cells. Physiol Rev. 75 (3), 487-517 (1995).
  6. Owens, G. K., Kumar, M. S., Wamhoff, B. R. Molecular regulation of vascular smooth muscle cell differentiation in development and disease. Physiol Rev. 84 (3), 767-801 (2004).
  7. Kleemann, R., Zadelaar, S., Kooistra, T. Cytokines and atherosclerosis: a comprehensive review of studies in mice. Cardiovasc Res. 79 (3), 360-376 (2008).
  8. Karas, S. P., et al. Coronary intimal proliferation after balloon injury and stenting in swine: an animal model of restenosis. J Am Coll Cardiol. 20 (2), 467-474 (1992).
  9. Ip, J. H., et al. The role of platelets, thrombin and hyperplasia in restenosis after coronary angioplasty. J Am Coll Cardiol. 17 (6 Suppl B), 77B-88B (1991).
  10. Mason, R. G., Read, M. S. Some species differences in fibrinolysis and blood coagulation. J Biomed Mater Res. 5 (1), 121-128 (1971).
  11. Lafont, A., Faxon, D. Why do animal models of post-angioplasty restenosis sometimes poorly predict the outcome of clinical trials? Cardiovasc Res. 39 (1), 50-59 (1998).
  12. Matter, C. M., et al. Increased balloon-induced inflammation, proliferation, and neointima formation in apolipoprotein E (ApoE) knockout mice. Stroke. 37 (10), 2625-2632 (2006).
  13. Lindner, V., Fingerle, J., Reidy, M. A. Mouse model of arterial injury. Circ Res. 73 (5), 792-796 (1993).
  14. Simon, D. I., et al. Decreased neointimal formation in Mac-1(-/-) mice reveals a role for inflammation in vascular repair after angioplasty. J Clin Invest. 105 (3), 293-300 (2000).
  15. Sata, M., et al. A mouse model of vascular injury that induces rapid onset of medial cell apoptosis followed by reproducible neointimal hyperplasia. J Mol Cell Cardiol. 32 (11), 2097-2104 (2000).
  16. Moroi, M., et al. Interaction of genetic deficiency of endothelial nitric oxide, gender, and pregnancy in vascular response to injury in mice. J Clin Invest. 101 (6), 1225-1232 (1998).
  17. Painter, T. A. Myointimal hyperplasia: pathogenesis and implications. 2. Animal injury models and mechanical factors. Artif Organs. 15 (2), 103-118 (1991).
  18. Stubbendorff, M., et al. Inducing myointimal hyperplasia versus atherosclerosis in mice: an introduction of two valid models. J Vis Exp. (87), e51459 (2014).
  19. Deuse, T., et al. Dichloroacetate prevents restenosis in preclinical animal models of vessel injury. Nature. 509 (7502), 641-644 (2014).

Tags

רפואה גיליון 132 היפרפלזיה Myointimal העכבר מודל חסיפה פציעה בלון תאי שריר חלק vasculopathy
מבוסס על בלון פציעה לזירוז היפרפלזיה Myointimal באבי העורקים בטן העכבר
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Tediashvili, G., Wang, D.,… More

Tediashvili, G., Wang, D., Reichenspurner, H., Deuse, T., Schrepfer, S. Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta. J. Vis. Exp. (132), e56477, doi:10.3791/56477 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter