Lesión basada en globo para inducir la hiperplasia Myointimal de la Aorta Abdominal de ratón
Summary
Este artículo demuestra un modelo murino para el desarrollo de la hiperplasia myointimal (MH) después de lesión de globo.
Abstract
El uso de modelos animales es esencial para una mejor comprensión de la MH, una de las principales causas de estenosis arterial. En este artículo, nos muestran un modelo de denudación murine del globo, que es comparable con modelos de lesión de buque establecido en grandes animales. El modelo de denudación de aorta con catéteres de balón imita el ajuste clínico y conduce a cambios fisiológicos y pathobiological comparables. Brevemente, después de realizar una incisión horizontal en la aorta abdominalis, un catéter con balón se introduce en el recipiente, inflado y se introdujo retrogradely. Inflación del balón dará lugar a lesiones de la íntima y overdistension del buque. Después de retirar el catéter, se cerrará la incisión aórtica con puntos de sutura únicas. El modelo mostrado en este artículo es reproducible, fácil de realizar y pueden establecerse de forma rápida y fiable. Es especialmente conveniente para la evaluación de agentes terapéuticos experimentales costosos, que pueden aplicarse de una manera económica. Mediante el uso de diferentes cepas de ratón knockout, podrá evaluarse el impacto de diferentes genes en el desarrollo de MH.
Introduction
Estenosis arterial en las arterias coronarias y periféricas tiene un gran efecto sobre la morbilidad y la mortalidad de pacientes1. Un mecanismo patológico subyacente es la hiperplasia myointima (MH), que se caracteriza por aumento de la proliferación, migración y síntesis de matriz extracelular proteínas del músculo liso vascular células (SMC)2. SMC se encuentran en la capa media del vaso y migrar sobre el estímulo a la superficie de la luz. Señales estimulantes incluyen factores de crecimiento, citoquinas, contacto célula-célula, lípidos, componentes de la matriz extracelular y esquileo mecánico y estiran las fuerzas3,4,5,6. Lesiones de la pared del vaso, patológica o iatrogénica, causan la célula endotelial y daño a las células del músculo liso y estimulan reacciones inflamatorias y así llevan a MH7.
Diferentes modelos animales están disponibles para el estudio de lesión arterial y la hiperplasia myointima. Grandes animales como cerdos o perros tienen la ventaja de compartir una similar de la arteria y la anatomía coronaria con los seres humanos y son especialmente adecuados para estudios investigando técnicas, procedimiento y dispositivos de angioplastia8. Sin embargo, modelos de cerdo tienen el inconveniente de mayor trombogenicidad9,10, mientras que los perros sólo tienen una suave respuesta a lesiones de vasos11. Además, todos los modelos animales grandes requieren especial, equipos y personal, que está relacionado con altos costos y no siempre está disponibles en una institución. Modelos animales pequeños incluyen ratas y ratones. En comparación con las ratas, ratones tienen las ventajas de menor costo y la existencia de una variedad de golpes modelos. El modelo descrito en este video se puede combinar con ApoE-/-los ratones alimentados con una dieta occidental que mímico de cerca el ajuste clínico de la angioplastia en los vasos ateroscleróticos12. Los modelos anteriores inducida por lesión vascular vía cable lesión13, desecación líquido14, primavera15o manguito lesiones16. Puesto que la naturaleza de la lesión afectará grandemente el desarrollo y Constitución de MH, utilizando un catéter con balón para inducir lesión de vaso es la mejor manera de imitar el ajuste clínico.
En este artículo describimos un nuevo método para inducir a MH con un catéter con balón en ratones. El uso de un catéter con balón (1,2 mm x 6 mm) con un puerto de RX (figura 1A) permite el raspado de la capa íntima y, al mismo tiempo, la inducción de un overdistension del buque. Ambos de estos factores son importantes factores desencadenantes para el desarrollo de MH. El tiempo de observación para este modelo es de 28 días17.
Protocol
Representative Results
Discussion
Este artículo demuestra un modelo murino para el desarrollo de la hiperplasia myointimal y permite la exploración de los procesos patológicos subyacentes y la prueba de nuevos medicamentos o terapéuticas.
El paso más crítico en este protocolo es la denudación de la aorta. Debe prestarse especial cuidado durante este paso como denudación excesiva dará lugar a la formación de aneurismas y el fracaso del modelo. Por otro lado, si la denudación se realiza escaso, desarrollará myointima…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores agradecen a Christiane Pahrmann para su asistencia técnica.
D.W. fue apoyado por el Max Kade Foundation. T.D. recibidas becas de la Fundación de Kröner otro (2012_EKES.04) y la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DE2133/2-1_. S. S. recibió becas de investigación de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).
Materials
| 10-0 Ethilon suture | Ethicon | 2814G | |
| 3 mL Syringe | BD Medical | 309658 | |
| 37% HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| 5-0 prolene suture | Ethicon | EH7229H | |
| 6-0 prolene suture | Ethicon | 8706H | |
| Acid Fuchsin | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Trichrome staining |
| Antigen retrieval solution | Dako | S1699 | |
| Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | Trichrome staining |
| Bepanthen Eye and Nose ointment | Bayer | 1578675 | Eye ointment |
| Betadine Solution | Betadine Purdue Pharma | NDC:67618-152 | |
| C57BL/6J | Charles River | Stock number 000664 | |
| Clamp applicator | Fine Science Tools | 18056-14 | |
| Collagen 3 | abcam | ab7778 | Antibody |
| DAPI | Thermo Fischer | D1306 | |
| Donkey anti-Goat IgG AF555 | Invitrogen | A21432 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A21206 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A11055 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF555 | Invitrogen | A31572 | Secondary antibody |
| Ethanol 70% | Th. Geyer | 2270 | |
| Ethanol 96% | Th. Geyer | 2295 | |
| Ethanol absolute | Th. Geyer | 2246 | |
| FAP | abcam | ab28246 | Antibody |
| Forceps fine | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Forceps standard | Fine Science Tools | 11023-10 | |
| Glacial Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 537020 | |
| Hair clipper | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Heparin | Rotexmedica | PZN 3862340 | 25.000 I.E./mL |
| High temperature cautery kit | Bovie | 18010-00 | |
| Image-iT FX Signal Enhancer | Invitrogen | I36933 | Blocking solution |
| Light Green SF | Waldeck | 1B-211 | Trichrome staining |
| Microsurgical clamp | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine – 4mm |
| MINI TREK Coronary Dilatation Catheter 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange | Abbott | 1012268-06U | |
| Molybdatophosphoric acid hydrate | Merck | 1.00532.0100 | Trichrome staining |
| NaCl 0,9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160 | |
| Needle holder | Fine Science Tools | 12075-14 | |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
| Orange G | Waldeck | 1B-221 | Trichrome staining |
| Paraffin | Leica biosystems | REF 39602004 | |
| PBS pH 7,4 | Gibco | 10010023 | |
| PFA 4% | Electron Microscopy Sciences | #157135S | |
| Ponceau S solution | Serva Electrophoresis | 33427 | Trichrome staining |
| Primary antibody diluent | Dako | S3022 | |
| Prolong Gold Mounting solution | Thermo Fischer | P36930 | Mounting solution for immunofluorescence stained slides |
| Replaceable Fine Tip | Bovie | H101 | |
| Resorcin-Fuchsin Weigert | Waldeck | 2E-30 | Trichrome staining |
| Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | Carprofen |
| Scissors | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| Scissors Vannas-style | Fine Science Tools | 15000-03 | |
| Secondary antibody diluent | Dako | S0809 | |
| Fast acting Adhesive MINIS 3x1g | UHU | 45370 | Cyanoacrylate |
| Slide Rack | Ted Pella | 21057 | |
| SM22 | abcam | ab10135 | Antibody |
| SMA | abcam | ab21027 | Antibody |
| Staining dish | Ted Pella | 21075 | |
| Surgical microscope | Leica | M651 | |
| Tabotamp fibrillar | Ethicon | 431962 | Absorbable hemostat |
| Transpore Surgical Tape | 3M | 1527-1 | |
| U-100 Insulin syringe | BD Medical | 324825 | |
| Vessel Dilator | Fine Science Tools | 18603-14 | |
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| Weigerts iron hematoxylin Kit | Merck | 1.15973.0002 | Trichrome staining |
| Xylene | Th. Geyer | 3410 |
References
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