מאמר זה מדגים מודל מאתר ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointimal (MH) לאחר פציעה בלון אבי העורקים.
השימוש במודלים חיוני לצורך הבנה טובה יותר של MH, אחד הגורמים העיקריים עבור היצרות העורקים. במאמר זה נדגים מודל חסיפה מאתר בלון, אשר ניתן להשוות עם כלי ויצר מודלים פגיעה בבעלי חיים גדולים. דגם חסיפה העורקים עם אחרים-קטטרים מחקה את ההגדרה הקלינית ומוביל שינויים דומים pathobiological, פיזיולוגיים. בקצרה, לאחר ביצוע חתך אופקי ב אבי העורקים abdominalis, קטטר בלון להיות מוכנס לתוך הכלי, מנופח, הציג retrogradely. האינפלציה של הבלון יוביל אינטימה פציעה, overdistension של כלי השיט. לאחר הסרת הקטטר, החתך אבי העורקים תהיה סגורה עם אוקיי יחיד. המודל המוצג במאמר זה הוא לשחזור, קל לביצוע, ולא ניתן להקים במהירות ובאמינות. הוא מתאים במיוחד להערכת יקר סוכני טיפולית ניסיוני, אשר יכול להיות מיושם באופן חסכוני. באמצעות זנים נוקאאוט-עכבר, וצריך להעריך את ההשפעה של גנים שונים על פיתוח MH.
היצרות עורקים בתוך העורקים הכליליים והיקפי יש השפעה גדולה על התחלואה ואת התמותה של חולים1. אחד כבסיס מנגנון פתולוגי הוא myointima היפרפלזיה (MH), אשר מאופיין על ידי התפשטות מוגברת, הגירה, סינתזה של חלבונים מטריצה חוץ-תאית השריר החלק בכלי הדם תאים (SMC)2. התקן SMC ממוקמים בשכבת המדיה של כלי השיט ולהעביר על גירוי על פני השטח של לומן. אותות מופחתים כוללים גורמי גדילה, ציטוקינים, תא-תא מגע, ליפידים, מטריצה חוץ-תאית רכיבים ו הטיה מכני ולמתוח כוחות3,4,5,6. פציעות של הקיר כלי, פתולוגי או iatrogenic, תאי אנדותל לגרום נזק תאי שריר חלק, לעורר תגובות דלקתיות, ובכך להוביל MH7.
מודלים בבעלי חיים שונים זמינים כעת ללמוד פגיעה עורקית ו היפרפלזיה myointima. חיות גדולות כמו חזירים או כלבים יש את היתרון של שיתוף, עורק דומה ו אנטומיה כלילית עם בני אדם, מתאימות במיוחד עבור מחקרים חוקרת אנגיופלסטיה טכניקות, הליך והתקני8. עם זאת, חזיר הדגמים יש החיסרון של9,גבוהה יותר thrombogenicity10, בעוד כלבים יש רק בתגובה כלי פציעה11מתון. בנוסף, כל הדגמים בעלי חיים גדולים דורשים דיור מיוחדים, ציוד ו צוות, אשר מחוברים עם עלויות גבוהות, אינם זמינים ב מוסד. הדגמים בעלי חיים קטנים כוללים חולדות ועכברים. בהשוואה לחולדות, עכברים יש את היתרונות של עלות נמוכה יותר את קיומו של מגוון רחב של דגמים מדהימה. המודל המתואר בסרטון הזה יכול להיות משולב עם ספקיות-/-עכברים שקיבלו עם דיאטה מערבית לחקות מקרוב את ההגדרה הקלינית של אנגיופלסטיה כלי טרשת עורקים12. דגמים קודמים המושרה פגיעה בכלי הדם דרך תיל פציעה13, לייבוש הנוזלים14, האביב15או פציעה השרוול16. מאז מהות הפגיעה ישפיע במידה רבה את הפיתוח ואת חוקת MH, באמצעות צנתר בלון כדי לגרום לפציעה כלי היא הדרך הטובה ביותר כדי לחקות את ההגדרה הקלינית.
במאמר זה אנו מתארים שיטה לזירוז MH עם קטטר בלון בעכברים. השימוש של קטטר בלון (1.2 מ”מ x 6 מ”מ) עם יציאת RX (איור 1 א’) מאפשר גירוד השכבה intimal, במקביל, תנאי הגיוס של overdistension של כלי השיט. שני הגורמים הללו הם גורמים חשובים עבור התפתחות MH. הזמן תצפית עבור דגם זה הוא 28 יום17.
מאמר זה מדגים מודל מאתר ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointimal ומאפשרת חקר התהליכים הפתולוגיים כבסיס ובדיקות של תרופות חדשות או אפשרויות טיפוליות.
השלב הקריטי ביותר ב פרוטוקול זה הוא חסיפה של אבי העורקים. טיפול מיוחד צריך להיות משולם במהלך שלב זה, כפי חסיפה מופרז יוביל היווצרות ?…
The authors have nothing to disclose.
המחברים מודים כריסטיאן Pahrmann על סיוע טכני שלה.
D.W. נתמכה על ידי קרן kade ב Max. סמטת קיבלו מענקים מן Fondation Kröner אחר (2012_EKES.04) פתוח (DE2133/2-1_. ס ס קיבל מענקי מחקר פתוח (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).
10-0 Ethilon suture | Ethicon | 2814G | |
3 mL Syringe | BD Medical | 309658 | |
37% HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
5-0 prolene suture | Ethicon | EH7229H | |
6-0 prolene suture | Ethicon | 8706H | |
Acid Fuchsin | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Trichrome staining |
Antigen retrieval solution | Dako | S1699 | |
Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | Trichrome staining |
Bepanthen Eye and Nose ointment | Bayer | 1578675 | Eye ointment |
Betadine Solution | Betadine Purdue Pharma | NDC:67618-152 | |
C57BL/6J | Charles River | Stock number 000664 | |
Clamp applicator | Fine Science Tools | 18056-14 | |
Collagen 3 | abcam | ab7778 | Antibody |
DAPI | Thermo Fischer | D1306 | |
Donkey anti-Goat IgG AF555 | Invitrogen | A21432 | Secondary antibody |
Donkey anti-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A21206 | Secondary antibody |
Donkey anti-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A11055 | Secondary antibody |
Donkey anti-Rabbit IgG AF555 | Invitrogen | A31572 | Secondary antibody |
Ethanol 70% | Th. Geyer | 2270 | |
Ethanol 96% | Th. Geyer | 2295 | |
Ethanol absolute | Th. Geyer | 2246 | |
FAP | abcam | ab28246 | Antibody |
Forceps fine | Fine Science Tools | 11251-20 | |
Forceps standard | Fine Science Tools | 11023-10 | |
Glacial Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 537020 | |
Hair clipper | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
Heparin | Rotexmedica | PZN 3862340 | 25.000 I.E./mL |
High temperature cautery kit | Bovie | 18010-00 | |
Image-iT FX Signal Enhancer | Invitrogen | I36933 | Blocking solution |
Light Green SF | Waldeck | 1B-211 | Trichrome staining |
Microsurgical clamp | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine – 4mm |
MINI TREK Coronary Dilatation Catheter 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange | Abbott | 1012268-06U | |
Molybdatophosphoric acid hydrate | Merck | 1.00532.0100 | Trichrome staining |
NaCl 0,9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160 | |
Needle holder | Fine Science Tools | 12075-14 | |
Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
Orange G | Waldeck | 1B-221 | Trichrome staining |
Paraffin | Leica biosystems | REF 39602004 | |
PBS pH 7,4 | Gibco | 10010023 | |
PFA 4% | Electron Microscopy Sciences | #157135S | |
Ponceau S solution | Serva Electrophoresis | 33427 | Trichrome staining |
Primary antibody diluent | Dako | S3022 | |
Prolong Gold Mounting solution | Thermo Fischer | P36930 | Mounting solution for immunofluorescence stained slides |
Replaceable Fine Tip | Bovie | H101 | |
Resorcin-Fuchsin Weigert | Waldeck | 2E-30 | Trichrome staining |
Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | Carprofen |
Scissors | Fine Science Tools | 14028-10 | |
Scissors Vannas-style | Fine Science Tools | 15000-03 | |
Secondary antibody diluent | Dako | S0809 | |
Fast acting Adhesive MINIS 3x1g | UHU | 45370 | Cyanoacrylate |
Slide Rack | Ted Pella | 21057 | |
SM22 | abcam | ab10135 | Antibody |
SMA | abcam | ab21027 | Antibody |
Staining dish | Ted Pella | 21075 | |
Surgical microscope | Leica | M651 | |
Tabotamp fibrillar | Ethicon | 431962 | Absorbable hemostat |
Transpore Surgical Tape | 3M | 1527-1 | |
U-100 Insulin syringe | BD Medical | 324825 | |
Vessel Dilator | Fine Science Tools | 18603-14 | |
Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
Weigerts iron hematoxylin Kit | Merck | 1.15973.0002 | Trichrome staining |
Xylene | Th. Geyer | 3410 |