Summary
このプロトコルでは、仮死の心停止による脳虚血における学習・記憶機能を評価する変更におけるの使用について説明します。
Abstract
背景: 軽度脳虚血 (すなわち心不全) モデルの認知機能障害中等度から評価手術後悪い歩行困難できます。たとえば、手術を受けるとモリス水迷路にさらされるラットできないことがあります、泳ぐこと従って実験を排尿します。
新しい方法: 変更された行動の自発交替におけるテストを設けています。変更におけるプロトコルの主な利点は、虚血後の学習・記憶機能を評価するために十分に強力なその比較的シンプルなデザインです。また、データの分析は、シンプルでわかりやすいです。ラットの学習/記憶障害は軽度から中程度 (6 分) 仮死心不全 (ACA) の有無の両方を決定する、におけるを使いました。ラット探査のための自然な傾向を持っているし、海馬を破壊したラット海馬関連を明らかに減少の自発的交替率の側の好みを採用する傾向にあるに対し、における代替の腕を探索ACA の有無での学習・記憶機能。
結果: ACA グループ側優先率が高くなり、対照と比べて低い交替があります。
既存のメソッドとの比較: のモリス水とバーンズ迷路学習・記憶機能を評価するためより顕著であります。しかし、モリス水迷路は他の迷路よりもストレスです。バーンズ迷路が ACA 誘起 neurocognitive 欠損より密接に関連しています作業 (短期) メモリへ参照 (長期) メモリを測定するために使用されています。
結論: 我々 の全脳虚血モデル (ACA) のワーキング、における経由 (短期) メモリを記述する、シンプルで効果的な戦略を開発しました。
Introduction
アメリカ心臓協会 (2017 年)、心不全 (CA) によると-引き起こされた死亡率 4 分ごとに発生し、米国1年ごとの以上 400,000 人に影響します。CA が不十分な血液灌流2,3,4の結果として神経の脳損傷を引き起こす可能性が定評です。海馬5,6、7学習とメモリ8,9、重要な神経細胞に影響を与えるの虚血に敏感な ca1 で CA による脳損傷が発生します。 10、11,12。また、海馬 (すなわち CA1 ニューロン) の虚血条件下での樹状突起スパイン密度の損失は、空間記憶障害13,14,15で重要な役割を果たしています。CA 後これらの病理学的変化による行動障害など: 不安、うつ病、心的外傷後ストレス障害、記憶喪失がより普及しています。(低体温症) を除く神経保護治療のほとんどが CA16 後機能的転帰の改善に失敗する改良された CA 生存率と相関する医療技術 (すなわち効率的な外来サービス) の進歩をされているが、 ,17。CA の生存者は通常貧しい生活質を持っており、16を支出増分の医療負担。
行動テストで脳梗塞の認知状況の評価は、両方の薬剤の有効性を判断し、最終的に成功した臨床試験を開発することが重要。1940 年代に、エドワード ・ トールマンは、空間記憶の海馬ベース18を勉強する最初の動作試験を設計されています。その後、さまざまな迷路 (モリス水迷路、放射状迷路、T または Y-迷路とバーンズ迷路) は海馬空間学習とラット19,20,21,22 でメモリを評価するため開発されました。 ,23。広く使われている行動テストの 1 つが空間学習を調べ、モリス水迷路とラットのメモリ モデル24。ただし、モリス水迷路では、泳ぐし、完全運動機能とコントロールを発揮するラットが必要です。仮死心不全 (ACA、CA のモデルラット) モデルなど虚血実験、大腿動脈/静脈の穿刺がバイタル血圧、血液ガス、様々 な薬物の導入を取得する必要があります。大腿動脈/静脈穿刺は、ラットの正しく泳ぐ能力をレンダリング脚移動を抑制することが、以来、モリス水迷路は ACA の下で認知障害をテストする最も適切なかもしれない。
バーンズ迷路は、他の広く使用されている行動のテスト齧歯動物モデルにおける記憶・学習能を検査するためです。バーンズ迷路は完全運動機能のコントロール、運動を必要としない、こうしてモリス水迷路よりもストレスの少ない。過去には、我々 はバーンズ迷路を使用して間機能学習・記憶違いが発生するかどうかを確認する実験を行ったコントロールまたは ACA 誘発ラット対偽。データ一方バーンズ迷路に参照 (長期) メモリ25,26を測定に広く用いられてバーンズ迷路という事実のために、軽度中程度の ACA から次認知障害をテストするのには解決していないために,ACA 誘発神経認知赤字より密接に関連作業 (短期) メモリ27,28,29,30バーンズ迷路が私たち ACA の記憶機能を評価するためより少なく実行可能であることを示唆するにはモデル。
従って変更における自発交替テストを使用した ACA の後の作業 (短期) メモリの評価を行った。変更後における自発交替テストの主な利点は簡易性および他の行動のテストと比較してラットに最小限のストレスも重い計算として、事前の動物訓練を必要としない修正におけるという事実のために分析やモリス水迷路とバーンズ迷路に必要なサブルーチン (すなわち、ラットのビデオ イメージ投射)。ここで変更における自発交替テストが十分な解像度を正確に検出し、短期メモリ損失を引き起こす疾患における海馬機能の評価を提供することができます単純なまだ非常に効率的な行動試験パラダイムであることを示す(すなわち ACA)。
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Protocol
すべて実験プロシージャが健康の国民の協会のガイドラインに従って行われ、機関動物ケアおよび使用委員会 (ルイジアナ州立大学健康科学センター-シュリーブ ポート) 男性のスプレイグ ドーリー ラット (の使用が承認300-350 g、9-10 週齢)。ラットが ACA 手術前に一晩絶食。
1. における装置の設計と設定
注: の執事およびローリンズの 2006年モデル31基におけるデザイン。
- SketchUp32を利用した迷路、3 D 構造を設計します。におけるの 3 D 構造を作成するには、外長さ 200 mm、幅 165 mm、高さ 148 mm 3 D プリンターの印刷寸法に合わせて開始腕を構築します。肉厚 5.5 mm と 8 mm の床厚を使用します。
- 3 D プリンターを使用して迷路を印刷 (材料の表参照)32。研究室では、3 D プリンターが一覧にない場合は、木、媒体密度の有機質繊維板、または改築の店から購入することができますプラスチック (ポリ塩化ビニールすなわち) など他の材料を使用します。
- 印刷領域の高さ制限のため 2 つの独立した 3 D プリントの迷路の壁を構築し、迷路アセンブリに結合 (つまり、2 番目の壁の高さが 140 mm、280 mm の総壁の高さによって高さを増加する迷路セクションに追加された)。それぞれ独立した 3 D 印刷拠点には、"T"の形のロック機構は、1 つのセクションが、次に接続が含まれています。
- 開始の目標腕くんでの交差点、その目標腕開始アームの幅に参加する 165 mm の広いセクションを作成します。開始腕として同じような設計法を用いた目標武器を構築します。ただし、執事およびローリンズのデザインごと 100 mm アームの幅を減らします。
- におけるの回路図/寸法の詳細につきましては、図 1を参照してください。
- 開始腕と目標腕の接合部で設計に中央のパーティションを含んでいます。目標の腕に分割する開始の腕に、におけるのと 200 mm 後ろの壁からこのパーティションを拡張します。このパーティションはまた迷路 (図 1) の高さを拡張します。
2. 仮死心不全 (ACA)
- 手術の開始前にオートクレーブの手術器具の (121 ° C で 15 分)。手術のサイトで動物の毛 70% のエタノール 15 分ひげをそるが手術台を消毒します。外科手術のための表面の皮を betadine ソリューションを適用します。
- Anesthetization
- 4% イソフルランと無段階の混合物と O2と N2O (300 mL/分 O2と 700 mL/分 N2O) マスクを介してラットを麻酔します。
- 与えるラット換気用気管内挿管 (挿管後ラットが人工呼吸器に接続されて)。
- O2と N2O を使用ピンチ応答法麻酔の深さを決定するための無段階の混合物 2% に 4% からイソフルランを下げることによって麻酔を維持します。
- 麻酔中の乾燥を防ぐための目に軟膏を塗る。Regulae 加熱温度基準として肛門プローブ パッド齧歯動物によって体の温度。
- 気管内挿管
- 誘導室にネズミを配置します。4% のイソフルランと無段階の混合物の O2と N2o. ラットを麻酔します。
- 誘導室からラットを削除します。場所は、ネズミの顔に向かって麻酔マスクで仰臥位で動物を麻酔しました。
- そっと左の親指と人差し指の動物の左右どちらかに向けて舌を移動します。
- 17 ゲージ鈍先端ピペッティング針 (93 mm の長さの針の先端に 10 度の角度で) 上 14 ゲージ フレキシブル静脈カテーテル (49 mm 長い) を滑空します。17 ゲージ鈍チップ分注針を気管に挿入します。
- 気管から 17 g の分注針をそっと引き出します。14 ゲージ カテーテルのハブを人工呼吸器に接続します。0.67 mL/100 g と 60 呼吸/分の呼吸を人工呼吸器ストローク ボリュームを調整します。
- 加熱温度基準として肛門プローブ パッド齧歯動物によって全体の手順中に 37 ° C で頭と体の温度を維持します。
- 大腿動脈と静脈のカテーテル法
- (両側) 鼠径部付近の毛を剃るし、皮膚の外科手術のための表面に betadine を適用します。
- ラットを仰臥位に配置されます。手術用ハサミで、鼠径部の切開 (10 mm) を行います。
- 鼠径靭帯の公開まで結合組織を鈍先端の鉗子に区切ります。鼠径靭帯を把握するため、止血を使用します。大腿動脈および静脈は、鼠径靱帯の下です。
- 大腿動脈および静脈が公開されるまでは、結合組織を分離するのに鈍い先端の鉗子を使用します。
- ファインチップ鉗子を介して大腿動脈に沿って実行される大腿神経を優しきます。慎重に大腿動脈を分離、ファインチップ鉗子を介してユニットとして静脈。
- ファインチップ鉗子を使用して、静脈から大腿動脈を区切ります。
- 5-0 絹糸 (1 脚と体の方へ他の方) 静脈の下の 2 個を配置します。
- 体に近い側に緩やかな結び目を作る。保持し、体の反対側に向かって可能な限り引っ張って、止血を使用します。
- 脚に近い側の緩い結び目を作る。押しながら静脈血でいっぱいにできるように止血を介して足の方に引っ張ってください。
- (45 ° の角度) でミクロ解剖はさみによって静脈 (約 0.1 mm) の小切開を作る。滅菌ガーゼで血を吸収します。
- PE 50 カテーテル (20 U/mL と生理食塩水で満ちている) 鈍い先端針注射器に接続します。20 U/mL と生理食塩水で PE 50 カテーテルを入力します。解剖はさみで PE 50 カテーテルをポイントを作成または鋭い端を 45 ° の角度でカットします。PE 50 カテーテルの端を保持するのに鈍い先端の鉗子を使用します。そっと PE 50 カテーテルを大腿静脈に挿入します。
- カテーテルを完全に挿入すると後は、ゆっくりと 0.1 mL のヘパリン/食塩水漏れがないことを確認するを管理します。PE 50 カテーテルを安定させるためにしっかり縫合結び目 (シングル ノット) を結ぶ。様々 な薬の連続投与 (IV) 用 PE 50 カテーテルをしてください。
- 1 mL 注射器で使用、23 ゲージのプロシージャ全体でラットを動けなく大腿静脈経由でルアー スタブ アダプター ベクロニウム臭化物 (0.67 mg/kg、10 分毎に投与) を管理します。
- 5-0 絹糸 (1 脚と体の方へ他の方)、動脈の下の 2 個を配置します。
- 脚に近い側の緩い結び目を作る。脚に向かって可能な限り縫合をプルして、止血を使用します。
- 体に近い側に緩やかな結び目を作る。動脈の血液で充満を許可する止血を介して体の方に引っ張って押しします。
- (45 ° の角度) でミクロ解剖はさみで動脈 (約 0.1 mm) の小切開を作る。
- PE 50 カテーテル (20 U/mL と生理食塩水で満ちている) 鈍い先端針注射器に接続します。20 U/mL と生理食塩水で PE 50 カテーテルを入力します。解剖はさみで PE 50 カテーテルをポイントまたは鋭い端を作成する 45 度の角度でカットします。PE 50 カテーテルの端を保持するのに鈍い先端の鉗子を使用します。PE 50 カテーテルの端を保持するのに鈍い先端の鉗子を使用します。優しく PE 50 カテーテルを大腿動脈に挿入します。
- 後カテーテルを完全に挿入すると、ゆっくりと引くそのカテーテルが機能ように注射器。PE 50 カテーテルを安定させるためにしっかり縫合結び目 (シングル ノット) を結ぶ。PE 50 カテーテル動脈圧と血液ガス連続記録を保持します。
- 仮死の心不全 (ACA) 手順
- ストローク量、O2 N2O のレベルを調節することにより、必要に応じて (つまり pO2pCO2血圧、および pH 値) 生理学的パラメーターを調整します。これらのパラメーターの正常な生理学的な範囲を使用: pO2: 100 mmHg、pCO2: 35 40 mmHg、血圧: 100 mmHg と pH: 7.4。
- ACA を実行する前に約 100 mmHg または大腿静脈経由でベクロニウム臭化物 (0.67 mg/kg、静注) を管理し、2 分待つ 23 ゲージ ルアー スタブ アダプターを接続して 1 mL 注射器、血圧は、ことを確認使用します。
- 人工呼吸器から気管内チューブ (14 ゲージ カテーテル ハブ) を切断することによって無呼吸 (6 分) を誘発します。さらに完全な無呼吸を確保するための 1 mL シリンジで気管内チューブをブロックします。
注: 6 分仮死時間人工呼吸器切断と蘇生の初め間の期間として定義されます。完全な心停止は、平均動脈圧 10 mmHg より低いとして定義されます。 - 無呼吸の最後の分の間に 80 の呼吸/分、人工呼吸器の呼吸を調整し、O2 0% N2O を 2 L/分に増加この操作は、任意の残りのイソフルランと N2O は、人工呼吸器の残りが爆破されます。
- 次の無呼吸の分は、気管内チューブから 1 mL の注射器を削除します。人工呼吸器を気管内チューブを接続し直します。
- ルアー スタブ アダプター大腿静脈からエピネフリン (0.005 mg/kg、静注) を管理でき x 光円運動で動物の胸に指と親指、中指、によって手動の胸部圧迫を管理するゲージを使用、23 の 1 mL 注射器が接続されていると自然循環 (平均動脈圧 ≥ 50 mmHg)33,34,35のリターンまでの z 軸 (200/分) です。
- 使用別 1 mL 注射器、23 ゲージ自然循環へのリターンの直後に大腿静脈経由で重炭酸ナトリウム 1 meq/kg、静注) を管理するルアー スタブ アダプター (50 mmHg 以上)33,34,35呼吸性アシドーシスを軽減するために。
- 測定血液ガス再度 10 分蘇生 (pH ACA 約 7.35 に 7.40 後) の酸塩基状態を確認後
- 大腿動脈および静脈を揃えるため、止血を使用します。ゆっくりと優しく鈍い先端の鉗子を用いた動脈と静脈のカテーテルを削除します。大腿動脈/静脈の出血を防ぐために 5-0 絹糸を結紮します。3-0 絹糸を使用して手術部位を覆う皮膚を閉じます。中断縫合テクニックを使用すると、傷の再開の可能性を最小限に抑えます。
- ラット呼吸自体 (蘇生後 60 分通常 30 分) まで待ち、ベンチレーターからラットを切断、気管内チューブを慎重に取り外します。
- 場所赤ちゃんインキュベーター (27 ° C、湿度 50%) でラットの一夜します。(水に浸漬製) 軟化食品を置き、赤ん坊の定温器に一晩水します。
- 個々 のケージにラットを転送し、通常の食事と水の動物施設にラットを返します。におけるテストは、ACA の後 3 日間を開始します。
3. における
-
動物の準備
- (偽または ACA) は、手術の前日は、5 分ごとのラットを処理します。決してとき彼らのおり (480 mm × 250 mm × 200 mm、プラスチックの透明ケージ) からラットを昇格処理 (図 2)。
- ラットを処理した後、そっと拾うラット他の手のサポートで片手で尻尾でその ' 足。5 倍 (100 mm) ケージに手からジャンプさせてください。彼らは食糧および/または戦いの支配していないので、個々 のケージに各ラットを分けます。
- シャムや ACA 手術 (図 2) 後、3 日間は、最初の実行の開始前に静かで暗い部屋にケージでラットを転送します。だけ低消費電力デスク ランプをオンに、最低被写体照度を維持するために実験室の隅に置きます。10 分闇に適応するラットを許可します。
- 午後にはラットのパフォーマンスに日内変動の効果を避けるためにすべての実験を実行します。オペレーターは受信したラット偽または ACA 手術がお勧めしません。
-
自発交替
- 迷路の全体の床をカバーする (〜 10 mm 厚) を寝具の薄い層を広げます。それぞれの出発点です開始腕 ("T"の下) でラットの実行、および許可し、場所はラット右または左の目標腕を探索する 3 分です。
- ラット (ネズミのすべての 4 つの足は目標腕にした) 特定の目標腕にコミットされると、"T"接合開始腕と反対の目標腕ラットが反対の目標腕を入力できないようにする (図 1) はブロックします。30 秒間、迷路の中でネズミを残すし、ラットをピックアップし、最小限の時間 (~ 30 秒) についてそのケージに戻ってそれを配置します。"T"ジャンクションを削除、におけるから (125 mm X 230 mm X 65 mm、3 D プリンターによって作られた) をブロックします。
- 開始腕にラットを置き、3.2.2 を繰り返します。交替として定義されて: ラットと比較して36を実行前の反対側の腕に入ったとき。1 日あたりの実行の通りを 4 ラットがあります。
1stを実行
2ndを実行します。
10 分休憩
3rdを実行します。
4回実行します。 - 10 分休憩の間に、香りのバイアスを除去するために動物の寝具を変更します。における実験的毎日の終わりに蒸留水が続く 75% エタノールできれいに。
- 3.2.1 の手順を繰り返します。-3.2.4。図 2のように 2 つ以上日 (合計 12 の実行)。
-
交代率と側優先率の計算
- 交替 % と % 側の好みが、計算、
L: ラットが左の腕を選択します。
R: ラットを選択右の腕
正解: (各セットは、2 つの実行を含んでいる) 与えられたセットの 1stと 2ndを実行は違います
不適切な選択: ラットが以前の実行と同様同じ腕を選択
例:
1 日目: L L/L
2 日目: L L/L R
3 日目: R L/L
交代: 2 (正しい選択肢) 6 (合計セット実行) * 100 = 33.33%
側の好み: 10 (L、優先側) 12 (合計実行実行) * 100 = 83.33%
- 交替 % と % 側の好みが、計算、
-
手術後のケア:
- 与えるは、手術後 2 日間 12 時間間隔ブプレノルフィン (0.01 mg/kg IP) をラットします。心停止後 1 h までのラットを観察します。
- それは胸骨の横臥を維持するために十分な意識を取り戻したまで人工呼吸器や加熱パッドにラットを取り付けます。術後後の動物の体温を維持するために (27 ° c、湿度 50% 設定) 赤ちゃんのインキュベーターでラットを配置します。
- 手術後最初の 24 時間の動物に軟化チョウ (水浸漬製) を提供します。ラットの飲料水がなかったら場合、管理静菌性生理食塩水 (100 mL/kg/日、i. p.) まで動物が回復し、自由に水を飲むのです。
- すべての傷に痛み (バシトラシンとリドカイン軟膏) をラットの局所用抗生物質を与えます。完全に回復した後、ラットを動物施設に戻って移動します。
-
安楽死の方法
- 5% イソフルランと 100% N2O は、実験の終わりに動物の安楽死を使用します。
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Representative Results
ACA (グローバル脳虚血) は主に作業 (短期) メモリの赤字28,29を発生します。ACA の後、記憶・学習の機能を評価するには、(短期) メモリ30の作業を評価するのに変更された自発交替テストを使用しました。自発交替のテストからの結果は ACA グループ (26.19 ± 4.96%) で 3 日間の連続から交代率がコントロール群 (62.96 ± 6.07%) と比較して有意に低いことを提案します。(* p0.05)ACA に提出されたラットが対照と比べて側バイアスを開発したという事実のため35 (v. 62.89 ± 2.86 %82.14 ± 4.57% * p0.05) (図 3 a と 3 b)35、したがって自発交替率が低いが掲載します。結果は、± S.E.M. データを用いてトルコの事後テスト37続いて一方向の分散分析の手段として表現されました。p < 0.05 (95% の信頼水準) は、統計的に有意と考えられていた。
図 1。における設計。
T 字迷路 (ラット) 用のプラットフォームは、600 mm × 165 mm 開始腕と"T"の上の頂点で 400 mm × 100 mm の目標腕で建てられました。壁の厚さは 5.5 mm × 8 mm (床の厚さ)。中央のパーティションは、このパーティションが目標武器を分割開始腕ににおけると 100 ミリメートルの後ろの壁から拡張の目標腕へスタートの腕の接合部でだった。点線の四角形は、どちらかの腕をブロック"T"ジャンクション ブロックの位置を表します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 2。ACA/偽手術とにおける実験のタイムラインです。
ACA の手術の前日、ラットは人間の接触にラットを慣らすに (5 分/各時間、日 0) 4 回を処理されていました。ACA 手術後ラットを癒すために、次の 3 日にわたって安定させる許されました。回復後、ラットは 3 日連続 (12 の実行、実行/日 4) 自発的交替のテストを実行しました。各ラットは、1 日あたり 4 の実行を実行します。実験のタイムラインは偽手術のため同じです。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 3。ACA の後の短期記憶の障害。
側の嗜好率の増加は、ACA (、) を受けるラットで観察できます。制御 (b) と比較して ACA ラットにおける自発交替率は減少しました。括弧内の数字は、グループごとに使用される動物を示します。結果は、± S.E.M. の手段として表現された * P 0.05 < コントロールと大幅に異なることを示します。統計解析は、Tukey の事後テストで一方向の分散分析によって評価しました。この図は、2017年35李らから変更されています。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
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Discussion
執事とローリンズのプロトコル31と比較して本研究では、変更が行われました。3 D プリンターは、におけるを作成に使用されました。3 D 印刷は、製品化における手頃な価格でコスト効果の高い選択肢を提供します。ラットの不安を減らすためには、テスト中に、におけるは最低被写体照度が暗い部屋で行われました。ラットが目標の腕の 1 つを入力した後我々 は優しく相手の腕をブロックしました。これは、ギロチンのドアを削減しながらラットの尾からの損傷と同様、テスト、可能なストレスを回避できます。不要なストレスがラットの後続の実行でパフォーマンスを抑制します。したがって、テスト中にプラスチックのギロチンのスライドドアから、きしるような音を排除するために本研究ではゲートとして"T"ジャンクション ブロックを利用します。この手順は、における実験ではラットの不安を大きく削減できます。
気になるラットが迷路の中で実行する意欲はありませんので、慣れは成功における研究のための重要なステップです。したがって、ラット慣らすヒューマン タッチ、高さ、およびケージから、実験前に迷路に移動することを確認することが不可欠です。気になるラットを作るきしむまたはシューという音の演算子は、それらをタッチしようとするとき。さらに、ラットはどちらか長い凍結応答または拒否迷路全体の実行中に実行すると存在不安における実験します。彼らは通常、迷路を探索することがなく開始腕で時間の大半を過ごします。ラットが迷路の中で実行しないでください、彼らの尾を軽くタッチし、彼らは実行されます。その他の可能な理由は、ラット受信十分な慣れであることです。そっとケージに戻ってラットを入れて、自分の不安を減らすため 10 分待ちます。ラットが実行を完了するために失敗した場合はもう一度、そのラットの研究から除外です。ラットは、3 分の 1 回の実行を完了できません、する場合は、そのケージに戻ってそれを置くし、10 分待ちます。まだラットが実行を完了する場合は、ラットは研究から除外する必要があります。ラットがない期間の延長または周波数のテストを実行または 1 時間以上のテスト部屋に滞在、それ以外の場合彼らは目新しさの不足のため実行を停止します。
以前の研究では、ラットの 70% が左または右バイアス38,39を示すことを示しています。この横方向のバイアスは、ラット39におけるパフォーマンスを悪化させます。したがって、本研究ではラットの包含と除外基準を指定します。私達は、当社における研究で投与 15 ラット ACA 手術の合計をテストしました。仙送装誤投与ラットにおける平均交代率は 29 ± 4% です。コントロールまたは偽のラットに、海馬の損傷または学習/記憶障害を持たないので、我々 の仮説を制御するまたはせ物のラットは ACA 扱われる動物と比べてにおけるパフォーマンス (交替率 ≥ 29 ± 4%) を向上させる必要があります。したがって、ラットは側の好みがあるまたは迷路の中で学ぶことができなかった示唆している交代率 < 29% (交替 ≤ 1 の合計数) とコントロールまたは偽ラットは、研究から除外すべき。25 の対照群にこの除外基準に用いています。6 人 (24%) ハイサイド嗜好率 (85 ± 3%) と低自発交替率 (29% より低い) は研究から除外しました。
における自発交替実験はラットの目新しさを探検する自然な傾向に大きく依存です。したがって、における自発交替プロトコルの主要な制限は、ラットが迷路の中で実行する最終的に中止されます。私たちの過去の経験に基づいて、ラットが迷路の中で 3 日間連続の意志のみです。我々 は他の脳傷害/疾患 (すなわちアルツハイマー病、パーキンソン病、一過性脳虚血発作) にも関連する私たちの現在の調査結果を推定できますので仮死心不全は主に短期的な記憶障害の結果、短期記憶の障害。
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Disclosures
著者が明らかに何もありません。
Acknowledgments
この作業によって、国家機関の健康/国立研究所の神経疾患をサポートされていたし、ストロークを与える 1R01NS096225 01A1、アメリカの心臓協会許可 AHA 13SDG1395001413、AHA 17GRNT33660336、AHA-17POST33660174、ルイジアナ州立大学助成援助研究評議会、マルコム ・ ファイスト心血管研究フェローシップ、およびエベリン F. マクナイト脳研究所で。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 3D Printer | MakerBot | Replicator | Fifth generation |
| 3D Printer Filament | Hatchbox | PLA, 1.75 mm filament diameter | |
| 200 Proof Pure Ethanol | Koptec | V1005SG | |
| Sani-Chips | PJ Murphy-Forest Products | Size: 8 to 20 mesh; 2.2 cubic foot/package; autoclavable bags | |
| Rat | Charles River Laboratories | Sprague-Dawley | |
| Vecuronium bromide | Sun Pharmaceutical | 47335-931-40 | 10 mg |
| Epinephrine | Par Pharmaceutical | 42023-103-01 | Adrenalin Chloride Solution 1 mg/mL, 1:1000 |
| Buprenorphine Hydrochloride Injection | Pfizer | 00409-2012-32 | 0.3mg/mL |
| SketchUp | Trimble Inc. | 3D modeling software | |
| VentElite Small Animal Ventilator | Harvard Apparatus | 55-7040 | Animals raging in size from mouse to guinea pig (10g to 1kg) |
| PowerLab 8/35 | Adinstruments | PL3508 | 8 analog input channels – 4 of which can be used in differential mode. |
| Bio Amps | Adinstruments | FE132 | The Bio Amp is a galvanically isolated, high-performance differential bio amplifier optimized for the measurement of a wide variety of biological signals such as ECG, EMG and EEG recordings. |
| Quad Bridge Amp | Adinstruments | FE224 | A four-channel, non-isolated bridge amplifier designed to allow the PowerLab to connect to most DC bridge transducers. |
| LabChart 8 | Adinstruments | ||
| ABL80 FLEX CO-OX blood gas analyzer | Radiometer | pH / p CO2 / p O2 | |
| SURFLO Teflon I.V. Catheter | Terumo | sc-361556 | Only use the flexible thin wall catheter (49-mm long) |
| Pipet/Infusion Needle | Hamilton | 7748-03 | 17-gauge; 93-mm long; 10-degree angle |
| Classic T3 Vaporizer | SurgiVet | VCT302 | Classic T3 Isoflurane Funnel Fill |
| ENVIRO-PURE Charcoal Canister | SurgiVet | 32373B10 | Designed to absorb waste anesthetic gas |
| O2 single flowmeter | SurgiVet | 32375B1 | 0-1000 mL |
| N2O Flowmeter | VetEquip | 401721 | 0-4LPM |
| Clay Adams Intramedic Luer-Stub Adapter (Sterile) | Becton Dickinson | 427565 | 23 gauge |
| Micro Forceps | Black and Black surgical | B3FRC-18 RM-8 | 7 1/4" (18 cm), 8mm RH, counterweight w/ guide pin 2mm, platform 6 x .3 mm, curved. |
| Halstead Mosquito Forceps | Roboz | RS-7111 | Curved; 5" Length, 1.3 mm tip diameter, 2.1 mm jaw width |
| Mixter Forceps | Roboz | RS-7291 | 5.25" Curved Extra Delicate, 1.1 mm tips |
| Castroviejo Micro Dissecting Spring Scissors | Roboz | RS-5650 | Straight, Sharp Points; 9 mm Cutting Edge; 0.15 mm Tip Width; 3 1/2" Overall Length |
| Mayo-Stille Scissors | Roboz | RS-6891 | 5.5" Round Curved |
| Dumont #5 Forceps | Roboz | RS-5058 | 45 Deg Dumoxel Tip Size .10 x .06 mm |
| Olsen-Hegar Combination Scissor And Needle Holder | Roboz | RS-7884 | Cross Serration Tip; 5.5" Length |
| Moloney Forceps | Roboz | RS-8254 | Serrated; Slight Curve; 4.5" Length |
References
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