Summary
이 문서는 복 카 테 테 르는 동물 뒤에 있던 한 액세스 포트에 연결 된 쥐에 외과 위치에 대 한 메서드를 보여 줍니다. 또한, 5/6 신 PD 환자의 신부전 상태를 위한 절차를 설명 합니다.
Abstract
복 막 투 석 (PD)는 신장 대체 요법 관리 및 기능적으로 부족 한 신장 수는 물과 독성 대사 산물을 배출 하는 복 막 구멍에 있는 hyperosmotic 액체의 후부 복구에 일관성이 제거 합니다. 불행 하 게도,이 절차는 복 악화. 조직 손상 부상을 치료 하는 염증의 발병을 트리거합니다. 부상 지속 염증 된다 만성 경우에, 그것은 발생할 수 있습니다 섬유 증는 많은 질병에 일반적인 발생 이다. PD, 만성 염증, 섬유 증, 이러한 것 들에 관련 된 다른 특정 프로세스와 기술의 후속 정지 실패를 의미 한 용량 저하 이어질. 인간의 샘플 작업 biopsies을 얻을 기술 및 윤리적인 한계를 선물만이 악화에 대 한 정보를 제공 합니다. 동물 모델이이 악화 때문에 그들은 이러한 결점을 극복 연구에 필수적입니다.
만성 마우스 주입 모델 관련 된 메커니즘의 가능성을 열고 유전자 변형된 생쥐의 넓은 범위에서 혜택을 2008 년에 개발 되었다. 이 모델은 액세스 포트를 피하는 동물의 뒷면에 부착 된 카 테 터로 구성 된 쥐를 위한 사용자 지정된 장치를 사용 합니다. 이 절차 동안 장기 실험, 감염 및 염증 주사 복 막의 연속 펑크를 방지 합니다. 이 모델 덕분에 만성 PD 유체 노출에 의해 유도 된 복 막 손상이 특징 되어과 변조. 이 기술은 대량의 액체의 주입을 허용 하 고 있는 시간의 연장된 기간 동안 약 또는 다른 물질의 접종은 필요 다른 질병의 연구에 사용 될 수 있습니다.
이 문서는 쥐에 카 테 터의 외과 배치에 대 한 메서드를 보여 줍니다. 또한, PD 환자에 신장 불충분의 상태를 모방 하는 5/6 신에 대 한 절차를 설명 합니다.
Introduction
신장 기능 및 신장 질환
신장은 항상성, 혈액 여과 및된 호르몬 생산에 필수적인 장기. 신부전, 요 독 증, 신장 기능 장애1으로 유지 하는 혈액에서 폐기물의 축적으로 인해 전신 증상의 그룹으로 정의 된의 후속 발병이 끌 다양 한 조건이 있다. 또한, homeostatic 기능에도 영향을 경우에 신부전, 이후 고혈압 볼륨 과부하 때문에 발생할 수 있습니다, 되는 또한 위험한 심장 마비1발생할 수 있습니다. 때 신장 기능 기능 10%-15%, 환자 다음 치료 옵션 중 하나를 겪어야 한다: 혈액 투 석, 복 막 투 석 (PD) 또는 신장 이식.
PD 환자 치료 또는 실질적으로 어디서 나 그들의 홈의 안락에서 따라서 자주 병원에 대 한 필요성을 피하고 방문 및 체류를 계속 수 있도록 재미 있는 옵션입니다. 경찰 기술 복 막 구멍으로 작은 독성 분자와 삼 투 액 (복 막 투 석 액, PDF)의 주입을 통해 몸2 에 의해 생성 된 과잉의 물을 제거 합니다. 이 점 복 모 세관 및 PDF, 외 (UF)로 알려진 프로세스 사이의 물과 용액의 교환에 필요한 삼 투 그라데이션을 생성 합니다.
복 막 투 석에 의해 유도 된 복 막 부상
복 막 구멍 막 (오후) 또한 몇 혈관, 섬유 아 세포, 대 식 세포와 다른 세포 인구 주택 행렬에 mesothelial 세포의 단층으로 구성 된 적용 됩니다. 불행 하 게도, 복 막 막 항상 겪고 있다 몇 가지 변경을 apoptosis와 mesothelial 세포의 손실, mesothelial (MMT) 및 내 피 (끝-몬태나) 세포, 염증 세포의 채용의 엽 과도 같은 PD 치료 동안 및 fibrocytes, 혈관 변경, 신생, lymphangiogenesis 및 섬유 증3,,45,6,7,8,9. 이러한 변경 UF 용량 오류10, 치료, 환자 (혈액 투 석 또는 신장 이식)을 대체 치료를 받아야 합니다 요구의 계속 하는 걸로 개발에 대 한 책임은 . 따라서, 이러한 환자에 대 한 지연 또는 변경이 복 막의 개발을 제어 필수적 이다.
그것은 혼자 요 독 증 염증11을 발생할 수 있습니다 하지만 가장 중요 한 지역 계수는 PDF bioincompatibility 추측 하고있다. 대부분 Pdf 염증을 일으키는 삼투성 대리인으로 포도 당을 사용 합니다. PDF 저장 시간 및 살 균, 포도 당 저하의 과정을 겪고 있다 고이 반응에서 새로운 제품 표시, 생성 더 많은 염증, MMT와 apoptosis12,13. 또한, 주입 방법 때문에 기계적 손상의 가능성도 있다. 행동을 지속적으로, 이러한 모든 요소는 지속적이 고 재발 성 염증 성 상태 만성 염증, 막 악화 하 고, 결정적으로, UF 실패 드라이브를 선도 생성할 수 있습니다. 이 피해를 감소 하 또는 피할 수 어떻게 아직도 연구의 문제 이다.
변의 개발 분석: 인간의 샘플 동물 모델에서
인간의 생체 검사 작업은 조직 샘플을 얻기에 있는 어려움 때문에 제한 요소 이다. 이 샘플만 카 테 터 고장 또는 이식, PD 치료의 년 후에 일반적으로 수행 하는 수술에서 얻어질 수 있다. 이 방법은 복 막, PDF에 노출에 의해 고통을 병 적인 변화의 분석에 유용 하지만 프로세스의 개발을 연구 하는 데 충분 하지 않습니다. 또 다른 가능성은 세포 투 석 유출에서 뽑아 분석 하 하지만이 여전히 완벽 한 시나리오를 제공 하기 위해 실패 합니다. 두 기술을 병합 동물 모델에 가능 하다. 복 막 구조는 포유류, 사이 유사 하 고 따라서 다른 동물성 종 가진 모델 있다. 양 (Rodela 외 에 따라 하는 몇 가지 연구 14 와 총구 외. 15) 토끼16,17 모델; 그러나, 작은 동물 들은 그들이 집에 쉽게 유지, 그리고는 또한 경제적으로 바람직입니다. 쥐18,19,20,,2122,,2324 를 사용 하 여 관찰 하는 데 필요한 짧은 치료 시간을 제공 나비의 기능 변경입니다. 그것은 예를 들어 BMP-7 (뼈 morphogenic 단백질-7)25 항 거리 약물의 효과 같은 다른 문제와 RAS (renin-안 시스템)26,27 를 대상으로 탐구 하는 매우 유용한 모델 대표 , 28.
그러나, murine 모델은 다른 사람 이상의 많은 혜택으로 이상적인 모델으로 떠오르고 있다. 가장 흥미로운 장점은 유전자 사용의 가능성 수정 복 막 손상의 분자와 세포질 기초 공부 하 쥐입니다. 사실, 수많은 질병의 분석에 대 한 마우스 채용 종종 다양 한 잘 알려진 유전 배경와 여러 가지 변종이 있다. 다른 장점의 실험 (동물의 더 작은 크기) 때문에, 취급의 용이성, 시 약의 가용성 및 증가 양의 쥐의 다른 긴장에 사용할 수 있는 정보 주택, 감소 된 비용에 필요한 감소 공간 이후 그들은 가장 일반적으로 사용 된 동물 연구에서 왔다.
이식된 장치를 채용 하는 마우스 기반 모델 PD29,30, 가장 최근에 설립 된 모델 되었습니다 그리고 복 막 악화 Pdf에 노출 때문에 PD 환자에 의해 고통을 모방을 보여줘 왔다. 이 모델은 병 적인 프로세스 연루31,,3233이해 협력. 또한, 그것은 장황이 면역 변조기 및 항 염증 제 약물 및 다른 반대로 거리를 사용 하 여 저하 고 콕스-2 (cyclooxygenase 2) 억제제 등의 안티-신생 에이전트에 대 한 다양 한 잠재적인 치료를 확인 하기 위해 사용 되었습니다. 34, PPAR-γ (peroxisome proliferator 활성화 수용 체-γ) 촉진제35, Tamoxifen36, Paricalcitol (는 비타민 D 수용 체 활성 제는 면역 반응을 조절 한다)37, Rapamycin38 Nebivolol 39.
이식된 카 테 터와 마우스 모델 개발
이 모델의 목표는 닮은, 가능한 만큼, 작은 동물에 PD의 확장된 처리를 수행할 수 있도록 인간의 PD 환자에서 사용 하는 기술입니다. 지금까지, 복 막으로 투 석 액의 주입에 대 한 세 가지 기술 생쥐에서 테스트 되었습니다. 첫 번째, 눈 앞의 찔린 복 벽 복 막 손상과 같은 발생할 수 있습니다 여러 위험으로 인해 논란은 출혈 하 고, 맹목적으로, 내장 펑크입니다. 두 번째 기술은 소위 "오픈 영구 시스템 이다", 액체 주입 장치 몸 밖에 서 배치 됩니다. 이 절차는 인간에서 수행 하는 가장 비슷합니다. 그러나, 그것은 감염의 기회를 증가 시킬 수 있습니다으로 장기 실험의 개발을 허용 하지 않습니다 고 일반적으로 결과 방해할 수 있는 PDF를 않도록 마 취의 사용을 요구 한다. 세 번째 기술은 "닫힌된 시스템" 이다. 이 방법을 전체 장치 액체 주입에 사용 되는 동물의 몸 안에 있습니다. 유체는 피하 배치 됩니다 액세스 포트를 통해 바늘으로 주사 된다. 이 절차는 복 막 감염 및 출혈 뿐 아니라 마 취에 대 한 필요성의 위험을 줄여줍니다.
PD에 요 독 증의 효과 연구, 최근 murine 모델 또한 되었습니다40 카 테 터와 PDF 주입 모델에 따라 부설. 이 모델 신장 기능 감소, 쥐에는 신을 수행 하는 새로운 기술에 제공 합니다. 현재 문서에서 201540 에 Ferrantelli 그 외 여러분 에 의해 고용 하는 프로토콜의 수정 개발 되었습니다. 이 새로운 프로토콜에는 신, 동안 카 테 테 르 주입 수술 동안 쏜 상처의 길이 감소 하 고 신장에 대 한 액세스를 용이 하 게 수 있습니다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
여기에 설명 된 모든 메서드는 기관 동물 관리 및 사용 분자 생물학 센터 세 베로 오 초아 (마드리드, 스페인)의 위원회에 의해 승인 되었습니다.
참고: C57BL/6J 여성 쥐 세 12 ~ 14 주 하 고 연구의 시작에서 대략 20 g를 무게 사용 되었다. 모든 동물 표준 조건 하에서 지 내게 되었다 고 음식과 물 광고 libitum부여 했다. 건강 상태는 매일 체크 했다. 장갑, 드 레이프, 카 테 터, 봉합 바늘, 등 필요한 재료 살 균 해야 합니다.
1. 카 테 터를 삽입
참고: 경우에 신장은 제거 되지 않습니다, 그들은 남아 완전히 기능, 요 독 증, 따라서 고립에서 PDF 노출의 연구 허용의 효과 고려 하지 않습니다. 수술 복 막 구멍으로 카 테 터의 원심 극단만을 소개 하 고 그것에 대 한 액세스를 제공 하는 동물의 뒷면에 액세스 포트를 배치에 구성 되어 있습니다. 카 테 터를 배치 하는 절차는 다음과 같습니다.
- 유도 챔버에 마우스를 놓고 마 취를 사용 하 여 4 %isoflurane 및 산소 0.4 L/min의 유량과 righting 반사의 손실까지 제공 합니다.
- 마 취 장치에 연결 된 nosecone 튜브를 통해 2% isoflurane 0.3 L/min의 흐름으로 100% 산소에서를 가진 동물을 유지 한다. 근육 톤과 자극에 응답을 평가 하 여 적절 한 anesthetization를 확인 합니다.
- 속도 과정에서 호흡의 깊이 확인 합니다. 눈에 마 취에서 건조를 방지 하기 위해 수 의사 연 고를 사용 합니다. 절차는 수술 동안 멸 균 상태 유지 되도록 캐비닛 흐름 경우 것이 좋습니다.
- 수술을 수행 후 깨끗 한 지역에서 액세스 포트에 액체를 주입 하 고 맞은 측면 및 동물의 뒤를 면도. 동물의 온도 떨어지지 않을 것입니다 되도록 열 시스템과 수술 테이블에는 왼쪽된 측면에 가로 위치에 놓습니다.
- 1% 액체 gluconate 솔루션 영역을 치료. 본문의 오른쪽 측면에 피부에 무딘가 위로 작은 잘라 (0.5 c m)를 확인 하 고 분리 그것은 신중 하 게 인접 한 근육 층에서가 위의 도움으로 동물의 뒷면의 전체 지역 소개 수 나중에 잘 분리 되도록 쉽게 액세스 포트입니다. 절차를 수행 하는 데 필요한 자료를 보고 그림 1 을 참조 하십시오.
- 근육 층을 통해 직경 약 1 m m의 작은 절 개를 만들고 삽입 카 테 터와 첫 번째 플라스틱 링의 끝. 복 막 피해 최소화 됩니다.
- 5.0 또는 6.0 비 흡수 성 봉합 사로 봉합 단단히 테, 주변 복 벽. 1 플라스틱 반지 다음 복 막 구멍, 그리고 근육과 피부 사이 다른 안에 위치 해 있습니다. 테 그로 인하여 피하 공간으로 새 어에서 액체를 방지 하기 위해 고정 됩니다.
- 가려움 수 고 동물 수 긁어 그들의 피부를 비트는 피부에 수정 위치를 확보 하지 않고 마우스의 꼬리 쪽으로 피하 공간에 액세스 포트를 삽입 합니다.
- 5.0 또는 6.0 비 흡수 봉합 사를 피부 상처를 닫습니다. 흡입 마 취를 제거 하 고 동물의 식을 복구할 수 있도록. 두지 마십시오 마우스 무인 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지. 완전히 복구 하는 경우 마우스는 다른 동물의 회사를 반환할 수 있습니다.
참고: 실험은 수술 후 회복의 4 ~ 7 일 후 시작할 수 있습니다. - 수술 날에 대 한 식 수의 250 ml에서이 부 프로펜 (20 mg/mL)의 3 mL에 용 해 하 여 진통을 제공 합니다.
- 수술 후 기간 동안 아무 reddened 영역 피부, 억 센 머리카락이 나 상처에는 확인 매일, 동물의 건강 상태를 확인 합니다.
- 동물 (그것은 마비) 없이 꼬리를 한 손으로 액세스 포트와 다른 바늘을 잡아 하 여 액체를 주사. 주입 하기 전에 1% 액체 gluconate 솔루션 영역을 치료. 액세스 포트 (그림 1A)의 실리콘 심장 피어스 대신 부 위해 경사지는 특별 한 바늘 (후버 바늘)을 사용 하는 것이 흥미롭습니다. 40 일 동안 하루 두 주사 복 변경 (그림 3) 관찰에 충분 하다.
- 실험 마무리 때 이산화탄소 질 식 또는 자 궁 경관 탈 구 마우스를 안락사.
2. 5/6 신을 수행 하 고 카 테 터를 삽입
참고: 더 나은 PD 환자에서 상황을 닮은 그것은 잔여 신장 기능만을 허용 하는 5/6 신을 수행할 수 있습니다. 이 경우에, 혈 청 샘플 분석 요소 레벨 250 μ의 얼굴 정 맥을 통해 혈액을 추출 하 여 펑크, 치료 및 동물을 희생 하는 경우에 수술을 시작 하기 전에 적어도 하루에 취해야 한다. 절차는 수술 동안 멸 균 상태 유지 되도록 캐비닛 흐름 경우 것이 좋습니다.
- 단계 1.1에서 isoflurane를 사용 하 여 쥐를 anesthetize.
- 0.1 mg/kg Buprenorphine, 전날과는 수술 당일에 대 한 식 수의 250 ml에서이 부 프로펜 (20 mg/ml)의 3 ml에 용 해 하 여 동물의 목에 피하 주사의 진통 제공.
- 수술을 수행 후 깨끗 한 지역에서 액세스 포트에 액체를 주입 하 고는 패스와 동물의 뒤를 면도.
- 왼쪽, 왼쪽된 신장에 대 한 직접 액세스를 갈비뼈 가까이 피부에 약 0.5 c m의 절 개를 수행 합니다.
- 복 막, 캡슐 및 아드레날린 선 제거에서 왼쪽된 신장 려 근육에 작은 절 개를 엽니다. 캡슐을 제거 하는 더 나은 신장 복 막 구멍 밖에 서 잡아 필요 합니다.
- 점화 하 고는 cauterizer와 함께 신장의 극치를 잘라 (필요한 자료에 대 한 그림 1 참조).
- 신장 복 막 구멍으로 다시 하 고 불용 성 5.0 또는 6.0 봉합으로는 근육과 피부에 상처를 봉합.
- 후, 하루는 완전히 오른쪽 신장 제거 하 고 신장 제거로 같은 절 개를 사용 하 여 카 테 터를 삽입. 또, isoflurane와 마우스를 anesthetize 하 고 수술 직전 Buprenorphine의 0.1 mg/kg을 피하 주사. 또한 식 수 하루 전에 250 ml과는 수술 당일에이 부 프로펜 (20 mg/ml)의 3 ml을 분해.
- 약 0.5 cm의 피부에서 절 개 하 게 그리고가 위의 도움으로 액세스 포트 위치할 공간을 열고 근육에서 동물 뒤 피부를 분리.
- 근육에 상처를 수행 (0.3-0.4에 대 한 cm)를 복 막 구멍 오른쪽 신장 데리고.
- 캡슐과 아드레날린 선 신장에 더 나은 접근을 제거 합니다. 신장 정 맥, 동맥, 및 5.0 또는 6.0 봉합 비 흡수와 ureter ligate 고 신장을 완전히 제거 합니다.
- (1.5 단계) 전에 설명 근육 두 개의 플라스틱 링 사이 유지 해야 하는 카 테 터의 끝을 소개 하는 복 막 근육에 상처 봉합
- 1.6와 1.7 단계에 설명 된 대로 피부를 봉합와 피하 공간으로 액세스 포트를 소개 합니다.
참고: 마우스 복 근육에 상처는 완전히 치유 하 고 액체를 주입 하는 동안 피하 공간으로 누설 될 것입니다 이러한 수술에서 적어도 10 일 동안 휴식 해야 한다. 1.10 단계에서 액체를 주사. - 실험 마무리 때 이산화탄소 질 식 또는 자 궁 경부 전위에 의해 동물 안락사.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
그림 1 프로토콜 섹션에서 설명 하는 절차를 수행 하는 데 필요한 모든 자료를 보여준다. 이 예제에서는 마우스 제출 또는 신 (8 동물 그룹 당) (그림 2) 일반적으로 임상 연습에 사용 하는 두 다른 Pdf의 혼합물에 40 일 (두 주사 하루, 둘 사이의 최소 2 시간 대기) 동안 노출 됐다. Extraneal (icodextrin 기반 PDF) 및 Dianeal (포도 당 기반 PDF). 염 분 솔루션 그룹 제어로 부설 되었다 (n = 6).
마우스 정수 리 복 막 조직 테의 가장 먼 지역에서 얻은 했다. 샘플은 막로 셀 존재와 mesothelial 레이어 보존 (그림 3)의 농축을 비교 하기 위하여 분석 되었다. 이와 관련, 두께 셀 존재 투 석, 동안에 증가 되 고 nephrectomized 그룹에서 악화. Mesothelial 세포는 또한 세포 노조 PD 중 고통 이후 변경 된 형태를 보여줍니다.
혈 청 샘플 3 다른 시간 지점에서 얼굴 정 맥 빵 꾸를 통해 혈액의 250-400 µ L를 추출 하 여 우 레 아 수준 분석 nephrectomized 쥐에서 가져온: 수술, 치료 및 끝점의 중간 전에 1 일. 아니 nephrectomized 마우스의 경우 혈 청 샘플만 끝 지점 (그림 4)에서 얻은 했다. 측정 통합된 화학 시스템 (참조 테이블의 재료)를 사용 하 여 수행 했다. 결과 5/6 신 유도 신부전 상태, 초기 상태와 비교 하는 실험의 과정 ureic 질소 수준 증가 보여줍니다. 또한, 신장은 완전히 기능, ureic 질소 수준 유지 PDF (그림 4)에 드러낸 쥐에도 기저 상태와 비슷합니다.
그림 1 . Nephrectomies 카 테 터 이식의 수술에 필요한 소재. (카 테 터 A)와 (B) 6.0 바늘 비 흡수 봉합, 스테인리스 무딘 포인트 핀셋, 잠금 클램프 (바늘을) 집게와가 위, cauterizer 및 면 면봉을 둔. 재료는 수술 전에 살 균 되어야 한다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 . 사진의 오른쪽 신장 결 찰 및 왼쪽된 신장 극단 제거는 cauterizer와 레코딩. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3 . Masson의 Trichrome 얼룩. 쥐 복 막의 대표적인 사진 (400 X) Pdf + 5/6 신 (신) 없이 Pdf, (신) 없이 염에 노출. 화살표 표시 cellularity의 증가 및 mesothelial 레이어 무결성의 손실. 검은 선은 어디는 기질에 해당 블루 얼룩 복 막의 두께 보여 줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4 . 신 절차 또는 제출 PDF 솔루션에 노출 하는 쥐 그리고 쥐 염 혼자 치료의 혈 청 ureic 질소 수준 (mg/dL). 데이터는 평균 및 표준 편차로 표시 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
"시스템 닫기" 기술을 사용 하 여 PD 변경 분석 첫 번째 게시 된 데이터는 200929 에 수행 되었다. 이 닫기 시스템 전체 장치는 몸 안에 있는 액체 액세스 포트를 통해 바늘으로 주입 됩니다 의미 합니다. 카 테 터를 통해 유체 주입의 장기 동물 모델에서 가장 중요 한 기술 문제는 방해의 발생 이다. 가능한 옵션은 omentectomy 수행 또는 헤 파 린을 복 막 유착을 줄이기 위해 Pdf에 추가. 그럼에도 불구 하 고,는 omentum 방어 기관으로 작동 하 고 헤 파 린, 항 응 혈 약의 효과 제외 하 고 염증 세포 활동, 신생, 세포 외 매트릭스의 합성 및 세포의 확산 과정을 조절 한다. 2009 년에 게시 된 원래 장치의 디자인 나중 액세스 포트의 크기와 액체의 출구를 촉진 하기 위하여 카 테 터의 직경을 조정 이러한 문제를 극복 하기 위해 개선 되었습니다.
동물 모델 질병에 관련 된 경로에 대 한 조치의 타당성과 가능성이 효능 뿐만 아니라 수많은 질병의 진화를 분석 하는 데 필수적입니다. 복 막 유체 주입 마우스 모델 개발 약물 요법 뿐만 아니라 다양 한 병 리, 공부에 대 한 유용할 수 있습니다. 이 모델은 마약의; 장기 문제에 대 한 훌륭한 도구를 제공 합니다. 따라서, 우리는 그것은 다양 한 질병 으로부터 고통 환자의 삶의 질을 향상 시킬 수 있습니다 기대 합니다.
이 실험에 대 한 계정으로 이동 해야 하는 두 가지 문제가 있다. 첫 번째 액체는 복 부에 관리 하지만 PD 환자에서 처럼 제거 되지 않습니다 사실 이다. 우선, 이러한 PD 노출 모델, 목표는 하지 물과 대사 산물을 제거 하는 복 막에 액체의 효과 공부 하는 게 중요 하다. 그럼에도 불구 하 고, 쥐의 PD 연구 있다 액체 제거 모든 시간에 대 한 필요가 이후 소변으로 제거 될 수 있습니다. 사실, 우리는 관찰 남아 신장 분수는 아직도 작동 하기 때문에 5/6 nephrectomized 마우스 edematous 되지 않습니다 그리고 우리가 매일 주사 사이 떠날 시간 소변 관리 볼륨에 충분 하다. 또한, 오일의 추출 것 마비 동물 매일 하 고 개방 이후의 조직 손상, 그것을 배수 하는 복 막 구멍을 포함 하 고 있다. 또 다른 옵션, 카 테 터를 통해 액체를 추출 될 수 있지만 장기를 빨 아 것입니다 그것 때문에 쓰러질 것 이다. 세 번째 옵션은 최근에 출판 된41되었습니다 하지만 긴 치료에 적합 하지 않습니다.
두 번째 문제는 내재 카 테 터 결과42,43를 방해할 수 있는 이물질 반응을 발생할 수 있습니다. 따라서,이 효과 카 테 터의 존재에만 노출 하는 마우스의 복 막에서 연구 했다. 결과 복 막의 두껍게와 삽입 사이트에 새로운 세포의 축적은 나타났다. 그러나,이 반응은 카 테 터 삽입 지점에서 먼 지역에 점차적으로 감소 한다. 카 테 터 맞은편 복 측에 복 막 순진한 컨트롤 마우스 (데이터 표시 되지 않음)의 막으로 동일한 외관을 하고있다. 이러한 이유로, 그것은 형태 변경, 또한 피하 찾을 때 복 벽의 왼쪽된 측면을 분석 하는 것이 중요 합니다 교육 알바.
내재 카 테 터를 사용 하 여 치료, 감염, hemoperitoneum 및 기관 손상의 가능성의 위험 감소의 기간 동안 복 막에 반복된 자국에 대 한 필요성을 피할 수 있습니다. 또한,이 기술은 더 밀접 하 게 인간 환자에서 PDF 주입 절차를 유사합니다. 액체 주입 하는 것입니다, 동물을 완전히 깨어 유지 됩니다. 피부의 선택된 영역을 청소 하 고 액세스 포트만 개최. 따라서 그것에 게 과도 한 스트레스를 일으킬 수 있습니다 결과 방해할 수 있는 마 취에 대 한 필요성을 obviates 동물을 잡아 필요가 있다.
Ferrantelli는 nephrectomies에 대 한 프로토콜에 의하여 첫째로 발행 동부 표준시 제공 2015 년에서40 수술에 대 한 상처의 위치와 활용 소개 오른쪽 신장의 추출에 필요한 절 개를 줄이기 위해 수정 되었습니다 카 테 테 르입니다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
저자 E. Ferrantelli, G. Liappas R. 산체스-디아스와 P5/6 신 프로토콜을 설정 하는 그들의 지원에 대 한 감사. 쥐 배려와 지원에 대 한 ureic 질소 평가, 및 E. Hevia F. 누 녜 스 지원에 대 한 마틴. 이 작품에서 "정부의 드 Economía y Competitividad" SAF2016-80648R 교부 금에 의해 지원 되었다 / Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS)에서 마누엘 로페스-카브 레 라와 PI 15/00598 Fondo Europeo 드 개발 지역 (MINECO/페더)-페더 기금, 하 Abelardo 아길레라입니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Minute Mouse Port 4French with retention beads and cross holes | Access technologies | MMP-4S-061108A | |
| Posi-Grip Huber point needles 25 ga. X 1/2´´ | Access technologies | PG25-500 | |
| High Temperature Cautery Kit | Bovie | 18010-00 | |
| Forane | abbVie | 880393.4 HO | |
| non absorbable suture 6/0 | Laboratorio Agaró | 6121 | |
| Scissors | Fine Science Tools | 14079-10 | |
| forceps | Fine Science Tools | 11002-12 | |
| clamp | Fine Science Tools | 13002-10 | |
| Buprenorphine 0,3 mg/ml | pharmaceutical product | ||
| cotton swabs | pharmaceutical product | ||
| Dalsy (Ibuprofen) 20mg/mL oral suspension | AbbVie S.R.L. | pharmaceutical product |
References
- Meyer, T. W., Hostetter, T. H. Uremia. New England Journal of Medicine. 357 (13), 1316-1325 (2007).
- Pyper, R. A.
- Chaimovitz, C. Peritoneal dialysis. Kidney International. 45 (4), 1226-1240 (1994).
- Aguilera, A., Yanez-Mo, M., Selgas, R., Sanchez-Madrid, F., Lopez-Cabrera, M. Epithelial to mesenchymal transition as a triggering factor of peritoneal membrane fibrosis and angiogenesis in peritoneal dialysis patients. Current Opinion in Investigational Drugs. 6 (3), 262-268 (2005).
- González-Mateo, G. T., et al. Pharmacological modulation of peritoneal injury induced by dialysis fluids: is it an option. Nephrology Dialysis Transplantation. , (2011).
- Mateijsen, M. A., et al. Vascular and interstitial changes in the peritoneum of CAPD patients with peritoneal sclerosis. Peritoneal Dialysis International. 19 (6), 517-525 (1999).
- Williams, J. D., et al. Morphologic changes in the peritoneal membrane of patients with renal disease. Journal of the American Society of Nephrology. 13 (2), 470-479 (2002).
- Dobbie, J. W. Pathogenesis of peritoneal fibrosing syndromes (sclerosing peritonitis) in peritoneal dialysis. Peritoneal Dialysis International. 12 (1), 14-27 (1992).
- Loureiro, J., et al. Blocking TGF-beta1 protects the peritoneal membrane from dialysate-induced damage. Journal of the American Society of Nephrology. 22 (9), 1682-1695 (2011).
- Aroeira, L., et al. Epithelial to mesenchymal transition and peritoneal membrane failure in peritoneal dialysis patients: pathologic significance and potential therapeutic interventions. Journal of the American Society of Nephrology. 18 (7), 2004-2013 (2007).
- Zhang, J., et al. Regulatory T cells/T-helper cell 17 functional imbalance in uraemic patients on maintenance haemodialysis: A pivotal link between microinflammation and adverse cardiovascular events. Nephrology. 15 (1), 33-41 (2010).
- Welten, A. G., et al. Single exposure of mesothelial cells to glucose degradation products (GDPs) yields early advanced glycation end-products (AGEs) and a proinflammatory response. Peritoneal Dialysis International. 23 (3), 213-221 (2003).
- De Vriese, A. S., Tilton, R. G., Mortier, S., Lameire, N. H. Myofibroblast transdifferentiation of mesothelial cells is mediated by RAGE and contributes to peritoneal fibrosis in uraemia. Nephrology Dialysis Transplantation. 21 (9), 2549-2555 (2006).
- Rodela, H., Yuan, Z., Hay, J., Oreopoulos, D., Johnston, M. Reduced lymphatic drainage of dialysate from the peritoneal cavity during acute peritonitis in sheep. Peritoneal Dialysis International. 16 (2), 163-171 (1996).
- Barrell, G. K., McFarlane, R. G., Slow, S., Vasudevamurthy, M. K., McGregor, D. O. CAPD in sheep following bilateral nephrectomy. Peritoneal Dialysis International. 26 (5), (2006).
- Schambye, H. T., et al. Bicarbonate- versus lactate-based CAPD fluids: a biocompatibility study in rabbits. Peritoneal Dialysis International. 12 (3), 281-286 (1992).
- Garosi, G., Gaggiotti, E., Monaci, G., Brardi, S., Di Paolo, N. Biocompatibility of a peritoneal dialysis solution with amino acids: histological evaluation in the rabbit. Peritoneal Dialysis International. 18 (6), 610-619 (1998).
- Elema, J. D., Hardonk, M. J., Koudstaal, J., Arends, A. Acute enzyme histochemical changes in the zona glomerulosa of the rat adrenal cortex. I. The effect of peritoneal dialysis with a glucose 5 percent solution. Acta endocrinologica (Oslo). 59 (3), 508-518 (1968).
- Liard, J. Influence of sodium withdrawal by a diuretic agent or peritoneal dialysis on arterial pressure in one-kidney Goldblatt hypertension in the rat. Pflügers Archives. 344, 109-118 (1973).
- Beelen, R. H., Hekking, L. H., Zareie, M., vanden Born, J.
- Sun, Y., et al. Treatment of established peritoneal fibrosis by gene transfer of Smad7 in a rat model of PD. American Journal of Nephrology. 30 (1), 84-94 (2009).
- Schilte, M. N., et al. Peritoneal dialysis fluid bioincompatibility and new vessel formation promote leukocyte-endothelium interactions in a chronic rat model for peritoneal dialysis. Microcirculation. 17 (4), 271-280 (2010).
- Peng, Y. M., et al. A new non-uremic rat model of long-term peritoneal dialysis. Physiological Research. 60 (1), 157-164 (2011).
- Stavenuiter, A. W., Farhat, K., Schilte, M. N., Ter Wee, P. M., Beelen, R. H. Bioincompatible impact of different peritoneal dialysis fluid components and therapeutic interventions as tested in a rat peritoneal dialysis model. International Journal of Nephrology. 2011, 742196 (2011).
- Loureiro, J., et al. BMP-7 blocks mesenchymal conversion of mesothelial cells and prevents peritoneal damage induced by dialysis fluid exposure. Nephrology Dialysis Transplantation. 25 (4), 1098-1108 (2010).
- Duman, S., et al. Does enalapril prevent peritoneal fibrosis induced by hypertonic (3.86%) peritoneal dialysis solution? Peritoneal Dialysis International. 21 (2), 219-224 (2001).
- Duman, S., et al. Intraperitoneal enalapril ameliorates morphologic changes induced by hypertonic peritoneal dialysis solutions in rat peritoneum. Advances in Peritoneal Dialysis. 20, 31-36 (2004).
- Duman, S., Sen, S., Duman, C., Oreopoulos, D. G. Effect of valsartan versus lisinopril on peritoneal sclerosis in rats. International Journal of Artificial Organs. 28 (2), 156-163 (2005).
- González-Mateo, G. T., et al. Chronic exposure of mouse peritoneum to peritoneal dialysis fluid: structural and functional alterations of the peritoneal membrane. Peritoneal Dialysis International. 29 (2), 227-230 (2009).
- González-Mateo, G. T., et al. Modelos animales de diálisis peritoneal: relevancia, dificultades y futuro. Nefrología. Supl. 6, 17-22 (2008).
- Rodrigues-Diez, R., et al. IL-17A is a novel player in dialysis-induced peritoneal damage. Kidney International. 86 (2), 303-315 (2014).
- Gonzalez-Mateo, G. T., et al. Pharmacological modulation of peritoneal injury induced by dialysis fluids: is it an option. Nephrology Dialysis Transplantation. 27 (2), 478-481 (2012).
- Liappas, G., et al. Immune-Regulatory Molecule CD69 Controls Peritoneal Fibrosis. Journal of the American Society of Nephrology. 27 (12), 3561-3576 (2016).
- Aroeira, L. S., et al. Cyclooxygenase-2 Mediates Dialysate-Induced Alterations of the Peritoneal Membrane. Journal of the American Society of Nephrology. 20 (3), 582-592 (2009).
- Sandoval, P., et al. PPAR-[gamma] agonist rosiglitazone protects peritoneal membrane from dialysis fluid-induced damage. Laboratory Investigation. 90 (10), 1517-1532 (2010).
- Loureiro, J., et al. Tamoxifen ameliorates peritoneal membrane damage by blocking mesothelial to mesenchymal transition in peritoneal dialysis. PLoS One. 8 (4), e61165 (2013).
- Gonzalez-Mateo, G. T., et al. Paricalcitol reduces peritoneal fibrosis in mice through the activation of regulatory T cells and reduction in IL-17 production. PLoS One. 9 (10), e108477 (2014).
- Gonzalez-Mateo, G. T., et al. Rapamycin Protects from Type-I Peritoneal Membrane Failure Inhibiting the Angiogenesis, Lymphangiogenesis, and Endo-MT. BioMed Research International. 2015, 989560 (2015).
- Liappas, G., et al. Nebivolol, a beta1-adrenergic blocker, protects from peritoneal membrane damage induced during peritoneal dialysis. Oncotarget. 7 (21), 30133-30146 (2016).
- Ferrantelli, E., et al. A Novel Mouse Model of Peritoneal Dialysis: Combination of Uraemia and Long-Term Exposure to PD Fluid. Biomed Research International. 2015, 106902 (2015).
- Altmann, C., et al. Early peritoneal dialysis reduces lung inflammation in mice with ischemic acute kidney injury. Kidney International. 92 (2), 365-376 (2017).
- Peters, T., et al. Mouse model of foreign body reaction that alters the submesothelium and transperitoneal transport. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 300 (1), F283-F289 (2011).
- Flessner, M. F., et al. Peritoneal changes after exposure to sterile solutions by catheter. Journal of the American Society of Nephrology. 18 (8), 2294-2302 (2007).
