Summary
Bu makalede farelerde hayvan arka tarafında konumlandırılmış bir erişim bağlantı noktasına bağlı bir mayi kateter, cerrahi yerleşim için yöntem gösterilmektedir. Ayrıca, PD hastalar üremik durumunu benzemeye 5/6 nefrektomi için yordamı açıklar.
Abstract
Periton diyalizi (PD) yönetim ve işlevsel olarak yetersiz böbrekler mümkün değildir su ve toksik metabolitleri boşaltmak için Periton boşluğunda hyperosmotic sıvı posterior kurtarma hakkında tutarlı bir renal replasman tedavisi olduğunu ortadan kaldırmak. Ne yazık ki, bu yordamı Karın zarını bozulur. Doku hasarı yaralanma iyileşmek için iltihabı başlangıcı tetikler. Yaralanma devam ederse ve inflamasyon kronik hale gelir, birçok hastalığın ortak bir olay olduğu için fibrozis, neden olabilir. PD, kronik inflamasyon ve fibrozis, bu olanlar için ilgili diğer belirli işlemleri ile birlikte başarısızlık ve teknik sonraki kesilmesi anlamına gelir Ultrafiltrasyon kapasite bozulmasına yol açar. İnsan örnekleri ile çalışma biyopsi almak için teknik ve etik sınırlamalar bu bozulma sunar ama hakkında bilgi sağlar. Hayvan modelleri bu eksikliklerini aşmak beri bu bozulma çalışma için gerekli olan.
Kronik fare infüzyon manken 2008 yılında hangi geniş mekanizmaları dahil eğitim olasılığını açmadan genetiği değiştirilmiş farelerin faydalanacağını geliştirilmiştir. Bu model fareler, subkutan hayvan arkasına yerleştirilen bir erişim bağlantı noktasına bağlı bir kateter oluşan için tasarlanmış özelleştirilmiş bir aygıt kullanır. Bu yordamı Karın zarını sürekli ponksiyon sırasında uzun süreli deneyler, enfeksiyonlar ve iltihap nedeniyle enjeksiyonları azaltılması önler. Bu model sayesinde, kronik PD sıvı poz tarafından indüklenen periton hasar ile karakterize ve modülasyonlu. Bu teknik büyük miktarlarda sıvı infüzyonu sağlar ve diğer hastalıklar, uyuşturucu veya diğer maddelerin aşılama uzun bir süre içinde gerekli olan çalışma için kullanılabilir.
Bu makale, farelerde kateterin cerrahi yerleşim için yöntem gösterir. Ayrıca, böbrek yetmezliği PD hastalarında mevcut durumunu taklit etmek 5/6 nefrektomi için yordamı açıklar.
Introduction
Böbrek ve böbrek hastalığı
Böbrekler temel organları homeostazı, kan filtrasyon ve hormon üretimi vardır. Böbrek yetmezliği ve sistemik semptomlar nedeniyle böbrek fonksiyon bozuklukları1muhafaza kandaki atık ürünlerin birikimi nedeniyle grubu olarak tanımlanan yükselmeye sonraki başlangıcı neden çeşitli koşullar vardır. Böbrek yetmezliği olduğunda homeostatik yeteneği de etkilenir beri Ayrıca, birim aşırı yük nedeniyle hipertansiyon, kalp yetmezliği1' e yol açabilir gibi da tehlikeli ile oluşabilir. Böbreklerde fonksiyonel kapasitesini daha az % 10-% 15'ten, ne zaman hasta tedavi aşağıdaki seçeneklerden birini geçmeleri gerekir: hemodiyaliz, periton diyalizi (PD) veya böbrek nakli.
PD hastalar tedavi böylece sık hastane ihtiyacını kaçınarak rahatlık evlerinin veya neredeyse her yerde, ziyaret ve kalır devam sağlar ilginç bir seçenektir. PD tekniği küçük zehirli moleküller ve aşırı su vücut2 ile korumak bir ozmotik sıvı (Periton Diyaliz sıvısı, PDF) tarafından oluşturulan periton boşluğuna ortadan kaldırır. Bu korumak solutes ve periton kılcal ve PDF, Ultrafiltrasyon (UF) bilinen bir işlem arasında su alışverişi için gerekli ozmotik degrade oluşturur.
Peritoneal yaralanma periton diyalizi tarafından indüklenen
Periton boşluğuna mesothelial hücreler de kaç kan damarları, fibroblastlar, makrofajlar ve diğer hücre popülasyonlarının evler bir matris üzerinde dinlenme monolayer oluşan bir membran (PM) kaplıdır. Ne yazık ki, peritoneal membran her zaman apoptozis ve mesothelial hücreler kaybı, mesothelial (MMT) ve (bitiş-MT) endotel hücreleri, inflamatuar hücre alımı mezenkimal geçiş gibi PD tedavisi sırasında bazı değişikliklere uğrar ve fibrocytes, vasküler değişiklikler, anjiogenez, lymphangiogenesis ve/veya fibrozis3,4,5,6,7,8,9. Bu değişiklikleri için hangi hasta (hemodiyaliz ya da böbrek nakli) hayatta kalmak için alternatif tedavi alması gereken gerektiren tedavisinin devamı önleyen bir UF kapasitesi hatası10, geliştirme sorumlu . Bu nedenle, bu hastalar için bu gecikme veya periton bu değişiklikleri gelişimi denetlemek için esastır.
Bu iltihap11yalnız yükselmeye neden olabilir, ancak PDF bioincompatibility en önemli yerel faktördür spekülasyonlar. Çoğu PDF'ler glikoz inflamasyon nedenleri ozmotik aracı kullanın. PDF depolama kez ve sterilizasyon, nedeniyle glikoz yıkımı süreci uğrar ve bu reaksiyon yeni ürünleri üreten daha fazla inflamasyon,12,13MMT ve Apoptozis görünür. Ayrıca, ayrıca korumak yöntemi nedeniyle mekanik hasar olasılığı mevcuttur. Tüm bu faktörler sürekli olarak hareket, kronik inflamasyon zarı bozulma ve UF başarısızlık için kesin, sürücüler, önde gelen bir kalıcı ve tekrarlayan inflamatuar durumu oluşturabilir. Bu hasar nasıl azaltılmış veya kaçınılması hala çalışma meselesi.
Lezyonlar gelişimi analiz: hayvan modelleri için insan örneklerinden
Çalışma insan biyopsi ile doku örneği almak üzere zorluk nedeniyle kısıtlayıcı bir faktör olduğunu. Bu örnekler yalnızca kateter arıza veya nakli, PD tedavisi yıl sonra genellikle nedeniyle gerçekleştirilen ameliyatlar elde edilebilir. Bu yaklaşım patolojik değişiklikler PDF'ye maruz bir peritoneal membran uğradığı analizi için yararlıdır, ancak süreç geliştirme çalışması için yeterli değildir. Başka bir olasılık Diyaliz Atık süzülmüş hücreleri analiz etmek, ama bu yine de tam bir senaryo sağlamak başarısız. Her iki teknik birleştirme sadece hayvan modelleri ile mümkün olur. Periton yapısı memeliler arasında benzer ve bu nedenle farklı hayvan türleri ile modelleri vardır. Birkaç çalışma koyun (Rodela vd dayalı vardır 14 ve Barrell vd. 15) ve tavşan16,17 modelleri; Ancak, onlar eve kolaydır ve korumak hem de daha ekonomik olarak daha küçük hayvanlar tercih edilir. Kullanma fare18,19,20,21,22,23,24 gözlemlemek için gerekli daha kısa bir tedavi süresi sunuyor Morfo fonksiyonel değişiklikler. Örnek BMP-7 (kemik morphogenic protein-7)25 anti-fibrotik ilaçların etkisi gibi farklı konular ve26,27 hedefleme RAS (renin-anjiyotensin sistem) keşfetmek için çok kullanışlı bir model temsil etmiştir , 28.
Ancak, fare modeli birçok yararları ile ideal bir model olarak diğerleri üzerinde ortaya çıkmıştır. Genetik olarak kullanma imkanı periton hasar moleküler ve hücresel temeli çalışmaya fareler değişikliğin en ilginç avantajdır. Aslında, fareler kez olduğu gibi birçok farklı suşları çeşitli tanınmış genetik kökenli çok sayıda hastalıklar, analiz için istihdam edilmektedir. Diğer avantajı düşük alan deneyler (nedeniyle hayvanların daha küçük boyutu), kullanım kolaylığı, reaktifler kullanılabilirliğini ve fareler farklı suşları kullanılabilir bilgi artan miktarda konut, düşük maliyet için gerekli içerir Onlar en yaygın olarak kullanılan araştırma hayvanlarda beri.
Yerleştirilmiş bir aygıt istihdam bir fare tabanlı model PD29,30için en yeni kurulan model olmuştur ve PD hastaların maruz PDF'lere nedeniyle uğradığı periton bozulma taklit etmek için gösterilmiştir. Bu model patolojik süreçler31,32,33karıştığı anlamak için işbirliği vardır. Ayrıca, bu bağışıklık modülatörler ve anti-inflamatuar ilaçlar ve diğer anti-fibrotik kullanarak bozulma ve anti-anjiogenik acentaları, COX-2 (siklooksijenaz-2) inhibitörleri gibi ameliorating için çeşitli olası tedaviler doğrulamak için kullanılmıştır 34, PPAR-γ (peroxisome proliferatör-aktive reseptör-γ) agonistler35, tamoksifen36, Paricalcitol (Bu bağışıklık reaksiyon gelen bir vitamin D reseptör aktivatör)37, Rapamycin38 ve Nebivololün 39.
Yerleştirilmiş bir kateter ile fare modeli geliştirmek
Bu model, mümkün olduğu kadar küçük hayvanlarda PD genişletilmiş tedaviler gerçekleştirmek için izin veren insan PD hastalarında tekniği kullanılan benzemeye hedeftir. Şimdiye kadar farelerde üç teknikleri içine Periton Diyaliz sıvı korumak için test edilmiştir. İlki, kör ön delik karın duvarı, tartışmalı periton hasar gibi tabi olabilir birden fazla riskleri nedeniyle kanama ve körü körüne gerçekleştirilen, visseral delik olduğu gibi. "Sıvı enjekte için cihazın gövde dışında yerleştirildiği sözde açık kalıcı sistemi", ikinci tekniğidir. Bu yordam en insanlarda gerçekleştirilen benzer. Ancak, enfeksiyon olasılığını artırabilir gibi uzun süreli deneyler, gelişimine izin vermez ve genellikle sonuçları ile girişime neden olabilir PDF aşılamak için anestezi kullanımını gerektirir. "Kapalı sistem" üçüncü tekniğidir. Bu yaklaşım ile sıvı korumak için kullanılan tüm cihaz hayvanın vücudunun içinde yer alır. Sıvı subkutan yerleştirilir bir erişim bağlantı noktası üzerinden iğneyle enjekte edilir. Bu yordamı peritonal enfeksiyon ve kanama gibi anestezi ihtiyacını riskini azaltır.
PD yükselmeye etkisini incelemek için son fare modeli de olmuştur kateter ile PDF infüzyon modelini temel40 stablished. Bu model bir nefrektomi böylece renal fonksiyon azaltarak farelerde, gerçekleştirmek için bir roman tekniği getiriyor. Bugünkü yazıda, Ferrantelli ve ark. tarafından 201540 istihdam protokolü bir değişiklik geliştirmiştir. Bu yeni iletişim kuralı kateter implantasyon sırasında yapılmış, ameliyat sırasında verdirdiler yara uzunluğunu azaltır ve böbrekler için erişimi kolaylaştırır sağlar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm yöntem tanımlamak burada kurumsal hayvan bakım ve moleküler biyoloji merkezi Severo Ochoa (Madrid, İspanya) kullanım Komitesi tarafından onaylanmış olması.
Not: 12-14 hafta yaşlı ve çalışma başlangıcında yaklaşık 20 gr ağırlığında C57BL/6J dişi fareler kullanıldı. Bütün hayvanlar standart koşullar altında yer alan ve gıda ve su ad libitumverildi. Sağlık koşulları her gün kontrol edildi. Eldiven, örtüsü, kateter, dikiş ve iğneler, gibi gerekli malzeme steril olmalıdır.
1. kateter yerleştirme
Not: böbrekler kaldırılmaz yükselmeye, böylece yalıtım modunda PDF pozlama çalışmanın erişimine izin verme etkisini dikkate almaz böylece onlar tamamen işlevsel kalır. Ameliyat sadece kateterin distal aşırı periton boşluğuna tanıtılması ve bu erişim sağlayan hayvan, arkası erişim bağlantı noktası yerleştirerek oluşur. Kateteri yerleştirmek için bu yordamı aşağıdaki gibidir:
- Fareyi bir indüksiyon odasında yerleştirin ve % 4 isoflurane ve oksijen 0,4 L/dak debi ile düzeltilmesi refleks kaybı kadar kullanarak anestezi sağlayın.
- Anestezi cihazı bağlı bir nosecone tüp sayesinde % 100 oksijen 0,3 L/min bir akışı ile % 2 isoflurane hayvanla korumak. Uygun anesthetization kas tonu ve stimülasyon yanıtı değerlendirirken onaylayın.
- Oranı ve bütün işlemi sırasında solunum derinliği kontrol edin. Veteriner merhem gözünü kuruluk anestezi iken altında engellemek için kullanın. Ameliyat sırasında steril koşullar bakım sağlamak için kabine akışı işlemleri yapılırsa tercih edilir.
- Sağ kanadı ve hayvanlar arkası ameliyatı gerçekleştirmek için ve daha sonra temiz bir alanda erişim noktasında sıvı enjekte etmek için tıraş. Hayvan cerrahi tablo, sıcaklık düşmeyecek olacaktır emin olmak için termal sistemi ile onun sol kanatta dinlenme bir lateral pozisyonda yerleştirin.
- Alanının % 1 KLORHEKSİDİN GLUKONAT çözüm ile dezenfekte. Küçük bir kesim (0.5 cm) içinde belgili tanımlık deri vücudun sağ kanatta künt makas ile kesme yapmak ve böylece arkadaki hayvan bütün alan de daha sonra tanıtmak edebilmek için ayrılmış dikkatle bitişik kas katmanı, bir makas yardımıyla ayrı erişim kolaylığı ile bağlantı noktası. İzlemek belgili tanımlık prosedür için gerekli malzemeleri görmek için Şekil 1 referans lütfen.
- Kas katmanı yoluyla çapındadır yaklaşık 1 mm küçük bir kesi yapmak ve kateter ve ilk plastik halka ucu yerleştirin. Periton hasarları en az düzeydedir.
- Kateter çevresinde sıkıca periton Duvar ile 5.0 veya 6.0 absorbe olmayan dikiş dikiş. Bir plastik halka sonra periton boşluğuna, diğeri de kas ve deri arasında yer alır. Kateter böylece sıvı subkutan uzaya sızıntı önlemek için sabittir.
- Erişim bağlantı noktası bu cilt için bir düzeltme konumuna kaşıntı ve hayvanlar çizilmeye ve onların deri biraz güvence olmadan fare kuyruğu doğru subkutan boşluk ekleyin.
- 5.0 veya 6.0 absorbe olmayan dikiş ile cilt yara kapatın. İnhalasyon anestezi kaldırmak ve hayvan bilinç kurtarmak izin verir. Sternal recumbency korumak için yeterli kendine geldi kadar fareyi sahipsiz bırakmayın. Ne zaman tamamen iyileşti, fare diğer hayvanlar şirkete iade edilebilir.
Not: Deneyler ameliyat sonrası kurtarma 4-7 gün sonra başlayabilirsiniz. - Analjezi ibuprofen (20 mg/mL) 3 mL çözülerek ameliyat günü için 250 mL içme suyu sağlar.
- Ameliyat sonrası dönemde, cilt, Kıllı saç veya yaralar hiç kızarmış alanı kontrol sağlık durumunu günlük, hayvan kontrol edin.
- Hayvan (anesthetizing olmadan) kuyruğundan tutup tek elle erişim bağlantı noktası ve diğer iğneyle kapma sıvı enjekte. Alanının % 1 KLORHEKSİDİN GLUKONAT çözüm önce enjeksiyon ile dezenfekte. Pierce yerine silikon septum erişim noktasının (Şekil 1A) bölüm için eğimli özel iğneler (Huber iğneler), kullanmak ilginçtir. 40 gün boyunca günde iki enjeksiyonları periton değişiklikler (Şekil 3) gözlemlemek için yeterlidir.
- Deneme tamamlanırken, karbon dioksit boğulma veya servikal çıkması fareyle ötenazi.
2. performans 5/6 nefrektomi ve kateter yerleştirme
Not: daha iyi durum PD hastalarında benzemek için yalnızca bir kalıntı renal işlevi sağlayan bir 5/6 yapılmış gerçekleştirileceği mümkündür. Bu durumda, serum numuneleri kan yüz damar yolu ile 250 μL ayıklanıyor tarafından düzeyleri ponksiyon, tedavi ve hayvanlar ödün orta ameliyatlar başlamadan önce en az bir gün üre analiz etmek için alınmalıdır. Ameliyat sırasında steril koşullar bakım sağlamak için kabine akışı işlemleri yapılırsa tercih edilir.
- Fareler isoflurane adım 1.1 olduğu gibi kullanarak anestezi.
- 0.1 mg/kg buprenorfin, subkutan boyun hayvan ve ibuprofen (20 mg/ml) 3 ml eriterek tarafından içme suyu 250 ml enjekte bir gün önce ve ameliyat günü için analjezi sağlar.
- Laterallerin ve hayvanlar arkası ameliyatlar gerçekleştirmek için ve daha sonra temiz bir alanda erişim noktasında sıvı enjekte etmek için tıraş.
- Sol böbrek doğrudan erişimi için kaburga, yakın sol tarafındaki deride bir kesi yaklaşık 0.5 cm gerçekleştirin.
- Küçük bir insizyon attım kapsül ve böbrek üstü bezi izale periton, dışarı sol böbrek almaya kas açın. Kapsül kaldırmak için daha iyi böbrek peritoneal kavite dışında tutmak gereklidir.
- Yakmak ve bir cauterizer böbrekle aşırı kesti (malzeme ihtiyaç için Şekil 1 bakınız).
- Böbrek periton boşluğuna reintroduce ve kas ve deri yaraları ile çözünmez 5.0 veya 6.0 dikiş dikerim.
- Bir gün sonra tamamen sağ böbrek çıkarın ve böbrek kaldırmak için aynı kesi kullanarak kateter takın. Yine, fare ile isoflurane anestezi ve subkutan 0.1 mg/kg buprenorfin cerrahi işlem hemen önce enjekte. Ayrıca 3 ml ibuprofen (20 mg/ml) içme suyu önceki gün 250 ml ve ameliyat günü geçiyoruz.
- Bir kesik yaklaşık 0.5 cm cilt içinde yapmak ve makas yardımı ile cilt hayvan arka kas erişim bağlantı noktası yerleştirileceği yer açmak için ayrı.
- Kas bir kesim gerçekleştirmek (0.3-0.4 konuda cm) dışarı periton boşluğuna doğru böbrek almaya.
- Kapsül ve böbrek üstü bezi böbrek daha iyi erişimi için kaldırın. Böbrek damar, arter ve üreter absorbe olmayan 5.0 veya 6.0 dikiş ile ligate ve böbrek tamamen kaldırın.
- Periton kas böylece kas iki plastik halkalar arasında kalmalıdır kateter sonu (adım 1.5) daha önce de açıklandığı gibi tanıtan, yaranın dikiş.
- Erişim bağlantı noktası subkutan uzaya tanıtmak ve 1,6 ve 1.7 adımlarda açıklandığı gibi deri dikiş.
Not: Fareler periton kas yaralar tamamen iyileşti ve sıvı enjekte ederken hiçbir sızıntı subkutan uzaya olacak emin olmak için bu ameliyatlar için en az 10 gün dinlenmek. Adım 1,10 olduğu gibi sıvı enjekte. - Deneme tamamlanırken, karbon dioksit boğulma veya servikal çıkması hayvanlara ötenazi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Şekil 1 Protokolü bölümünde açıklanan yordamları izlemek için gerekli tüm malzemeleri gösterir. Bu örneğin, gönderilmiş fareler veya değil nefrektomi (grup başına 8 hayvanlar) (Şekil 2) 40 gün (günlük, iki enjeksiyon her ikisi arasında en az 2 saat bekleyen) sırasında klinik pratikte yaygın olarak kullanılan iki farklı PDF'ler karışımı sinin: EXTRANEAL (PDF icodextrin tabanlı) ve Dianeal (glikoz tabanlı PDF). Serum fizyolojik solüsyonu ile bir grup denetimi olarak stablished oldu (n = 6).
Fareler parietal periton doku kateter en uzak alanından elde edilmiştir. Örnekleri kalınlaşma membran, hem de hücre varlığı ve mesothelial katman koruma (Şekil 3) karşılaştırmak üzere analiz edildi. Bu bağlamda, kalınlık ve hücre varlığı diyaliz sırasında arttı ve nephrectomized grubunda ağırlaştırılmış. Mesothelial hücreler de değişmiş bir morfoloji gösterilmeye devam PD sırasında hücreler arası sendikalar acı.
Üre düzeyi 250-400 µL kan yolu ile üç farklı noktalarda zaman-yüz ven ponksiyon ayıklayarak analiz etmek için nephrectomized fareler üzerinden elde edilen serum numuneleri: bir gün önce ameliyat, tedavi ve bitiş noktası orta. Nephrectomized hiçbir fare söz konusu olduğunda, serum numuneleri yalnızca bitiş noktası (Şekil 4) elde edilmiştir. Ölçümler bir entegre Kimya sistemi (bkz: Malzemeler tablo) kullanılarak yapıldı. Sonuçlar bu 5/6 nefrektomi başlangıç durumu ile karşılaştırma deneme süresince ureic nitrojen seviyesi artan üremik bir devlet indüklenen gösterir. Ayrıca, böbrekler tamamen işlevsel olduğunda, ureic nitrojen seviyesi benzer bazal durumda bile fareler PDF (Şekil 4) maruz kalır.
Resim 1 . Nephrectomies ve kateter implantasyon ameliyatları için gerekli malzeme. (A) kateter ve iğne (B) 6.0 absorbe olmayan dikiş, paslanmaz çelik kör nokta cımbız, kilitleme kelepçe forseps (iğne tutmak için) ve künt makas, cauterizer ve pamuk temizleme bezi. Önce ameliyat malzemeleri sterilize edilmiştir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Resim 2 . Sağ böbrek ligasyonu ve cauterizer ile yanan tarafından sol böbrek aşırı kaldırma resimlerini. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3 . Masson'ın Trichrome boyama. Temsilcisi resimleri (400 X) fare peritoneal membran PDF'ler + 5/6 nefrektomi, PDF (olmadan nefrektomi) ve (olmadan nefrektomi) tuzlu çözüm maruz. Oklar cellularity artması ve mesothelial katman bütünlüğü kaybı gösterir. Siyah çizgiler nerede mavi boyama karşılık gelen hücre dışı matriks peritoneal membran kalınlığı göster. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4 . Serum ureic nitrojen seviyesi (mg/dL) PDF çözümleri gönderilmiş, ya da nefrektomi yordamı için maruz fareler ve fareler tuzlu çözüm yalnız tedavi. Verileri ortalama ve standart sapma temsil edilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
İlk yayımlanan veri PD değişiklikler "sistemi Kapat" tekniği kullanarak Analizi 200929 gerçekleştirildi. Yakın bu sistem tüm cihaz gövdesi içinde yer alır ve sıvı bir erişim bağlantı noktası üzerinden iğneyle enjekte edilir demektir. En önemli teknik bir kateter ile sıvı infüzyonu uzun vadeli hayvan modellerinde tıkanıklığı geçtiği bir sorundur. Olası seçenekler omentectomy gerçekleştirmek veya heparin periton yapışıklıklar azaltmak için PDF'ye eklemek üzeresiniz. Yine de, omentumun bir savunma organ davranır ve heparin, antikoagülan etkileri dışında inflamatuar hücrelerin aktivitesi, anjiogenez, hücre dışı matriks sentezi ve hücrelerin çoğalması gibi süreçleri modüle. 2009 yılında yayınlanan özgün aygıt tasarımını daha sonra erişim bağlantı noktası sildiyseniz ve sıvı çıkış kolaylaştırmak için kateter çapını ayarlayarak bu sorunların üstesinden gelmek için geliştirildi.
Hayvan modelleri çok sayıda hastalıkların evrimi, hem de yolları hastalıklarında dahil üzerinde gerçekleştirilen eylem fizibilite ve potansiyel etkinliğini analiz etmek için gereklidir. Peritoneal sıvı infüzyon fare modeli patolojiler geniş bir eğitim için yanı sıra gelişmekte olan ilaç tedavileri yararlı olabilir. Bu model ilaçların uzun vadede korumak için mükemmel bir araçtır; Bu nedenle, beklediğimiz çeşitli hastalıklardan muzdarip hastaların yaşam kalitesini artırmaya yardımcı olabilir.
Bu deneyler için dikkate alınması gereken iki konu vardır. İlk sıvı karın yönetilen ama değil PD hastalarında çıkarmak gibi gerçektir. Her şeyden önce bu PD-pozlama modelleri, amaç sıvı etkileri su ve metabolitleri kaldırmak değil Karın zarını üzerinde çalışmaya nerede olduğunu unutmamak gerekir. Yine de, farelerde PD etütler gerek yoktur her zaman sıvı kaldırılmak beri idrar ile ortadan kaldırılabilir. Aslında, kalır böbrek kesir hala işlevsel olduğu için 5/6 nephrectomized fareler ödemli olmazlar ve biz günlük enjeksiyonları arasında bırakmak zaman yönetilen birimin işemek için yeterli gözlemledim. Ayrıca, sıvı ekstraksiyon hayvan her gün anesthetizing ve sonraki doku hasarı ile boşaltmak için periton boşluğuna açılması söz konusu olacaktır. Başka bir seçenek kateter aracılığıyla sıvı ayıklamak için olabilir, ama organları berbat olacak çünkü çökerdi. Üçüncü bir seçenek kısa bir süre önce41oldu ama uzun tedaviler için uygun değildir.
Kalıcı kateter ile sonuçları42,43engelleyebilir bir yabancı cisim tepki neden olabilir ikinci konudur. Bu nedenle, bu etkiyi sadece kateter varlığı maruz fare peritoneal membran incelenmiştir. Sonuçları Karın zarını kalınlaştırma ve yeni hücre ekleme alanında birikimi olduğunu gösterdi. Ancak, bu tepki kateter ekleme noktasından uzak alanlarda giderek azalır. Peritoneal membran periton kateteri ters tarafında bir saf kontrol fare (veri gösterilmez) membran olarak aynı görünüme sahip. Bu nedenle, aynı zamanda kaçınarak morfolojik değişiklikler için bakıldığında sol tarafındaki periton duvar analiz önemlidir linea alba.
Bir kalıcı kateter kullanımı böylece enfeksiyon, hemoperitoneum ve bir organ zarar olasılığı riskini azaltarak tedavi süresi boyunca karın zarını içinde tekrarlanan delikler engeller. Ayrıca, bu teknik daha yakından PDF korumak yordam insan hastalarda benzer. Sıvı enjekte edilir, hayvan tamamen uyanık kalır. Seçili alanı cilt temizlenir ve yalnızca erişim bağlantı noktası düzenlenmektedir. Bu nedenle, aşırı stres neden olabilir ve sonuçları ile girişime neden olabilir anestezi ihtiyacını namussuz hayvan tutmak gereksizdir.
İletişim kuralı nephrectomies için öncelikle Ferrantelli tarafından yayınlanan et at. 2015 yılında40 cerrahi yara alan ve belgili tanımlık kesme tanıtmak için sağ böbrek çıkarılması için gerekli çekme avantajı azaltmak için değiştirildi kateter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Yazarlar E. Ferrantelli ve G. Liappas R. Sánchez Díaz ve P5/6 nefrektomi iletişim kuralları ayarlanıyor verdikleri destek için teşekkür ederiz. Martin hakkında yardım almak için ureic azot değerlendirmeler ve E. Hevia ve F. Núñez fareler bakımı konusunda yardım almak için. Bu eser "" gayri resmi "de Economía y Competitividad" gelen hibe SAF2016-80648R tarafından desteklenen / Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS) üzerinden Fondo Europeo de Desarrollo bölge (MINECO/FEDER) Manuel López-Cabrera ve PI 15/00598-FEDER fonları için Abelardo Aguilera.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Minute Mouse Port 4French with retention beads and cross holes | Access technologies | MMP-4S-061108A | |
| Posi-Grip Huber point needles 25 ga. X 1/2´´ | Access technologies | PG25-500 | |
| High Temperature Cautery Kit | Bovie | 18010-00 | |
| Forane | abbVie | 880393.4 HO | |
| non absorbable suture 6/0 | Laboratorio Agaró | 6121 | |
| Scissors | Fine Science Tools | 14079-10 | |
| forceps | Fine Science Tools | 11002-12 | |
| clamp | Fine Science Tools | 13002-10 | |
| Buprenorphine 0,3 mg/ml | pharmaceutical product | ||
| cotton swabs | pharmaceutical product | ||
| Dalsy (Ibuprofen) 20mg/mL oral suspension | AbbVie S.R.L. | pharmaceutical product |
References
- Meyer, T. W., Hostetter, T. H. Uremia. New England Journal of Medicine. 357 (13), 1316-1325 (2007).
- Pyper, R. A.
- Chaimovitz, C. Peritoneal dialysis. Kidney International. 45 (4), 1226-1240 (1994).
- Aguilera, A., Yanez-Mo, M., Selgas, R., Sanchez-Madrid, F., Lopez-Cabrera, M. Epithelial to mesenchymal transition as a triggering factor of peritoneal membrane fibrosis and angiogenesis in peritoneal dialysis patients. Current Opinion in Investigational Drugs. 6 (3), 262-268 (2005).
- González-Mateo, G. T., et al. Pharmacological modulation of peritoneal injury induced by dialysis fluids: is it an option. Nephrology Dialysis Transplantation. , (2011).
- Mateijsen, M. A., et al. Vascular and interstitial changes in the peritoneum of CAPD patients with peritoneal sclerosis. Peritoneal Dialysis International. 19 (6), 517-525 (1999).
- Williams, J. D., et al. Morphologic changes in the peritoneal membrane of patients with renal disease. Journal of the American Society of Nephrology. 13 (2), 470-479 (2002).
- Dobbie, J. W. Pathogenesis of peritoneal fibrosing syndromes (sclerosing peritonitis) in peritoneal dialysis. Peritoneal Dialysis International. 12 (1), 14-27 (1992).
- Loureiro, J., et al. Blocking TGF-beta1 protects the peritoneal membrane from dialysate-induced damage. Journal of the American Society of Nephrology. 22 (9), 1682-1695 (2011).
- Aroeira, L., et al. Epithelial to mesenchymal transition and peritoneal membrane failure in peritoneal dialysis patients: pathologic significance and potential therapeutic interventions. Journal of the American Society of Nephrology. 18 (7), 2004-2013 (2007).
- Zhang, J., et al. Regulatory T cells/T-helper cell 17 functional imbalance in uraemic patients on maintenance haemodialysis: A pivotal link between microinflammation and adverse cardiovascular events. Nephrology. 15 (1), 33-41 (2010).
- Welten, A. G., et al. Single exposure of mesothelial cells to glucose degradation products (GDPs) yields early advanced glycation end-products (AGEs) and a proinflammatory response. Peritoneal Dialysis International. 23 (3), 213-221 (2003).
- De Vriese, A. S., Tilton, R. G., Mortier, S., Lameire, N. H. Myofibroblast transdifferentiation of mesothelial cells is mediated by RAGE and contributes to peritoneal fibrosis in uraemia. Nephrology Dialysis Transplantation. 21 (9), 2549-2555 (2006).
- Rodela, H., Yuan, Z., Hay, J., Oreopoulos, D., Johnston, M. Reduced lymphatic drainage of dialysate from the peritoneal cavity during acute peritonitis in sheep. Peritoneal Dialysis International. 16 (2), 163-171 (1996).
- Barrell, G. K., McFarlane, R. G., Slow, S., Vasudevamurthy, M. K., McGregor, D. O. CAPD in sheep following bilateral nephrectomy. Peritoneal Dialysis International. 26 (5), (2006).
- Schambye, H. T., et al. Bicarbonate- versus lactate-based CAPD fluids: a biocompatibility study in rabbits. Peritoneal Dialysis International. 12 (3), 281-286 (1992).
- Garosi, G., Gaggiotti, E., Monaci, G., Brardi, S., Di Paolo, N. Biocompatibility of a peritoneal dialysis solution with amino acids: histological evaluation in the rabbit. Peritoneal Dialysis International. 18 (6), 610-619 (1998).
- Elema, J. D., Hardonk, M. J., Koudstaal, J., Arends, A. Acute enzyme histochemical changes in the zona glomerulosa of the rat adrenal cortex. I. The effect of peritoneal dialysis with a glucose 5 percent solution. Acta endocrinologica (Oslo). 59 (3), 508-518 (1968).
- Liard, J. Influence of sodium withdrawal by a diuretic agent or peritoneal dialysis on arterial pressure in one-kidney Goldblatt hypertension in the rat. Pflügers Archives. 344, 109-118 (1973).
- Beelen, R. H., Hekking, L. H., Zareie, M., vanden Born, J.
- Sun, Y., et al. Treatment of established peritoneal fibrosis by gene transfer of Smad7 in a rat model of PD. American Journal of Nephrology. 30 (1), 84-94 (2009).
- Schilte, M. N., et al. Peritoneal dialysis fluid bioincompatibility and new vessel formation promote leukocyte-endothelium interactions in a chronic rat model for peritoneal dialysis. Microcirculation. 17 (4), 271-280 (2010).
- Peng, Y. M., et al. A new non-uremic rat model of long-term peritoneal dialysis. Physiological Research. 60 (1), 157-164 (2011).
- Stavenuiter, A. W., Farhat, K., Schilte, M. N., Ter Wee, P. M., Beelen, R. H. Bioincompatible impact of different peritoneal dialysis fluid components and therapeutic interventions as tested in a rat peritoneal dialysis model. International Journal of Nephrology. 2011, 742196 (2011).
- Loureiro, J., et al. BMP-7 blocks mesenchymal conversion of mesothelial cells and prevents peritoneal damage induced by dialysis fluid exposure. Nephrology Dialysis Transplantation. 25 (4), 1098-1108 (2010).
- Duman, S., et al. Does enalapril prevent peritoneal fibrosis induced by hypertonic (3.86%) peritoneal dialysis solution? Peritoneal Dialysis International. 21 (2), 219-224 (2001).
- Duman, S., et al. Intraperitoneal enalapril ameliorates morphologic changes induced by hypertonic peritoneal dialysis solutions in rat peritoneum. Advances in Peritoneal Dialysis. 20, 31-36 (2004).
- Duman, S., Sen, S., Duman, C., Oreopoulos, D. G. Effect of valsartan versus lisinopril on peritoneal sclerosis in rats. International Journal of Artificial Organs. 28 (2), 156-163 (2005).
- González-Mateo, G. T., et al. Chronic exposure of mouse peritoneum to peritoneal dialysis fluid: structural and functional alterations of the peritoneal membrane. Peritoneal Dialysis International. 29 (2), 227-230 (2009).
- González-Mateo, G. T., et al. Modelos animales de diálisis peritoneal: relevancia, dificultades y futuro. Nefrología. Supl. 6, 17-22 (2008).
- Rodrigues-Diez, R., et al. IL-17A is a novel player in dialysis-induced peritoneal damage. Kidney International. 86 (2), 303-315 (2014).
- Gonzalez-Mateo, G. T., et al. Pharmacological modulation of peritoneal injury induced by dialysis fluids: is it an option. Nephrology Dialysis Transplantation. 27 (2), 478-481 (2012).
- Liappas, G., et al. Immune-Regulatory Molecule CD69 Controls Peritoneal Fibrosis. Journal of the American Society of Nephrology. 27 (12), 3561-3576 (2016).
- Aroeira, L. S., et al. Cyclooxygenase-2 Mediates Dialysate-Induced Alterations of the Peritoneal Membrane. Journal of the American Society of Nephrology. 20 (3), 582-592 (2009).
- Sandoval, P., et al. PPAR-[gamma] agonist rosiglitazone protects peritoneal membrane from dialysis fluid-induced damage. Laboratory Investigation. 90 (10), 1517-1532 (2010).
- Loureiro, J., et al. Tamoxifen ameliorates peritoneal membrane damage by blocking mesothelial to mesenchymal transition in peritoneal dialysis. PLoS One. 8 (4), e61165 (2013).
- Gonzalez-Mateo, G. T., et al. Paricalcitol reduces peritoneal fibrosis in mice through the activation of regulatory T cells and reduction in IL-17 production. PLoS One. 9 (10), e108477 (2014).
- Gonzalez-Mateo, G. T., et al. Rapamycin Protects from Type-I Peritoneal Membrane Failure Inhibiting the Angiogenesis, Lymphangiogenesis, and Endo-MT. BioMed Research International. 2015, 989560 (2015).
- Liappas, G., et al. Nebivolol, a beta1-adrenergic blocker, protects from peritoneal membrane damage induced during peritoneal dialysis. Oncotarget. 7 (21), 30133-30146 (2016).
- Ferrantelli, E., et al. A Novel Mouse Model of Peritoneal Dialysis: Combination of Uraemia and Long-Term Exposure to PD Fluid. Biomed Research International. 2015, 106902 (2015).
- Altmann, C., et al. Early peritoneal dialysis reduces lung inflammation in mice with ischemic acute kidney injury. Kidney International. 92 (2), 365-376 (2017).
- Peters, T., et al. Mouse model of foreign body reaction that alters the submesothelium and transperitoneal transport. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 300 (1), F283-F289 (2011).
- Flessner, M. F., et al. Peritoneal changes after exposure to sterile solutions by catheter. Journal of the American Society of Nephrology. 18 (8), 2294-2302 (2007).
