Summary
تسجيل الضغط إينتراكافيرنوسال (برنامج المقارنات الدولية) وسيلة هامة لتقييم وظيفة الانتصاب الحيوانات التجريبية. هنا، يتجلى بروتوكول مفصل لإجراءات التسجيل لبرنامج المقارنات الدولية كاثيتيريزينج القضيب كرورا وثم كهربائياً تحفيز الأعصاب الكهفي في الفئران.
Abstract
ضعف الانتصاب (ED) يعرف بأنه عدم القدرة على تحقيق أو المحافظة على انتصاب من القضيب، وقد أصبح هذا اضطراب جنسي ذكور انتشارا. تستخدم القوارض بالعديد من الدراسات لبحوث علم وظائف الأعضاء/أمراض الانتصاب. يمكن تقييم وظيفة الانتصاب في القوارض بقياس الضغط إينتراكافيرنوسال (برنامج المقارنات الدولية). في الممارسة العملية، يمكن رصد برنامج المقارنات الدولية في أعقاب التحفيز الكهربائي للأعصاب الكهفي (CNs). الضغط الشرياني للشريان السباتي (متوسط الضغط الشرياني) يستخدم كالمرجع لبرنامج المقارنات الدولية. باستخدام برنامج المقارنات الدولية تسجيل البروتوكولات، ويمكن قياس العديد من المعالم الرئيسية لوظيفة الانتصاب من منحنى استجابة برنامج المقارنات الدولية. قياس برنامج المقارنات الدولية توفر معلومات أكثر من اختبار الانتصاب القضيب المستحثة apomorphine، وهو أرخص من رصد القياس البعدي القضيب spongiosum الإحضار، مما يجعل هذا الأسلوب الأكثر شعبية واحدة لتقييم وظيفة الانتصاب. ومع ذلك، مقارنة لاختبار وظيفة الانتصاب التي يسببها APO تنفيذها بسهولة، تسجيلات برنامج المقارنات الدولية الناجحة تتطلب الاهتمام بالتفاصيل، والممارسة، والتمسك بطريقة عملية. في هذا العمل، تقدم مقدمة لتسجيل برنامج المقارنات الدولية في الفئران لتكملة الإجراءات كفاءة.
Introduction
اد يعرف بأنه عدم القدرة على تحقيق أو الحفاظ انتصاب القضيب، وأصبح اضطراب جنسي ذكور مشتركة1. وتستخدم الحيوانات التجريبية وتقديم نماذج استنساخه للتحقيق في وظيفة الانتصاب2. لفترة طويلة، وقد استخدمت عدة نماذج حيوانية أكبر للتحقيق في الانتصاب3،،من45. على الرغم من قوارض صغيرة نسبيا مقارنة بغيرها من الحيوانات، كما أنها تستخدم لدراسة الانتصاب الذكور نظراً لنستعرض عدة مزايا6. أولاً، يرد موجز لها الخصائص الجنسية المورفولوجية والوظيفية للبشر في القوارض. ثانيا، بالمقارنة مع أكبر الحيوانات المستخدمة في الدراسات اد، القوارض أكثر اقتصادا لشراء منزل، والحفاظ على. نماذج القوارض المعدلة وراثيا، والثالثة توفر مزايا في الدراسات السلوكية وكذلك العصبية استنساخه واللاحقة. ولذلك، أصبحت القوارض بسرعة الحيوانات الأولية المستخدمة في هذه الدراسة من الذكور من ضعف الانتصاب.
تستفيد من خلفية وراثية نقية وظروف ثقافة متسقة، قدمت نماذج القوارض استنساخه باستمرار البيانات5،6،،من78. من بين العديد من الدراسات المتاحة ذات الصلة بجوانب كثيرة من وظائف الانتصاب، apomorphine (APO)-استجابة الانتصاب المستحث واختبار التحفيز المستحثة الكهربائية برنامج المقارنات الدولية الاستجابة هي الأساليب الأكثر استخداماً التي موثوق بها تعكس الانتصاب وظيفة9،10،،من1112. اختبار وظيفة الانتصاب التي يسببها APO، وضعتها هيتون et al. 13، هو بيو-الإنزيم الذي يستخدم هذه الظاهرة أن إدارة apomorphine الفئران يتسبب الانتصاب والتثاؤب. كسهله وموسع ومستقرة بيو-مقايسة لتقييم وظيفة الانتصاب، اختبار وظيفة الانتصاب التي يسببها APO يستخدم على نطاق واسع في العديد من الدراسات. غير أن هذا التحليل لا يعكس نوعية الانتصاب أو التغيرات الدينامية في تدفق الدم المقترن استجابة الانتصاب14. قياسات برنامج المقارنات الدولية، وضعت في البداية كوينلان et al. 15-في هذا الأسلوب، يتم وضع قسطرة في الشريان السباتي لقياس ضغط الدم النظامية، ويتم إدخال قسطرة أخرى في cavernosum الإحضار ساق لتسجيل برنامج المقارنات الدولية. قبل أو أثناء التسجيل، وعامل فعال في الأوعية و/أو تنشيط الحقل الكهربائي من العقدة الحوض الرئيسية (ميلا في الغالون) برنامج المقارنات الدولية أو CN كثيرا ما أعطيت ل الفئران14. هذا التحليل كان أداة موثوقة لتقييم العلاج والأدوية اد، وسوف يرجح أن تستخدم كأسلوب تقييم حيوي في المستقبل6.
مقارنة لاختبار وظيفة الانتصاب التي يسببها APO تنفيذها بسهولة، تسجيلات برنامج المقارنات الدولية الناجحة تتطلب الاهتمام بالتفاصيل والممارسة، والتمسك بطريقة عملية. ولذلك، هنا، نحن نقدم وصفاً مفصلاً لكيفية إجراء تسجيل برنامج المقارنات الدولية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
عمره ثلاثة أشهر و 18 شهرا الفئران سبراغ داولي واستخدمت في هذه الدراسة. كل الحيوانات عولجت وفقا "المبادئ التوجيهية المعاهد الوطنية للصحة" لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. الإجراءات التي تشمل مواضيع الحيوان أقرتها لجنة الأخلاق، ورعاية الحيوان المؤسسية المحلية مع محاولة لتقليل معاناة الحيوانات. البروتوكولات وافق على "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) في جامعة نانجينغ للتكنولوجيا (نانجينغ، الصين).
وتم تقسيم الفئران إلى مجموعتين وفقا لسنهم وأولية للأداء في اختبار وظيفة الانتصاب التي يسببها APO قبل تسجيل برنامج المقارنات الدولية: الشباب العادي (المجموعة YN) والذين تتراوح أعمارهم بين ضعف الانتصاب المجموعة (المجموعة هاء)10.
1-إعداد قبل الجراحة
- يدوياً جعل زوج من أقطاب القطبين لتسجيل برنامج المقارنات الدولية (الشكل 1). قليلاً ثني نهايات الأقطاب، وضبط المسافة بين قطبين إلى 1-2 مم على نطاق واسع، كما هو مبين في الشكل 1 ألف.
- قم بتوصيل الأقطاب مشجعا استخدام المشابك التماسيح اثنين (الشكل 1 أ، ب).
- تجميع نظام القسطرة: أولاً، الاتصال إبرة ز 23 hypodermic محبس الحنفية 3-الطريقة مع الأنابيب، ثم الاتصال محبس الحنفية الضغط على المفاتيح. بعد ذلك، إرفاق حقنه 10 مل إلى نهاية الثالث محبس الحنفية توفير الهيبارين المالحة.
- فحص دقيق للتسرب بعد تعبئة النظام بأكمله مع الهيبارين المالحة (200 U/mL). ثم انتقل محبس الحنفية 3-طريقة لإغلاق القناة المحاقن أو الضغط على المفاتيح القناة (الشكل 1).
- أرفع مستوى لوح خشبي الإبرة 20 سم. ثم معايرة الضغط تسجيل النظام إلى 20 سم ح2o. وبعد ذلك، نقل ارتفاع الإبرة للتحقق من دقة نظام التسجيل. كرر المعايرة حتى تم تأكيد الدقة.
- نقل الفئران من مرفق الحيوان إلى غرفة الجراحة، وتمكينهم من اعتاد إلى غرفة الجراحة لمدة 30 دقيقة على الأقل.
- ترش بالصكوك يعقم مع الإيثانول 70% فقط قبل الجراحة
2. إجراء جراحة
- تخدير الفئران بحقن داخل الصوديوم بينتوباربيتال بجرعة من 45 مغ/كغ من وزن الجسم، وانتظر 5-10 دقيقة قرصه الأصابع للتأكد من أنيسثيتيزيشن سليم.
- يحلق الفراء البطن والرقبة مع ماكينة حلاقة كهربائية، ومكان الفئران على ظهرها وسادة تدفئة.
- مسح منطقة الجراحة مع 10% بوفيدون حل غارقة كرات القطن متبوعاً بكرات القطن الإيثانول 70% بالدماء. أيضا، تطبيق مرهم العيون لمنع العينين من الجفاف.
- كاثيتيريزي الشريان السباتي الأيسر.
- أمسك جلد الرقبة بالملقط وجعل شق أفقي في منتصف الرقبة. جداً في العضلات، بعناية فضح الشريان السباتي الأيسر، وعزل قسم 5 مم من السفينة.
- عناية فصل الشريان السباتي من العصب المبهم باستخدام الملقط، رسم خياطة حرير تحت الشريان السباتي، ووضع تعادل فضفاضة على نهاية والذيلية للسفينة، ثم جعل آخر عقده ضيق في نهاية الجمجمة من السفينة.
- كودالي المشبك السفينة مع المشبك لدغ أعلاه خياطة لوقف تدفق الدم.
- بعناية تجعل شق على متن السفينة مع مقص ميكروسورجيكال، وإدراج قسطرة الشرايين نحو القلب بمساعدة هوك وملقط تشريح الصغرى.
- ربط حرف مزدوج والذيلية فضفاضة حول القسطرة لضمان الحصول عليها. إزالة المشبك لدغ لاستعادة تدفق الدم.
-
عزل CN ومكان مسرى
- مع زوج من الملقط، رفع الجلد والعضلات في البطن. مع مقص تشريح، قطع طريق أسفل البطن إلى القضيب جعل شق خط الوسط.
- دفع الأمعاء مع مسحه بلطف إلى الجزء العلوي من تجويف البطن.
- فهم المثانة مع زوج من الملقط وسحب المثانة من تجويف البطن. كشف الفصوص البطني البروستاتا، الذي يقع في الجزء البطني من مجرى البول.
- سحب الفصوص البطني البروستاتا، حويصلة، والاسهر لفضح الفص الظهرية البروستات. العثور على نقطة التصاق الاسهر والبروستاتا.
- مساحة بين البروستاتا والاسهر منفصلة. فضح الكبسولة الليفية، التي يقع اللاحق إلى نقطة تقاطع للبروستاتا والاسهر بعناية. ثم العثور العقدة الرئيسية الحوض (الشكل 2).
ملاحظة: أن العقدة الرئيسية في الحوض والأعصاب الكهفي يمكن رؤية سطح البروستاتا. - المجال CN الجافة بعناية مع مسحه معقمة. عزل وربط العصب الكهفي الحق مع أقطاب القطبين بعناية.
-
كاثيتيريزي كرورا اليسرى
- قص شق صغير في جلد القضيب مع مقص تشريح، ومن ثم سلب الجلد رمح القضيب بعناية.
- تشريح عضلات القضيب striated. ابحث عن الفرع العلوي لعظم العانة.
- كشف عضلة بولبوسبونجيوسوس، الذي يغطي لمبة سبونجيوس.
- تقسيم العضلات بولبوسبونجيوسوس من العضلات إيشيوكافيرنوسوس باستخدام الملقط منحنية.
- عزل العضلات إيشيوكافيرنوسوس بعناية مع الملقط منحنى ومن ثم قص العضلات إيشيوكافيرنوسوس لفضح albuginea الغلالة البيضاء من cavernosum الإحضار ساق.
- في أعقاب اتجاه cavernosum الإحضار ساق التشريحية، بعناية إدراج الإبرة في cavernosum الإحضار ساق من خلال albuginea الغلالة البيضاء.
ملاحظة: هذا خطوة حاسمة لقسطرة ناجحة. يمكن حقن كمية صغيرة من المياه المالحة هيبارينيزيد، وينبغي التقيد انتفاخ القضيب طفيف، إذا تم إدراج الإبرة بشكل صحيح. - الإفراج عن الإبرة وتجنب أي انزلاق الإبرة أو تعطل أنبوب يربط بعناية. تفتيش لأي تسرب.
3-الحث على CN
- فتح برنامج حاسوبي لتسجيل إشارة الضغط وبدء تسجيل إشارة الضغط.
- تعيين المعلمات للتحفيز: 15 هيرتز وعرض النبض الميلي ثانية 5، 5 فولت، لمدة 60 ثانية. حفز CN في تواتر 15 هرتز مع عرض نبض 5 مللي ثانية.
ملاحظة: يمكن ملاحظة ارتفاع حاد لبرنامج المقارنات الدولية أثناء تطبيق التحفيز الكهربائي. - السماح بفترة الراحة بعد 30 دقيقة بين التحفيز. الحد الأقصى للتحفيز على التوالي في كل الحيوانات ثلاث مرات.
4-في نهاية الإجراء
- بعد التسجيل، إدارة القتل الرحيم عن طريق حقن جرعة زائدة من الصوديوم بينتوباربيتال بجرعة 150 مغ/كغ من وزن الجسم. تأكيد وفاة الفئران بالتدقيق على الضغط الشرياني. إزالة الفئران، وتنظيف أدوات الجراحة.
5-بيانات التحليل
- حفظ وتصدير البيانات من البرنامج. عادة يتم التعبير عن الاستجابة كالنسبة من برنامج المقارنات الدولية للضغط الشرياني يعني الجهازية (خريطة). وحسبت نسبة الذروة برنامج المقارنات الدولية/خريطة لتقييم وظيفة الانتصاب.
- تجميع البيانات من الفئران على الأقل خمسة، وتحليلها مع البرامج الإحصائية. الاختلافات تعتبر يعتد بها إحصائيا عند ف < 0.05، استخدام الاختبار t للطالب.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
وأظهرت العديد من الدراسات أن ضعف الانتصاب في المسنين الذكور أصبحت مشكلة شائعة. ومع ذلك، يقتصر العلاج الطبي في إدارة المتصلة بالشيخوخة اد16. في نماذج القوارض من اد المتصلة بالشيخوخة، يتم اختبار العديد من العلاجات في وظيفة الانتصاب من الفئران الذين تتراوح أعمارهم بين. كما قدمنا أعلاه، يمكن استخدام اختبار تسجيل برنامج المقارنات الدولية التمييز بين الحيوانات اد من مجموع السكان في الحيوانات التجريبية، الذي أيضا قيمة لقياس تأثير المخدرات أو العلاج المحتملة على وظيفة الانتصاب.
كما هو موضح في الشكل 3 ألف، منحنى استجابة برنامج المقارنات الدولية النموذجية الفريق اد (سن اد الفئران، عبد اللطيف، 18 شهرا) كان أقل بكثير من المنحنى مجموعة التحكم في (صغار الفئران العادية، YN, 3 أشهر). عادة، تم اختيار برنامج المقارنات الدولية أعلى للتحليل الإحصائي. بعد حساب النسبة لبرنامج المقارنات الدولية/خريطة البيانات المجمعة من 5 الفئران أظهرت أن نسبة برنامج المقارنات الدولية/خريطة في مجموعة عبد اللطيف أيضا انخفاض كبير مقارنة بمجموعات التحكم (الشكل 3B). وإلى جانب هذه البارامترات الرئيسية اثنين، ذروة برنامج المقارنات الدولية، منطقة الهضبة برنامج المقارنات الدولية، انخفض الوقت ديتوميسسينسي ومدة الاستجابة، ومنطقة تحت المنحنى كثيرا في العمر اد الفئران (الجدول 1). هذه بيانات تسجيل برنامج المقارنات الدولية توفر طريقة لقياس كمي تعكس وظيفة الانتصاب.
رقم 1: يدوياً بالقسطرة واقطاب القطبين، ومشجعا وإشارة تسجيل النظام لتسجيل برنامج المقارنات الدولية- وترتبط سواء بالقسطرة واقطاب مشجعا وإشارة معدات نظام التسجيل. يتم إدراج نهايات القسطرة في cavernosum الإحضار الأيسر الشريان أو ساق لتسجيل الضغط. يتم وضع أقطاب كهربائية تحت الأعصاب الكهفي (CNs). (أ) ينتهي من أقطاب كهربائية هي بنت قليلاً. (ب) مشجعا وإشارة معدات نظام التسجيل. (ج) القسطرة تجميعها يدوياً. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: موقف التشريحية الرئيسية العقدة الحوض والأعصاب الكهفي. كما هو موضح في الشكل، يقع العقدة الحوض الرئيسية على الحدود الجانبية للبروستاتا. العصب الكهفي في الفئران هو عصب متميزة التي تمتد من العقدة الحوض الرئيسية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: تسجيل ممثل برنامج المقارنات الدولية للفئران بشكل مختلف أعمارهم. (أ) تمثيل التغييرات برنامج المقارنات الدولية خلال تحفيز العصب الكهفي. مجموعة المراقبة (الشباب العادي الفئران، YN، الفئران عمرها 3 أشهر)؛ اد مجموعة (العمر اد الفئران، عبد اللطيف، 18 شهرا). الشريط تحت منحنى استجابة برنامج المقارنات الدولية يمثل توقيت التحفيز الكهربائي. (ب) يتم عرض مؤشر وظيفة الانتصاب (intracavernous الضغط/يعني الضغط الشرياني) مجموعة مختلفة من التجربة. وترد البيانات من الفئران على الأقل خمسة ±standard متوسط الانحراف؛ الاختلافات تعتبر يعتد بها إحصائيا عند *p < 0.05، استخدام الاختبار t للطالب. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
| الشباب العادي (YN) | الذين تتراوح أعمارهم بين ضعف الانتصاب (AE) | |
| (Mean±SD) | (Mean±SD) | |
| برنامج المقارنات الدولية القاعدية | 22.3±3.7 (مم زئبق) | 21.9±5.2 (مم زئبق) |
| ذروة برنامج المقارنات الدولية | 172.8±7.6 (مم زئبق) | 105.4±4.9 (ملم زئبق) * |
| هضبة برنامج المقارنات الدولية | 165.4±2.5 (مم زئبق) | 86.5±4.1 (ملم زئبق) * * |
| زمن الوصول إلى الانتصاب | 10.3±1.6 (s) | 15.1±2.3 (s) |
| الوقت ديتوميسسينسي | 46.7±2.6 (s) | 11.8±3.3 (s) * |
| مدة الاستجابة | 107.2±3.7 (s) | 71.7±4.2 (s) * |
| المنطقة تحت المنحنى | 17436.9±736.4 | 6426±428.3 * * |
| عدد الانتصاب | 3±0.0 | 3±0.0 |
الجدول 1: معلمات لوظيفة الانتصاب لدى الفئران الانتصاب الشباب والذين تتراوح أعمارهم بين. هضبة الضغط intracavernous القاعدية (برنامج المقارنات الدولية)، ذروة برنامج المقارنات الدولية، برنامج المقارنات الدولية، زمن الوصول إلى الانتصاب والوقت ديتوميسسينسي ومدة الاستجابة، منطقة تحت منحنى استجابة الوقت برنامج المقارنات الدولية، وتحسب عدد الانتصاب لاحظت في 30 دقيقة ومعبرا عنه بمتوسط ±standard الانحراف (n = 5). الاختلافات تعتبر يعتد بها إحصائيا عند *p < 0.05 أو * *ف < 0.01، استخدام الاختبار t للطالب.
| أعراض استكشاف الأخطاء وإصلاحها | الأسباب المحتملة واقتراحات |
| أي ضغط من برنامج المقارنات الدولية أو خريطة | مشكلة المعدات: التحقق من حالة المعدات |
| مشكلة التسرب: التحقق من الأنبوب، تأكد من أن الاتصال سليمة، ثم تحقق من محبس الحنفية، وما إذا كان في المكان المناسب | |
| زيادة الضغط المنخفض بعد التحفيز الكهربائي | عدم كفاية أو لا التحفيز: التحقق من الاتصال الأقطاب من مشجعا على CN، ومحاولة إعادة وضع أقطاب كهربائية |
| الأضرار التي لحقت CN: محاولة حفز أهي كونترالاتيرال | |
| التسرب: تحقق من موقع الإدراج من القسطرة برنامج المقارنات الدولية، نظراً لأن التسرب من موقع الإدراج سيتم خفض برنامج المقارنات الدولية | |
| نزيف | تحقق من موقع النزيف؛ إذا هو مثقب الشريان، في نهاية التجربة. إذا التربية يحدث في موقع الإدراج برنامج المقارنات الدولية، إعادة ثقب صعب جداً، وربما تكون مستحيلة |
الجدول 2: استكشاف الأخطاء وإصلاحها لإجراء التسجيل في برنامج المقارنات الدولية- ثلاثة من الأعراض الشائعة في جراحة برنامج المقارنات الدولية، والأسباب المحتملة والاقتراحات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
كتدبير مباشر لوظيفة الانتصاب، هو برنامج المقارنات الدولية طريقة موثوق بها14. أنها تسمح للحصول على بيانات عن القاعدية برنامج المقارنات الدولية، ذروة برنامج المقارنات الدولية، هضبة برنامج المقارنات الدولية، وقت إلى وقت الانتصاب وديتوميسسينسي، ومدة الاستجابة و ما إلى ذلك. وإلى جانب هذه المباشرة قياس البارامترات، هناك بعض المعلمات الأخرى في الفهرس: (1) "T80"، والوقت تصل إلى 80 في المائة ذروة برنامج المقارنات الدولية؛ (2) "D20"، والوقت انخفاض بنسبة 20 في المائة ذروة برنامج المقارنات الدولية؛ (3) "ΔT80"، أن معدل الزيادة في الضغط (في الثانية) في T80؛ و (4) "ΔD20"، بمعدل انخفاض في الضغط (في الثانية) في D20. تسمح هذه المعلمات للتحديد الكمي لكل مرحلة من المراحل ونوعية الاستجابة برنامج المقارنات الدولية، والتي يمكن أن تعكس تأثير المرض ودراسة مدى فعالية ال14،المخدرات17. يستخدم هذا الأسلوب تسجيل برنامج المقارنات الدولية على نطاق واسع في نماذج حيوانية اد. في هذا البروتوكول، قارنا استجابة برنامج المقارنات الدولية في الفئران اد الشباب والمسنين. إذا كان هناك حاجة الإدارة من المخدرات عن طريق القسطرة إينتراكافيرنوس، يمكن القيام بوضع قسطرة إينتراكافيرنوس آخر في ال cavernosum الإحضار ساق كونترالاتيرال17. ينبغي أن يكون الحجم الإجمالي لحقن أقل من 0.1 مل. يمكن إجراء منهجي الدواء عن طريق الحقن تحت الجلد أو داخل. إذا كانت هناك حاجة إلى الإدارة عن طريق الحقن الوريدي، يمكن النظر في حق حبل الوريد.
على الرغم من أن الجراحة برنامج المقارنات الدولية هو التحدي قليلاً من الناحية التقنية ويتطلب فهم متعمق للتشريح أجهزة البطن والحوض السفلي، مع الوقت والجهد يمكن أحد سيد البروتوكول. منذ القسطرة واقطاب مصنوعة يدوياً قبل المجرب، الضغط على المفاتيح يحتاج إلى فحص ومعايرة كل مرة قبل البدء التجربة. أقطاب كهربائية ينبغي أن تكون رقيقة والمسافة بين قطبين ينبغي أن تكون صغيرة بما يكفي لتحفيز الأعصاب كفاءة. من المهم تجنب الأضرار تمتد أو غيرها للعصب أثناء وضع أقطاب كهربائية. من المهم للضبط إدراج الإبرة في كرورا اليسرى، دون أي انزلاق أو إنزال. الأعراض الشائعة الثلاثة المذكورة في الجدول 2، التي يمكن أن تعتبر عند حدوث بعض الأعراض.
هذا الأسلوب تسجيل برنامج المقارنات الدولية أيضا التحويل للفئران. ومع ذلك، جثث الفئران أصغر من الفئران، مما يجعل تسجيل برنامج المقارنات الدولية في الفئران أكثر صعوبة. إذا أجريت تسجيلات برنامج المقارنات الدولية في الفئران، ويمكن استخدام أصغر حجم الإبر إبر.
تسجيل برنامج المقارنات الدولية أيضا لها حدودها، ويمكن النظر في أساليب أخرى. عادة، يتم إجراء جراحة تسجيل برنامج المقارنات الدولية على تخديره من الحيوانات، وهي التضحية الحيوانات بعد قياس برنامج المقارنات الدولية القصيرة الأجل، التي ليست مناسبة للرصد الطولي لبرنامج المقارنات الدولية. أداء تحسنا كبيرا لطريقة تسجيل برنامج المقارنات الدولية المباشرة تسجيلات برنامج المقارنات الدولية على الفئران واعية، تتحرك بحرية، ووصف جيد في البروتوكولات كتبها هيدلوند et al. 17 هذا الأسلوب يوفر فرصة لتسجيل الضغط إينتراكافيرنوسال لفترات أطول من الوقت. في الآونة الأخيرة، بذلت التقدم لتشمل اتباع نهج القياس البعدي يطبق في الحيوانات واعية، تتحرك بحرية18،،من1920. على الرغم من أن نهج القياس البعدي بالعديد من المزايا على برنامج المقارنات الدولية التقليدية، تسجيل، فإنه يتطلب معدات غالية الثمن لتحويل واستقبال إشارات الضغط المحولة. للتغلب على الأسلوب قسطرة، تصف اداتشي et al. وسيلة لدراسة الردود الانتصاب بقياس مستمر للقطر من الأعضاء التناسلية للذكور في الفئران21. في هذا الأسلوب، يتم وضع زوج من بلورات كهرضغطية على رمح القضيب cavernosum الإحضار. يتم تعريف المعلمات اثنين تقييم استجابة الانتصاب: (1) "د-ماكس": الأعلى وضعت قطر القضيب أثناء القياس؛ و (2) "T50%": الوقت من الاستجابة القصوى لاسترداد 50% من الاستجابة القصوى في الفئران تخديره. مع أحكام هذا البروتوكول، تعكس التغييرات التي حدثت قطر القضيب أيضا إخلاص نوعية استجابة الانتصاب؛ وعلاوة على ذلك، لا هو إصابة الأنسجة أثناء قياس كامل. ومع ذلك، مثل نهج القياس البعدي، يتطلب هذا الأسلوب سونوميكروميتري أيضا معدات غالية الثمن نسبيا ومحددة لتحويل وتلقى التغييرات قطر القضيب.
وخلاصة القول، تسجيل برنامج المقارنات الدولية طريقة دقيقة ومريحة نسبيا وغير مكلفة. ونحن نعتقد أن هذه المقدمة يمكن أن تساعد في توسيع نطاق استخدام أسلوب برنامج المقارنات الدولية، وكذلك المعرفة المسبقة لعلم الأمراض وعلم وظائف الأعضاء من ضعف الانتصاب.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب لا تمت بصلة إلى الكشف عن
Acknowledgments
هذا العمل كان تدعمها "أموال البحوث الأساسية" للجامعات المركزية (020814380018، 020814380077)، مجلس المنح الدراسية الصيني (ديوان الخدمة المدنية، رقم 201606195024)، ومؤسسة العلوم الطبيعية بمقاطعة جيانغسو (BK20160138)، ومشروع مفتاح يدعمه العلم والتكنولوجيا مؤسسة التنمية، جامعة نانجينغ الطبية (2014NJMUZD053).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animal | |||
| Rats | Strain: Sprague-Dawley Age: 2-3 month | ||
| Rats | Strain: Sprague-Dawley Age: 15-18 month | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| Saline | Sigma-Aldrich, S7653 | dissolve 8.5 gram sodium chloride in distilled water | |
| Pentobarbital sodium solution | Sigma-Aldrich, P3761 | dissolve 1 gram in 100 ml saline | |
| Povidone-iodine | BTP Pharmaceutical Co. Limited | 10% (V/V) | |
| Ethanol | China National Pharmaceutical Group Corporation (SINOPHARM) | 70% (V/V) | |
| Heparin | Sigma-Aldrich, H3149 | dissolve 20000U heparin in 100 ml saline | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Materials | |||
| Hypodermic needle | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd. | 23G | |
| Syringe | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd | 10 ml | |
| Three-way stopcock | Chengdu Instrument factory | TSK 01 | |
| Electrode | Chengdu Instrument factory | JST-1 | |
| Catheter tube | Chengdu Instrument factory | PE-10, PE-50 | |
| Operating scissors | Shanghai operation equipment factory | J22010, J22020 | |
| Ophthalmic operating scissors | Shanghai operation equipment factory | Y00010, Y00020 | |
| Ophthalmic forceps | Shanghai operation equipment factory | JD1010, JD1020 | |
| MicroScissors | World Precision Instruments | WAA260 | |
| silk suture | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd. | 5-0 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Stimulator | Nanjing medease science and technology co. ltd (model 4C501H) | 15 Hz, 5 ms pulse, 5 V, 60 s duration and 5 minutes interval | |
| Multichannel signal collection processing system | Nanjing medease science and technology co. ltd (model 4C501H) | Blood pressure model | |
| Pressure transducer | Beijing Xin Hang Xing Ye Technology Trading Company Limited (model YP100) | 40KPa |
References
- NIH Consensus Conference. Impotence. NIH Consensus Development Panel on Impotence. JAMA. 270 (1), 83-90 (1993).
- Chung, E., De Young, L., Brock, G. B. Investigative models in erectile dysfunction: a state-of-the-art review of current animal models. J Sex Med. 8 (12), 3291-3305 (2011).
- Lue, T. F., Takamura, T., Schmidt, R. A. Hemodynamics of erection in the monkey. J Urol. 130 (6), 1237-1241 (1983).
- Carati, C. J., Creed, K. E., Keogh, E. J. Autonomic control of penile erection in the dog. J Physiol. 384, 525-538 (1987).
- Steers, W. D., Mallory, B., de Groat, W. C. Electrophysiological study of neural activity in penile nerve of the rat. Am J Physiol. 254 (6 Pt 2), R989-R1000 (1988).
- Kapoor, M. S., Khan, S. A., Gupta, S. K. Animal models of erectile dysfunction. J Pharmacol Toxicol Methods. 76, 43-54 (2015).
- Burnett, A. L., Lowenstein, C. J., Bredt, D. S. Nitric oxide: A physiologic mediator of penile erection. Science. 257 (5068), 401-403 (1992).
- Oh, T. Y., Kang, K. K., Ahn, B. O. Erectogenic effect of the selective phosphodiesterase type 5 inhibitor, DA-8159. Arch Pharm Res. 23 (5), 471-476 (2000).
- Ouyang, B., Sun, X., Han, D. Human urine-derived stem cells alone or genetically-modified with FGF2 Improve type 2 diabetic erectile dysfunction in a rat model. PLoS One. 9 (3), e92825 (2014).
- Pan, F., Xu, J., Zhang, Q. Identification and characterization of the MicroRNA profile in aging rats with erectile dysfunction. J Sex Med. 11 (7), 1646-1656 (2014).
- Cho, M. C., Park, K., Kim, S. W. Restoration of erectile function by suppression of corporal apoptosis, fibrosis and corporal veno-occlusive dysfunction with rho-kinase inhibitors in a rat model of cavernous nerve injury. J Urol. 193 (5), 1716-1723 (2015).
- Hannan, J. L., Matsui, H., Sopko, N. A. Caspase-3 dependent nitrergic neuronal apoptosis following cavernous nerve injury is mediated via RhoA and ROCK activation in major pelvic ganglion. Sci Rep. 6, 29416 (2016).
- Heaton, J. P., Varrin, S. J., Morales, A. The characterization of a bio-assay of erectile function in a rat model. J Urol. 145 (5), 1099-1102 (1991).
- Mehta, N., Sikka, S., Rajasekaran, M. Rat as an animal model for male erectile function evaluation in sexual medicine research. J Sex Med. 5 (6), 1278-1283 (2008).
- Quinlan, D. M., Nelson, R. J., Partin, A. W. The rat as a model for the study of penile erection. J Urol. 141 (3), 656-661 (1989).
- Albersen, M., Orabi, H., Lue, T. F. Evaluation and treatment of erectile dysfunction in the aging male: A mini-review. Gerontology. 58 (1), 3-14 (2012).
- Hedlund, P., Matsumoto, K., Andersson, K. -E. Animal Models of Erectile Dysfunction. Curr Prot Pharmacol. 29, 5.41.1-5.41.22 (2005).
- Giuliano, F., Bernabe, J., Rampin, O. Telemetric monitoring of intracavernous pressure in freely moving rats during copulation. J Urol. 152 (4), 1271-1274 (1994).
- Bernabe, J., Rampin, O., Giuliano, F. Intracavernous pressure changes during reflexive penile erections in the rat. Physiol Behav. 57 (5), 837-841 (1995).
- Bernabe, J., Rampin, O., Sachs, B. D. Intracavernous pressure during erection in rats: an integrative approach based on telemetric recording. Am J Physiol. 276 (2 Pt 2), R441-R449 (1999).
- Adachi, H., Kodama, K., Ishihara, H. Evaluation of erectile response by continuous measurement of penile diameter in rats. J Pharmacol Toxicol Methods. 41 (4), 147-152 (1999).
