Summary
Utilsigtet skud kan induceres på internodal segmenter af ipecac uden phytohormone behandling. For at vurdere phytohormone dynamics under utilsigtet skyde dannelse, målte vi endogene auxin og cytokinin i internodal segmenter af LC-MS/MS.
Abstract
Utilsigtet skyde dannelse er en vigtig teknik for udbredelsen af økonomisk vigtige afgrøder og regenerering af transgene planter. Phytohormone behandling er påkrævet for induktion af utilsigtet skud i de fleste arter. Om utilsigtet skud kan induceres bestemmes af balancen mellem auxin og cytokinin (CK) niveau. Stor indsats går til bestemmelse af optimal koncentrationer og kombinationer af Phytohormoner i hver væv bruges som explants og i enkelte plantearter. I ipecac, imidlertid kan utilsigtet skud induceres på internodal segmenter i dyrkningsmediet uden phytohormone behandling. Dette giver mulighed for den iboende plasticitet af ipecac celle differentiering skal evalueres. For at fremkalde utilsigtet skud i ipecac, kulturperler vi internodal segmenter på 24 ° C under 15 µmol m−2 s1 af lys i en 14-h lys/10-h mørke cyklus på phytohormone-gratis B5 medium solidificeret med 0,2% gellan tyggegummi i 5 uger. For at undersøge phytohormone dynamics under utilsigtet skyde dannelse, målte vi endogene indol-3-eddikesyre og CKs i segmenter af liquid chromatography-tandem massespektrometri LC-MS/MS. Denne metode giver mulighed for analyse af endogene indol-3-eddikesyre og CKs niveauer på en enkel måde. Det kan anvendes til at undersøge dynamics af endogene auxin og CK under organogenesis i andre plantearter.
Introduction
Gottlieb Haberlandt (1854-1945) foreslået begrebet "totipotency", af hvilke anlæg kan celler dividere, differentiere og regenerere hele planter selv efter deres forudgående differentiering af specifikke celletyper i modne planter1. I vævskultur bestemmes hvorvidt planten regeneration kan være fremkaldt eller ikke af den kombination og koncentration af eksogent anvendt Phytohormoner i vækstmediet. Skoog og Miller fandt, at utilsigtet skud kunne være induceret fra tobak callus kultur medium, der indeholder en høj andel af CKs til auxins, der henviser til, at utilsigtet rødder kunne være fremkaldt på medium, der indeholder en lav ratio2. Siden denne konstatering, har væv kultur været udbredt formeringsmateriale af økonomisk vigtige afgrøder og til regenerering af transgene planter3. Utilsigtet skud kan være fremkaldt af væv end skyde yderste meristem, som blade, rødder og stængelled. Phytohormone behandling er påkrævet for induktion af utilsigtet skud i de fleste plantearter. Optimal koncentrationer og kombinationer varierer dog af arter og blandt væv bruges som explants. Således, meget indsats går til bestemmelse af optimal koncentrationer og kombinationer af Phytohormoner for eksperimenter.
Carapichea ipecacuanha (Brot.) L. Andersson (ipecac) er en lægeplante, der indeholder alkaloider såsom emetine og cephaeline, hovedsagelig i rødder4. Rod ekstrakter anvendes som en slimløsende, et brækmiddel og en amoebicide5. Selvom ipecac vokser naturligt i tropiske regnskove i Brasilien, det er tilbageholdende med at sætte frø i kultur og spiring sats falder under frø opbevaring i Japan, med sit koldere klima6. I stedet, det er formeret af vævskultur, som utilsigtet skyde dannelse på stængelled er den mest effektive metode7,8. Interessant, kan utilsigtet skud være fremkaldt i denne arter uden phytohormone behandling8.
Utilsigtet skud er dannet på epidermis i den apikale region internodal segmenter uden callusing, men ikke i basal region9. Denne forskel angiver væv polaritet i internodal segmenter, som er formentlig under phytohormonal forordning. Ipecac kultur system giver en enestående mulighed for at analysere ændringer i endogene phytohormone niveauer under utilsigtet skyde dannelse. Her vil vi præsentere vores metode til analyse af de endogene niveauer af én auxin (indol-3-eddikesyre (IAA)) og fire CKs (isopentenyl adenin (iP), isopentenyl adenin riboside (iPR), trans-zeatin (tZ), og trans-zeatin riboside (tZR)) i internodal segmenter ved hjælp af LC-MS/MS.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bemærk: Ipecac (C. ipecacuanha) blev brugt i denne undersøgelse, fordi det letter analysen af endogene Phytohormoner.
1. vækst betingelser til at fremkalde utilsigtet skud af Ipecac
- Forberede phytohormone-fri B5 medium justeres til pH 5.710, og tilføje 0,2% gellan tyggegummi. Steriliseres ved autoklavering.
- Hæld 25 mL af autoklaveres mediet i en steril petriskål (90 mm × 20 mm).
- Skær 8-mm internodal segmenter af ipecac plantlets ved hjælp af en kirurgisk skalpel med et blad No. 22 på en steril akryl plade, og sted på medium (figur 1).
- Kultur på phytohormone-gratis B5 medium på 24 ° C under 15 µmol m−2 s1 af lys i en 14-h lys/10-h mørke cyklus for 5 uger.
- Identificere regioner jeg (apikale) IV (basal) i hvert segment (figur 1B). Tæl antallet af utilsigtet skud > 0.3 mm længde i hver enkelt region under et mikroskop en gang om ugen.
2. ekstraktion og oprensning af Phytohormoner
- Sætte en 5-mm zirconia perle i hver af de fire 2 mL prøveglas.
- Skær segmenterne i regioner I til IV (hver 2 mm i længden) ved hjælp af en kirurgisk skalpel på en steril akryl plade.
- Indsamle otte segmenter i hver region i separate Prøveglassene (10-30 mg frisk vægt).
- Veje, og derefter fryse prøverne i flydende kvælstof.
- Knuse de frosne prøver ved hjælp af en perle-baserede homogeniseringsapparat.
- Suspendere de knuste prøver i 1 mL acetonitril indeholdende 500 pg i hver intern standard af auxin og CKs (d5-IAA, d5- tZ, d5- tZR, d6- iP, d6- IER) ved hjælp af en vortex-mixer.
- Hold ved 4 ° C i 1 h, derefter centrifugeres ved 3.500 × g i 5 min ved stuetemperatur.
- Vaske pelleten i 80% (v/v) acetonitril indeholdende 1% (v/v) eddikesyre. Centrifugeres igen ved 3.500 × g i 5 min ved stuetemperatur. Kombinere analysere (fra trin 2.7 og 2.8) i en engangs glasrør.
- Tilføje 600 µL vand indeholdende 1% (v/v) eddikesyre til hver kombineret supernatanten, og fordampe acetonitril ved hjælp af et vakuum koncentrator.
- Reagensglasset hydrofile-lipofile-balanceret (HLB) kolonne patroner ved at anvende 1 mL acetonitril, methanol og vand indeholdende 1% (v/v) eddikesyre.
- Anvende en prøveopløsning pr. afbalancerede HLB patron.
- Vask patroner med 1 mL vand indeholdende 1% (v/v) eddikesyre.
- Elueres alle hormoner med 2 mL 80% (v/v) acetonitril indeholdende 1% (v/v) eddikesyre i et glasrør.
- Fordampe acetonitril i eluatet at opnå ekstrakt i vand indeholdende 1% (v/v) eddikesyre ved hjælp af et vakuum koncentrator.
Bemærk: Ikke tørre det helt. - Reagensglasset blandet tilstand, stærk-kationbytter (MCX) kolonne patroner ved at anvende 1 mL acetonitril, 1 mL methanol, 0,5 mL 0,1 M HCl og 1 mL vand indeholdende 1% (v/v) eddikesyre.
- Anvende en prøveopløsning pr. afbalancerede MCX patron.
- Vask patroner med 1 mL vand indeholdende 1% (v/v) eddikesyre.
- Elueres IAA med 2 mL 30% (v/v) acetonitril indeholdende 1% (v/v) eddikesyre i et glasrør.
- Vask patroner med 2 mL 80% (v/v) acetonitril indeholdende 1% (v/v) eddikesyre.
- Vask patroner med 2 mL vand og 1 mL vand indeholdende 5% vandig ammoniak.
- Elueres af CKs med 2 mL 60% (v/v) acetonitril indeholdende 5% vandig ammoniak i et glasrør.
- Fordamper opløsningsmidler i hver hormon brøk ved hjælp af et vakuum koncentrator og gemme på −30 ° C indtil LC-MS/MS-analyse.
3. LC-MS/MS analyse af IAA og CKs
- Opløse hver hormon ekstrakt i en tube med 600 µL af methanol og opløsningen overføres til en skrue hals total recovery hætteglas. Fordampe opløsningsmiddel ved hjælp af et vakuum koncentrator.
- IAA-fraktionen i 20 µL 30% (v/v) acetonitril, og CK fraktioner i 20 µL vand indeholdende 1% (v/v) eddikesyre i skruen hals total recovery hætteglas opløses.
- Analysere prøverne i positiv ion mode på et triple-Quadrupol MS system udstyret med et system til HPLC.
Bemærk: Vi betingelserne HPLC som anført i tabel 1.- For IAA eluering, bruge en binær graduering af 5% - 50% opløsningsmiddel B over 7 min, og derefter øge af 98% opløsningsmiddel B og hold i 1 min og derefter Blandingen henstår i 2 min på 5% opløsningsmiddel B ved reden injektion.
- For CK eluering, bruge en binær forløb af 2% - 40% opløsningsmiddel B over 5 min, 40-70% væske B i 7 min, og derefter øge af 95% opløsningsmiddel B og hold i 1 min og derefter Blandingen henstår i 2 min på 2% opløsningsmiddel B af reden injektion.
- Indstille electrospray Ionisation (ESI)-MS parametre af ion kilde som anført i tabel 2.
- Bruge flere reaktionen overvågning (MRM) overgang til kvantificering af hver analysand, der er anført i tabel 3.
- Kvantificere endogene IAA og CK niveauer mod en Standardkurven for forholdet mellem umærkede deuterium-mærket standarder.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
1st uge, havde ingen utilsigtet skud dannet. Uge 2nd små skud dukkede op. På de 3rd og 4th uger, antallet af skyder øget mest i de apikale regioner (I og II) (figur 2A). 5th uge, antallet af skud var ca 7 i regionen og 5 i region II (figur 2B). I modsætning, blev kun et par skud dannet i region III og IV.
Før kultur, IAA var lidt højere i region I (4.1 pg/mg, friske vægt (FW)) end i regioner II-IV (~ 2,5 pg/mg FW; Figur 3). 1st uge, IAA er steget stærkt i region IV (11,4 pg/mg FW) og faldt svagt i regionerne I-III (1,5-2.2 pg/mg FW). Uge 2nd IAA niveau i regionen IV faldt til ~ 4,4 pg/mg FW, der angiver, at IAA ophobning i regionen basal var forbigående. Ved 5 ugers kultur opstået en IAA koncentration gradient med niveauer region IV stigende fra regionen.
Før kultur var der kun sporingsniveauer af de fleste CKs (figur 3). 1st uge, tZR steg til 13,8 pg/mg FW i region II og 18,1 pg/mg FW i region III. Niveauet faldt derefter gradvist over 5 uger af kultur. På den anden side niveauerne af tZ, iP og iPR ændrede kun lidt under kultur.
Figur 1 : Forberedelse af ipecac for utilsigtet skyde dannelse. (A) et internodal segment (8 mm) er skåret fra regenereret ipecac på en ren bænk. (B) først internodium blev brugt til utilsigtet skyde dannelse. (C) segmenter er kulturperler på 25 mL phytohormone-fri B5 medium i petriskåle til at fremkalde utilsigtet skud. Skalalinjen = 1 cm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2 : Distribution af utilsigtet skud dannede et internodal segment. (A) utilsigtet skud dannet efter 0-5 uger af kultur. Skalalinjen = 5 mm. (B) segmenter var opdelt i fire regioner (I-IV), og antallet af utilsigtet skud i hver region blev optalt på uge 5. Data er middel ± SEM (n = 3). Ti segmenter blev brugt i hvert forsøg. Holger = ikke fundet. Dette tal er blevet ændret fra Koike et al. 9 Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3 : Tidsforløb analyse af phytohormone niveauer i internodal segmenter. Segmenter var opdelt i fire regioner (I-IV). Endogene IAA og CKs (tZ, tZR, iP og intellektuel ejendomsret) i hver region var kvantificeres ved LC-MS/MS. Fordi iP og iPR niveauet var meget lavt, blev en zoomet graf indsat inde den samme graf. Data er middel ± SEM (n = 3). Otte segmenter blev brugt i hvert forsøg. Dette tal er blevet ændret fra Koike et al. 9 Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
| Kolonne | IAA: ACQUITY BEH C18 φ2.1 × 100 1.7 µm |
| CKs: Poroshell EF-C18 φ2.1 × 50 2.7 µm | |
| Temperatur | 40ºC |
| Mobil fase | Opløsningsmiddel A: destilleret vand + 0,05% eddikesyre |
| Opløsningsmiddel B: acetonitril + 0,05% eddikesyre | |
| Strømningshastighed | 0,35 ml/min |
| Injektionsvolumen | 18 µl |
Tabel 1: HPLC betingelse i IAA og CK analyse.
| Gardin gas (a.u.)* | 10 / 40 ** |
| Kollision gas (a.u.)* | 5 / 3 ** |
| Ion spray spænding (V) | 5500 |
| Temperatur (ºC) | 600 |
| Ion kilde gas 1 (a.u.)* | 30 |
| Ion kilde gas 2 (a.u.)* | 40 / 80 ** |
| Opløsning | Enhed |
Tabel 2: parametre af ion kilde. * arbitrære enheder. ** IAA analyse/CK analyse. Denne tabel er ændret fra Koike et al. 9
| Q1 (m/z) | Q3 (m/z) | Declustering potentiale (V) | Indgangen potentielle (V) | Kollisionen energi (V) | |
| IAA | 176 | 130 | 26 | 6.5 | 21 |
| d5-IAA | 181 | 134 | 36 | 4.0 | 23 |
| tZ | 220 | 136 | 36 | 5.0 | 23 |
| d5- tZ | 225 | 137 | 31 | 5.0 | 21 |
| tZR | 352 | 220 | 41 | 5.5 | 23 |
| d5- tZR | 357 | 225 | 51 | 5.0 | 21 |
| iP | 10W | 136 | 31 | 9,0 | 19 |
| d6- iP | 210 | 137 | 31 | 5.5 | 21 |
| intellektuelle ejendomsrettigheder | 336 | 10W | 31 | 5.0 | 21 |
| d6- iPR | 342 | 210 | 36 | 5.5 | 21 |
Tabel 3: MRM overgange af IAA og CKs i LC-MS/MS analyse. Denne tabel er ændret fra Koike et al. 9
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
For at identificere fordelingen af Phytohormoner involveret i organogenesis, det er vigtigt at bruge plantematerialer, hvor organogenesis kan iagttages på phytohormone-gratis medium, fordi når Phytohormoner anvendes eksogent på explants for at fremkalde skud eller rødder, de påvirker den hele eksplantat, hvilket gør det vanskeligt at vurdere de iboende plasticitet af planter i Celledifferentiering og organogenesis. Utilsigtet skud kan induceres på phytohormone-fri kultur medier i andre plantearter såsom Dianthus caryophyllus L.11, Aegle marmelos (L.) Correa12, Bacopa monnieri (L.) Pennell13, Celastrus paniculatus Willd. 14, og Kalanchoë blossfeldiana Poelln. 15. det ville være muligt at anvende protokollen i disse plantearter.
Vi udtrukket IAA, tZ, tZR, iP og intellektuelle ejendomsrettigheder i acetonitril og renset dem ved ekstraktion, fast-fase. Den oprindelige metode bruger tre typer af patron kolonner (HLB, MCX og svage anion exchange (voks)), fordi alle Phytohormoner er renset (herunder gibberellins, abscisic syre, jasmonic syre og salicylsyre)16. Kolonnen HLB bruger en polymere omvendt-fase sorptionsmiddel, kolonnen MCX bruger det samme med kationbytter grupper, og kolonnen voks bruger det samme med svag anion-exchange grupper. Den oprindelige metode eluerer CKs (grundlæggende) med 60% acetonitril indeholdende vandig ammoniak på et MCX kolonne i det andet trin, og derefter IAA (sure) med 80% acetonitril indeholdende 1% eddikesyre på en voks kolonne i det sidste trin. Da vores fokus er auxin og CKs, der vekselvirker antagonistisk til at regulere planten vækst17, bruger forenklet-protokollen kun HLB og MCX kolonnerne; IAA er elueret med 30% acetonitril indeholdende 1% eddikesyre på kolonnen HLB i det første skridt. Det tager to dage fra prøveforberedelse til LC-MS/MS analyse.
Acetonitril opløsningsmiddel må ikke tørre ud under phytohormone-rensningen i kolonnerne patron. Hvis det gør, resuspend prøven i acetonitril at forhindre Phytohormoner bliver holdt sig til glasrør og tabt fra prøven. I denne protokol, detektionsgrænse med ion-fælde MS system er ~ 10 pg IAA og CKs fra 10-30 mg frisk væv. For at analysere mindre beløb, ville det være nødvendigt at indsamle meget mere prøve eller bruge MS med højere følsomhed.
Phytohormone analyse er en vigtig teknik til vurdering af planternes vækst og udvikling. Brug denne metode, vi måske kunne bestemme timingen af auxin og CK behandling for utilsigtet skyde dannelse i plantearter hvor den optimale kultur betingelse er stadig ukendt. Som phytohormone kvantificering bliver stadig vigtigere, aktiverer LC-MS/MS protokollen beskrevet her analyse af små prøver med høj følsomhed og opløsning. Vores forenkling af et tidligere metode vil lette oprensning og analyse, og bringe høje alsidighed og reproducerbarhed. I fremtiden, kan denne metode anvendes til at undersøge dynamikken i den endogene auxin og CK under organogenesis i andre plantearter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer, at de har ingen interessekonflikter.
Acknowledgments
Vi er taknemmelige for Mr. Akira Murakami af Institut for anvendt Biosciences, Toyo-universitetet og Mr. Koudai Taniguchi i Gunma landbrugs Technology Center for deres tekniske bistand. Vi er også taknemmelige til Professor Shosaku Kashiwada og Dr. Uma Maheswari Rajagopalan, Toyo Universitet for deres forslag. Denne undersøgelse var delvist understøttet af Forskningscentret for livet og miljøvidenskab, Toyo Universitet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| [2H5]indole-3-acetic acid | Olchemlm Ltd | 031 1531 | Internal standard for LC-MS/MS |
| [2H5]trans-zeatin | Olchemlm Ltd | 030 0301 | Internal standard for LC-MS/MS |
| [2H5]trans-zeatin riboside | Olchemlm Ltd | 030 0311 | Internal standard for LC-MS/MS |
| [2H6]N6-isopentenyl adenine | Olchemlm Ltd | 030 0161 | Internal standard for LC-MS/MS |
| [2H6]N6-isopentenyl adenosine | Olchemlm Ltd | 030 0171 | Internal standard for LC-MS/MS |
| indole-3-acetic acid | Wako | 098 00181 | standard for LC-MS/MS |
| trans-zeatin | SIGMA-ALDRICH | Z0876 5MG | standard for LC-MS/MS |
| trans-zeatin riboside | Wako | 262 01081 | standard for LC-MS/MS |
| N6-isopentenyl adenine | SIGMA-ALDRICH | D7674 1G | standard for LC-MS/MS |
| N6-isopentenyl adenosine | ACROS ORGANICS | 22648 1000 | standard for LC-MS/MS |
| acetonitrile hypergrade for LC-MS LiChrosolv | MERCK | 1.00029.1000 | solvent for LC-MS/MS |
| Water for chromatography LiChrosolv | MERCK | 1.15333.1000 | solvent for LC-MS/MS |
| HPLC | SHIMADZU | Prominence | |
| MS | Sciex | 3200QTRAP | |
| Oasis HLB 30 mg/1 cc | Waters | WAT094225 | cartridge column |
| Oasis MCX 30 mg/1 cc | Waters | 186000252 | cartridge column |
| screw neck total recovery vial | Waters | 186002805 | |
| blue, 12 x 32mm screw neck cap and PTFE/silicone septum | Waters | 186000274 | |
| Acquity UPLC BEH C18, 2.1x100 mm | Waters | 186002350 | UPLC column |
| Proshell 120 EC-C18, 2.1x50 mm | Agilent | 699775-902 | UPLC column |
| Digital microscope | Leica | DHS1000 | |
| TissueLyser II | QIAGEN | 85300 | |
| Surgical blade | Feather | No. 22 | |
| Scalpel handle | Feather | No. 4 | |
| Savant SpeedVac/Refregerated vapor trap | Thermo Fisher Scientific | SPD111/RVT4104 | vacuum concentrartor |
| Disposable glass tobe (13x100 mm) | IWAKI | 9832-1310 | |
| Sterile petri dish | INA OPTICA | I-90-20 |
References
- Haberlandt, G. Kulturversuche mit isolierten Pflanzenzellen. Sitzungsber. Math.-Naturwiss. Kl. Akad. Wiss. Wien. 111, 69-92 (1902).
- Skoog, F., Miller, C. O. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro. Symp Soc Exp Biol. 11, 118-130 (1957).
- Ganeshan, S., Caswell, K. L., Kartha, K. K., Chibbar, R. N. Transgenic plants and crops. Khachatourians, G. G., McHughen, A., Scorza, R., Nip, W. K. , CRC Press. Ch. 4 69-84 (2002).
- Teshima, D., Ikeda, K., Satake, M., Aoyama, T., Shimomura, K. Production of emetic alkaloid by in vitro culture of Cephaelis ipecacuanha. Plant Cell Rep. 7 (4), 278-280 (1988).
- Chatterjee, S. K., Nandi, R. P., Ghosh, N. C. Cultivation and utilixzation of medicinal plants. Regional Research Laboratory, Council of Scientific and Industrial Research. Atal, C. K., Kapur, B. M. , Jammu-Tawi, India. 295-301 (1982).
- Bajaj, Y. P. S. Biotechnology in Agriculture and Forestry 21, Medicinal and Aromatic Plants IV. , Springer-Verlag. Berlin Heidelberg. 87-103 (1993).
- Ideda, K., Teshima, D., Aoyama, T., Satake, M., Shimomura, K. Clonal propagation of Cephaelis ipecacuanha. Plant Cell Rep. 7 (4), 288-291 (1988).
- Yoshimatsu, K., Shimomura, K. Efficient shoot formation on internodal segments and alkaloid formation in the regenerates of Cephaelis ipecacuanha A. Richard. Plant Cell Rep. 9 (10), 567-570 (1991).
- Koike, I., Taniguchi, K., Shimomura, K., Umehara, M. Dynamics of endogenous indole-3-acetic acid and cytokinins during adventitious shoot formation in ipecac. J. Plant Growth Regul. , (2017).
- Gamborg, O. L., Miller, R. A., Ojima, K. Nutrient requirements of suspension cultures of soybean root cells. Exp. Cell Res. 50 (1), 151-158 (1968).
- Watad, A. A., et al. Adventitious shoot formation from carnation stem segments: a comparison of different culture procedures. Scientia Hortic. 65 (4), 313-320 (1996).
- Ajithkumar, D., Seeni, S. Rapid clonal multiplication through in vitro axillary shoot proliferation of Aegle marmelos (L.) Corr., a medicinal tree. Plant Cell Rep. 17 (5), 422-426 (1998).
- Tiwari, V., Tiwari, K. N., Singh, B. D. Comparative studies of cytokinins on in vitro propagation of Bacopa monniera. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 66 (1), 9-16 (2001).
- Rao, M. S., Purohit, S. D. In vitro shoot bud differentiation and plantlet regeneration in Celastrus paniculatus Willd. Biol. Plant. 50 (4), 501-506 (2006).
- Sanikhani, M., Frello, S., Serek, M. TDZ induces shoot regeneration in various Kalanchoë blossfeldiana Poelln cultivars in the absence of auxin. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 85 (1), 75-82 (2006).
- Yoshimoto, K., et al. Autophagy negatively regulates cell death by controlling NPR1-dependent salicylic acid signaling during senescence and the innate immune response in Arabidopsis. Plant Cell. 21 (9), 2914-2927 (2009).
- Schaller, G. E., Bishopp, A., Kieber, J. J. The yin-yang of hormones: cytokinin and auxin interactions in plant development. Plant Cell. 27 (1), 44-63 (2015).
