Summary
यह आलेख आनुवंशिक रूप से इंजीनियर अग्नाशय के कैंसर चूहों में उच्च संकल्प अल्ट्रासाउंड के उपयोग का वर्णन है । प्राथमिक उद्देश्य पता लगाने और अंतर्जात अग्नाशय के ट्यूमर के मूल्यांकन के लिए एक विस्तृत अनुदेश प्रदान करने के लिए है ।
Abstract
द LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) माउस मॉडल एक स्थापित और अक्सर इस्तेमाल किया ट्रांसजेनिक मॉडल अग्नाशय के कैंसर में उपंयास उपचार का मूल्यांकन करने के लिए प्रतिनिधित्व करता है । ट्यूमर शुरुआत 8 सप्ताह और कई महीनों के बीच KPC मॉडल में चर रहा है । इसलिए, गैर इनवेसिव इमेजिंग उपकरण ट्यूमर शुरुआत और उपचार के लिए प्रतिक्रिया के लिए निगरानी के लिए स्क्रीन करने के लिए आवश्यक हैं । इस समस्या को हल करने के लिए, विभिंन दृष्टिकोण पिछले वर्षों में उभरे हैं । उच्च संकल्प अल्ट्रासाउंड जैसे गैर इनवेसिव, तेज सत्र बार और विकिरण जोखिम के बिना एक उच्च छवि संकल्प के रूप में प्रमुख लाभ है । हालांकि, चूहों में अल्ट्रासाउंड तुच्छ और पर्याप्त संरचनात्मक ज्ञान और व्यावहारिक कौशल नहीं है सफलतापूर्वक पूर्व नैदानिक अग्नाशय के कैंसर मॉडल में उच्च संकल्प अल्ट्रासाउंड प्रदर्शन करने के लिए आवश्यक हैं । निम्नलिखित लेख के साथ, अंतर्जात अग्नाशय के कैंसर मॉडल पर एक विशेष ध्यान देने के साथ murine मॉडल में उदर अल्ट्रासाउंड के लिए एक विस्तृत हाथ पर गाइड प्रस्तुत किया है । इसके अलावा, आम गलतियों का सारांश और कैसे उन से बचने के लिए प्रदान की जाती है ।
Introduction
आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडलों के कैंसर के कारण उनकी क्षमता को बारीकी से मानव कैंसरजनन1,2,3के जटिल प्रकृति दोहराऊंगा के लिए एक बढ़ती महत्व प्राप्त की है । सबसे अक्सर इस्तेमाल किया मॉडलों में से एक अग्नाशय के कैंसर के विकास, प्रगति और चिकित्सीय प्रतिक्रिया के अध्ययन के लिए Kras oncogene में एक सक्रिय उत्परिवर्तन की विशेषता है ट्यूमर शमन p534की एक निष्क्रियता के साथ संयुक्त । यह LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) माउस मॉडल आक्रामक कार्सिनोमा के लिए पूर्व इनवेसिव अग्नाशय intraepithelial neoplasia (PanIN) घावों से कदम वार प्रगति की नकल । Phenotypically, लगभग सभी चूहों जंम के बाद पहले छह महीने के भीतर PDAC विकसित करना । हालांकि, प्रत्यारोपित मॉडलों की तुलना में, KPC मॉडल 8 सप्ताह से कई महीनों के लिए एक उच्च चर ट्यूमर शुरू होने से पता चलता है4। एक बार अग्नाशय ट्यूमर एक निश्चित आकार (व्यास में 5-9 मिमी) तक पहुँचने, ट्यूमर विकास तेजी से तेजी लाने और चूहों के लिए नैदानिक परीक्षणों में दाखिल किया जाना होगा5. इसलिए, ट्यूमर की शुरुआत और ट्यूमर के आकार का सटीक पता लगाने के लिए एक आवश्यक शर्त है नैदानिक अध्ययन रसद और चिकित्सा की निगरानी । सामांय में, चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई)6, गणना टोमोग्राफी स्कैनिंग7,8,9 या उच्च संकल्प अल्ट्रासाउंड की तरह कई दृष्टिकोण ट्यूमर स्क्रीनिंग आयोजित करने के लिए नियोजित किया जा सकता है और थैरेपी10. प्रत्येक तकनीक अपने फायदे और कमियां है । हालांकि एमआरआई-या गणना टोमोग्राफी (सीटी)-इमेजिंग उच्च संकल्प डेटा अधिग्रहण के रूप में के रूप में अच्छी तरह से सटीक मात्रा गणना, सामान्य बेहोशी की आवाज के तहत लंबे समय तक परीक्षा के वक्त की अनुमति देता है, और बहुत महंगा उपकरण की आवश्यकता है, और अक्सर अनुमति नहीं है समय की एक लंबी अवधि के दौरान स्कैनिंग । इसके विपरीत, छोटे जानवर ट्रा एक स्थापित विधि है कि चूहों11में उदर विकृतियों के लिए स्क्रीन करने के लिए नियोजित किया जा सकता है । इस इमेजिंग विधि के लाभ कम स्कैनिंग बार, उच्च संकल्प, और संभावना डॉपलर अल्ट्रासाउंड या विपरीत बढ़ाया अल्ट्रासाउंड (CEUS) का उपयोग करने के लिए समानांतर में अंगों की छिड़काव कल्पना कर रहे हैं । हालांकि, संरचनात्मक ज्ञान, 3 डी कल्पना और पूरी तरह से व्यावहारिक प्रशिक्षण सही छवि व्याख्या के लिए आवश्यक हैं ।
निंनलिखित लेख में, KPC मॉडल में उच्च संकल्प अल्ट्रासाउंड के उपयोग के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान की जाती है । इसके अलावा, मानक अल्ट्रासाउंड छवियों को दर्शाया गया है और खोजी के लिए अभिविन्यास की सुविधा के लिए अंग संरचनाओं के साथ लेबल ।
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Protocol
यह प्रोटोकॉल विश्वविद्यालय चिकित्सा केंद्र Goettingen, जर्मनी (33.9-42502-04-15/2056) में पशु देखभाल दिशानिर्देशों के अनुसार है । व्यक्तिगत पशु समीक्षा बोर्डों की विशिष्ट आवश्यकताओं के आधार पर, प्रोटोकॉल कदम के कुछ तदनुसार संशोधित किया जा सकता है ।
1. KPC चूहों के उदर टटोलने का कार्य
- अनावश्यक अल्ट्रासाउंड स्कैन से बचने के लिए, माउस पेट टटोलना चूहों जो संभवतः एक intraabdominal घाव सहन हो सकता है की पहचान करने के लिए और बाद में पेट के अल्ट्रासाउंड से गुजरना चाहिए ।
- पेट टटोलने का कार्य साप्ताहिक KPC माउस मॉडल में 8 सप्ताह की उम्र से शुरू करते हैं । उच्च संकल्प अल्ट्रासाउंड भी प्रत्यारोपित ट्यूमर मॉडल (उदा, orthotopics) या अंय आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल में लागू किया जा सकता है ।
नोट: ट्यूमर कैनेटीक्स और अध्ययन लक्ष्य पर निर्भर करता है (रोकथाम अध्ययन, चिकित्सीय हस्तक्षेप अध्ययन), बहुत छोटे ट्यूमर का पता लगाने (1-2 मिमी) ट्यूमर palpated जा सकता से पहले शुरुआत ट्यूमर की निगरानी करने के लिए संभव है.
- पेट टटोलने का कार्य साप्ताहिक KPC माउस मॉडल में 8 सप्ताह की उम्र से शुरू करते हैं । उच्च संकल्प अल्ट्रासाउंड भी प्रत्यारोपित ट्यूमर मॉडल (उदा, orthotopics) या अंय आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल में लागू किया जा सकता है ।
- पिंजरे ग्रिड पर माउस प्लेस और धीरे पूंछ द्वारा माउस उठा और धीरे से ऊपर जा रहा है और टटोलना सूचकांक और गैर के अंगूठे के साथ नीचे-फिक्सिंग हाथ (चित्रा 1) ।
- यदि माउस नरम टटोलने का कार्य सहन, धीरे दबाव में वृद्धि से आगे बढ़ें । एक बड़ा प्रतिरोध आसानी से ऊपरी और निचले पेट में पता लगाया जा सकता है । कई बार, हार्ड मल गलती से एक ट्यूमर द्रव्यमान के रूप में व्याख्या कर सकते हैं ।
2. कार्य स्थान की तैयारी
- न्यूनतम तीन विभिन्न कार्य इकाइयों के लिए स्थान प्रदान करें: पूर्व स्कैन क्षेत्र, स्कैनिंग चरण और वसूली पिंजरे. आवश्यक सामग्री चित्रा 2में चित्रित कर रहे हैं ।
- साफ मुख्य काम की थाली (उदाहरण के लिए 70% इथेनॉल के साथ) और स्कैनिंग से पहले हीटिंग प्लेटफॉर्म पर स्विच (चित्र 3) । सुनिश्चित करें कि पहले माउस स्थानांतरित करने से पहले 38-40 ° c का लक्ष्य तापमान तक पहुँच गया है ।
- अल्ट्रासाउंड मशीन पर स्विच करें और प्राप्त किए गए डेटा (आरेख 4) के लिए एक नया फ़ोल्डर बनाएं । B-मोड सेटिंग उदर इमेजिंग के लिए लागू किया जाता है । इसके अलावा, सुनिश्चित करें कि उदर transducer मशीन के सक्रिय बंदरगाह में खामियों को दूर किया है । transducer बढ़ते सिस्टम का उपयोग करके कार्य चरण के शीर्ष पर transducer सिर को ठीक करें ।
- एक हीटिंग प्लेट या थर्मल चटाई (या उपयोग हीटिंग लैंप) पर एक वसूली पिंजरे तैयार करने के बाद सुनिश्चित करने के लिए प्रक्रियात्मक thermoregulation और स्कैन चूहों की तेजी से वसूली । इस पिंजरे के नीचे तकिया के रूप में ऊतक की एक पतली परत रखो घुटन के जोखिम के साथ बिस्तर की आकांक्षा से बचने के (चित्रा 5) ।
3. साँस लेना संज्ञाहरण
- इंडक्शन चैंबर में माउस लगाकर आगे बढ़ें । गैस वाहक प्रवाह के लिए वाल्व खोलें (1 L/ंयूनतम ऑक्सीजन या हवा) और 4% के लिए isoflurane एकाग्रता सेट प्रेरण चैंबर के एक धीरे बढ़ती संतृप्ति की अनुमति । सुनिश्चित करें कि उचित isoflurane सफाई (निष्क्रिय या सक्रिय फ़िल्टरिंग) जगह में है । के बारे में 2-4 मिनट के बाद माउस आमतौर पर गहरी बेहोश हो जाएगा ।
- कार्य मंच पर नाक शंकु के माध्यम से 2% isoflurane प्रशासन द्वारा बेहोशी बनाए रखें ।
- ध्यान से प्रेरण कक्ष से पशु स्थानांतरित करने के लिए कार्य मंच । एक निरंतर गैस प्रवाह के लिए नाक शंकु की जांच करें । संज्ञाहरण लाइन आउटलेट के नाक शंकु में माउस थूथन रखो । प्रारंभिक स्कैनिंग के लिए नियमित स्थिति लापरवाह स्थिति है । माउस को भी अपने दाहिने या बाईं ओर अग्नाशय सिर या पूंछ ट्यूमर की दृश्यता में सुधार करने के लिए रखा जा सकता है (चित्र 6) ।
- हालांकि पेट अल्ट्रासाउंड दर्दनाक प्रतिनहीं है, एक दर्द मुक्त हालत और गहरी संवेदनाहारी राज्य के लिए एक संकेतक के रूप में पैर चुटकी परीक्षण करते हैं । यदि माउस अभी भी सक्रिय है या सक्रिय रूप से चारों ओर घूम रहा है, पुनः हस्तांतरण प्रेरण चैंबर में दोहराया और लंबे समय तक प्रेरण के लिए पशु वापस ।
- corneal तरल पदार्थ नुकसान के कारण चोटों को रोकने के लिए आंख संरक्षण मरहम का प्रयोग करें ।
- संज्ञाहरण के दौरान, एक निगरानी प्रणाली का उपयोग करें । हालांकि, ईसीजी और मलाशय के तापमान पेट अल्ट्रासाउंड स्कैनिंग के लिए नियमित रूप से प्रयोग नहीं किया जाता है । महत्वपूर्ण बात, चूहों संज्ञाहरण के तहत thermoregulate करने की क्षमता खो देते हैं । इसलिए, बारीकी से ऐसे हांफना या एपनिया के रूप में हाइपोथर्मिया या श्वसन संकट के लिए नैदानिक संकेत का निरीक्षण । यदि कोई लक्षण स्पष्ट isoflurane बंद करो और तुरंत वसूली पिंजरे में माउस जगह है ।
4. अल्ट्रासाउंड सेटिंग्स
- निर्माता के निर्देशों के अनुसार बताए गए अल्ट्रासाउंड सिस्टम पर स्विच करें । सुनिश्चित करें कि प्राथमिक सेटिंग सामांय इमेजिंग पर सक्रिय उदर पैकेज के साथ रखा है । आमतौर पर बी-मोड-इमेजिंग एक मानक के रूप में डेटा अधिग्रहण के लिए प्रयोग किया जाता है ।
- निम्नलिखित मापदंडों के साथ अनुकूलित छवि गुणवत्ता प्राप्त: आवृत्ति 40 मेगाहर्ट्ज, 2d-25-30 डीबी, छवि गहराई 10 मिमी, छवि चौड़ाई 10 मिमी, 3 3-6 मिमी के बीच केंद्र के साथ फोकल जोन.
5. माउस की तैयारी
- चिपकने वाला टेप का उपयोग ऊपरी और निचले अतिवाद को ठीक करें । (चित्रा 7) निर्धारण के कारण पशु के लिए किसी भी चोट से बचने के लिए संभव के रूप में सावधान रहना ।
- इलेक्ट्रॉनिक पालतू कतरनों का उपयोग सभी पेट फर निकालें । फर बनावट के कारण, निचले पेट से शुरू करने के लिए ribcage. इस क्षेत्र में त्वचा चोटों से बचने के लिए processus xiphoideus पर ध्यान रखें ।
नोट: माउस फर अल्ट्रासाउंड तरंगों को दर्शाता है और दृश्यता घटाता है । - एक अनुकूलित त्वचा की तैयारी और फर का पूरा हटाने के प्रदर्शन के लिए लोमनाशक क्रीम का प्रयोग करें । प्रशासन कपास युक्तियां (चित्रा 8) का उपयोग करके मुंडा पेट पर क्रीम की एक पतली परत । क्रीम निकालें (30 एस के बाद या बाद में इस्तेमाल किया क्रीम पर निर्भर करता है) सूखे ऊतकों के साथ बहुत सारे अवशेष को पूरी तरह से हटाने के लिए (चित्रा 9, चित्रा 10, चित्रा 11) । क्रीम अवशेष अल्ट्रासाउंड के बाद त्वचा और म्यूकोसा जलन पैदा कर सकता है और इस प्रकार स्वास्थ्य को प्रभावित कर सकते हैं ।
- पर्याप्त स्कैनिंग की स्थिति सुनिश्चित करने के लिए पेट पर अल्ट्रासाउंड जेल के बहुत लागू (चित्रा 12). आमतौर पर, गर्म अल्ट्रासाउंड जेल माउस के लिए हाइपोथर्मिया को कम करने के क्रम में प्रयोग किया जाता है ।
- मैंयुअल रूप से transducer सिर पर अल्ट्रासाउंड जेल की एक पतली परत लागू होते हैं । पायदान के साथ transducer छोर पर छूने से एक टेस्ट प्रदर्शन करते हैं । स्क्रीन पर बाईं ऊपरी ओर एक संकेत में देखा जा सकता है अगर transducer सही ढंग से तैनात है ।
6. उदर अल्ट्रासाउंड
- मजबूत दबाव का उपयोग कर पेट पर transducer समायोजित करें । माउस पेट के भारी संपीड़न श्वसन या संचार हानि के लिए नेतृत्व कर सकते है और बचा जाना चाहिए ।
- ऊपर और नीचे स्कैन । कार्य मंच और x-अक्ष और y-अक्ष के लिए पहियों के फ्रेम को समायोजित करें ।
- जैसा कि पहला कदम दोनों गुर्दे की पहचान । आमतौर पर वे पेट के निचले में hyperechogenic समरूप संरचनाओं के रूप में दिखाई देते हैं । कनेक्टेड वेना renalis आसानी से पाया जा सकता है जो आगे वेना कावा अवर (चित्रा 13) की ओर जाता है ।
- का प्रयोग करें वेना lienalis अग्ंयाशय के लिए ऐतिहासिक पोत के रूप में कार्य करता है । वेना renalis और वेना lienalisके बीच अंतर करने का प्रयास । वेना lienalis का पता लगाने पर अग्ंयाशय बिल्कुल स्थानीयकृत हो सकता है । सामान्य अग्न्याशय एक ठोस संरचना की तुलना में उदर गुहा के माध्यम से फैला है बल्कि एक झिल्ली है (चित्रा 14 और चित्रा 15).
7. अग्नाशय ट्यूमर का पता लगाने और मात्रा मूल्यांकन
- सभी आसपास के संरचनाओं से अग्नाशय के घावों की पहचान । वे आम तौर पर hypoechoic सजातीय दौर या लंबी ऊतक द्रव्यमान (चित्रा 16) के रूप में दिखाई देते हैं । ट्यूमर आमतौर पर फर्म है और शायद ही स्कैन सिर से संकुचित किया जा सकता है । ध्यान दें, समय समय पर यह स्पष्ट रूप से एक ट्यूमर और एक छोटी आंत पाश के बीच भेद करने के लिए मुश्किल हो सकता है. आंत्र क्रमाकुंचन है कि अग्नाशय के ट्यूमर में नहीं मनाया जाना चाहिए करने के लिए ध्यान देना ।
- ट्यूमर का पता लगाने स्क्रीन पर और नीचे कुल आकार की एक छाप पाने के लिए और अल्ट्रासाउंड कैलिपर का उपयोग करके सबसे बड़ा व्यास को मापने के लिए । एक उपयुक्त छवि पाया जाता है एक बार, स्क्रीन फ्रीज और ठीक ट्यूमर का आकार निर्धारित करने के लिए उपाय उपकरण का उपयोग करें । ध्यान दें, बाद में उपयोग के लिए यह अंतर करने के लिए महत्वपूर्ण हो जाएगा कि क्या एक ट्यूमर पूंछ, शरीर या अग्ंयाशय के सिर में स्थानीयकृत है ।
- लाइव मोड में वापस बदलने से पहले, काम रिकॉर्ड करने के लिए चित्रों को सहेजने के लिए सुनिश्चित करें । ध्यान दें, जबकि छवि ठंड यह हो सकता है कि समायोजन पहिया जारी है, और अल्ट्रासाउंड जांच और भी माउस पेट को दबाया जाता है । इसलिए, स्थिर करने के लिए मोड परिवर्तित करने से पहले संपीड़न का समायोजन को ठीक करें ।
- पहले विमान की माप खत्म करने के बाद या तो अनुदैर्ध्य स्थिति में 90 डिग्री से स्कैन सिर घुमाएं (चित्र 17), या इसके पक्ष में माउस बारी, ट्यूमर का पता लगाने के लिए ' अनुदैर्ध्य विस्तार । कुछ ट्यूमर पर्याप्त दृश्यता के लिए माउस की स्थिति को बदलने की आवश्यकता हो सकती है । अग्नाशय पूंछ ट्यूमर के लिए, माउस अपनी बाईं ओर (चित्रा 11 और आंकड़ा 20) पर अग्नाशय के सिर के ट्यूमर के लिए, इसके दाईं ओर (चित्रा 10 और आंकड़ा 19) पर रखा जा सकता है ।
8. ट्यूमर की मात्रा का ठहराव
नोट: सभी प्रयासों का एक प्रमुख उद्देश्य ट्यूमर की मात्रा का सही निर्धारण है । हालांकि वहां कई एक ellipsoid के फार्मूले सहित गणना विधि उपलब्ध तकनीक विश्वविद्यालय चिकित्सा केंद्र Goettingen में पसंद है रहे हैं ।
- सभी तीन पहले से प्राप्त व्यास के साथ सुसज्जित, इसी ट्यूमर की अनुमानित मात्रा की गणना (चित्रा 21).
- वैकल्पिक रूप से, अनुवर्ती मात्रा की गणना और 3-डी-पुनर्निर्माण के साथ ट्यूमर क्षेत्र के एक स्वचालित स्कैन करने के लिए स्कैन सिर के एक मोटर प्रणाली का उपयोग करें ।
9. रिकवरी
- स्कैनिंग के बाद, ध्यान से सभी चिपकने वाला टेप को हटाने और ध्यान से सूखी ऊतक के साथ सभी अल्ट्रासाउंड जेल हटा दें ।
- ध्यान से वसूली पिंजरे ( चित्रा 21) में माउस स्थानांतरित. माउस ´ एस चेहरे पर किसी भी कवर ऊतक है कि श्वसन हानि का कारण हो सकता से बचें । वसूली के लिए एक पक्ष की स्थिति को प्राथमिकता दी जानी चाहिए ।
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Representative Results
अल्ट्रासाउंड इमेजिंग एक बहुमुखी और गैर इनवेसिव तकनीक है कि मानव रोगों के murine मॉडलों में कई मुद्दों को संबोधित किया जाता है । अंय सभी इमेजिंग दृष्टिकोण प्रमुख लाभ की तुलना में उच्च प्रवाह, लागत कुशलता, लघु अधिग्रहण समय और वास्तविक समय इमेजिंग कर रहे हैं । हालांकि, इस उपकरण को सटीक, उच्च गुणवत्ता वाले चित्र उत्पंन करने के लिए विशेषज्ञता की जरूरत है । विशेष रूप से अवांछित कलाकृतियों के मामले में सामान्य रूप से अल्ट्रासाउंड इमेजिंग के साथ कुछ अनुभव बहुत उपयोगी है । अग्नाशय के कैंसर के संबंध में इस उपकरण के ट्यूमर की शुरुआत, प्रगति और चिकित्सा के लिए प्रतिक्रिया का निर्धारण करने के लिए अनुमति देता है । इसके अलावा, अलग व्यास की माप से यह समय के साथ ट्यूमर मात्रा का एक सटीक ठहराव की अनुमति देता है । इस अध्ययन को दर्शाता है और विस्तार से वर्णन कैसे आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडलों में अग्नाशय के कैंसर के लिए एक स्क्रीनिंग उपकरण के रूप में उच्च संकल्प अल्ट्रासाउंड इमेजिंग का उपयोग करने के लिए ।
चित्र 1 : उदर टटोलने का कार्य । हाथ फिक्सिंग धीरे पूंछ खींचती है, जबकि गैर फिक्सिंग हाथ धीरे से प्रक्रिया शुरू होता है और नीचे जा रहा है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 2 : सभी आवश्यक वस्तुओं के अवलोकन के साथ पूर्व स्कैनिंग क्षेत्र. त्वचा संक्रमण (1), धुंध स्पंज (2), 70% isopropanol (3), ग्लास आंत्र के साथ अल्ट्रासाउंड जेल (4), नेत्र मरहम (5), ऊतक पोंछे (6), चिकित्सा टेप (7), पानी कंटेनर (8), पीईटी कतरनी (9) छोटे कंटेनर (10) के साथ लोमनाशक क्रीम, कपास लागू करने के लिए सुझाव आंख मरहम या अल्ट्रासाउंड जेल (11) । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 3 : Isoflurane vaporizer के साथ स्कैनिंग क्षेत्र । समायोज्य जांच धारक (1), प्रेरण चैंबर (2) सहित isoflurane vaporizer (3) के साथ कार्य मंच । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 4 : अल्ट्रासाउंड डिवाइस. अल्ट्रासाउंड सिस्टम में तीन अल्ट्रासाउंड जांच और इसी बंदरगाहों से सप्लाई की जाती है । कुंजीपटल और PC माउस सिस्टम में शामिल हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 5 : वसूली पिंजरे । पिंजरे के नीचे पतली ऊतक और स्कैनिंग प्रक्रिया के बाद पर्याप्त हीटिंग के लिए अनुमति देने के लिए पूर्व गर्म के साथ तैयार किया जाता है । तापमान सेल्सियस (सी °) में दिखाया गया है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 6 : कार्य मंच पर फिक्स्ड माउस । माउस को वर्किंग स्टेज पर एक लापरवाह पोजीशन में रखा गया है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 7 : पालतू कतरनी का उपयोग करने के बाद माउस मुंडा । पेट फर काट रहा है, लेकिन बालों के छोटे भागों जारी रहती है जो नियमित रूप से कलाकृतियों का कारण । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 8 : लोमनाशक क्रीम का प्रयोग करें । प्रशासन पेट के मुंडा क्षेत्र पर लोमनाशक क्रीम की एक पतली परत । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 9 : पूरी तरह से एक चूहे के पेट मुंडा । पानी की बहुत सारी क्रीम अवशेष कुल्ला करने के लिए प्रयोग किया जाता है, केवल फर का एक पूरा हटाने एक इष्टतम स्कैनिंग प्रक्रिया की अनुमति देता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 10 : माउस के दाईं ओर. अग्नाशय पूंछ ट्यूमर स्कैनिंग के लिए इष्टतम अभिविन्यास । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 11 : माउस के बाईं ओर. अग्नाशय के सिर ट्यूमर स्कैनिंग के लिए इष्टतम अभिविन्यास । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 12 : माउस पेट पर अल्ट्रासाउंड जांच । माउस को किसी भी चोट को रोकने के लिए बहुत ज्यादा दबाव का उपयोग नहीं करते । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 13 : सही पेट भाग के अल्ट्रासाउंड छवि । उदर महाधमनी और वेना कावा अवर जैसे मुख्य पोत संरचनाओं गुर्दे और जिगर के करीब निकटता में स्थित हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 14 : छोड़ दिया पेट भाग के अल्ट्रासाउंड छवि । बाएं गुर्दे और तिल्ली के बीच अग्ंयाशय का झिल्लीदार संरचना स्थित है, एक मील का पत्थर के रूप में, वेना lienalis अंग (पीला तीर) के माध्यम से चल रहा है और एक मार्गदर्शक संरचना के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 15 : अग्ंयाशय की सीमा । पेट (सामग्री के साथ) अग्ंयाशय (पीला तीर) की बाईं सीमा के निशान । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 16 : अग्नाशय ट्यूमर की पहचान. एक hypodense दिखाई दे रहा दौर अग्नाशय के ट्यूमर के साथ लापरवाह स्थिति, तीर आसपास के सामान्य ऊतक की सीमा को इंगित करता है. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 17 : अनुदैर्ध्य वरून. अग्नाशय के ट्यूमर की लंबाई का निर्धारण. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 18 : अग्नाशय के ट्यूमर के अनुदैर्ध्य स्कैन । हस्तक्षेप हवा भरा ग्रहणी की वजह से । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 19 : माउस के दाईं ओर: अग्नाशय पूंछ ट्यूमर इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए यहां क्लिक करें कृपया ।
चित्र 20 : माउस के बाईं ओर: अग्नाशय के सिर ट्यूमर इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए यहां क्लिक करें कृपया ।
चित्र 21 : ट्यूमर मात्रा ठहराव. सभी तीन व्यास के अधिग्रहण के बाद पहले से संकेत दिया है कि दो पदों स्कैनिंग, एक मात्रा गणना किया जाता है । इसलिए, किसी ellipsoid का सूत्र उपयोग किया जाता है: 4/3 π a/2 * b/2 * c/ कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 22 : रिकवरी । पशु स्कैनिंग के बाद पूरी तरह से बरामद जब तक एक हीटिंग प्लेट को हस्तांतरित है, माउस आंख पर सफेद आंख मरहम नोटिस । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
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Discussion
इस प्रोटोकॉल के साथ, आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल में उच्च संकल्प पेट अल्ट्रासाउंड इमेजिंग का उपयोग अग्नाशय ट्यूमर को बढ़ाता है के लिए एक विस्तृत वर्णन प्रदान की जाती है । हाल ही में, Sastra एट अल । एक विस्तृत विवरण प्रकाशित कैसे माउस मॉडल में अग्नाशय के ट्यूमर को बढ़ाता है, लेकिन तैयारी और सभी आगे कदम के लिए शर्त के रूप में हैंडलिंग के बारे में कोई कल्पना का निर्देश11दिखाया गया । इस पांडुलिपि का समग्र लक्ष्य चूहों में उच्च संकल्प अल्ट्रासाउंड के लिए एक व्यापक दृश्य गाइड प्रदान करना है ।
हालांकि हम आनुवंशिक रूप से इंजीनियर चूहों में अंतर्जात अग्नाशय ट्यूमर पर हमारे विवरण ध्यान केंद्रित, इस विधि भी orthotopic प्रत्यारोपण मॉडल के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । orthotopic मॉडल के लिए, यहां तक कि बहुत छोटे ट्यूमर 1-2 मिमी करने के लिए पेट में ले दर और ट्यूमर शुरुआत की जांच करने के लिए पता लगाया जा सकता है । के रूप में पेट टटोलने का कार्य व्यक्तिपरक और मुश्किल हो सकता है पुन: पेश करने के लिए, अल्ट्रासाउंड स्क्रीनिंग भी KPC मॉडल में पूर्व टटोलने का कार्य के बिना लागू किया जा सकता है बहुत छोटे अग्नाशय के ट्यूमर की शुरुआत का पता लगाने । इसके अलावा, इस तरह के छोटे आंत्र हवा से भरा छोरों के रूप में पेट संरचनाओं आरोपित हो सकता है । इस संबंध में, यह काम कर मंच पर जानवर की स्थिति को बदलने में सहायक हो सकता है । अधिकांश ट्यूमर एक लापरवाह स्थिति में visualized किया जा सकता है; हालांकि, कुछ ट्यूमर ही पता लगाया जा सकता है जब माउस अपनी बाईं ओर (अग्नाशय के सिर ट्यूमर) या दाईं ओर (अग्नाशय पूंछ ट्यूमर) पर रखा गया है । इस प्रकार, माउस की एक पर्याप्त स्थिति कुशल दृश्यता बढ़ाने के लिए महत्वपूर्ण है ।
उदर अंगों या संरचनात्मक परिवर्तनशीलता की अपर्याप्त दृश्यता हो सकती है । दृश्यता और अल्ट्रासाउंड छवियों, चमक और कंट्रास्ट सेटिंग्स के संकल्प को बढ़ाने के साथ ही ध्यान के अनुसार बदल दिया जाना चाहिए । छवि कलाकृतियों दोषपूर्ण के कारण हो सकता है/गलत जांच, माउस फर की अपूर्ण हटाने, अल्ट्रासाउंड जेल की अपर्याप्त मात्रा या माउस पेट के साथ जांच के अपर्याप्त संपर्क दबाव । इसके अलावा, थोड़ा जांच झुकाव भी काफी दृश्यता में सुधार हो सकता है ।
इसके अलावा, ट्यूमर विकास कैनेटीक्स छोटे जानवर अल्ट्रासाउंड द्वारा longitudinally निगरानी की जा सकती है । तकनीक के प्रमुख लाभ कम लागत (एक अल्ट्रासाउंड मशीन की उपलब्धता को देखते हुए), कोई विकिरण जोखिम, कम स्कैनिंग समय, और चूहों के लिए इस प्रकार थोड़ा तनाव शामिल हैं । विशेष रूप से अनुदैर्ध्य कैंसर के अध्ययन के प्रकाश में, दोहराया स्कैनिंग प्रदर्शन करने के लिए आसान है और छोटे जानवर सीटी या एमआरआई स्कैन के लिए आवश्यक है कि बेहोश करने की क्रिया या संज्ञाहरण की लंबी अवधि की आवश्यकता के बिना जानवरों पर थोड़ा तनाव डालता है ।
के बाद से अधिक शक्तिशाली अल्ट्रासाउंड सिस्टम के साथ तकनीकी अग्रिमों वर्तमान में सुधार संकल्प और तेजी से स्वचालित छवि अनुकूलन उपकरण, छोटे जानवर, उच्च संकल्प अल्ट्रासाउंड के साथ विकसित किया जा रहा है अधिक बार विभिंन नैदानिक में इस्तेमाल किया जाएगा भविष्य में अनुशासन । प्रोटोकॉल के भीतर महत्वपूर्ण कदम सही माउस की तैयारी और स्थिति, साथ ही उदर अंगों और जहाजों की सही पहचान शामिल हैं ।
उच्च संकल्प अल्ट्रासाउंड आनुवंशिक रूप से इंजीनियर और orthotopic माउस मॉडल में अग्नाशय के ट्यूमर का पता लगाने और ठहराव के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण है । अंय की स्थापना की कल्पना तकनीकों की तुलना में इस अल्ट्रासाउंड आधारित विधि तेजी से सत्र बार और लागत कुशलता को जोड़ती है । के बाद से सही अधिग्रहण और अल्ट्रासाउंड छवियों की व्याख्या उचित हाथों पर प्रशिक्षण की आवश्यकता है और इस वीडियो प्रोटोकॉल का अनुभव अग्नाशय के कैंसर के मॉडल में सभी पहलुओं के लिए एक विस्तृत दिशानिर्देश के रूप में कार्य करता है ।
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
इस अनुसंधान के ड्यूश Krebshilfe (मैक्स ईडर समूह एक: ११०९७२), एक DGVS डॉक्टरेट थीसिस छात्रवृत्ति (SMB), और एक और -Kröner-Fresenius फाउंडेशन छात्रवृत्ति (RGG) के लिए विश्वविद्यालय के मेडिकल सेंटर Goettingen पर द्वारा समर्थित किया गया था । हम विशेषज्ञ तकनीकी सहायता के लिए जुटता ब्लमबर्ग और Ulrike Wegner को धन्यवाद देते हैं । हम भी माउस रखने के लिए विश्वविद्यालय के चिकित्सा केंद्र Goettingen के पशु सुविधा पर सभी पशु तकनीशियनों का धन्यवाद. सभी प्रयोगों जर्मन पशु कल्याण नियमों के अनुसार प्रदर्शन किया गया ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Visual Sonics Vevo2100 High Resolution Ultrasound System, including imaging stage and anesthesia line | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | VS-11945 | |
| Vevo 2100 MicroScan Transducer MS-550-D (22-55MHz) | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | VS-11874 | |
| Vevo Anesthesia System (anesthesia induction chamber with fresh and waste gas inlet) | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | SA-12055 | |
| Vevo Imaging Station (working stage with nose cone for anesthesia supply) | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | SA-11982 | |
| electronic pet clippers | Panasonic Marketing Europe, Germany | 5025232484324 | Panasonic ER-PA10-s |
| Labotect Hot plate | Labor tech Göttingen, Germany | 13854 | |
| eye cream (ophthalmic ointment) | Schülke&Mayr, Germany | 9080249 | |
| veterinary isoflurane | Abbvie, Germany | 4831867 | |
| depilatory cream | RB healthcare UK, United Kingdom | 8218535 | |
| 70% ethanol (v/v) in distilled water | TH. Geyer, Germany | 22941000 | |
| ultrasound gel | Asmuth, Germany | 13477 | |
| tissue wipes | Kimberly-Clark Germany, Germany | 7558 | |
| cotton tips | Meditrade, Germany | 75481116 | |
| glass bowl for ultrasound gel | ARC France, France | H1149 | |
| water bowl | W & P Trading Co., USA | B00K2P6PLQ | |
| gauze sponges | Fuhrmann, Germany | 960504 |
References
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