L’obiettivo generale di questa procedura è quello di fornire una tecnica altamente riproducibile per la valutazione in vivo della perturbazione barriera emato – encefalica nei modelli del ratto del colpo ischemico.
Ictus ischemico conduce a edema cerebrale di vasogenic e successive cranico primario, che è mediata attraverso la distruzione della barriera sangue – cervello (BBB). Ratti con il colpo ischemico indotto sono stati stabiliti e usati come modelli in vivo per studiare l’integrità funzionale della BBB. Rilevazione spettrofotometrica di blu di Evans (EB) nei campioni di cervello con lesione ischemica potrebbe fornire giustificazione affidabile per la ricerca e lo sviluppo delle modalità terapeutiche novelle. Questo metodo genera risultati riproducibili ed è applicabile in qualsiasi laboratorio senza necessità di attrezzature speciali. Qui, presentiamo una guida di riferimento tecnico e visualizzato sulla rilevazione di stravaso di EB dopo induzione del colpo ischemico in ratti.
L’edema vasogenic cervello dovuto rottura della barriera emato – encefalica (BBB) rimane una complicazione importante dell’ictus ischemico e un elemento determinante del tasso di sopravvivenza in pazienti ictus1,2. L’emato – encefalica (BBB), che è formata da cellule endoteliali dei capillari del cervello (BCECs) e composto da componenti distinti neurovascular (ad es., giunzioni strette tra BCECs, periciti, astroglial e cellule neuronali3), fornisce un specializzata e dinamica interfaccia tra il sistema nervoso centrale (SNC) e la circolazione del sangue periferico4,5. Insulti come lesioni di ischemia-riperfusione potrebbero compromettere l’integrità funzionale della BBB e portare alla successiva penetrazione di leucociti circolanti nel parenchima del cervello che attivano in definitiva l’infiammazione cerebrale e lesioni cerebrali primari 6 , 7. modelli animali sono necessari per l’esatta individuazione della disfunzione di BBB seguendo l’occorrenza di un oggetto stroke. Tali modelli sono di grande importanza per lo studio di base dei meccanismi fisiopatologici e introducendo nuove strategie neuroprotettive. In vitro modelli cellulari basati sulla cultura della BBB sono stati altamente sviluppati e utilizzati per lo studio molecolare del BBB fisiopatologia8,9,10. Tuttavia, in vivo modelli animali, che producono un danno ischemico della BBB simili a condizioni cliniche umane, sono anche molto utili a questo proposito. La determinazione quantitativa dello stravaso di blu di Evans (EB) è una tecnica ben accettata e sensibile che è stata utilizzata per la valutazione dell’integrità BBB e funzione nelle malattie neurodegenerative, tra cui ictus ischemico11, 12 , 13 , 14. questo metodo è conveniente, fattibile, riproducibile e completamente applicabile in qualsiasi laboratorio sperimentale. Sua attuazione non richiede attrezzature avanzate, come traccianti radioattivi15 o risonanza magnetica (MRI)16, che sono prerequisiti per altri metodi. In questo articolo, dimostriamo completamente base processi tecnici di valutazione BBB utilizzando lo stravaso EB nei modelli del ratto del colpo ischemico.
Finora, vari metodi come l’autoradiografia e rilevamento dei traccianti radioattivi24,25, microscopia di immunofluorescenza26,27ed EB stravaso tecnica20, 23 sono stati usati per valutare il danno della barriera emato – encefalica. Tintura EB è fortemente in grado di legarsi all’albumina del siero e viene utilizzata come tracciante per la rilevaz…
The authors have nothing to disclose.
Gli autori sono grati al Vice Cancelliere per la ricerca della Ardabil University of Medical Sciences (Ardabil, Iran) per il sostegno finanziario (concedere No: 9607).
Isoflurane | Piramal | AWN 34041100 | 20 – 25 °C |
2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Molekula | 31216368 | 4 years |
Sprague–Dawley rats | Pasture Institute (Tehran, Iran) | 300-350g | |
Evans Blue | Sigma-Aldrich | 314-13-6 | |
Trichloroacetic acid | Sigma-Aldrich | 76-03-9 | 2 years |
Bupivacaine HCl (0.5%) | Delpharm Tours | below 25 °C | |
Bupernorphine | Exir (Iran) | ||
Sodium Carbonate | Sigma-Aldrich | 497-19-8 | |
Sodium chloride | Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | |
Di- Sodium hydrogen phosphate | EMD Millipore | 231-448-7 | |
Potassium chloride | Sigma-Aldrich | 7447-40-7 | |
Ethanol | Sigma-Aldrich | 64-17-5 | |
silicone(Xantopren) | Heraeus | EN ISO 4823 | |
Activator universal plus | Heraeus | 66037445 | |
Micro-Dissecting forceps | Stoelting | 52100-41 | |
Spring Scisors | Stoelting | 52130-00 | |
Operating Scissors | Roboz | 52140-70 | |
Brain matrix | Stoelting | 51390 | |
Anesthesia Machine for Small Animals | | Kent Scientific | SS-01 | |
Power Lab system | AD Instruments | ML880 | |
Laser Doppler flowmeter | AD Instruments | ML191 | |
Heating feed back system | Harvard Appratus | 72-7560 | |
Vascular micro clamp | FineScience Tools | 18055-03 | |
Silk 5-0 suture thread | Ethicon | 682G | |
Ethilon 4-0 suture thread | Ethicon | EH6740G |