Summary
Vi etablert en roman kirurgisk protokoll for to-fotonet bildebehandling av levende mus lever med minimal invasjonen. Med denne teknikken identifisert vi detaljert strukturen i leveren under lipopolysakkarid-indusert endotoxemia. Vi forventer at denne metoden kan brukes til å fastslå effekten av ulike reagenser behandlingen til hepatic leukocytter migrasjon.
Abstract
Sepsis er en alvorlig infeksjon som kan forårsake organ dårlig og vev skade. Selv om dødelighet og sykelighet priser knyttet til sepsis meget er ekstremt høy, ikke direkte behandling eller orgel-relaterte mekanisme har vært undersøkt i detalj i sanntid. Leveren er det viktige orglet som administrerer toksiner og infeksjoner i menneskekroppen. Her, rettet vi å utføre intravital avbildning av musen lever etter induksjon av endotoxemia for å spore motilitet av immunceller, for eksempel nøytrofile og leveren capsular makrofager (LCMs). Derfor designet vi en roman kirurgisk metode for eksponering av leveren med minimal invasiv kirurgi. Mus ble intraperitoneally injisert med lipopolysakkarid (LPS), en felles endotoxin. Med vårt romanen kirurgisk tilnærming for eksponering og intravital bildebehandling av musen lever, fant vi at nøytrofile rekruttering i LPS-behandlet LysM-grønn fluorescerende protein (GFP) økte musen leveren sammenlignet med det i fosfat-bufret Saline-behandlet leveren. Etter LPS behandling økt antall nøytrofile betydelig med tid. I tillegg visualisert bruker CX3Cr1-GFP mus, vi er leveren bosatt makrofager kalt LCMs. Derfor undersøke virkningen av ny reagenser til å styre immun mobilitet i vivo, kan å bestemme motilitet og morfologi av nøytrofile og LCMs i leveren tillate oss å identifisere terapeutisk effekt orgel svikt og vev skade forårsaket av leukocytter aktivisering i sepsis.
Introduction
Leveren er den store metabolske orgelet i pattedyr; det fungerer som et tårn for energi, hormoner og avgiftning1. På grunn av dens betydning, har forskere gjennomført mange i vitro og vivo eksperimenter for å belyse endringer i leveren ved betennelser. Intravital mikroskopi er brukt til å fange levende bilder fra lever2 . Faktisk introdusert ulike leveren tenkelig metoder har blitt2,3,4,5,6. Men for å utvikle en mer forenklet kirurgisk tilnærming og oppnå stabilisering av målet orgel og immunceller, utviklet vi en enkel protokoll som kan veilede forskere for å minimere deres innsats for intravital avbildning.
I denne studien innført vi en stabil og romanen tenkelig kammer og kirurgisk teknikk som kan brukes til å minimere blødning og mulige infeksjoner. Vi bekreftet at leveren forble intakt for mer enn 2 timer. Med denne metoden identifisert vi morphologies LCMs7 og nøytrofile under septisk tilstand. Siden denne metoden reduserer fysiske og biologiske forvirrende faktorer som skjelving og uventet betennelse i kirurgiske prosedyren, forventer vi at denne metoden kan brukes til å observere akutte reaksjoner av immunceller i leveren svar reagenser som LPS.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle prosedyrer ble utført i samsvar med retningslinjene i institusjonelle Animal Care og bruk komiteen av Yonsei University College of Medicine, Korea. LysM-grønn fluorescerende protein (GFP; gfp / +) mus8 og CX3Cr1-GFP (gfp / +)9 mus på 8-12 ukens av alderen ble brukt for intravital avbildning. Alle kirurgiske verktøy var autoklaveres og desinfiseres med 70% alkohol.
1. spesialdesignede musen leveren imaging kammeret hjelper verktøy
- Musen leveren imaging kammer design
- Lage et kammer av følgende størrelse for musen leveren imaging (figur 1): indre kammeret (120 mm lengde × 160 mm bredde × 30 mm høyde), ytre kammer (100 mm lengde × 100 mm bredde × 24 mm høyde), bolter (minuskel: 3 mm × 30 mm høyde), nøtter (minuskel: 4 mm) , og vingeformede nøtter (minuskel: 4 mm).
- Mål herding agent og elastomer base i 1:9-forhold for å gjøre totalt 120 g silikon.
- Sett blandingen til flytende silikon i en 250 mL Erlenmeyer kolbe og bland det godt. Deretter satte kolbe i en desiccator og fjerne luftbobler i ca 1 time under vakuum gjennom pumpen.
- Hell flytende silikon blandingen i en spesialdesignet musen kammer så høyt som 10 mm høyde og la det kur for et par dager (figur 1A).
- Utarbeidelse av dekselet lysbilder og leveren fikse seng
- I metallramme, knytter du dekke glass ved hjelp av silikon lim. La det tørke i 1 dag (figur 1B).
- For å effektivt holde destillert vann for vann nedsenking linsen, er en semipermanent vann-blokkerende struktur viktig. Lag 1 mm avrunding silikon lim og herde det over natten.
- Bland herding agent og elastomer base og så helle den i en 6-vel plate i en høyde av ca 8-10 mm. Utfør herding prosessen som beskrevet i 1.1.2-1.1.4.
2. forberedelse av LPS
- Forberede sterilt 1 × fosfat-bufret saltvann (PBS) å fortynne LPS pulver fra Salmonella enterica serotype enteritidis. (1 × PBS: 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 1,8 mM KH2PO4).
- Forvarm PBS i vannbad på 37 ° C, og åpne LPS pulver flasken (25 mg) nøye.
- Bruker en Pipetter hjelpemiddel, hell sterilt PBS (5 mL) i LPS pulver flasken og forsiktig røre eller utsette løsningen for å forberede lagerløsning.
Merk: Etter LPS pulver er flytende, harde vortexing kan forårsake bobler. Unngå å gjøre bobler å minimere tap når dele i 1,5-mL rør. - Lagrer lager LPS løsningen på −20 ° C, og fortynne den i en 1 mg/mL LPS injeksjonsvæske.
- Injisere 1 mg/mL LPS løsningen (20 mg/kg) i peritoneum med ikke-anesthetized musen bruker en 1-mL sprøyte. For kontroll dyret, injisere den samme mengden PBS.
- Vent 2t for tilstrekkelig betennelsesreaksjon.
3. forberedelse av Texas-rød dekstran stain blodkar
- Forberede to 15-mL konisk rør og 10 mL steril PBS.
- Fortynne Texas-rød dekstran pulver (25 mg) i 3 mL PBS og bland det godt. Overføre blandingen til en tom 15-mL konisk rør.
- Overføre gjenværende PBS (7 mL) til 15-mL konisk røret som inneholder dekstran blandingen (3 mL).
- Koble filtere 0,45 µm sprøyten til spissen av en 10-mL sprøyte. Sprøyte filteret skal erstatte nålen.
- Filtrere dekstran blandingen (10 mL). Trykk sprøyten jevnt for å unngå søl.
- Dispensere 500 µL av 2,5 mg/mL dekstran løsning i lys-blokkert 1.5-mL tube og lagre den på −20 ° C. Når tint, lagre den på 4° C.
4. kirurgisk prosess
- Desinfiser tabellen kirurgi og alle instrumenter med 70% alkohol før operasjonen. Deretter angi verktøy for leveren kirurgi og justere varmeplaten 37 ° c (figur 2A, B).
- For anestesi, injisere intraperitoneally mus med 30 mg/kg av tiletamine/zolazepam og 10 mg/kg av xylazine. Disse løsningene kan blandes og fortynnet i PBS for samtidige injeksjon. Bekrefte anesthetization ved forsiktig å trykke tå på musen. Fortsette neste trinn når det er ingen refleks.
- Bruke lite øye ointment å hindre tørrhet i mouse netthinnen.
- Fjerne kroppshår rundt magen området bruker hår fjerning krem (figur 2C).
- Injisere 200 µL av Texas-rød dekstran løsning (konsentrasjon av 2,5 mg/mL) via hale blodåre eller retro-orbital innsetting bruker en insulinsprøyte (figur 2D).
- Merke området rett sirkulerer med merketråd. Linjen skal trekkes fra xiphoid prosessen til slutten av vrborden. Kuttet epidermis med tang og saks (figur 2E, F).
- Åpne bukhulen mikro-saks og tang, og utsette leveren nøye. Den venstre lateral lobe skal være rullet ut med bomull vattpinner (figur 2 g, H).
- Hell 500 µL av sterile PBS på bukhulen å hindre tørrhet i leveren.
- Plasser musen i høyre-liggesår posisjon i en spesialdesignet kammer, og bruke en liten mengde vev lim på silisium sengen. Deretter nøye feste leveren bruker bomull vattpinner (figur 2I).
Merk: Leveren vev er ekstremt basert, ikke mekanisk trekk ut leveren. Forsiktig kast det med bomull vattpinner. - Et par sekunder senere, våt leveren igjen med 500 µL av sterile PBS å unngå uttørking av leveren. Plasser metallramme på leveren og fastsette den fast med nøtter (figur 2J).
5. intravital imaging i leveren med to-fotonet mikroskopi
- Kjøre ZEN programvare (Carl Zeiss) å aktivere laser, sette bølgelengden til 880 nm og sett grønn, og rød kanaler. Justere laser makt fluorescens intensitet (figur 3A). Utslipp filterinformasjon er som følger: grønn/Alexa488, 500-550 nm og rød/Alexa 555, 575-610 nm.
- Plasser kammeret på tenkelig scenen og plassere 20 X vann nedsenking linsen nær dekket glasset.
- Fastsette silikon gummi varmeren under selve musen å opprettholde sin kroppstemperatur (figur 3B).
- Slipp 500 µL destillert vann på metallramme, og trekk linsen nær leveren (Figur 3 c).
- Justere fokus og bestemme dybden og tid av området tenkelig.
- Gjennomføre bildebehandling.
- For langsiktige bildebehandling, injisere halv en dose tiletamine/zolazepam og xylazine blanding hver time under bildebehandling. Opprettholde kroppstemperaturen av musene på 37 ° C er viktig i denne fasen. Alltid holde på med den til musen, siden anesthetization tid er forskjellig fra hver musen.
Merk: Denne metoden er ikke egnet for gjenoppretting etter kirurgi og bildebehandling. Vi ofre etisk musen umiddelbart etter operasjonen. - Sjekk pedal reflekser for enhver 30 min for stabil anesthetization.
6. dataanalyse
- Åpne data analyseprogramvare Volocity og deretter importere rådata i biblioteket til programvaren.
- Fjerne støy fra bildet passer situasjonen og ta et øyeblikksbilde.
Merk: For å få jevn bilder, bruke 'Fine' eller 'Median' filteret. Videre bruk funksjonen 'Kontrast ekstrautstyr' for å gjøre mørke eller uklare bilder klarere. - Passe de redigerte elementene til 100% og eksportere som JPEG eller TIFF-filer for øyeblikksbilder og AVI-filer for filmer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
En enkel og meget stabil tenkelig kammer ble utarbeidet. Bunnen av kammeret var dekket med silikon, noe som forhindret glir av musen kroppen og organer. I tillegg fordi silisium har riktig mengde elastisitet, kan det hindre forventet skade forårsaket av presset av dekselet lysbildet (figur 1A, C). Andre, vev-safe lim (Vet obligasjon) ble brukt for å fikse utdraget leveren på halvsirkelformede silikon sengen. Denne metoden mulig for oss å unngå skjelvende forårsaket av hjerteslag eller respirational bevegelse. Endelig ble et metall cover lysbilde plassert og løst av bolter og muttere basert på kroppen størrelsen av mus og plasseringen av utstikkende leveren (figur 1B-D). Når anestesi ble utført riktig, kan innstillingene bildebehandling vare lenger enn 6 h.
Før du starter operasjonen, ble kroppstemperaturen av musene kontrollert ved å plassere dyret på en oppvarming kammer som var forhåndsinnstilt til 37 ° C (figur 2A). Neste, for å hindre sekundære infeksjoner, alle nødvendige verktøy for musen kirurgi og bildebehandling ble sterilisert med 70% alkohol og/eller autoklaveres å hindre sekundære infeksjoner (figur 2B). Deretter ble musen kroppshår fjernet, spesielt fra mageområdet, med en hår fjerning krem (figur 2C). Før i snitt, var huden sterilisert med povidon jod. Blodstrømmen ble merket med Texas-rød dekstran via blodåre injeksjon (figur 2D). En linje som begynte i xiphoid prosessen og endte på høyre ribben ble trukket. Denne rett sirkulerer snittlinjen hjalp minimere blødning. Med en skalpell eller mikro-saks, ble dissection startet. magen ble ikke åpnet for mye for å unngå utvisning av tarmen fra bukhulen (figur 2E, F). Fett og vev lag ble fjernet med tang og mikro-disseksjon saks, og snitt området ble renset med sterilisert PBS og bomull vattpinner (figur 2 g). Den venstre lateral lobe, den største av fire leveren lobes, ble tatt ut med bomull vattpinner og deretter knyttet til silisium sengen bruker et vev bånd (Vet obligasjon). Leveren vev var ekstremt basert, flyttet leveren med bomull vattpinner (figur 2 H, jeg). Etter anvender metall cover glass, ble leveren utsatt for bildebehandling. For å hindre tørrhet, ble sterilisert PBS brukt til avstanden mellom leveren og dekke glass (figur 2J). Høyden på dekket glasset ble justert med nøtter ved behov.
To-fotonet mikroskopi var utstyrt med X, Y, Z aksen mikrometer kontrolleren og skjermet med svart gardin (figur 3A). Laser var stabilt modus-låst på Zen programvare. For å erverve stabil bildebehandling, skulle drivende målet orgel være forhindret. Derfor tenkelig kammer og kirurgisk metode var ledninger av den elektroniske varmeputen sikret fra tenkelig scenen og godt organisert av selvklebende tape (figur 3B). Til slutt, en tilstrekkelig mengde destillert vann ble lagt til toppen av forsiden glasset for vann nedsenking linsen (Figur 3 c).
Blodstrømmen var tydelig indikert på skjermen etter intravenøs injeksjon av Texas-rød dekstran. For å fange både rødt og grønt samtidig, vi utført bildebehandling med en bølgelengde på 880 nm. Ifølge intravital tenkelig analyse, var et passende antall nøytrofile alltid sirkulerende blod i PBS tilstand. Mens antall nøytrofile i LPS behandlet mus betydelig økt. Merk at mange nøytrofile var sirkulerer i blodet, men de ikke overføre utenfor fartøyet i betennelsestilstand. (Figur 4A, utfyllende film 1). Nøytrofile i LPS-behandlet mus var mer bestemt overholder luminal overflaten av fartøyet, som gjorde hyppigere påvisning av nøytrofile i beholderen (figur 4A, utfyllende film 1). Bortsett fra motilitet av nøytrofile, ble LCMs i CX3Cr1-GFP mus observert på overflaten av leveren vev enn dypt i vevet (figur 4B). LCMs viste liten bevegelse eller aktivisering i leveren selv i LPS-behandlet mus.
Figur 1 . Utformingen av leveren kammer og datterselskap verktøy. (A) pouring silikon blandingen i spesialdesignede musen kammeret. (B) størrelse metalldeksel lysbildet (1 tomme = 25,4 mm, minuskel: = diameter). (C) bildet viser plast spesialdesignede leveren kammer fylt med silikon. (D) andre deler ble brukt til å montere leveren kammeret. Fikse bolter og muttere ble laget av jern. Piler angitt bolter og muttere, henholdsvis c og (D). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2 . Kirurgisk trinnene for leveren kirurgi. (A) metall og gummi oppvarming plater på 37° C og DC temperatur kontroller før operasjonen. (B) samlet surgery og støttende verktøy for leveren kirurgi (a. bomull swab og beholder, b. 70% alkohol, c. papir vev, d. barberhøvel, e. hår fjerning, f. spesialdesignede kammer, g. kirurgisk tape, h. hjemmelaget leveren pidestall, i. vingemutter og fikserer og nøtter, j. metalldeksel lysbildet k. mikro-disseksjon saks l. tang, m. saks, n. 3-mL sprøyte, o. markør, s. 0.3-mL insulin sprøyten, q. 1-mL sprøyte). Prosedyre for leveren kirurgi (C-J). (C) bruk hår fjerning krem på abdominal området. (D) retro-orbital innsetting av mus med Texas-rød dekstran. (E) markerer snitt stedet med en markør. (F) kutte epidermis med tang og saks. (G) gjør et snitt i bukhulen. (H) trekke ut den venstre lateral lobe forsiktig. (I) feste lobe til leveren pedestal med veterinæren bond. (J) bilde av finalen definere. Nøtter ble løst til metalldeksel lysbilde, og deretter dekke lysbildet ble løst med sommerfugl nøtter. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3 . Innstillinger for to-fotonet mikroskopi og tenkelig scenen. (A) visning av to-fotonet mikroskopi (LSM 7 MP) og tenkelig scenen, som kan flytte i x- og y retninger. (B) en leveren tenkelig kammer med en gummi varmeputen var festet med tape for å dekke musen. (C) slippe destillert vann med en pipette mellom linsen og dekke glass. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4 . Visualisering av nøytrofile og leveren capsular makrofager i leveren levende mus. (A) utvidet fokus øyeblikksbilde av nøytrofile i leveren LysM-GFP mus. Kontroll bildet var fra PBS-behandlet mus. LPS bildet var fra LPS-behandlet mus. Bildene ble anskaffet ved hjelp av en 20 X / 1.0 NA vann nedsenking linse (synsfelt [FOV] = 424.3 µm × 424.3 µm, dybde = 40 µm, slice intervall = 1 µm, tidsintervallet = 60 s, syklus = 31). Skala bar = 50 µm. (B) indre og overflate område øyeblikksbilde av LCMs i leveren CX3Cr1-GFP mus. Bildene ble anskaffet med en 20 × / 1.0 NA vann nedsenking linse (FOV = 424.3 µm × 424.3 µm, dybde = 40 µm (indre) / 10 µm (overflate), sektor intervall = 1 µm, tidsintervallet = 60 s (indre) / 20 s (overflate), syklus = 31). Skala bar = 50 µm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Sekvenser komplementære filmen 1. Sammenligning av PBS behandlet leveren versus LPS behandlet leveren. Klar forskjell i to ulike forhold er også observert. I LPS behandlet lever, nøytrofile er betydelig økt og motilitet er redusert. Stabiliteten i filmen i begge betingelsene er observert. Blodstrøm er merket med Texas røde dekstran. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Leveren er aktivt studert av mange grupper3,10, på grunn av viktigheten av funksjonen. For eksempel foreslo Heymann et al. en delikat metode som bruker agarose. Selv om denne metoden ble funnet for å være svært nøyaktig, tar innstillingen agarose tid. Men med vår metodikk, kan alle prosedyrer utføres innen 30 min, minimere andre forvirrende faktorer. Andre er stabilisere leveren svært viktig fordi hjerterytme kan forstyrre videoen. For å eliminere dette fenomenet, flyttet vi mus i høyre liggesår posisjon.
Et viktig skritt i denne protokollen var produksjon metalldeksel og plasseringen på metallstangen. Det viktigste hinderet som vi møtte var å finne ut hvordan å overvinne friability i leveren i henhold til leveren fiksering ved hjelp av en passende mengde press. Først når bare sommerfugl nøtter ble brukt til å holde dekselet lysbildet, blodsirkulasjonen ble hindret og leveren kunne tåle vekten av dekselet lysbildet. I stedet utviklet vi en metode for å rulle ned bolter før plassere dekke lysbildet langs linjen. Siden forsiden lysbildet ble støttet av bolter, ga plass for leveren tykkelsen og herved, trykk ikke ned hardt i leveren og ennå opprettholdes balansen og fiksering. Bruker LysM-GFP mus6, bekreftet vi at denne utformingen kan tillate visualisering av nøytrofile i sinusoids og sentrale årer. CX3Cr1-GFP mus5 ble også brukt i denne modellen for å observere LCMs. LCMs ble ofte funnet på overflaten av leveren.
Høyden på leveren sokkelen eller silisium sengen, var også viktig. Hvis det var for høyt, vil blodsirkulasjonen i leveren bli forstyrret. Når høyden på leveren sokkelen var for lavt, var det vanskelig å opprettholde stabil fiksering av leveren. Fordi alle mus hadde ulike kroppens størrelser, produsert vi silisium senger som hadde ulike høyder med en 6-vel plate, som brukes for cellekultur. På denne måten kunne vi tilpasse kammeret avhengig av hver musen. I sammendraget utviklet vi en ny og enkel protokoll for intravital avbildning av musen leveren til å undersøke morfologi og motilitet av immunceller i leveren under inflammatoriske tilstander.
Denne nye protokollen kan være svært nyttig for forskere i dette feltet som vil observere akutt immunrespons i leveren. Men med denne metoden kan ikke forskere gjennomføre langsiktige imaging lenger enn 6 h på grunn av leveren fiksering med vev lim. Denne protokollen er en engangs eneste metoden, og derfor mus skal ofres umiddelbart etter bildebehandling. Når leveren er løsrevet fra silicon sengen, vil leveren etterhvert bli fjernet av fra sengen, noe som resulterer i overdreven blødning. Re-innsetting og suturing av mageområdet er derfor umulig for fremtidige observasjon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer ingen konkurrerende økonomiske interesser.
Acknowledgments
Denne studien ble støttet av et stipend fra National Research Foundation av Korea (NRF) finansiert av Korea regjeringen (MSIP, grant nr. 2016R1A2B4008199 Y-m. H.), og helse og velferd, Sør-Korea (gi nummer: HI14C1324).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Custom designed chamber | Live Cell Instruments | Custom-designed size | |
| Metal cover slide | Live Cell Instruments | Custom-designed size | |
| Cover glass | Electron Microscopy Sciences | #72204-03 | |
| Sylgard 184 Silicone elastomer kit | Dow Corning | ||
| Erlenmeyer flask | DURAN | 21 216 36 | |
| Cell culture plate (Flat type) | HYUNDAI Micro Co. | H31006 | |
| Desiccator | ADARSH | 55204 | |
| High Q BOND SE 5 mL | BJM LAB | To make semi-permanent dam | |
| Flexible Silicone Rubber Heaters | Omega | SRFR/SRFG SERIES, M1250/0800 | |
| DC power supply | Toyotech | DP30-03A | |
| Phosphate-buffered saline | Home-made | ||
| Lipopolysaccharides (LPS) from Salmonella enteria serotype enteritidis | Sigma-Aldrich | L6011 | |
| Texas Red Dextran | Thermo Fisher Scientific | D1830 | |
| 15 mL High-clarity polypropylene conical tube |
FALCON | 14-959-49B | |
| 0.45 μm filter (Minisart Syringe Filter) | Sartorius | 16555k | |
| 1.5ml Micro Tube, Amber | Axygen | MCT-150-X | For light-blocking |
| 1 mL syringe | Korea Vaccine | KV-S01 | |
| 3 mL syringe | Korea Vaccine | KV-S03 | |
| 10 mL syringe | Korea Vaccine | KV-S10 | |
| 0.3 mL insulin syringe | Becton Dickinson | 324900 | |
| Hair removal cream 100 mL | Body natur | ||
| Cotton swab | ABDI | ||
| Zoletil 50 5 mL | Virbac | ||
| Rompun 10 mL | Bayer | ||
| Heating plate | Live Cell Instruments | PH-S-10 | Custom-designed size |
| DC controller | Live Cell Instruments | CU-301 | |
| Microdessection Scissors | Harvard Apparatus | 72-5418 | |
| Scissors | Roboz | RS-5882 | |
| Forceps | Roboz | RS-5137 | |
| Vet bond | 3M | 1469SB | |
| ZEN software (Black Edition) | Carl Zeiss | Program for LSM 7 MP | |
| LSM 7 MP | Carl Zeiss | ||
| Volocity | PerkinElmer | Analysis program |
References
- Girard, J. R., et al. Fuels, hormones, and liver metabolism at term and during the early postnatal period in the rat. J Clin Invest. 52 (12), 3190-3200 (1973).
- Marques, P. E., et al. Imaging liver biology in vivo using conventional confocal microscopy. Nat Protoc. 10 (2), 258-268 (2015).
- Dasari, S., Weber, P., Makhloufi, C., Lopez, E., Forestier, C. L. Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics. J Vis Exp. (101), e52303 (2015).
- Honda, M., et al. Intravital imaging of neutrophil recruitment in hepatic ischemia-reperfusion injury in mice. Transplantation. 95 (4), 551-558 (2013).
- Jenne, C. N., Wong, C. H., Petri, B., Kubes, P. The use of spinning-disk confocal microscopy for the intravital analysis of platelet dynamics in response to systemic and local inflammation. PLoS One. 6 (9), e25109 (2011).
- Ritsma, L., et al. Intravital microscopy through an abdominal imaging window reveals a pre-micrometastasis stage during liver metastasis. Sci Transl Med. 4 (158), 158ra145 (2012).
- Sierro, F., et al. A Liver Capsular Network of Monocyte-Derived Macrophages Restricts Hepatic Dissemination of Intraperitoneal Bacteria by Neutrophil Recruitment. Immunity. 47 (2), 374-388 (2017).
- Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages. Blood. 96 (2), 719-726 (2000).
- Jung, S., et al. Analysis of fractalkine receptor CX(3)CR1 function by targeted deletion and green fluorescent protein reporter gene insertion. Mol Cell Biol. 20 (11), 4106-4114 (2000).
- Heymann, F., et al. Long term intravital multiphoton microscopy imaging of immune cells in healthy and diseased liver using CXCR6.Gfp reporter mice. J Vis Exp. (97), (2015).
