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Cancer Research

जीभ Extracellular मैट्रिक्स के निर्माण और जीभ स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा में से पुनर्गठन इन विट्रो

Published: June 20, 2018 doi: 10.3791/57235
Automatic Translation
1, 1, 1
1Key Laboratory of Gene Engineering of the Ministry of Education, State Key Laboratory of Biocontrol, School of Life Sciences, Sun Yat-sen University

Summary

एक विधि यहां भाषा extracellular मैट्रिक्स (उनि) की तैयारी के लिए कुशल decellularization के साथ दिखाया गया है । उनि स्थिर या उभार संस्कृति की स्थिति के तहत एक जीभ स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा (TSCC) मॉडल के पुनर्निर्माण के लिए कार्यात्मक पाड़ के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है ।

Abstract

इन विट्रो मेंजीभ स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा (TSCC) के लिए एक प्रभावी और यथार्थवादी मॉडल का निर्माण करने के लिए, तरीकों को TSCC निर्माण के लिए कार्यात्मक पाड़ों प्रदान करता है जो सेलुलर भाषा extracellular मैट्रिक्स (उनि) का उत्पादन करने के लिए बनाए गए थे । उनि सेल विकास, भेदभाव, और सेल प्रवास के लिए इन विट्रो आला प्रदान करता है । microstructures देशी extracellular मैट्रिक्स (ECM) और जैव रासायनिक रचनाओं में बनाए रखा सेलुलर मैट्रिक्स लंगर कोशिकाओं के लिए ऊतक विशिष्ट niches प्रदान करते हैं । उनि का निर्माण deoxyribonuclease द्वारा एहसास किया जा सकता है (DNase) पाचन कार्बनिक या अकार्बनिक उपचार के एक गंभीर के साथ साथ । इस प्रोटोकॉल को संचालित करने के लिए आसान है और decellularization के लिए उच्च दक्षता सुनिश्चित करता है । उनि स्थिर या उभार संस्कृति शर्तों, जो TSCC मॉडल के निर्माण में सक्षम बनाता है के तहत TSCC कोशिकाओं के लिए अनुकूल cytocompatibility दिखाया । एक स्वयंभू प्रतिक्रिया भी सेल संस्कृति के लिए लगातार उभारा हालत के लिए इस्तेमाल किया गया था । खंगाला TSCC का उपयोग कर उनि विशेषताओं और नैदानिक TSCC histopathology जैसी संपत्तियों दिखाया, TSCC अनुसंधान में क्षमता का सुझाव ।

Introduction

जीभ जैसे निगरण, अभिव्यक्ति, और चखने के रूप में विभिंन महत्वपूर्ण कार्यों, है । इस प्रकार, जीभ समारोह की हानि1जीवन के रोगियों की गुणवत्ता पर काफी प्रभाव पड़ता है । मौखिक गुहा में सबसे आम द्रोह जीभ स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा (TSCC) है, जो आम तौर पर लोग हैं, जो शराब या धूंरपान2तंबाकू पीने में होता है ।

हाल के वर्षों में, TSCC पर मौलिक अनुसंधान में थोड़ी प्रगति हासिल की गई है । इन विट्रो अनुसंधान मॉडल में कुशल की कमी के लिए सबसे बड़ी समस्याओं में से एक है रहता है । इस प्रकार, extracellular मैट्रिक्स (ECM) के लिए एक संभावित समाधान हो जाता है । चूंकि ECM एक जटिल नेटवर्क अत्यधिक संगठित मैट्रिक्स घटकों से बना फ्रेम है, पाड़ एक संरचना की तरह ECM होने सामग्री और रचना कैंसर अनुसंधान के लिए सक्षम होगा । सेलुलर ECM पूरी तरह से उन विट्रो मेंएक ही मूल से कोशिकाओं के लिए जगह प्रदान कर सकते हैं, जो बाहर जाता है ECM का सबसे महत्वपूर्ण लाभ हो ।

ECM सेलुलर घटकों डिटर्जेंट और एंजाइमों का उपयोग decellularization के माध्यम से ऊतकों से हटाया जा रहा है के साथ बनाए रखा जा सकता है । विभिन्न ECM घटकों, कोलेजन, fibronectin सहित, और laminin में सेलुलर मैट्रिक्स प्रदान एक देशी ऊतक की तरह microenvironment के लिए प्रसंस्कृत कोशिकाओं, अस्तित्व को बढ़ावा देने, प्रसार, और कोशिकाओं के भेदभाव3. इसके अलावा, प्रत्यारोपण के लिए immunogenicity ECM में सेलुलर घटकों के अभाव के साथ एक ंयूनतम स्तर तक कम किया जा सकता है ।

अब तक, इस तरह के दिल4,5,6,7, जिगर8,9,10 के रूप में विभिंन ऊतकों और अंगों, में ECM के लिए निर्माण विधियों की कोशिश की गई है ,11, फेफड़े12,13,14,15,16,17, और गुर्दे18,19 , 20. हालांकि, कोई प्रासंगिक अनुसंधान हमारे ज्ञान का सबसे अच्छा करने के लिए जीभ में इसी तरह के काम पर पाया गया है ।

इस अध्ययन में, सेलुलर जीभ extracellular मैट्रिक्स (उनि) शारीरिक, रासायनिक, और एंजाइमी उपचार की एक श्रृंखला के द्वारा दोनों कुशलतापूर्वक और सस्ते गढ़े गया था । तब उनि TSCC व्यवहार और विकास के लिए एक उपयुक्त सिमुलेशन दिखा, इन विट्रो मेंTSCC दोहराऊंगा करने के लिए इस्तेमाल किया गया था । उनि अच्छी तरह से है और साथ ही ऊतक-विशिष्ट आला है, जो यह इंगित करता है कि उनि TSCC अनुसंधान3में महान क्षमता हो सकती है कोशिकाओं को मार्गदर्शन करने की क्षमता है । यहां दिखाया प्रोटोकॉल या तो रोगजनन या TSCC के नैदानिक चिकित्सा पर अध्ययन शोधकर्ताओं के लिए एक विकल्प प्रदान करता है ।

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Protocol

पशु कल्याण अधिनियम, संस्थागत दिशानिर्देश और संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति, सन यत्-सेन विश्वविद्यालय द्वारा अनुमोदित सभी पशु कार्य के अनुसार प्रदर्शन किया गया ।

१. उनि की तैयारी

  1. गर्भाशय ग्रीवा के विस्थापन द्वारा चूहों को निष्पादित और बाँझ शल्य कैंची और चिमटी का उपयोग कर जीभ को हटा दें ।
  2. 3 मिनट के लिए ७५% इथेनॉल में जीभ विसर्जित कर दिया, तो एक १.५ मिलीलीटर Eppendorf (EP) ट्यूब में 10 मिमी बाँझ फॉस्फेट के 1 मिलीलीटर के साथ एक जीभ डाल (पंजाब) ।
    नोट: सभी निम्न चरणों में पंजाबियों की एकाग्रता इस कदम में एकाग्रता के रूप में एक ही है.
  3. सेल lysis गल द्वारा फ्रीज: EP ट्यूबों में जीभ फ्रीज पर-८० ° c 1 ज के लिए, और फिर 3 चक्रों के लिए ४५ मिनट के लिए कमरे के तापमान पर जीभ गल ।
  4. एक सर्जिकल सुई का उपयोग कर सर्जिकल सीवन का एक टुकड़ा पर प्रत्येक जीभ लोड और बाँझ टिनफॉईल का एक छोटा सा टुकड़ा के साथ सीवन के अंत लपेटो । एक ३.५ सेमी या 6 सेमी संस्कृति बाँझ स्थितियों में ७५% इथेनॉल युक्त पकवान में कार्रवाई करते हैं ।
    नोट: सर्जिकल सीवन के प्रत्येक टुकड़े की उचित लंबाई के बारे में है 20 सेमी, और टिनफॉईल के प्रत्येक टुकड़ा के उचित आकार के बारे में है ०.३ cm2 (1 cm × ०.३ cm) । जीभ टिनफॉईल के पास भरी जानी चाहिए ।
  5. 30 एस के लिए एक ३.५ सेमी या 6 सेमी संस्कृति पकवान में बाँझ पंजाबियों के 3 मिलीलीटर के साथ प्रत्येक जीभ कुल्ला बाँझ स्थितियों में इस आपरेशन प्रदर्शन ।
  6. ultrapure पानी के साथ जीभ धो लें: ९० µ g/एमएल के अंतिम एकाग्रता के लिए बाँझ ultrapure पानी की २५० मिलीलीटर के साथ एक व्यापक मुंह की बोतल में ampicilin जोड़ें । एक बार हलचल युक्त बोतल में जीभ रखो । बोतल के बाहर शेष सीवन के भाग के साथ बोतल टोपी कस । बाँझ स्थितियों में इस कार्रवाई को निष्पादित करें ।
    नोट: अप करने के लिए 5 जीभ सीवन के जुड़वां के विचार में एक ही बोतल में डाल दिया जा सकता है । टिनफॉईल बोतल में सीवन के अंत में है बंद फिसल से जीभ को रोकने के लिए । जीभ बोतल के अंदर शेष सीवन की लंबाई का समायोजन करके बोतल के नीचे से 2 सेमी उच्च रखा जाना चाहिए । यह नोट चरण १.८, १.१०, १.१२ और १.१६ के लिए भी है ।
  7. 12 ज के लिए एक चुंबकीय सरगर्मी पर बोतल रखो ।
  8. NaCl के साथ जीभ धोने: ९० µ g/एमएल के एक अंतिम एकाग्रता के लिए बाँझ 1 एम NaCl की २५० मिलीलीटर के साथ एक व्यापक मुंह की बोतल में ampicilin जोड़ें । जीभ और बोतल में हलचल बार हटो । बोतल के बाहर शेष सीवन के भाग के साथ बोतल टोपी कस । बाँझ स्थितियों में इस कार्रवाई को निष्पादित करें ।
  9. 24 ज के लिए एक चुंबकीय सरगर्मी पर बोतल रखो ।
  10. सेल lysis द्वारा ट्राइटन एक्स-१००: ampicilin में एक अंतिम एकाग्रता के लिए जोड़ें ९० µ g/mL की २५० मिलीलीटर के साथ एक चौड़े मुंह की बोतल में बाँझ 2% ट्राइटन X-में पंजाब-१००. जीभ और बोतल में हलचल बार हटो । बोतल के बाहर शेष सीवन के भाग के साथ बोतल टोपी कस । बाँझ स्थितियों में इस कार्रवाई को निष्पादित करें ।
  11. ४८ एच के लिए एक चुंबकीय सरगर्मी पर बोतल रखो ।
  12. CaCl के साथ जीभ धो2/MgCl2: एक व्यापक मुंह की बोतल में ampicilin जोड़ें बाँझ 5 मिमी CaCl2/MgCl2 की २५० मिलीलीटर के साथ ९० µ जी के एक अंतिम एकाग्रता के लिए/ जीभ और बोतल में हलचल बार हटो । बोतल के बाहर शेष सीवन के भाग के साथ बोतल टोपी कस । बाँझ स्थितियों में इस कार्रवाई को निष्पादित करें ।
  13. 24 ज के लिए एक चुंबकीय सरगर्मी पर बोतल रखो ।
  14. DNase द्वारा पाचन: एक EP ट्यूब के लिए है हांक संतुलित नमक समाधान (HBSS) के 1 मिलीलीटर जोड़ें । HBSS में DNase जोड़ें ३०० µ एम के अंतिम एकाग्रता के लिए क्रमशः प्रत्येक EP ट्यूब में एक जीभ हटो, ट्यूब के बाहर सीवन के भाग के साथ । बाँझ स्थितियों में इस कार्रवाई को निष्पादित करें ।
    नोट: सुनिश्चित करें कि सीवन का हिस्सा है जो पिछले चरणों में बोतलों के अंदर रहता है भी इस कदम में ep ट्यूब अंदर रहता है, और सुनिश्चित करें कि सीवन जो पिछले कदम में बोतलों के बाहर रहता है के भाग भी इस कदम में ep ट्यूब के बाहर रहता है ।
  15. मशीन EP ट्यूबों में ३७ ° c पर 24 घंटे के लिए जीभ ।
  16. पंजाबियों के साथ जीभ धो लें: ९० µ g/एमएल के अंतिम एकाग्रता के लिए बाँझ पंजाबियों की २५० मिलीलीटर के साथ एक व्यापक मुंह की बोतल में ampicilin जोड़ें । जीभ और बोतल में हलचल बार हटो । बोतल के बाहर शेष सीवन के भाग के साथ बोतल टोपी कस । बाँझ स्थितियों में इस कार्रवाई को निष्पादित करें ।
  17. 24 ज के लिए एक चुंबकीय सरगर्मी पर बोतल रखो ।
  18. उपयोग तक 4 डिग्री सेल्सियस पर बाँझ पंजाब में तैयार उनि की दुकान.

2. तीन आयामी (3 डी) TSCC का पुनर्गठन

  1. स्टेटिक TSCC मॉडल निर्माण
    1. बीज १.० x 106 एकल TSCC कोशिकाओं (Cal27) एक ३.५ सेमी संस्कृति डिश में । Dulbecco के संशोधित ईगल मध्यम/F12 (DF12) 10% भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS), ९० µ g/एमएल ampicilin, और ९० µ g/एमएल कनमीसिन से युक्त 3 मिलीलीटर जोड़ें ।
    2. संस्कृति 2 से 3 दिनों के लिए ३७ ° c पर Cal27 कोशिकाओं । सुनिश्चित करें कि कक्ष डिश नीचे के कम से ६०% क्षेत्र को कवर ।
    3. संस्कृति पकवान में Cal27 monolayer पर उनि लोड ।
    4. 28 दिनों के लिए ३७ ° c में एक सह2 मशीन में पकवान रखो ।
    5. कल्चरल मीडियम को सेल कल्चर प्रोसेस के दौरान हर रोज रिफ्रेश करें । सीओ2 मशीन में एकाग्रता 5% है ।
  2. हड़कंप TSCC मॉडल निर्माण
    1. सेल्फी की तैयारी ने मचा दिया हड़कंप minibioreactor
      1. बाहर एक 10 मिलीलीटर सिरिंज से गोताख़ोर ले लो ।
      2. छड़ी के निचले टर्मिनल के पास एक छेद (1 सेमी का व्यास) खोदना और छेद में एक हलचल बार लोड ।
      3. एक छेद खोदो (०.५ cm के व्यास) एक प्लास्टिक की बोतल टोपी के केंद्र में चौड़े मुंह बोतल और टोपी के माध्यम से पिस्टन रॉड डाल दिया ।
      4. कट एक ५० मिलीलीटर के आधा ट्यूब केंद्रापसारक और यह बोतल टोपी के बाहरी हिस्से पर वेल्ड ।
      5. मछली पकड़ने लाइनों जो fishhooks से बंधे है के साथ रॉड लपेटकर रॉड को fishhooks देते हैं ।
        नोट: अप करने के लिए 4 fishhooks एक रॉड से जुड़ा जा सकता है ।
      6. उपयोग से पहले स्वयं निर्मित परिसर को आटोक्लेव ।
        नोट: प्लास्टिक वाइड-माउथ बॉटल को आटोक्लेव न करें । संवर्धन कोशिकाओं जबकि एक नया बाँझ प्लास्टिक वाइड मुंह बोतल का उपयोग करें ।
  3. गतिशील सेल संस्कृति
    1. स्व-निर्मित minibioreactor में बीज १.० x 106 एकल Cal27 कक्ष । DF12 मीडियम की १५० एमएल जोड़ें जिसमें 10% FBS, ९० µ जी/एमएल ampicilin, और ९० µ जी/एमएल कनमीसिन हैं ।
    2. लोड minibioreactor पर उनि रॉड से जुड़ी fishhooks का उपयोग कर ।
    3. बोतल टोपी कस और एक चुंबकीय सरगर्मी पर minibioreactor डाल दिया । 7 से 14 दिनों के लिए ३७ ° c में एक सह2 मशीन में २०० rpm पर minibioreactor को सक्रिय करें ।
      नोट: सीओ 2 मशीन में2 की एकाग्रता 5 % है ।

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Representative Results

उनि की तैयारी के लिए इस प्रोटोकॉल को कुशल और उपयुक्त हो जाता है । उनि देशी जीभ के ऊतकों के साथ तुलना में सही decellularization दिखाया । decellularization की प्रभावकारिता hematoxylin-eosin (वह) धुंधला (चित्रा 1ए-बी) द्वारा पुष्टि की गई थी । वह धुंधला परिणाम (चित्रा 1ख) उनि में परमाणु दाग के पूरा गायब होने का पता चला । इसके अलावा, पिछले काम से डीएनए सामग्री ठहराव पता चला है कि डीएनए लगभग पूरी तरह से3उनि से हटा दिया गया था । इस प्रोटोकॉल भी ऊतक अखंडता के लिए दुर्लभ क्षति दिखाया जबकि सेल घटकों को हटाने (चित्रा 1बी) ।

TSCC का 3d पुनर्गठन उनि और एक स्वयंभू minibioreactor (चित्रा 2ए बी) का उपयोग संतोषजनक परिणाम हासिल किया । वह धुंधला पता चला कि उनि में Cal27 कोशिकाओं ठेठ TSCC रोग विशेषताओं (चित्रा 2सी डी) प्रस्तुत किया । उभारी हुई संस्कृति की स्थितियों में कोशिकाओं के विभिन्न घावों क्षेत्रों में एकल सेल माइग्रेशन (चित्रा 2सी) या सामूहिक प्रवास (चित्रा 2डी) प्रस्तुत किया । स्थिर संस्कृति की स्थिति में, Cal27 कोशिकाओं को भी उनि में इनवेसिव संरचनाओं का गठन, लेकिन यह एक लंबा समय लगा (चित्रा 2ई). इसके अलावा, एक मानव ऑस्टियो सेल लाइन U2OS भी इसी उभारा संस्कृति प्रणाली के लिए शुरू किया गया था । हालांकि U2OS कोशिकाएं संस्कृति माध्यम में रह सकती थीं, वे उनि (चित्रा 2एफ) में नहीं मिलीं । उनि कैंसर की कोशिकाओं के विभिंन प्रकार के लिए विभिंन असंगति दिखाया, सुझाव है कि विभिंन ट्यूमर कोशिकाओं को पनपने के लिए अलग microenvironments की आवश्यकता हो सकती है ।

Figure 1
चित्रा 1 : उनि की तैयारी. (क) वह चूहों से देशी जबान के दाग. स्केल बार = १०० µm । (ख) वह चूहों से विस्तरित उनि का दाग. स्केल बार = १०० µm. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2 : उनि द्वारा TSCC का पुनर्गठन । (क) स्वयं निर्मित minibioreactor का अवलोकन. (ख) एक स्वयं निर्मित minibioreactor के उनि-लोडिंग की स्थिति का दृश्य । (ग) वह 14 दिन के दाग़ी, उनि के साथ उभारा हुआ कल्चरल TSCC. एकल कोशिका आक्रमण घटनाएं काले तीरों द्वारा दर्शाई जाती हैं । स्केल बार = ५० µm । (घ) वह 14 दिन के दाग के TSCC के साथ, उनि । सामूहिक आक्रमण की घटनाएं काले तीरों से दर्शाई गई हैं । स्केल बार = ५० µm । (ङ) वह 28 दिन का धुंधला उनि के साथ स्थिर प्रसंस्कृत TSCC । एकल कोशिका आक्रमण घटनाएं काले तीरों द्वारा दर्शाई जाती हैं । स्केल बार = १०० µm. (च) वह 14 दिन की सरगर्मी के धुंधला हो जाना U2OS कोशिकाओं के साथ उनि । स्केल बार = ५० µm. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

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Discussion

सेलुलर ECM निर्माण के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित प्रोटोकॉल देशी ECM संरचना बनाए रखने चाहिए, जबकि ऊतकों में सेलुलर घटकों को हटाने के लगभग पूरी तरह से21। वर्तमान में रिपोर्ट decellularization प्रोटोकॉल जो संवहनी परिवहन द्वारा सेलुलर सामग्री को हटाने के लिए vasculature के माध्यम से छिड़काव की आवश्यकता होती है के बावजूद, यांत्रिक आंदोलन यहां अपनाया गया था, एक पारंपरिक सरल और सस्ते22 विधि के रूप में जाना , 23 , 24 , 25 , 26. इसके अलावा, के बाद से जीभ lingualis में समृद्ध है और कुछ भारी संवहनी जहाजों है, इस प्रोटोकॉल अधिक अंय प्रोटोकॉल की तुलना में जीभ के ऊतकों के लिए उपयुक्त है ऊपर वर्णित है ।

इसके अलावा, उनि उत्पादन के लिए इस प्रोटोकॉल एक उचित उदारवादी शक्ति decellularization बाहर किया जाता है, विनाश या आधार झिल्ली जो सोडियम dodecyl सल्फेट जैसे उच्च शक्ति decellularization की वजह से हो सकता है के विघटन से बचने ( एसडीएस) उपचार3. इसके अलावा, प्रोटोकॉल भी प्रभावी ढंग से चूहे और सुअर की जीभ में काम किया (नहीं दिखाया डेटा), सुझाव है कि विधि सामांयतः विभिंन प्रजातियों3से जीभ पर इस्तेमाल किया जा सकता है ।

यह ध्यान देने योग्य बात है कि इस प्रोटोकॉल है, जो सीधे परिणामों को प्रभावित कर सकता में कुछ महत्वपूर्ण कदम या विवरण है लायक है । एक महत्वपूर्ण कदम DNase द्वारा जीभ कोशिकाओं के पाचन है । यदि पाचन समय पर्याप्त नहीं है या DNase कुशलता से काम नहीं करता है, तो जीभ के decellularization को शायद ही हासिल किया जा सके. एक और बात जो गौर किया जाना चाहिए है कि प्रतिक्रिया के लिए रोटरी गति भी तेजी से नहीं होना चाहिए, उनि को नुकसान पर विचार । इसके अलावा, इस आपरेशन के लिए एक बाँझ वातावरण प्रोटोकॉल में बहुत महत्वपूर्ण है ।

इसके बाद के संस्करण सख्त नियमों के बावजूद, उनि तैयारी के लिए प्रोटोकॉल कुछ हद तक समायोजित किया जा सकता है । कुछ और घंटे के लिए ultrapure पानी या पंजाबियों के साथ जीभ धोने समय जो प्रोटोकॉल स्पष्ट रूप से उनि के निर्माण को प्रभावित नहीं होता पता चलता है । हालांकि, के बाद से प्रोटोकॉल लगभग एक सप्ताह की जरूरत है कि उनि तैयार, यह उनि के लिए तत्काल मांगों को पूरा नहीं कर सकते ।

TSCC मॉडल निर्माण में उनि महान मूल्य दिखाता है । एक साथ एक आत्म निर्मित minibioreactor के साथ, निलंबित Cal27 कोशिकाओं को उनि में संलग्न कर सकते हैं और मानव TSCC histopathology3जैसी समान घुसपैठ संरचना के रूप में. यह निगरानी और हमलों और इन विट्रो मेंTSCC के मेटास्टेसिस की जांच के लिए एक आदर्श मॉडल हो सकता है । मॉडल TSCC पर दवा परीक्षण पर भी काम को फायदा हो सकता था । इन सब के विचार में, यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल TSCC अनुसंधान में महान क्षमता हो सकती है ।

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

लेखक राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन ऑफ चाइना (३१३७१३९०), राज्य उच्च तकनीक विकास परियोजना (2014AA020702) और गुआंग्डोंग विज्ञान और प्रौद्योगिकी (2016B030231001) के कार्यक्रम के कार्यक्रम से अनुसंधान अनुदान के समर्थन को स्वीकार करते हैं ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
C57-BL/6J mice Sun Yat-sen University Laboratory Animal Center
Ethanol Guangzhou Chemical Reagent Factory HB15-GR-2.5L
Sodium chloride Sangon Biotech A501218
Potassium chloride Sangon Biotech A100395
Dibasic Sodium Phosphate Guangzhou Chemical Reagent Factory BE14-GR-500G
Potassium Phosphate Monobasic  Sangon Biotech A501211
1.5 mL EP tube Axygen MCT-150-A
Ultra-low temperature freezer  Thermo Fisher Scientific
3.5 cm cell culture dish Thermo Fisher Scientific 153066
6 cm cell culture dish Greiner 628160
Triton X-100 Sigma-Aldrich V900502
Calcium chloride Sigma-Aldrich 746495
Magnesium chloride Sigma-Aldrich 449164
DNase Sigma-Aldrich D5025
Magnesium sulphate Sangon Biotech A601988
Glucose Sigma-Aldrich 158968
Sodium bicarbonate Sigma-Aldrich S5761
Ampicillin Sigma-Aldrich A9393
Kanamycin Sigma-Aldrich PHR1487
Surgical suture Shanghai Jinhuan
250 mL wide-mouth bottle SHUNIU 1407
Magnetic stirrer AS ONE 1-4602-32
CO2 incubator SHEL LAB SCO5A
10 mL syringe Hunan Pingan
50 mL centrifuge tube Greiner 227270
Cal27 cell Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank Tongue squamous cell carcinoma cell line
U2OS cell Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank Human osteosarcoma cell line
DMEM/F12 Sigma-Aldrich D0547
Sodium pyruvate Sigma-Aldrich P5280
Hepes free acid BBI A600264
FBS Hyclone SH30084.03
4 °C fridge Haier
Water purifier ELGA
Hemocytometer BLAU 717805

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References

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कैंसर अनुसंधान अंक १३६ Extracellular मैट्रिक्स decellularization भाषा ओरल स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा प्रतिक्रियाकर्ता मॉडल निर्माण
जीभ Extracellular मैट्रिक्स के निर्माण और जीभ स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा में से पुनर्गठन <em>इन विट्रो</em>
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Yao, Y., Lin, W., Zhang, Y.… More

Yao, Y., Lin, W., Zhang, Y. Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro. J. Vis. Exp. (136), e57235, doi:10.3791/57235 (2018).

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