Summary
Denne protokollen beskriver en minimal invasiv osteosynthesis teknikken bruker en mulig intramedulær skruen for standardisert stabilisering av femur frakturer, som kan brukes til å analysere endochondral bein i mus.
Abstract
Bein helbredende modeller er nødvendig for å analysere komplekse mekanismer for brudd healing for å forbedre klinisk brudd behandling. I løpet av det siste tiåret, ble økt bruk av musen modeller i Ortopedisk forskning bemerket, sannsynligvis fordi musen modeller tilbyr en rekke genetisk endret stammer og spesiell Antistoffene for analyse av molekylære mekanismer av brudd healing. For å kontrollere biomekaniske betingelsene, er godt karakterisert osteosynthesis teknikker obligatorisk, også i mus. Her rapportere vi om utforming og bruk av en lukket bein healing modell å stabilisere femur brudd i mus. Mulig intramedulær skruen, medisinsk kvalitet rustfritt stål gir gjennom sprekken komprimering en aksial og roterende stabilitet sammenlignet med mest brukte enkel mulig intramedulær pinner, som viser en fullstendig mangel på aksial og roterende stabilitet. Stabiliteten av mulig intramedulær skruen tillater analyse av endochondral healing. En stor mengde callus vev, mottatt etter stabilisering med skruen, tilbyr ideelle forhold å høste vevet for biokjemiske og molekylære analyser. Flere fordeler av skruen er det faktum at skruen kan settes inn i femur med en minimal invasiv teknikk uten å indusere skade bløtvev. Avslutningsvis er skruen en unik implantatet som ideelt kan brukes i lukkede brudd healing modeller tilbyr standardiserte biomekaniske forholdene.
Introduction
Bein helbredende studier i mus er svært etterspurt et bredt spekter av antistoffer og genetisk endret dyr. Disse fakta kan studere molekylære mekanismer av bein healing1. I de siste årene utviklet ulike bein healing modeller for mus har vært2. Disse modellene kan deles inn i åpne modeller, som benet er osteotomized med en åpen lateral kirurgisk tilnærming og lukket modeller, der benet er brukket basert på brudd modell introdusert av Bonnares og Einhorn3. Bruker denne teknikken, standardisert tverrgående brudd kan produseres av en 3-punkts bøying enhet og mulig intramedulær implantater kan settes gjennom en liten mediale parapatellar snitt i en minimalt invasiv teknikk unngå en stor bløtvev traumer.
Mulig intramedulær skruen kan brukes for lukket brudd stabilisering i mus. Skruen tilbyr roterende og aksial stabilitet. Dette oppnås ved brudd komprimering gjennom en proksimale tråd og distale hodet4. Ytterligere fordeler av skruen er enkel kirurgiske teknikken, invasivity, lav lav karakteren implantat vekt og, spesielt, en høyere stabilitet gir standardisert og kontrollert biomekaniske forhold sammenlignet med andre mulig intramedulær implantater5. Faktisk mest lukket brudd modeller, fragmenter er stabilisert bare av enkel pinner, som er forbundet med en fullstendig mangel på roterende og aksial stabilitet og en høy risiko for pin og også brudd forvridning. Dette kan betydelig påvirke helbredelsesprosessen, som kan føre til forsinket helbredelse eller ikke-union formasjonen.
Det er velkjent at stabiliteten i brudd fiksering har en enorm innvirkning på den helbredende prosess6,7. En høy stive fiksering resulterer i intramembranous healing, mens en mindre rigid fiksering, som kan micromovements brudd gapet, resulterer i endochondral healing. Stabilisering av brudd med mulig intramedulær skruen viser hovedsakelig en endochondral healing med en stor mengde callus vev, særlig etter 2 uker brudd healing. Muligheten til å høste mye callus vev gjør analyse av flere parametere av forskjellige teknikker.
Her rapportere vi om design og anvendelse av mulig intramedulær skruen i mus, samt fordeler og ulemper i eksperimentelle studier på normal endochondral bein helbredelse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle prosedyrer ble utført i henhold til National Institutes of Health retningslinjer for bruk av forsøksdyr og fulgte institusjonelle retningslinjer (Landesamt für Verbraucherschutz, Zentralstelle Amtstierärztlicher Dienst, Saarbrücken, Tyskland).
1. forberedelse av kirurgiske instrumenter og implantater
- Velg en skalpell blad (størrelse 15), en liten vattpinne, fine tang, en 27 G nål, en ikke-resorbable 5-0 Sutur, saks og en nål holder fra boksen Mikrokirurgiske instrument.
- Pakk ut til mulig intramedulær skruen, guidekabelen (0,3/0.2 mm diameter, 10 cm lengde), sentrering borekronen (0,5 mm diameter) og hånd drill (figur 1, se Tabellen for materiale).
Merk: Mulig intramedulær skruen (0,5 mm diameter, 17.2 mm lengde) er laget av medisinsk kvalitet rustfritt stål retrograd implantasjon til femur. Skruen har en proksimale tråd (0,5 mm diameter, 4 mm lengde) med en nese (0.2 mm diameter, 0.4 mm lengde) for tips og distale kjegle-formet hode (0,8 mm diameter, 0,9 mm lengde) å oppnå brudd komprimering samt aksial og roterende stabilitet. - Avsløre implantater og alle kirurgiske instrumenter til et desinfiserende løsning (96% alkohol) i 5 min eller sperre (dampsterilisering, 130 ° C, 25 min). Etter desinfeksjon eller sterilisering, sett instrumenter på en operasjon klut. Plasser operasjonen kluten direkte tilknytning til tabellen liten dyr operasjon.
2. dyr og anestesi analgesi
- Velg belastning, alder og kjønn av mus ifølge studien spørsmålet som er adressert.
Merk: Denne studien 12 - til 14-uke-gamle mannlige CD-1 mus ble brukt. Den passende kroppsvekten bruke mulig intramedulær skruen er mellom 25-35 g. - Bedøve mus med en intraperitoneal injeksjon av 15 mg/kg xylazine og 75 mg/kg ketamin. Bekreft anesthetization ved toe knipe. Bruk øye smøremiddel for å beskytte dyr øyne tørker under anestesi. Etter innledningen av anestesi, Plasser musen under en varme radiator å holde kroppstemperaturen konstant. Under inngrepet, ble dyr overvåket med gjentatte tå knipe for å sikre en passende fly av anestesi.
- Bruk tramadol-hydrochloride i drikkevannet (1.0 mg/mL) for analgesi fra dag 1 før operasjonen til dag 3 etter operasjonen.
Merk: Analgesi og infeksjon forebygging bør være med de respektive retningslinjene av landet og institusjon der eksperimenter er utført.
3. kirurgisk prosedyre og mulig intramedulær skruen implantering
- Før kirurgi, barbere hele rett bakben beinet og bruke en depilatory fløte. Etter 5 min, fjerner kremen og rengjør beinet med vann. Bruk deretter en desinfiserende løsning med 96% alkohol. Betadine eller chlorhexidine kan legges til alkohol å sikre fullstendig asepsis.
- Under aseptiske forhold, plass musen i supine posisjon i tabellen liten dyr operasjon. Bøye det høyre kneet å tillate en fremre tilnærming til Kondyler i kneet. Utføre en 5 mm mediale parapatellar snitt på det høyre kneet med skalpell blad.
- Mobilisere patellar ligament med skalpell bladet og trekkes ut. Deretter SKIFT patella sidelengs med fine tang å avsløre intercondylar hakket av femur.
- Åpne intercondylar hakket nøyaktig i midten femur mellom begge Kondyler. Sørg for ikke å overskride 1.0 mm i dybde for bore hull.
- Start manuell boring på sakte fart og en 45 ° forskyvning ventrally til femur aksen bruke 0,5 mm sentrering borekronen og hånd boret (figur 1 c og D, figur 2). Boring, kontinuerlig redusere vinkelen til 0 ° forskyvning (parallelt med bein aksen av femur). Stoppe boring når en dybde på 1.0 mm er nådd.
- Etter åpning beinet på intercondylar hakket, inn 27 G nålen mulig intramedulær hulrom over hele lengden av femur. Pakke mulig intramedulær hulrom av femur manuelt gjennom roterende bevegelser av 27 G nålen. Skyv nålen frem til autoperforering til kortikalt beinvev i forhold til større trokanter proximally.
- Fjerne 27 G nålen og bruke guidekabel den distale del av femur.
- Gjøre en huden snitt med skalpell blad (størrelse 15) proximally over guidekabelen og presse guidekabelen frem til begge ender av guidekabel er utenfor. Pass på å holde guidekabel i stedet.
- Opprette en definert lukket brudd med giljotinen.
- Plass musen i lateral posisjon med høyre beinet under giljotinen. Kontroller at den diaphyseal delen av femur er plassert midt i giljotinen.
- Slippe vekten (200 g) fra definert avstand på 25,5 cm.
- Kontrollere brudd konfigurasjonen og brudd posisjon samt plasseringen av guidekabel (Figur 3) ved hjelp av x-ray-enheten (se Tabell for materiale).
- Koble mulig intramedulær skruen med nesen på den klubbeformede enden guidekabelen 0.2 mm og sette den inn i femur under kontinuerlig trykk, og Roter med klokken.
- Skjær av drivakselen når tilstrekkelig dreiemoment er oppnådd.
- Fjerne guidekabelen proximally.
- Omplasser patella og fikse patella senen til muskler med én enkelt Sutur bruker en 5-0 syntetisk, monofilament, er skjærende polypropylen Sutur. Bruk enkelt suturer samme materiale og størrelse for å lukke såret. Kontrollere reduksjon av fragmenter og skruen posisjon radiologically ved hjelp av x-ray-enheten (se Tabell for materiale).
- Holde dyr under varme radiatoren før de komme bedøvelsen. Ikke la dyrene uovervåket før de har fått tilbake tilstrekkelig bevissthet for å opprettholde ventrale recumbency. Tilbake dyrene til enkelt bur i dyr anlegget. Ikke tilbake dyrene til selskapet av andre dyr under første 24 h, selv om de har helt tilbake fra anestesi.
- Overvåke dyrene nøye hver dag. Opprettholde postoperativ analgesi bruke tramadol-hydrochloride i drikkevannet med en dose av 1.0 mg/mL under de tre første dagene. Fortsette analgesi hvis på dag 4 etter operasjonen, dyrene fortsatt vise bevis av smerte, som indikert av vocalization, rastløshet, mangel på mobilitet, feil å groom, unormal holdning og mangel på normal interesse omgivelser. Avslutte analgesi når dyrene er smertefri.
- På slutten av eksperimentet euthanize dyret av en overdose av barbiturat.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Driftstiden fra huden snitt å sår nedleggelse var 20 min. Operasjonen kan utføres uten stereo-mikroskop. Postoperatively, var dyrene overvåket daglig. Postoperativ analgesi ble avsluttet etter 2 dager fordi ingen av dyrene viste bevis av smerte etter denne tidsperioden. Dyrene viste også vanlig vektbærende innen 2 dager etter operasjonen. Sårinfeksjoner var ikke observert i hele observasjon perioden.
Radiologisk analyser etter 2 uker viste en tydelig dannelsen av callus vev bro brudd (figur 4A). Etter 5 uker, brudd var leget, og den periostal callus ble nesten fullstendig ombygd (figur 4B).
Histologiske analyser av callus og sonen brudd etter 2 uker viste typisk vev distribusjon av endochondral healing med brusk vev bygget under chondrogenic prosessen og vevd bein (figur 5A). Etter 5 uker, brusk vev forsvant, og vevd bein ble konvertert til lamellær Ben for å gjeninnføre normalt anatomiske og belastning egenskaper av bein (figur 5B).
Biomekaniske analyser etter 2 uker indikerte en bøying stivhet på 37% sammenlignet med kontralateral unfractured bein. Etter 5 uker var bøying stivhet nesten 100% angir fullstendig helbredelse (figur 6).
Figur 1: implantater. A. mulig intramedulær skruen (0,5 mm diameter, 17.2 mm lengde) med tråden (0,5 mm diameter, 4 mm lengde) og nesen (0.2 mm diameter, 0.4 mm lengde) proksimale og en kjegle-formet hode (0,8 mm diameter, 0,9 mm lengde) distale. B. guidekabelen (0,3/0.2 mm diameter, 10 cm lengde). C. midtstillingen bore bit (0,5 mm diameter). D. hånd drill. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: skjematisk tegning av femur-Kondyler som viser oppføringen peker for mulig intramedulær skruen. Femur Kondyler med intercondylar hakk i anterior-posterior vise (venstre) og sagittal (høyre). Korset (venstre) angir inngangspunkt for mulig intramedulær skruen, pilen (til høyre) viser 45 ° forskyvningen femur aksen starte boring. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: røntgenbilde av femur med tverrgående brudd og innsatte guidekabelen. Røntgenbilde viser tverrgående brudd konfigurasjonen i den diaphyseal delen av femur (pil) og guidekabelen i mulig intramedulær hulrom bro brudd. Skala stolper representerer 5 mm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: Radiographs etter 2 og 5 uker av bein healing. A. røntgen analyse av en femur stabilisert med skruen etter 2 uker demonstrere åpenbare callus formasjon. B. røntgen analyse av en femur stabilisert med skruen etter 5 ukene, viser nesten fullstendig helbredelse av frakturer med remodeling av callus. Skala stolper representerer 5 mm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 5: histologiske seksjoner etter 2 og 5 uker av bein healing. A. histologiske analyse av en femur stabilisert med skruen etter 2 uker demonstrere typisk vev distribusjon under endochondral bein healing med brusk (c) og benvev (b) i callus. B. histologiske analyse av en femur stabilisert med skruen etter 5 ukene, viser nesten komplett remodeling å lamellær bein. Delene histologiske var farget i henhold til trichrome metoden. Skala stolper representerer 1000 µm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 6: biomekaniske analyser. Biomekaniske analyse av bøying stivhet etter 2 uker (hvit bar, n = 9) og 5 uker (svart linje, n = 8). Bøye stivhet er gitt i prosent til kontralateral ikke-brukket femur. Dataene er gitt som gjennomsnittlig ± standard feil av gjsnitt (SEM), * p < 0,05 vs 2 uker. Etter at forutsetningen for normalfordeling (Kolmogorov-Smirnov-test) og (F-test) med lik varians, ble sammenligningen mellom de to eksperimentelle gruppene utført med Student´s t-test. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Avgjørende skritt av kirurgiske prosedyren er å finne riktig inngangspunkt for skruen implantasjon i femur-Kondyler på intercondylar hakket samt optimal retningen på nålen parallelt med bein aksen for brotsjing av den mulig intramedulær hulrom. For å unngå en feil oppføring posisjon, bør kirurgen forberede hakket til en optimal visning er oppnådd. Bestemme retningen under brotsjing, bør femur av mus holdes med fingrene i en stabil posisjon. Et mer avgjørende skritt er innsetting av skruen i femur over guidekabelen fordi guidekabel kan skli av proksimale bein fragmentet som resulterer i en brudd forvridning. I dette tilfellet kirurgen kan prøve å tråd beinfragmenter igjen, men denne manøveren er hovedsakelig mislykkede, og dyrene har så å bli ekskludert fra studien.
I tillegg kan den kirurgiske prosedyren utvikle noen komplikasjoner. For eksempel kan patellar ligament, som er forskjøvet sideveis for å få en optimal visning til Kondyler, brudd. Dette krever suturing av ligament etter skruen innsetting. Under åpning beinet på Kondyler og brotsjing mulig intramedulær hulrom, kan Kondyler sprekke. I dette tilfellet er det ingen mulighet for feilsøking, fordi skruen ikke tilstrekkelig festes på den klubbeformede enden og komprimeringen av sprekken er ikke oppnådd. En annen complication er forvridning innsatte guidekabelen eller en feil posisjon av benet. Denne komplikasjonen kan reduseres ved håndtering med forsiktighet og røntgen analyse etter innsetting å bekrefte den riktige plasseringen under operasjonen. Videre kirurgen bør ta hensyn som skruen er satt helt inn fordi en protrusion av skruen kan begrense mobilitet av musen eller redusere brudd komprimeringen. Derfor er en x-ray-enhet obligatorisk for den kirurgiske prosedyren. Eneste dyr etter røntgen bekreftelse på slutten av kirurgi bør inkluderes i studien protokollen.
Fjerning av mulig intramedulær skruen på slutten av eksperimentet kan utføres uten problemer, fordi hodet av skruen kan kobles til en spesiell fjerning instrument eller, alternativt, skruen kan fjernes også med nål holder.
En begrensning av teknikken er som mulig intramedulær skruen leveres av selskapet bare i en størrelse med en definert lengde 17.2 mm og derfor må tas i betraktning størrelsen på femur. En ytterligere begrensning på bruk av mulig intramedulær skruen er at i vivo mikro beregnet tomografi-(CT) eller magnetisk resonans imaging (MRI) analyser av helbredelsesprosessen er nesten umulig på grunn av implantatet materialet, som påvirker bildet kvalitet. Disse analysene kan derfor bare utføres etter euthanasia og fjerning av implant på slutten av studietiden. Endelig kan ikke skruen brukes til å analysere bein defekt healing, fordi aksial stabiliteten oppnås gjennom komprimeringen av beinfragmenter av proksimale tråden og den distale lederen.
Bein helbredende studier bruker enten åpne8,9,10,11,12,13,14 eller lukket4,15, 16,17 bein healing modeller. Åpne bein helbredende modeller kan en stivere fiksering av fragmenter sammenlignet med lukket bein healing modeller, som resulterer i et høyere beløp av intramembranous healing uten en uttalt callus formasjon. Fordi åpne modeller forbundet med litt callus formasjon, kan ikke disse modellene bli foretrukket eksperimenter som krever større mengder av callus vev for biokjemiske og molekylære analyser. Ytterligere ulempe av åpne modellene er behovet for en invasiv lateral tilnærming med en stor bløtvev traumer. Derimot krever bruk av en lukket modellen bare litt mindre invasiv snitt. Inntil nå finnes bare noen lukket modeller i mus2.
I lukket bein healing modeller, brukes hovedsakelig en enkelt mulig intramedulær pin. Men har denne teknikken klare ulemper. Mest spesielt, manglende aksial og roterende stabilitet. Dette kan resultere i en heterogen healing respons5. Selv om denne ulempen er kjent for å påvirke eksperimentelle resultater18, bruke nyere studier, som akter å analysere mekanismene av bein healing, fortsatt murine modeller der sprekken er stabilisert bare med en nål eller selv igjen unstabilized7 . Vi føler at stabil osteosynthesis teknikker, sammenlignes med de brukt i klinisk praksis, bør også bli brukt i mus. For å oppnå aksial og roterende stabilitet, ble mulig intramedulær skruen utviklet som induserer brudd komprimering av en distale hode og en proksimale tråd. Av interesse, anvendelse av mulig intramedulær skruen produserer ikke en rigid fiksering, og dermed vridnings stivhet i fractured femora stabilisert med mulig intramedulær skruen er betydelig lavere sammenlignet med brukket femora stabiliseres av en ekstern fixator eller låsing plate5. En mindre rigid fiksering er imidlertid nødvendig å studere endochondral bein healing, fordi bare en mindre rigid fiksering tillater micromovements av beinfragmenter, som provoserer endochondral helbredelsesprosessen. Likevel, som vist i et tidligere ex vivo studie, mulig intramedulær skruen produserer en distinkt aksial og roterende stabilitet. Biomekaniske analyser avslørt at mulig intramedulær skruen oppnår en vridnings stivhet i 0.34 ± 0,18 Nmm / °, hvilke er viktig høyere sammenlignet med som oppnås med en konvensjonell pin (0,00 ± 0,00 Nmm / °)5. Dermed er mulig intramedulær skruen innført her bare implantatet som kan brukes i en minimal invasiv teknikk og som gir standardiserte biomekaniske forholdene for studien endochondral brudd healing i mus.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer at de har ingen konkurrerende økonomiske interesser.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av RISystem AG, Davos, Sveits.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mouse Screw | RISystem AG | 221,100 | |
| Guide wire | RISystem AG | 521,100 | |
| Centering bit | RISystem AG | 590,205 | |
| Hand drill | RISystem AG | 390,130 | |
| Cotton-Swab (150 mm, small head) | Fink Walter GmbH | 8822428 | |
| Suture (5-0 Prolene) | Ethicon | 8614H | |
| Forceps | Braun Aesculap AG &CoKG | BD520R | |
| Scissors | Braun Aesculap AG &CoKG | BC100R | |
| Needle holder | Braun Aesculap AG &CoKG | BM024R | |
| 27 G needle | Braun Melsungen AG | 9186182 | |
| Scalpel blade size 15 | Braun Aesculap AG &CoKG | 16600525 | |
| Heat radiator | Sanitas | 605.25 | |
| Depilatory cream | Asid bonz GmbH | NDXZ10 | |
| Eye lubricant | Bayer Vital GmbH | 2182442 | |
| Xylazine | Bayer Vital GmbH | 1320422 | |
| Ketamine | Serumwerke Bernburg | 7005294 | |
| Tramadol | Grünenthal GmbH | 2256241 | |
| Disinfection solution (SoftaseptN) | Braun Melsungen AG | 8505018 | |
| CD-1 mice | Charles River | 22 | |
| X-ray Device | Faxitron MX-20, Faxitron X-ray Corporation | 2321A0988 | |
| Fracture device small | RISystem AG | 891,100 |
References
- Jacenko, O., Olsen, B. R. Transgenic mouse models in studies of skeletal disorders. J Rheumatol Suppl. 43, 39-41 (1995).
- Histing, T., et al. Small animal bone healing models: standards, tips, and pitfalls results of a consensus meeting. Bone. 49 (4), 591-599 (2011).
- Bonnarens, F., Einhorn, T. A. Production of a standard closed fracture in laboratory animal bone. J Orthop Res. 2 (1), 97-101 (1984).
- Holstein, J. H., et al. Development of a stable closed femoral fracture model in mice. J Surg Res. 153 (1), 71-75 (2009).
- Histing, T., et al. Ex vivo analysis of rotational stiffness of different osteosynthesis techniques in mouse femur fracture. J Orthop Res. 27 (9), 1152-1156 (2009).
- Claes, L., Augat, P., Suger, G., Wilke, H. J. Influence of size and stability of the osteotomy gap on the success of fracture healing. J Orthop Res. 15 (4), 577-584 (1997).
- Histing, T., et al. Characterization of the healing process in non-stabilized and stabilized femur fractures in mice. Arch Orthop Trauma Surg. 136 (2), 203-211 (2016).
- Thompson, Z., Miclau, T., Hu, D., Helms, J. A. A model for intramembranous ossification during fracture healing. J Orthop Res. 20 (5), 1091-1098 (2002).
- Cheung, K. M., Kaluarachi, K., Andrew, G., Lu, W., Chan, D., Cheah, K. S. An externally fixed femoral fracture model for mice. J Orthop Res. 21 (4), 685-690 (2003).
- Garcia, P., et al. A new technique for internal fixation of femoral fractures in mice: impact of stability on fracture healing. J Biomech. 41 (8), 1689-1696 (2008).
- Histing, T., et al. An internal locking plate to study intramembranous bone healing in a mouse femur fracture model. J Orthop Res. 28 (3), 397-402 (2010).
- Garcia, P., et al. The LockingMouseNail-a new implant for standardized stable osteosynthesis in mice. J Surg Res. 169 (2), 220-226 (2011).
- Histing, T., Klein, M., Stieger, A., Stenger, D., Steck, R., Matthys, R., Holstein, J. H., Garcia, P., Pohlemann, T., Menger, M. D. A new model to analyze metaphyseal bone healing in mice. J Surg Res. 178 (2), 715-721 (2012).
- Histing, T., Menger, M. D., Pohlemann, T., Matthys, R., Fritz, T., Garcia, P., Klein, M. An Intramedullary Locking Nail for Standardized Fixation of Femur Osteotomies to Analyze Normal and Defective Bone Healing in Mice. J Vis Exp. (117), (2016).
- Hiltunen, A., Vuorio, E., Aro, H. T. A standardized experimental fracture in the mouse tibia. J Orthop Res. 11 (2), 305-312 (1993).
- Manigrasso, M. B., O'Connor, J. P. Characterization of a closed femur fracture model in mice. J Orthop Trauma. 18 (10), 687-695 (2004).
- Holstein, J. H., Menger, M. D., Culemann, U., Meier, C., Pohlemann, T. Development of a locking femur nail for mice. J Biomech. 40 (1), 215-219 (2007).
- Claes, L. E., et al. Effects of mechanical factors on the fracture healing process. Clin Orthop Relat Res. 355 Suppl, S132-S147 (1998).
