פקקת הברזל ותחמוצת כלוריד-induced הכלבי העורק הראשי: דגם בעל חיים גדול של פגיעה בכלי הדם
Summary
כאן, אנו מציגים את השינויים הנחוצים למודל מאופיין היטב ונמצאים בשימוש נפוץ קטנים בעלי חיים הברזל ותחמוצת כלוריד-induced (FeCl3) העורק פציעה לשימוש במודל גדול פגיעה בכלי הדם בבעלי חיים. המודל המתקבל יכול להיות מנוצל עבור ניסויים פרה-קליניים משפט הערכה של התערבויות תרופתי ועל מכניים מניעתי והן thrombolytic.
Abstract
ריטלין קריש דם שמוביל שבץ איסכמי מוחי, אוטם שריר הלב תורמת ~ 13 מיליון מקרי מוות בכל שנה ברחבי העולם. כאן, יש לנו לתרגם מודל פגיעה בכלי הדם של חיה קטנה לתוך חיה גדולה (כלב), עם שינויים קלים יכול לשמש להקרנה קליניים של סוכנים thrombolytic מניעתי. בנוסף לשיטות כירורגי, פרוטוקול ששונה מתאר את השיטות צעד אחר צעד כדי להעריך את העורק הראשי המוניות על-ידי אוגרי נתונים, הוראות מפורטות כדי לעבד המוח והן לצורך בדיקה היסטולוגית לוודא בעורק התרדמני המוניות דימום מוחי ו פרמטרים ספציפיים להשלמת הערכה של אירועים תרומבואמבוליים במורד הזרם על ידי ניצול תהודה מגנטית הדמיה (MRI). בנוסף, נדונים שינויים ספציפיים פרוצדורלי מהמודל בעבר ומבוססת קטנים בעלי צורך לתרגם פגיעה בכלי הדם חיה גדולה (כלב).
Introduction
שבץ תרפיה מבוססת במידה רבה לאחר טיפול למחלת עורקים, בעיקר בגלל התערבויות בתחום מחלות לב וכלי דם הגיבו טוב סמים טיפול ו endovascular התערבויות1. טיפולים אלו, עם זאת, יש לא בהצלחה לתרגם את מוחי. הקשיים בטיפול הקו הנוכחי הינם activator plasminogen רקמות רקומביננטי (rTPA) בלתי הפיכה, ניהול נושא סיכון משמעותי ב- 6.4% של המרה hemorrhagic2,3, 4. התפתחותה וכתוצאה מכך מגבילה את השימוש בה חלון קטן, לעתים קרובות בלתי ניתנת להשגה5. בנוסף, restenosis סגר מתרחשים לעיתים קרובות לאחר thrombolysis הראשונית, היפוך שיפור נוירולוגי הראשונית. לסיכום, יש חלון טמפורלית צר לניהול rTPA שתואמות הרוב הגדול (~ 90%) של חולים הסובלים עלבונות כשאבדן איסכמי.
התפקיד של עירוי antiplatelet הראו הבטחה בטיפול שבץ איסכמי עם כלי משופרת recanalization, הישרדות, תסריט2. למרבה הצער, תרופות אלו יש תופעת לוואי צפוי של דימום תוך-גולגולתי, במיוחד הגולגולת, בעיקר משום שאין אין דרך לקשר שלמאחה הפוך או לשלוט שלהם פעילות2. בזמן יעיל במניעת הצטברות של טסיות דם, הסיכון של דימום וחוסר היכולת להפוך את הפעילות שלהם יש מנעה את השימוש בהם בשגרת טיפול לחולי שבץ. צורך, לכן, קיימת עבור תרופות בשבץ antithrombotic חזק לפעול לבד או בשילובים כדי למנוע ואת lyse קרישי דם עדיין יש פרופיל בטיחות שיאפשר השימוש בשטח אחסון סגור, נמוך כמו המוח, איפה דימום הוא נסבל היטב.
הבנת המכניזם של קריש דם, re-היצרות, והערכת thrombolytics ותרופות המונעים re-היצרות, דורש קטנות כגדולות חייתיים כחלק של פיתוח תרופות קליניים. הברזל ותחמוצת כלוריד-induced פגיעה בכלי הדם היא טכניקה שימוש נרחב לזירוז במהירות ובאופן מדויק את היווצרות thrombi בכלי הדם חשופים של עכברים, חולדות, שרקנים, ארנבים6,7,8, 9 , 10 , 11 , 12. לזנים קטנים אלה מציעים מספר יתרונות כולל נוחות של הנדסה גנטית, רכישה זולה בעלי חיים נמוכה בממוצע ליום דיור עלויות. למרבה הצער, ניסויים בבעלי חיים קטנים לשלול מרובים לקחת דם במהלך הניתוח גישה טסיות תגובתיות, בדיקות גזים בדם של תגובה דלקתית. חשוב מכך, חיות גדולות הרבה יותר קרוב לחקות טסית דם אנושי פיזיולוגיה6,13. המודל פגיעה העורק3 FeCl מילא תפקיד השלטת במחקר של הפתופיזיולוגיה של פקקת, האימות של טסית אנטי-דם הרומן ותרופות אנטי מקריש, על גילוי thrombolytics פוטנציאליים6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12. הקודם מודלים עכברים, עכברושים, שרקנים, ארנבים סיפקו נוחות וגמישות על מניפולציה גנטית, אבל לתרגום מודלים קליניים הם קריטיים ללימודים מינון ורעילות החולה של פוטנציאל הרפוי6 ,13. למרות מספר מודלים של הפרעות קדחת פותחו בעכברים, גדול מודלים חייתיים של פקקת הרלוונטיים מחלת כלי דם היקפיים, שבץ מוחי, אוטם שריר הלב הן כמה רחוק. הדגמים הראשונים פקקת קופים, כלבים, חזירים התמקד היצרות, החלה ועוצרי דימום וגלילים מאוחר יותר על כלי, בדרך כלל וכתוצאה מכך זרימת מחזורי הפחתות14,15,16. במקום כגון ריטלין באתר של הנזק אנדותל כמו הדגם הברזל ותחמוצת כלוריד, כגון במודלים אלה גרמו פקקת מחזורית, חסימת כלי דם דיסטלי וחוזרים זרימת דם רגילה. לשם השוואה, המודל הברזל ותחמוצת כלוריד השתנתה פה חיה גדולה, תוצאות כגון ריטלין הפציעה התייצב ויש אומתו מסתמים לפני הטיפול thrombolytic. ובלבד החוקר יש קרנות בשפע לכל דיאם ורכישה של ניבים ומומחיות כירורגי נאותה, אנחנו. פירוט כאן דגם כלב גדול של פגיעה בכלי הדם כדי לאפשר מעבדות ללמוד פקקת ניצול כירורגי, הדמיה, היסטולוגית טכניקות.
Protocol
Representative Results
Discussion
המודל המושרה פגיעה בכלי הדם של3 FeCl נעשה שימוש נרחב ללמוד פקקת של חיות קטנות, והוא קל לתרגם מודל בעלי חיים פרה-קליניים גדולים עם שפע של יתרונות. שינויים קלים לעבד את הפרוטוקול כלב לאפשר הניצול של שני תהודה מגנטית כדי להעריך את קו ומסוג דימום לאחר להתערבות פרמקולוגית אוגרי נתונים להערכ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ברצוננו להודות למרכז ומטה קוגניטיביים לדימות המוח ההתנהגותי-אוניברסיטת אוהיו על תמיכתם פיננסיים ומדעיים לפתח ולבצע תהודה מגנטית הכלביים.
Materials
| 1/8” umbilical tape | Jorgensen Laboratories Inc., | #J0025UA | for ferric chloride application |
| 4% paraformaldehyde in PBS | Alfa Aesar | AAJ61899AP | |
| 10% neutral buffered formalin | Richard-Allan Scientific | 5701 | |
| 2% 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC in PBS, pH 7.4) | Sigma Aldrich | T8877 | |
| ADP/Collagen cartridges | Siemens Diagnostics | B417021A | |
| 4.5 ml 3.2% sodium citrate blood vacutainer | Becton Dickinson | BD 369714 | |
| 4.5 ml lithium heparin vacutainer | Becton Dickinson | BD 368056 | |
| EDTA K3 vacutainers | Becton Dickinson | BD455036 | |
| Doppler flow probe | Transonic Systems Inc | MA2.5PSL | |
| Hematoxylin 560 | Surgipath | 3801570 | |
| Eosin | Surgipath | 3801602 | |
| LabChart Software | ADInstruments Inc. | ||
| Prisma Fit 3 tesla (3T) magnet | Siemen's Diagnostics | ||
| Sodium heparin for injection (to coat blood gas syringe) | NovaPlus | 402525D | |
| HUG-U-VAC positioning system | DRE Veterinary | 1320 |
References
- Adams, H. P. Stroke: a vascular pathology with inadequate management. Journal of Hypertension Supplement. 21 (5), S3-S7 (2003).
- Lansberg, M. G., Bluhmki, E., Thijs, V. N. Efficacy and safety of tissue plasminogen activator 3 to 4.5 hours after acute ischemic stroke: a metaanalysis. Stroke. 40 (7), 2438-2441 (2009).
- Nagel, S., et al. Therapy of acute basilar artery occlusion: intraarterial thrombolysis alone vs bridging therapy. Stroke. 40 (1), 140-146 (2009).
- Ciccone, A., Motto, C., Abraha, I., Cozzolino, F., Santilli, I. Glycoprotein IIb-IIIa inhibitors for acute ischaemic stroke. The Cochrane database of systematic reviews. 3 (3), (2014).
- The National Institute of Neurological Disorders and Stroke rt-PA Stroke Study Group. Tissue Plasminogen Activator for Acute Ischemic Stroke. New England Journal of Medicine. 333 (24), 1581-1588 (1995).
- Leadley, R., Chia, L., Rebellob, S., Gagnon, A. Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 43 (2), 101-116 (2000).
- Bodary, P. F., Eitzman, D. T. Animal Models of Thrombosis. Current Opinion In Hematology. 16 (5), 342-346 (2009).
- Sachs, U. J. H., Nieswandt, B. In vivo thrombus formation in murine models. Circulation Research. 100 (7), 979-991 (2007).
- Bonnard, T., Hagemeyer, C. E. Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel. Journal of Visualized Experiments. (100), e52838 (2015).
- Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride. Thrombosis Research. 60 (4), 269-280 (1990).
- Karatas, H., Erdener, S. E., et al. Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 31 (6), 1452-1460 (2011).
- Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology. Redox Biology. 1 (1), 50-55 (2013).
- Vilahur, G., Padro, T., Badimon, L. Atherosclerosis and Thrombosis: Insights from Large Animal Models. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2011, 1-12 (2011).
- Coller, B. S., Folts, J. D., Smith, S. R., Scudder, L. E., Jordan, R. Abolition of in vivo Platelet Thrombus Formation in Primates with Monoclonal Antibodies to the Platelet GPIIb/IIIa Receptor. Correlation with Bleeding Time, Platelet Aggregation, and Blockade of GPIIb/IIIa Receptors. Circulation. 80 (6), 1766-1774 (1989).
- Folts, J. An in vivo Model of Experimental Arterial Stenosis, Intimal Damage, and Periodic Thrombosis. Circulation. 83 (6 Suppl), (1991).
- Yasuda, T., et al. A canine model of coronary artery thrombosis with superimposed high grade stenosis for the investigation of rethrombosis after thrombolysis. Journal of the American College of Cardiology. 13 (6), 1409-1414 (1989).
- Schob, S., et al. Correlation Between Aquaporin 4 Expression and Different DWI Parameters in Grade I Meningioma. Molecular Imaging and Biology : MIB : the Official Publication of the Academy of Molecular Imaging. 19 (1), 138-142 (2017).
- Schob, S., et al. Diffusion-Weighted Imaging Using a Readout-Segmented, Multishot EPI Sequence at 3 T Distinguishes between Morphologically Differentiated and Undifferentiated Subtypes of Thyroid Carcinoma-A Preliminary Study. Translational Oncology. 9 (5), 403-410 (2016).
- Schob, S., et al. Diffusion-Weighted MRI Reflects Proliferative Activity in Primary CNS Lymphoma. Public Library of Science One. 11 (8), e0161386 (2016).
