Trombose da artéria carótida canino induzida por cloreto férrico: Um modelo Animal grande de lesão Vascular

Summary

Aqui, apresentamos as modificações necessárias para um bem caracterizado e comumente usado pequenos induzida por cloreto férrico (FeCl₃) artéria carótida lesão modelo animal para uso em um modelo de grandes animais de lesão vascular. O modelo resultante pode ser utilizado para avaliação experimental pré-clínicos profilática e trombolítica intervenções farmacológicas e mecânica.

Abstract

Trombose arterial oclusiva, levando a isquemia cerebral e infarto do miocárdio contribui para 13 milhões de mortes todos os anos globalmente. Aqui, traduzimos um modelo de lesão vascular de um pequeno animal em um animal grande (canino), com pequenas modificações que podem ser usadas para a seleção pré-clínica de agentes profiláticos e trombolíticos. Além dos métodos cirúrgicos, o protocolo modificado descreve os métodos passo a passo para avaliar a canalização de artéria carótida por angiografia, instruções detalhadas para processar o cérebro e a artéria carótida para análise histológica verificar a carótida canalização e hemorragia cerebral e parâmetros específicos para completar uma avaliação de eventos tromboembólicos a jusante, utilizando a ressonância magnética (MRI). Além disso, alterações processuais específicas do modelo animal pequeno bem estabelecida anteriormente necessário para traduzir em uma lesão vascular animal grande (canino) são discutidas.

Introduction

Terapia de acidente vascular cerebral em grande parte é modelada após o tratamento de doença arterial coronariana, principalmente porque intervenções na doença cardiovascular tem respondido bem ao medicamento terapia e endovascular intervenções¹. Estes tratamentos, no entanto, não com êxito traduzidas para infarto cerebral. São as dificuldades com o atual tratamento de acidente vascular cerebral que o ativador de plasminogênio tecidual recombinante (rTPA) não pode ser revertido, e que a administração carrega um risco significativo de 6,4% de conversão hemorrágica^{2,3, 4}. a morbimortalidade resultante limita seu uso para uma janela pequena, muitas vezes inatingível,⁵. Também, reestenose e oclusão ocorrem frequentemente após trombólise inicial, invertendo melhora neurológica inicial. Em resumo, há uma estreita janela temporal para administrar rTPA que exclui a grande maioria (90%) dos pacientes que sofrem insultos cerebrovasculares isquêmicos.

O papel da Terapia antiplaquetária intravenosa se mostrou promissor no tratamento do acidente vascular cerebral isquêmico com recanalização do vaso melhorada, sobrevivência e resultado². Infelizmente, estas drogas têm um efeito colateral previsível de hemorragia intracraniana e extra-craniana, em grande parte porque não há nenhuma maneira para adequadamente reverter ou controlar sua atividade². Ao mesmo tempo eficaz na prevenção da agregação plaquetária, o risco de hemorragia e a incapacidade de reverter sua atividade impedido o seu uso na rotina de cuidados a pacientes com AVC. Portanto, existe uma necessidade, para medicamentos anti-coagulantes potentes que agir sozinhos ou em combinações para prevenir e lisar coágulos ainda têm um perfil de segurança que permitirá o uso em um espaço fechado, baixa o volume, como o cérebro, onde a hemorragia é mal tolerada.

Compreendendo o mecanismo da trombose arterial e re-estenose e avaliação dos trombolíticos e drogas que impedem a re-estenose, requerem modelos animais pequenos e grandes, como parte do desenvolvimento pré-clínico. Lesão vascular induzida por cloreto férrico é uma técnica amplamente utilizada para rapidamente e com precisão, induzir a formação de trombos nos vasos expostos de camundongos, ratos, cobaias e coelhos^{6,7,8, 9 , 10 , 11 , 12}. estas espécies menores oferecem várias vantagens, incluindo a facilidade de manipulação genética, compra animal de baixo custo e baixa diárias custos de habitação. Infelizmente, as experiências com animais pequenas negam vários empates de sangue durante a cirurgia de acesso plaquetas reatividade, gasometria arterial e resposta inflamatória. Mais importante ainda, animais de grandes porte muito mais pròxima imitam plaquetária humana fisiologia^6,13. O modelo de lesão de artéria carótida₃ FeCl tem desempenhado um papel predominante no estudo da fisiopatologia da trombose, na validação de novos medicamentos anti-plaquetários e anti-coagulante e na descoberta de potenciais trombolíticos^{6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12}. Previous modelos em camundongos, ratos, cobaias e coelhos forneceram facilidade e flexibilidade para a manipulação genética, mas traduzíveis modelos pré-clínicos são essenciais para pacientes estudos de dosagem e toxicidade da terapêutica potencial^{6 ,13}. Apesar de vários modelos de distúrbios trombóticos foram desenvolvidos em ratos, grandes modelos animais de trombose que são aplicáveis para a doença vascular periférica, acidente vascular cerebral e infarto do miocárdio são poucos e distante. Os primeiros modelos de trombose em macacos, cachorros e porcos focada na estenose, aplicando hemostatos e cilindros posteriores aos navios, geralmente resultando em fluxo cíclico reduções^14,15,16. Em vez de um trombo oclusivo no local do dano endotelial como no modelo de cloreto férrico, o trombo nesses modelos resultou em trombose cíclica, embolização distal e retornar para o fluxo de sangue normal. Em comparação, o modelo de cloreto férrico modificado aqui em um animal grande, resulta em um trombo oclusivo no local da lesão e é estabilizado e verificado por angiografia antes do tratamento trombolítico. Desde que o investigador tem fundos amplos para per diem e compra de caninos e perícia cirúrgica adequada, detalhamos aqui um grande modelo canino de lesão vascular para permitir que os laboratórios estudar trombose utilizando cirúrgica, imagiologia e histológicas técnicas.

Protocol

As investigações descritas de acordo com as orientações para o cuidado e o uso de animais de laboratório do institutos nacionais da saúde e foram aprovadas pelo Comitê de uso (#2015A00000029) e The Ohio estado Universidade institucional Cuidado Animal. Todas as manipulações cirúrgicas foram realizadas sob anestesia profunda e os animais não se sentiu dor em qualquer altura durante o procedimento. Todos os experimentos descritos foram não-cobrança. 1. preparação Recente…

Representative Results

Seguindo os procedimentos detalhados neste documento resultará no desenvolvimento de um modelo que pode ser usado para avaliação profiláctica ou trombolítica das intervenções arteriais oclusivas. A figura 1A mostra a velocidade de fluxo da linha de base e a velocidade de fluxo de sangue resultante antes, durante e após o tratamento, gravado por um software comercial. Dados de gravação podem ser usados para determinar o percentual de re-perfusão com…

Discussion

O modelo de lesão vascular induzida FeCl₃ é amplamente utilizado para estudar a trombose em pequenos animais e é fácil de se traduzir em um modelo animal, pré-clínicos grande com uma infinidade de vantagens. Pequenas modificações para adaptar o protocolo em um canino permitem a utilização de ambas as imagens de ressonância magnética para avaliar volumes de acidente vascular cerebral e hemorragia após uma intervenção farmacológica e a angiografia para avaliar a canalização de navio antes, dura…

Materials

1/8” umbilical tape	Jorgensen Laboratories Inc.,	#J0025UA	for ferric chloride application
4% paraformaldehyde in PBS	Alfa Aesar	AAJ61899AP
10% neutral buffered formalin	Richard-Allan Scientific	5701
2% 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC in PBS, pH 7.4)	Sigma Aldrich	T8877
ADP/Collagen cartridges	Siemens Diagnostics	B417021A
4.5 ml 3.2% sodium citrate blood vacutainer	Becton Dickinson	BD 369714
4.5 ml lithium heparin vacutainer	Becton Dickinson	BD 368056
EDTA K3 vacutainers	Becton Dickinson	BD455036
Doppler flow probe	Transonic Systems Inc	MA2.5PSL
Hematoxylin 560	Surgipath	3801570
Eosin	Surgipath	3801602
LabChart Software	ADInstruments Inc.
Prisma Fit 3 tesla (3T) magnet	Siemen's Diagnostics
Sodium heparin for injection (to coat blood gas syringe)	NovaPlus	402525D
HUG-U-VAC positioning system	DRE Veterinary	1320