Een veelzijdig Model van harde teek besmetting op laboratorium konijnen
Summary
We hebben een eenvoudig en veelzijdig systeem harde teken waardplanten laboratorium konijnen ontwikkeld. Ons niet-moeizame protocol gebruikt gemakkelijk toegankelijke materialen en kan worden aangepast afhankelijk van de vereisten van de verschillende experimentele instellingen. De methode kunt comfortabel toezicht en/of bemonstering van teken tijdens de gehele periode van de voeding.
Abstract
Het gebruik van levende dieren in de teek onderzoek is cruciaal voor een verscheidenheid van experimentele doeleinden met inbegrip van het onderhoud van harde teek kolonies in het laboratorium. Alle ontwikkelingsstadia (met uitzondering van ei) zijn cDNA in teken, en het verkrijgen van een bloed-maaltijd wanneer gekoppeld aan hun gewervelde gastheren is essentieel voor de succesvolle voltooiing van hun levenscyclus. Wij tonen hier een eenvoudige methode die gemakkelijk openable capsules gebruikt voor het voederen van harde teken op konijnen. De voordelen van de voorgestelde methode omvatten zijn eenvoud, korte duur en vooral veelzijdige aanpassing aan de behoeften van specifieke experimentele eisen. De methode maakt het gebruik van meerdere kamers (van verschillende maten) mogelijk op hetzelfde dier, waardoor de voeding van meerdere stadia of verschillende experimentele groepen terwijl het verminderen van de algehele dierlijke eis. De gebruikte materialen die niet-irriterend en gemakkelijk toegankelijke minimaliseert ongemak voor de dieren, die kan worden gemakkelijk hersteld van een experiment en voor goedkeuring aangeboden of opnieuw gebruikt wanneer de ethische protocol staat toe het.
Introduction
De harde teken (Ixodidae) zijn bekend als traag voeding geleedpotigen en kunnen worden aangesloten op een host voor meerdere dagen of weken, afhankelijk van de soort en de ontwikkelings fase1. Deze verplichte cDNA geleedpotigen zijn vectoren van een breed scala van ziekteverwekkers, zoals bacteriën, protozoa, en virussen, en dus het presenteren van een significant risico voor mens en dier1. Wanneer teek biologie studeren of evaluatie van de nieuwe controlemethoden, de oprichting van een effectieve teek voersysteem is van cruciaal belang om effectief de experimenten ontwerpen en verwezenlijken van de goal(s) van de studie. Onlangs, verscheidene kunstmatige teek voedersystemen (het vermijden van het gebruik van levende dieren) geweest ontwikkelde2,3,4 , en ze moeten waar mogelijk worden gebruikt. Echter, deze systemen zijn niet geweest kundig voor volledig vervangen teek voeden met levende dieren, en zij zijn niet geschikt substituten voor veel fysiologische voorwaarden voor wetenschappelijke studies. Daarom in sommige gevallen is het gebruik van experimentele dierlijke gastheren cruciaal voor het garanderen van de relevantie van experimentele resultaten.
Laboratorium Nieuw-Zeeland konijnen hebben aangetoond dat de hosts van het meest geschikte en toegankelijk voor verschillende ixodid teek soorten5,6,7,8,9. Twee gemeenschappelijke strategieën van de teek voeden met konijnen zijn vaak gebruikt: a) voeden met konijn oren bedekt met katoenen doek of sokken6,7, en b) voeding in katoen tassen9, nylon flessen10 of neopreen handschoenen Chambers11 gelijmd aan de rug van het konijn. De voeding op de oren van het konijn is niet een elegante systeem, omdat teken (vooral vroege stadia, larven of nimfen) kunnen kruipen en hechten diep in de gehoorgang, dat is ongemakkelijk voor het dier en maakt de monitoring van de teek voeding en/of het herstel van overvuld teken moeilijk. Dit systeem is ook beperkt tot slechts twee groepen van de teek op de oren volledig gedekt door sokken beschermd door Elizabethaanse kragen, vertegenwoordigen een aanzienlijke hinder voor het dier. Andere systemen9,10,11 zijn zeker meer geavanceerde en geschikt voor harde teek kolonie onderhoud. Ze zijn echter beperkt in het aantal experimentele groepen geplaatst bij konijnen, alsmede in de wijzigbare maten/vormen van de voeding kamers. Deze protocollen vereisen bovendien vaak moeizame de benen van de achterste konijn Voorkom krassen en het gebruik van de Elizabethaanse kragen om te voorkomen dat verzorgen.
Hierin stellen wij voor een eenvoudige, niet-moeizame en zeer effectieve methode om te voeden van meerdere groepen van harde teken in gesloten kamers vastgelijmd aan het konijn weer gedekt door een jas, eliminerend de behoefte aan Elizabethaanse kragen of moeizame tijdens het experiment. Ons systeem gebruikt met name elastische capsules gemaakt van een ethyleen vinyl acetaat (EVA) schuimfolie vallende mug mesh en gelijmd op de geschoren konijn terug met latex lijm niet-irriterend snel stollen (3 min). Deze techniek maakt het mogelijk de gehechtheid van meerdere capsules van gewenste grootte of vorm, en enkele weken na het experiment de konijnen zijn volledig hersteld. Het systeem is geschikt vooral voor de stadia van de nimfen en volwassen harde teek, maar met een beetje wijziging kan het worden gebruikt voor larven voeden ook. De EVA schuim gebaseerde methoden voor harde teek voeding kunnen worden aangepast aan andere soorten gewervelde gastheren, bijvoorbeeld schapen (die wordt aangegeven als een van de alternatieven in dit document).
Protocol
Representative Results
Discussion
De belangrijkste stap in dit hele protocol is om de capsule stevig aan de geschoren huid lijm. Om deze reden is constante druk gedurende ten minste 3 minuten kritisch, met name op de hoeken. Bij het enten van de teken in de capsule, is het belangrijk om ze te passen diep in de tegenoverliggende hoek van het open om te voorkomen dat de teek ontsnappen tijdens de verzegeling. Bij de planning van de experimenten, zorg ervoor dat alle de capsules onder de jas om schade te voorkomen vallen door kauwen of krassen. Zorg ervoor …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wij erkennen de technische bijstand van Evelyne Le Naour, Frans Nationaal Instituut van agrarisch onderzoek (INRA), Alain Bernier (INRA) en Océane Le Bidel (ANSES). Consuelo Almazán werd gesteund door een beurs van het laboratorium of Excellence, integratieve biologie van opkomende infectieziekten (LabEx IBEID), Pasteur Instituut. De konijnen en de schapen werden gekocht door ANSES. Onderdeel van dit werk werd gefinancierd door de National Institutes of Health toekenning RO1AI090062 aan Y. Park. Dr. Jeffrey L. Blair is erkend voor de herziening van het manuscript.
Materials
| New Zealand Rabbits (2.5-3.5 kg) | Charles River | Strain Code 571 | |
| Rambouillet sheep | Local provider-tick free farm | Female 6 months old | |
| EVA foam 5 mm thick | Cosplay Shop | EVA-PE451kg (950mm x 450mm) | 10 mm PE45kg foam from the Cosplay Shop may be used for the large adult tick species |
| Foam Sheet 9" X 12" 6 mm-White | Amazon | FOAMSHT6-20 | 6 mm-EVA foam ca be ordered via Amazon as an alternative to the foam from Cosplay Shop |
| Full length rabbit jackets | Harvard Apparatus, Inc. | 620077- medium, 6270078 – large | |
| Non-toxic latex glue | Tear mender | Fabric & Leather Adhesive | |
| Tubular cotton orthopedic stockinette | BSN Medical | 9076 (12-15 cm wide) | |
| Mosquito mesh | Loisirs Creatifs | Very fine filter nylon mesh fabric | Any mosquito mesh, or curtain material with the mesh size less than 50 microns is suitable. |
| Leukoplast | BSN medical S.A.S | LF 72361-02 | |
| Adhesive hook-and-loop tape | AIEX store | AIEX 39.37 Feet/12m Hook and Loop Self Adhesive Tape Roll, 20 mm width, white colour | Fullfiled by Amazon |
| Fast drying glue | Fixtout | Superglue |
References
- Sonenshine, D. E., Roe, M. Ticks, People and Animals. Biology of Ticks, Vol I. , (2014).
- Kröber, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).
- Bonnet, S., Jouglin, M., Malandrin, L., Becker, C., Agoulon, A., L’hostis, M., Chauvin, A. Transstadial and transovarial persistence of Babesia divergens DNA in Ixodes ricinus.ticks fed on infected blood in a new skin-feeding technique. Parasitology. 134 (2), 197-207 (2007).
- Bonnet, S., Liu, X. Laboratory artificial infection of hard ticks: A tool for the analysis of tick-borne pathogen transmission. Acarologia. 52 (4), 453-464 (2012).
- Khols, G. M. Tick rearing methods with special reference to the Rocky Mountain Wood Tick, Dermacentor andersoni Stiles. Culture methods for invertebrate animals. , (1937).
- Faccini, J. L. H., Chacon, S. C., Labruna, M. B. Rabbits (Oryctolagus cuniculus) as experimental hosts for Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae) [Coelhos (Oryctolagus cuniculus) como hospedeiros experimentais de Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae). Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia. 58 (6), 1236-1239 (2006).
- Chacon, S. C., Freitas, L. H. T., Barbieri, F. S. Relationship between weight and number of engorged Amblyomma cooperi. Nuttal (sic) and Warburton, 1908 (Acari: Ixodidae) larvae and nymphs and eggs from experimental infestations on domestic rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 13, 6-12 (2004).
- Sonenshine, D. E. Maintenance of ticks in the laboratory. Maintenance of Human, Animal, and Plant Pathogen Vectors. , (1999).
- Levin, M. L., Schumacher, L. B. M. Manual for maintenance of multi-host ixodid ticks in the laboratory. Experimental and Applied Acarology. 70 (3), 343-367 (2016).
- Bouchard, K. R., et al. Maintenance and experimental infestation of ticks in the laboratory setting. Biology of Disease Vectors. , (2005).
- Jones, L. D., Davies, C. R., Steele, G. M., Nutall, P. A. The rearing and maintenance of ixodid and argasid ticks in the laboratory. Animal Technology. 39, 99-106 (1988).
- Slovák, M., Labuda, M., Marley, S. E. Mass laboratory rearing of Dermacentor reticulatus ticks (Acarina, Ixodidae). Biologia, Bratislava. 57 (2), 261-266 (2002).
- Rechav, Y., Dauth, J. Development of resistance in rabbits to immature stages of the Ixodid tick Rhipicephalus appendiculatus. Medical and Veterinary Entomology. 1, 177-183 (1987).
- Zacarias do Amaral, M. A., Azevedo Prata, M. C., Daemon, E., Furlong, J. Biological parameters of cattle ticks fed on rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 21 (1), 22-27 (2012).
