Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Biology

מודל רב תכליתי של שנתות קשה שרץ על ארנבים מעבדה

doi: 10.3791/57994 Published: October 6, 2018

Summary

פיתחנו מערכת פשוטה ופסיביות ניזונים קרציות קשה מעבדה ארנבים. פרוטוקול שאינו מפרך שלנו משתמשת בחומרים נגיש בקלות, ניתן להתאים בהתאם לדרישות של ההגדרות ניסיוני שונים. השיטה מאפשרת ניטור נוח ו/או דגימה של קרציות במהלך תקופת האכלה כולה.

Abstract

השימוש של בעלי חיים במחקר שנתות חיוני עבור מגוון של מטרות ניסיוני כולל שמירה על מושבות שנתות קשה במעבדה. ב. קרציות, כל שלבים התפתחותיים (למעט ביצה) הן hematophagous, רכישת ארוחה דם כאשר למארחים חוליות שלהם חיונית סיומו המוצלח של מחזור החיים שלהם. כאן נדגים שיטה פשוטה המשתמשת קפסולות openable בקלות האכלה של קרציות קשה על ארנבים. היתרונות של השיטה המוצעת כוללים שלה פשטות, משך קצר, תכליתי והכי חשוב התאמה לצרכים של דרישות ספציפיות ניסיוני. השיטה מאפשר את השימוש צ'יימברס מרובים (בגדלים שונים) על אותה חיה, מה שמקנה האכלה מספר שלבים או קבוצות ניסוי ובו-בזמן להפחית את הדרישה בסך הכל בעלי חיים. החומרים ללא ונגיש בקלות בהם מזעור אי נוחות על חיות שניתן בקלות התאוששה ניסוי, המוצעים לאימוץ או לעשות שימוש חוזר אם הפרוטוקול האתי מאפשר זאת.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

הקרציות קשה (Ixodidae) ידועים היטב כמו איטי פרוקי רגליים האכלה, יכול להיות מצורף במחשב מארח מספר ימים, או שבועות, תלוי במין וההתפתחותי. שלב1. פרוקי רגליים אלה hematophagous חובה וקטורים של מגוון רחב של גורמים מדבקים, כגון חיידקים, חד-תאיים, וירוסים, ובכך להציג סיכון משמעותי בפני בני אדם, בעלי חיים בריאות1. מתי ללמוד ביולוגיה שנתות או הערכת שיטות בקרה חדשות, הקמת שנתות יעיל מערכות האכלה היא קריטית על מנת לעצב את הניסויים ביעילות להשיג את goal(s) של המחקר. לאחרונה, מספר השנתות מלאכותי האכלה מערכות (הימנעות השימוש של בעלי חיים) היו מפותחות2,3,4 , יש להשתמש במידת האפשר. עם זאת, מערכות אלו לא הצליחו להחליף שנתות האכלה בבעלי חיים ולאחר שהם אינם מתאימים תחליפים תנאים הפיזיולוגיות רבים הדרושים עבור מחקרים מדעיים. לכן, במקרים מסוימים, השימוש בבעלי חיים מארחים נסיוניים חיוני להבטיח את הרלוונטיות של תוצאות הניסוי.

ארנבים ניו זילנד מעבדה הוכיחו להיות המארחים נגיש ביותר עבור מספר ixodid שנתות מינים5,6,7,8,9. שתי אסטרטגיות נפוצות של שנתות ניזון ארנבים שימשו לעיתים קרובות: א) ניזון אוזני הארנב מכוסה כותנה בד או גרביים6,7, ב) האכלה שקיות כותנה9, ניילון בקבוקי10 או אטומה צ'יימברס11 דבוקה לגב של הארנב. ההזנה על האוזניים של הארנב אינה מערכת אלגנטית, מפני קרציות (בשלבים מוקדמים במיוחד, הזחלים או נימפות) עשוי לסרוק ולצרף עמוק בתוך תעלת האוזן, וזה לא נוח לבעל החיים גורם בקרה של שנתות האכלה ו/או ההתאוששות של צבה קרציות קשה. מערכת זו היא גם מוגבלת לקבוצות רק שתי שנתות על אוזניים מכוסה על ידי גרביים ונטויה. צווארונים האליזבתני, המייצג של אי נוחות משמעותי לבעל החיים. שאר מערכות9,10,11 הם בהחלט יותר מתקדם, מתאימה לתחזוקה המושבה שנתות קשה. עם זאת, הם מוגבלים במספר הקבוצות ניסיוני על הארנב וכן המידות לניתן לשינוי/הצורות של התאים האכלה. בנוסף, פרוטוקולים אלה דורשים לעיתים קרובות להביך את הרגליים ארנב האחורי כדי למנוע שריטות ושימוש קולרים האליזבתני כדי למנוע לטפח.

במסמך זה אנו מציעים שיטה פשוטה, שאינה מפרך ויעילה מאוד להאכיל קבוצות מרובות של קרציות קשה בדלתיים סגורות דבוק הארנב בחזרה מכוסה על ידי ג'קט, ביטול הצורך קולרים האליזבתני או דופק במהלך הניסוי. באופן ספציפי, המערכת שלנו משתמשת קפסולות אלסטי זני אתילן ויניל אצטט (EVA) קצף גיליון מכוסה על ידי רשת נגד יתושים ומודבק הארנב מגולח עם מהיר שהשרף מתהווה (3 דקות) ללא דבק לטקס. טכניקה זו מאפשרת ההחזקה של כמוסות מרובים של הגודל הרצוי או צורה, כמה שבועות לאחר הניסוי הארנבים הם החלים לחלוטין. המערכת מתאימה בעיקר לשלבים נטפלים ומבוגרים שנתות קשה, אך עם שינוי קטן זה יכול לשמש עבור הזחלים האכלה גם כן. השיטות מבוססות-קצף אווה עבור קשה שנתות האכלה שעשוי להיות מותאם סוגים אחרים של חוליות מארחים, לדוגמה כבשים (אשר מוצג בתור אחת החלופות בעיתון הזה).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

הערה: במחקר זה, ארנבים היו מתוחזקים בכלובים רגילים עם אוכל, מים מוצעים ad libitum בסוכנות צרפתית עבור מזון, איכות הסביבה, בריאות תעסוקתית & בטיחות (ANSES) מוכר מתקנים בעלי חיים אלפורט, צרפת. חיות נוטרו פעמיים מדי יום על ידי שני טכנאים מנוסים עבור תגובות חריג בעור, בעיות בריאות או סיבוכים. החדר ניסיוני היה מאובטח על ידי הפללת הפנימי של הפתח עם סרט הדבקה דו-צדדי כדי למנוע בריחה מקרית של קרציות. השיטה עובדת בצורה מיטבית אם שני אנשים עובדים כצוות, אבל לא ניתן להשלים יחיד הנערץ על ידי אדם מנוסה אחד. אמנם רוב הארנבים נינוח ורגוע, סימנים של לחץ עלולה להתרחש במהלך המניפולציה. כדי להבטיח כי ארנב אינה פוגעת עצמה על ידי נאבק, איפוק ידני עשוי להתבצע על-ידי החזקת בעדינות של עורפה של הצוואר ביד אחת בעוד היד השנייה תומך בכך האחוריות. מלפני חצי שנה, המלונות בהם צפיתי כבשים הנשי נשמר במרכז מתקני מחקר ביו-רפואי (CRBM) נבחרת וטרינרי בית הספר של Alfort (ENVA), מים ומזון היו שסופקו ad libitum, ואיפה זה נבדק פעמיים ביום.

הערה: המעבדה שלנו קיבל הרשאה לשימוש ארנבות וכבשים שנתות האכלה על ידי ועדת האתיקה חיה ניסויים יבוא Anses/ENVA/UPEC, היתר מספרי 01741.01, 11/10/16-5B, בהתאמה. מאז היינו רק קרציות נטולת הפתוגן בניסויים שלנו, כל הארנבונים השתמשו במחקר זה היו מוצעים לאימוץ באמצעות האגודה הארנב הלבן, פריז, צרפת.

1. הכנת הקפסולות

  1. לחתוך לגודל הרצוי של הקפסולה מגליון קצף אווה (איור 1א'). הסיבוב החיצוני פינות (איור 1B) של הקפסולה כדי לצמצם ניתוק בשוגג בעת הדבקה זה על העור ארנב.
    הערה: עובי המסגרת של הקפסולה צריך להיות בסביבות 8 מ מ. השתמש גיליון מוקצף בעובי 5 מ מ עבור הזחלים, נימפות, קרציות קטנות מינים למבוגרים כגון Ixodes. גיליון מוקצף בעובי 1 ס מ מתאים גודל גדול קרציות למבוגרים כגון Amblyomma sp., Hyalomma sp., וכו שהגודל של הקפסולה משתנה לפי דרישות ניסיוני. לדוגמה, עבור 20 זוגות מבוגרים Ixodes , נימפות 200 או 1,000 הזחלים, אנו משתמשים גודל של קפסולה הפנימי של 5 x 5 ס מ2, 6 x 7 ס מ2 או 7 x 9 ס מ2, בהתאמה.
  2. גזור 8 מ מ רחב רצועות של הוק הדבקה קלטת (ראה טבלה של חומרים) ושמים אותם על המסגרת קצף אווה מוכן (איור 1C).
  3. גזור הרצועות בגודל זהה של לולאה הדבקה קלטת (ראה טבלה של חומרים) ואגידתו לצדדים הוק מחוברים למסגרת קצף אווה (איור 1D).
  4. לחתוך את הגודל המתאים של הרשת יתושים בסדר (גודל רשת פחות מ- 50 מיקרומטר) בהתאם לגודל המסגרת קצף אווה ודבוק זה הלולאה דביק (איור 1E ו- 1F). חותכים את המסוכך במידת הצורך.
    הערה: סוג זה של קפסולת יכול לשמש כדי להאכיל נימפות ומבוגרים מינים שנתות קשה, בזמן מערכת איטום שונה של הכמוסות היא זקוקה זחל האכלה (משלימה באיור 1) כדי למנוע בריחה מקרית של הזחלים דרך מהודק בצד וו ולופ.

2. הכנת הארנב לפני התפשטות שנתות

  1. לגלח את האזור של הארנב ומאחור כדי לשמש עם מספריים (איור 2א).
  2. חלות ללא דבק לטקס על פני כולו של הקפסולה מוכן ומחכה 1 דקות (איור 2B).
  3. הדבק את הקפסולה על ידי לחיצה על העור (בעיקר בפינות) עם האצבעות במשך כ-3 דקות (איור 2C ו- 2D).
    הערה: בעת הדבקה כמוסה אחת, תוודאו שיש לפחות 5 מ מ שביניהם (איור 2E ו- 2F). אנחנו בדרך כלל להימנע האזור של עמוד השדרה, אך ניתן להשתמש במידת הצורך.
  4. הרם מעט הקפסולות לבדוק חזותית ההחזקה שלהם על העור. אם נמצאו אזורים שאינם מצורפים, להחיל את הדבק בעזרת מרית, הקש על עוד 3 דקות.
  5. סרט הגנה חלות על הכפות האחורי של הארנב כדי למנוע נזק המעיל (איור 2G).
    הערה: שלב זה הוא אופציונלי והוא הוא בעיקר כדי למנוע נזק מעיל, לא נזק הקפסולה שנתות.
  6. ללבוש את המעיל ארנב על-ידי הצבת כאשר רגליו הקדמיות דרך הפתחים והידוק בצוואר, ביצוע בטוח ארנב נושם שרידים נוחים. לא למקם את הרגליים האחוריים דרך מתחמים אלסטי בשלב זה ולהשאיר את רוכסן פתוח (איור 2H).

3. שנתות התפשטות

  1. מקום הקרציות לתוך מזרק פלסטיק (1 או 5 מ ל בהתאם למספר של האנשים) עם המחט-סוף גזורה מחובר עם כותנה (איור 1G). אם כמות קטנה של קרציות להיות שורץ, להשתמש מלקחיים.
    הערה: עבור תחזוקה המושבה שנתות לאפשר את תקתוק הנפוחים female(s) להטיל ביצים עם עוקבות הבקיעה בתוך המזרק (5 או 10 מ"ל) מכוסה על ידי רשת נגד יתושים השינוי עטוף עם גומייה12 כדי להימנע מניפולציה מפרך של הזחלים בזמנו הם הם חלה על המחשב המארח (איור 1H). בנוסף, הזחלים מלא הנפוחים מותר להרשות לו נשירה במזרק (איור משלים 1I; 5 או 10 מ"ל) עבור התפשטות ישירה של הארנב עם נימפות.
  2. מקם את המזרק עמוק לתוך הקפסולה באמצעות פתח פינה ואת לחסן הקרציות על-ידי לחיצה על הבוכנה מזרק. לאט לאט טוויסט על הבוכנה לכיוון העור הארנב כדי להסיר את הקרציות הנותרים קשורה על הבוכנה, בו זמנית תמשכי החוצה של הקפסולה (איור 2אני).
    הערה: אם חלק של האנשים אזחל הקפסולה, להחזיר אותם באמצעות מלקחיים.
  3. לסגור את הקפסולה על ידי שנעל שוב את הקלטת וו ולופ.
  4. למקם את הרגליים האחורי של הארנב האחורי מארזים אלסטי של הז'קט ו zip סגור.
    הערה: ודא כי האצבע יכולה להתאים בין הצוואר על הז'קט הארנב כדי להבטיח נוחות וגם כדי למנוע לועס את הז'קט.
  5. להחזיר את הארנב הכלוב (איור 2J).
    הערה: הזמן התפשטות לאוסף של קרציות גדושה להשתנות בין מינים שונים שנתות, בשלבים התפתחותיים. לדוגמה, עבור Ixodes scapularis ו- Ixodes קיקיון, משך הזמן של האכלה עבור מבוגרים נימפות, הזחלים הם 6 – 9, 3-4, ו- 2-3 ימים, בהתאמה. ניתן למצוא רשימה של הפניות 29 מחזורים החיים שונים שנתות קשה בתנאי מעבדה בלוין ושומכר (2016)9.

4. איסוף וניטור של קרציות

  1. קח את הארנב מן הכלוב לספסל, לפתוח את הז'קט.
  2. בעדינות לרסן את הארנב עם הידיים. לפתוח את הקפסולה על-ידי unfastening את הקלטת וו ולופ (איור 2 K ו- 2 ל') ולאסוף את הקרציות צחצוח הזחלים הנפוחים (משלימה באיור 1) או נימפות על צלחת פלסטיק או באמצעות מלקחיים למבוגרים (איור 2L ). אם באופן חלקי (לא רצופים) קרציות נדרשים, להשתמש טוויסטר שנתות או מלקחיים כדי לנתק אותם.
    הערה: אם שמירה על המושבות שנתות בבקשה לראות את הפתק בשלב 3.1. לשמור על קרציות הנפוחים ב המתאים לח ותנאי טמפרטורה לפי המין שנתות מסוים.
  3. אם יש צורך, refasten את הקלטת וו ולופ לסגור את הקפסולה.

5. שחזור של הארנב

  1. להסיר את רשת היתושים לחלוטין של הקפסולה ולהשאיר את הז'קט הארנב (איור 2מ').
  2. לחכות 3-4 שבועות, נסה להסיר את הקפסולה באמצעות בעדינות קיטום באחת הפינות (איור 2N). אם הקפסולה מחוברת עדיין בחוזקה, חזור על שלב זה שבוע לאחר מכן.
  3. להסיר את הג'קט ולתת שהארנב לשחזר בכלוב.
    הערה: לאחר הקפסולה אינו פועל, בדוק עורו של הארנב לתגובות לא נורמלי. אמנם בדרך כלל אין טיפול נדרש, קרם emollient יכול לשמש במקרה של גירוי.
  4. אם הפרוטוקול לבין ניסויים מאפשר, הארנב ששוחזר (איור 2O) ניתן לעשות שימוש חוזר או מוצעים לאימוץ.
    הערה: ארנבים הוכחו לרכוש התנגדות שנתות התקדמנו מכת קרציות חוזרות13; לכן, reinfestations לא מומלץ אלא אם הניסוי דורש.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

כאן אנו מציעים לראשונה שיטה צעד צעד מפורט-מאת של שנתות קשה האכלה ב- EVA מוקצף קפסולות חלה על הגב של ארנב מגולח, מכוסה על ידי מעיל (איור 1  ואיור 2). פרוטוקול זה מתאים עבור סוגים שונים של ניסויים כאשר קבוצות שנתות שונים באותו מחשב מארח נדרשים והוא יכול לשמש גם לגידול המוני של קרציות קשה. תקתוק האכלה הצלחה במעבדה בעיקר מסתמך על הכושר של אנשים השנתות ואת התאמתו של המארחת הארנב של המין שנתות מסוים, יותר מאשר הטכניקה עצמה. המערכת שלנו באמצעות קצף אווה קפסולות דבוק הארנב בחזרה הוכחו להיות מוצלח ביותר בעת האכלה בשלבים התפתחותיים שונים של שנתות קשה שונים מינים (טבלה 1) ו- may גם להיות מותאם לסוג אחר של מארחים מעבדה, כגון כבשים ( איור 3).

היתרונות העיקריים של שיטה זו הם הפשטות, חומרים נגישים בקלות (טבלה של חומרים) ומערכת, והכי חשוב, נוחים פתוח המאפשר ניטור קל של הקרציות במהלך ההזנה. בנוסף, שיטה זו תכליתי מציע את האפשרות של מגוון ניסיוני הגדרות שונות בהתבסס על מספר לשינוי, צורה, ההרכב של הקפסולות במחשב המארח (איור 2D-F), אל מול אתגרי של מחקר מסוים. השימוש בדבק לטקס מאוד יעיל, ייבוש מהיר, ללא מבטיחה הקפסולה מודבק היטב בתוך שלוש דקות ולא נשאר צמוד במשך שלושה שבועות לפחות. הליך זה גם מאפשר התאוששות מלאה של הארנב המארחים אחרי הניסויים (איור 2O).

Figure 1
איור 1 : הכנה של הקפסולה קצף אווה, קרציות. (A, B) חיתוך הקפסולה של קצף אווה. (ג) הצבת את הרצועות של סרט דביק הוק הקפסולה. (ד) מחייב את רצועות צד לולאה ומתקלף את הקלטת של מחברים. (E, F) לתקוע את רשת נגד יתושים רצועות דביקות. (G) דוגמה למבוגרים קרציות קשה בתוך המזרק (5 מ"ל) עם חתוך המחט-תום מכוסה על ידי כותנה. דוגמה (H) של טרי הבקיעה הזחלים בתוך המזרק עם חתוך המחט-תום מכוסה על ידי יתושים רשת השינוי שנערך במקום על ידי גומייה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2 :, הדבקה הקפסולה לארנב לתקתק מחלים/הדבקה והסרת כמוסה. (א) מגולח בחזרה של הארנב. (B) יישום של הדבק הקפסולה קצף אווה מוכן. (C, D) מצורף גודל שונה קפסולות הארנב. (E, F) נוף הגבי של ארנב מציג מספר שניים צ'יימברס שמחוברת, בהתאמה. (G) הקלטת ממוקם סביב רגליו האחוריות. (H) הז'קט מוחל החל רגליו הקדמיות ואת הצוואר, החלק האחורי נשאר פתוח. מוצג גם לפתוח את הפינה של הקפסולה. (אני) הצבת הקרציות הקפסולה באמצעות הפינה פתוחה באמצעות המזרק. (J) הז'קט הוא מכווצות לגמרי, הארנב פלשתין לכלוב. (K) ניטור הקרציות במהלך ההזנה שלהם על-ידי פתיחת הקפסולה. (L) איסוף קרציות גדושה עם המלקחיים. (ז) קפסולה ריק לאחר הסרת שנתות. (N) ניתוק הקפסולה (אחרי 3-4 שבועות) של הארנב. (O) החלים לחלוטין ארנב אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3 : EVA מוקצף מערכת מותאמת כבשים. (א) מצורף של הקפסולות קצף על אזור מגולח וניקו בצד הלטראלי של הכבשים בחזרה. (B) לאחר התפשטות, הקפסולות המצורפת מכוסות בתחבושת (אורטופדי stockinette), ובמקום ג'קט. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

שנתות מינים מספר שורץ קרציות/ומספר השנתות הנפוחים (%)
הזחלים נימפות נקבות
Ixodes קיקיון - 692/557 (80.49%) 670/592 (88.35%)
Ixodes scapularis - - 40/34 (85%)
Dermacentor מרושת 3255/3,550 (91.7%) 900/803 (89.22%) 323/305 (94.42%)
Rhipicephalus appendiculatus 3,300/2822 (85.52%) 490/421 (85.91%) 370/362 (97.83%)
Rhipicephalus pulchelus - 1,920/1831 (95.36%) 282/257 (91.13%)
Amblyomma variegatum 332/225 (67.77%) 404/308 (76.24%) 207/146 (70.53%)
Amblyomma americanum - 140/134 (95.71%) 31/27 (87.1%)
Hyalomma קעור 1,000 * 510 * (58.8%) 380/313 (82.36%)

טבלה 1: Engorgement קצב של שלבים התפתחותיים שונים של מינים שנתות קשה ניזון ארנבונים בתוך קפסולות קצף אווה. * בשל לתהליך מהיר molting שלבים לא בוגר ה קעור , הזחלים הנפוחים (נתונים לא מוצג) נותרו הנשירה לתוך נימפות אשר לאחר מכן צבה בטיל אותו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

הצעד החשוב ביותר של פרוטוקול זה כולה היא הדבק הקפסולה בחוזקה על העור מגולח. מסיבה זו, לחץ קבוע לפחות 3 דקות הוא קריטי, בעיקר בפינות. כאשר מזריקים הקרציות בתוך הקפסולה, חשוב ליישם אותם עמוק לתוך הפינה הנגדית של אחד פתוח כדי למנוע בריחה שנתות במהלך אטימה. בעת תכנון הניסויים, ודא כי כל הקפסולות מכוסים על ידי מהז'קט כדי למנוע נזק על ידי לעיסה או גירוד. ודא כי באזור הצוואר על הז'קט הוא חזק מספיק כדי למנוע לועסת אבל רופף מספיק כי הארנב נשאר נוחים.

אחד היתרונות העיקריים של הטכניקה המתוארת הוא הפשטות שלה והשינויים הזה מבחינת גודל, ניתן להשתמש במספר של הכמוסות. במהלך הניסויים שלנו, ניתוק קפסולות מן העור לא נצפו. עם זאת, הנזק פה ושם של המעיל (אך לא את הקפסולה) על ידי הארנב עלולה להתרחש.

ב ארנבים, הבחנו כי בתוך הקפסולה, קרציות באופן מלא צבה-משפחתי (בעיקר ילדותי שלבים הזחלים ו נימפות) וכשתתחילי מהר יותר בשל הטמפרטורה של הארנב. מסיבה זו, אנו ממליצים להעריך את משך תקופת האכלה של מינים שנתות מסוים, שלב, לתכנן שנתות הנפוחים אוסף מיד לאחר הניתוק שלהם. למרות המערכת שלנו נבדק האכלה של מינים שונים של שנתות קשה (טבלה 1), הארנב הוא לא טבעי מארח שנתות קשה כל המינים14. מגבלה זו עשויה להתגבר על ידי התאמת המערכת מתאימה זן מסוים שנתות קשה מארחים בעלי חיים אחרים. כאן אנחנו דיווח על השימוש של מערכת קצף אווה המותאמים כבשים להאכיל כל בשלבים התפתחותיים של קיקיון א (איור 3). במקרה ספציפי זה, הכבשים צריך להיות מגולח ושטף עם צמר גפן ספוג עם 70% אתנול לחסל את השמן נוכח פני השטח של העור. לאחר מכן עקבו אחרי כמו זה שמתואר לארנבים, אך ובמקום ג'קט, תחבושת כותנה שימש מאחור כמוצג באיור3.

בעת פיתוח מערכת זו, שילמנו תשומת לב מיוחדת כדי למזער את כמות החומרים אשר השתמשו בהם ואת שלבי ההליך. לעומת שיטות אחרות, אנחנו לא משתמשים הרדמה, ארנב צווארונים, האוזן גרביים או להביך האחוריות5,6,7,8,9,10. בנוסף, פרוטוקול הנוכחי אינו מפרך, אין אימונים אינטנסיביים נדרש כדי להכיר טכניקה זו. תקתוק קצף אווה מבוסס מערכות המפורטות במחקר האכלה צפוי לשמש למגוון רחב של ניסויים שונים לומדים ביולוגיה שנתות, אינטראקציות פתוגן-וקטור-פונדקאי, או בהערכת לפקד אחר מדדים כמו acaricides או חיסונים. הכיוון העתידי שלנו להיות בהתאמת הקפסולה קצף אווה מערכות האכלה למודל בעכבר כדי להאכיל ילדותי שלבי קרציות קשה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

אנו להכיר את הסיוע הטכני של אוולין Le Naour, צרפתית המכון הלאומי של המחקר החקלאי (INRA), אלן Bernier (INRA) Bidel Le Océane (ANSES). קונסואלו Almazán נתמכה על ידי התחברות מן המעבדה של המצוינות, אינטגרטיבי ביולוגיה של מחלות זיהומיות מתעוררים (LabEx IBEID), מכון פסטר. ארנבות וכבשים נרכשו על-ידי ANSES. חלק מעבודה זו מומן על ידי המכונים הלאומיים לבריאות גרנט RO1AI090062 לפארק י'. ד ר ג'פרי ל' בלייר הוא הודה לסקירה של כתב היד.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
New Zealand Rabbits (2.5-3.5 kg) Charles River  Strain Code 571
Rambouillet sheep Local provider-tick free farm Female 6 months old
EVA foam 5 mm thick  Cosplay Shop EVA-PE451kg (950mm x 450mm) 10 mm PE45 kg foam from the Cosplay Shop may be used for the large adult tick species
Foam Sheet 9" X 12" 6 mm-White Amazon FOAMSHT6-20 6 mm-EVA foam ca be ordered via Amazon as an alternative to the foam from Cosplay Shop
Full length rabbit jackets  Harvard Apparatus, Inc.  620077- medium, 6270078 - large 
Non-toxic latex glue  Tear mender  Fabric & Leather Adhesive
Tubular cotton orthopedic stockinette BSN Medical 9076 (12-15 cm wide)
Mosquito mesh  Loisirs Creatifs Very fine filter nylon mesh fabric Any mosquito mesh, or curtain material with the mesh size less than 50 μm is suitable.
Leukoplast  BSN medical S.A.S LF 72361-02
Adhesive hook-and-loop tape AIEX store AIEX 39.37 Feet/12m Hook and Loop Self Adhesive Tape Roll, 20 mm width, white colour Fullfiled by Amazon
Fast drying glue   Fixtout  Superglue

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sonenshine, D. E., Roe, M. Ticks, People and Animals. Biology of Ticks, Vol I. Oxford University Press. (2014).
  2. Kröber, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends in Parasitology. 23, (9), 445-449 (2007).
  3. Bonnet, S., Jouglin, M., Malandrin, L., Becker, C., Agoulon, A., L'hostis, M., Chauvin, A. Transstadial and transovarial persistence of Babesia divergens DNA in Ixodes ricinus.ticks fed on infected blood in a new skin-feeding technique. Parasitology. 134, (2), 197-207 (2007).
  4. Bonnet, S., Liu, X. Laboratory artificial infection of hard ticks: A tool for the analysis of tick-borne pathogen transmission. Acarologia. 52, (4), 453-464 (2012).
  5. Khols, G. M. Tick rearing methods with special reference to the Rocky Mountain Wood Tick, Dermacentor andersoni Stiles. Culture methods for invertebrate animals. Dover Pubs. New York. (1937).
  6. Faccini, J. L. H., Chacon, S. C., Labruna, M. B. Rabbits (Oryctolagus cuniculus) as experimental hosts for Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae) [Coelhos (Oryctolagus cuniculus) como hospedeiros experimentais de Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae). Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia. 58, (6), 1236-1239 (2006).
  7. Chacon, S. C., Freitas, L. H. T., Barbieri, F. S. Relationship between weight and number of engorged Amblyomma cooperi. Nuttal (sic) and Warburton, 1908 (Acari: Ixodidae) larvae and nymphs and eggs from experimental infestations on domestic rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 13, 6-12 (2004).
  8. Sonenshine, D. E. Maintenance of ticks in the laboratory. Maintenance of Human, Animal, and Plant Pathogen Vectors. Science Publishers Inc. Enfield. (1999).
  9. Levin, M. L., Schumacher, L. B. M. Manual for maintenance of multi-host ixodid ticks in the laboratory. Experimental and Applied Acarology. 70, (3), 343-367 (2016).
  10. Bouchard, K. R., et al. Maintenance and experimental infestation of ticks in the laboratory setting. Biology of Disease Vectors. Elsevier. San Diego. (2005).
  11. Jones, L. D., Davies, C. R., Steele, G. M., Nutall, P. A. The rearing and maintenance of ixodid and argasid ticks in the laboratory. Animal Technology. 39, 99-106 (1988).
  12. Slovák, M., Labuda, M., Marley, S. E. Mass laboratory rearing of Dermacentor reticulatus ticks (Acarina, Ixodidae). Biologia, Bratislava. 57, (2), 261-266 (2002).
  13. Rechav, Y., Dauth, J. Development of resistance in rabbits to immature stages of the Ixodid tick Rhipicephalus appendiculatus. Medical and Veterinary Entomology. 1, 177-183 (1987).
  14. Zacarias do Amaral, M. A., Azevedo Prata, M. C., Daemon, E., Furlong, J. Biological parameters of cattle ticks fed on rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 21, (1), 22-27 (2012).
מודל רב תכליתי של שנתות קשה שרץ על ארנבים מעבדה
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Almazán, C., Bonnet, S., Cote, M., Slovák, M., Park, Y., Šimo, L. A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits. J. Vis. Exp. (140), e57994, doi:10.3791/57994 (2018).More

Almazán, C., Bonnet, S., Cote, M., Slovák, M., Park, Y., Šimo, L. A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits. J. Vis. Exp. (140), e57994, doi:10.3791/57994 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter