Summary
Este protocolo mide aprendizaje espacial y memoria con el laberinto de Barnes. Un nuevo paradigma de Damsel en señal de socorro se utiliza para evaluar la actividad locomotriz y conducta prosocial en ratones.
Abstract
El laberinto de Barnes es una medida confiable del aprendizaje espacial y la memoria que no requieren restricción de alimentos o la exposición a estímulos extremadamente estresantes. El laberinto de Barnes también puede evaluar otros comportamientos de ratón, como motivación general para escapar de la plataforma de laberinto y conducta exploratoria. El laberinto de Barnes puede medir Si una mutación genética o variable ambiental puede impactar la adquisición y retención de recuerdos espaciales, así como proporcionar información sobre la estrategia de búsqueda empleada por los ratones. Aquí utilizamos el laberinto de Barnes para detectar un déficit de memoria en ratones adultos después de un evento de exposición de etanol del desarrollo individual. El paradigma de damisela en peligro nuevamente descrito expone un ratón macho a un hembra ratón atrapado en una cámara en el campo abierto del centro de la arena. Proporciona una oportunidad para que el ratón para responder a la mujer atrapada socialmente y muestran un comportamiento prosocial. El paradigma del Damsel en señal de socorro puede utilizarse también para examinar el comportamiento del ratón en una novedosa actividad locomotor arena y medida. El laberinto de Barnes y los protocolos de Damsel en señal de socorro requieren mínima inversión financiera y aspectos más de las pruebas pueden construirse de fuentes comunes del laboratorio. Estas herramientas flexibles y accesibles pueden utilizarse también para detectar cambios de comportamiento a lo largo del desarrollo.
Introduction
El propósito de este protocolo es medir el aprendizaje espacial y memoria en ratones con el laberinto de Barnes como respuesta social y locomoción utilizando el paradigma de la damisela en peligro. Utilizan pruebas de aprendizaje y memoria espaciales para roedores incluyen el laberinto de brazo radial, que mide la capacidad de un ratón para encontrar comida oculta en uno de los brazos de un aparato multi-spoked, y el laberinto de agua de Morris, que coloca un ratón en una gran tina o piscina de agua y evalúa el tiempo que tarda para encontrar una plataforma oculta bajo el agua. Por lo general, entrenamiento para estos paradigmas abarca múltiples ensayos y permite la medición de ambas tasas de adquisición y retención a corto plazo y a largo plazo memoria ensayos de aprendizaje.
Aunque el laberinto de brazos radiales y laberinto acuático de Morris son maneras confiables para probar la memoria en roedores, presentan complicaciones para algunos investigadores. Ambos laberintos usan privación o fuertes estímulos aversivos como refuerzo1. El laberinto de brazos radiales utiliza la carencia de alimentos para asegurar que los roedores son adecuadamente motivados para encontrar una recompensa de comida. En el laberinto acuático de Morris, los efectos del estrés inducido por un baño forzado pueden alterar los resultados en los ratones2.
El laberinto de Barnes es una tarea de conciencia espacial alternativa que requiere de roedores aprender la posición de un agujero para escapar de la superficie brillante, abierto laberinto3. Débil estimulación aversiva (luz o sonido) se aplica para aumentar la probabilidad de que los ratones se escaparán de la plataforma. El laberinto de Barnes no requiere privación de alimentos, por lo que la cantidad de preparación animal es menos que en el laberinto radial del brazo. Puede ser utilizado sin conflicto por los investigadores que investigan conductas o moléculas asociadas con comer, regulación hormonal o vías hipotalámicas.
El laberinto de Barnes también tiene ventajas sobre el laberinto acuático de Morris. Es menos estresante que el laberinto de agua de Morris, causando niveles menos elevados de corticosterona en ratones4. Además, es mucho más simple de montar y requiere menos espacio durante el procedimiento de prueba y el almacenamiento.
El ensayo de Damsel en señal de socorro es un simple experimento de dos partes que puede evaluar actividad locomotor seguida de comportamiento prosocial. El ensayo de Damsel en señal de socorro está diseñado para evaluar comportamientos exploratorios y la sensibilidad social de un roedor macho en respuesta a un roedor hembra atrapado. Un método comúnmente utilizado para evaluar la sociabilidad (como preferencia por la novedad social) es el uso de test de sociabilidad de tres cámaras de Crawley, que valora la libre elección de un ratón para pasar cerca o lejos de otros ratones5.
Similar al test de sociabilidad de tres cámaras de Crawley, el ensayo de Damsel en señal de socorro también mide libre elección acerca de cómo pasar tiempo en la presencia de otro ratón, pero también proporciona mediciones de aspectos más profundos del funcionamiento social: 1) en el Ensayo de damisela en peligro, el ratón hembra atrapado se lleva a cabo en el centro de un campo abierto, así que aversión potencial del macho a campo abierto se enfrentó contra su unidad social explorar o investigar una angustiada mujer conespecíficos. 2) el modelo Damsel en señal de socorro también proporciona una manera de evaluar el comportamiento prosocial y empatía en respuesta al ratón atrapado, que no se ha explorado con frecuencia en los ratones.
Empatía animal es definitivamente observables y medibles, aunque no muchos paradigmas existen para este propósito. Por ejemplo, en ratas, un compañero de jaula atrapada puede inducir un estado de motivación prosocial, donde las ratas trabajará para liberar los animales atrapados. De hecho, las ratas decide ayudar al animal capturado incluso antes de abrir un recipiente similar que contenga un bocado de chocolate, luego accederás el chocolate y compartir con los recién liberados rata6.
Medidas de empatía en los ratones generalmente involucran infligir dolor; de hecho, ratones que observan a otros ratones en el dolor son más sensibles a sí mismos del dolor7,8. Sistema de seguridad para el estrés es un fenómeno caracterizado en roedores y ha sido acompañado de choque para examinar respuestas de estrés, como una medida de la empatía en ratones9,10.
Hay consideraciones éticas asociadas con dolor inducido o choque, por lo que se necesitan alternativas inductores de estrés. Hemos desarrollado el paradigma de la damisela en peligro como medida de comportamiento empático en la ausencia de dolor o tratamiento de shock. Los ratones atrapados en nuestro protocolo de Damsel en señal de socorro muestran signos manifiestos de angustia después de varios minutos como no son capaces de dar vuelta alrededor en el recipiente pequeño, sin embargo son ilesos mientras que proporciona una oportunidad para que otros ratones responder a su angustia.
Para comenzar la evaluación de la damisela en peligro, un ratón macho se coloca en una gran arena novela que contiene un pequeño cilindro central vacío. Se registran comportamientos exploratorios durante varios minutos, incluyendo cómo muchas secciones de la arena se cruzan y cuánto tiempo se gasta en el área abierta central. Este método proporciona una manera rápida y fácil para descartar déficit locomotor como un confounder potencial en una situación de aprendizaje que requiere movimiento coordinado para completar con éxito. También proporciona una medida básica de cuánto aversión a campo abierto del centro está presente. Ambas medidas podrían influir en rendimiento de laberinto de Barnes.
Tras la exploración inicial, el macho se retira de la arena y un ratón hembra se coloca en un cilindro transparente central cerrado, pequeño (similar al utilizado para recolección de sangre de los ratones). Luego, el ratón macho original es reintroducido en la arena, y conducta exploratoria se anotó otra vez. El paradigma de la damisela en peligro evalúa si un ratón está interesado en una interacción social basada en los cambios en los patrones de comportamiento cuando una mujer atrapada (marcados por el tiempo pasado en la Plaza del centro y el número de episodios de excavación) y si el ratón exhibe comportamiento prosocial hacia la mujer atrapada (marcada por la cantidad de cilindros investigaciones y eventos de contacto con la mujer atrapada). El ensayo de Damsel en señal de socorro puede ser usado para medir una propensión para la novedad social (similar al test de sociabilidad de tres cámaras de Crawley) dependiendo de si los investigadores atrapan un ratón familiar o novedoso.
Juntos, el laberinto de Barnes y los experimentos de Damsel en señal de socorro permiten la evaluación precisa del ratón las capacidades de aprendizaje y capacidad de respuesta social en ausencia de estímulos extremadamente estresantes. Como con todos los ensayos conductuales, estos experimentos deben realizarse con una gran sensibilidad hacia la experiencia animal, reduciendo al mínimo el malestar experimentado por el animal.
Como la mayoría de los laberintos, diferencias en la actividad locomotriz pueden influir desempeño en el laberinto de Barnes, por lo que los investigadores también deberían evaluar actividad locomotriz, especialmente cuando se usa el laberinto de Barnes para evaluar el aprendizaje en ratones con mutaciones que pueden afectar el movimiento (tales como ésos encontrados en modelos de ratón de la enfermedad de Huntington, o los expuestos a las toxinas que pueden producir hiperactividad o retardar el movimiento, como el etanol). Además, las superficies de laberinto y la cámara deben ser limpiadas y ropa de cama cambiado entre cada animal para evitar la señal de olor confunde.
Lo importante, todos los materiales pueden ser fabricados en sitio con mínima inversión financiera y la pequeña huella física de estos ensayos significa que estos experimentos pueden reproducirse en casi cualquier entorno, permitiendo una gran flexibilidad. Este tipo de accesibilidad permite buena ciencia a realizarse en las instituciones más pequeñas con recursos limitados o en situaciones donde piloto datos deben recogerse rápidamente en ausencia de una ayuda sustancial.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Todos los métodos aquí descritos fueron aprobados por el institucional cuidado Animal y el Comité uso (IACUC) de Hampden-Sydney College o Universidad de Randolph-Macon (donde previamente se realizó un trabajo).
1. básicos de vivienda de los ratones
- Casa de los ratones en jaulas con fondos sólidos y lados y una capa de ropa de cama suave y jerarquización material tales como trituración de papel. Utilizar ropa de cama se compone de mazorcas de maíz rallado o virutas de madera y asegurar que la ropa de cama se cambia regularmente para saneamiento.
- Proporcionar acceso a los alimentos y agua ad libitum. La parte superior de la jaula plástica alberga una tolva de alimentación. Suministrar pellets de alimento correctamente formulado ratón de la tolva de alimentos y proporcionar un dispensador de agua. Asegúrese de que la parte superior de la jaula cuenta con un filtro de aire para proteger a ratones de contaminantes externos.
- Mantener los ritmos circadianos naturales de los ratones siguiendo un ciclo de luz-oscuridad de 12 horas en las instalaciones de la vivienda. Realizar pruebas conductuales a la misma hora del día, idealmente durante el ciclo oscuro del animal, tales como durante la noche.
Nota: Se debe tener cuidado para distinguir ratones en la vivienda. Existen varios métodos para distinguir los ratones, como golpes oídos, etiquetas de oreja y cola marcas.
2. Barnes prueba laberinto: construcción
- Obtener una tabla de madera circular que es de 120 cm de diámetro.
- Cortar 20 agujeros circulares (4,5 cm de diámetro) alrededor del perímetro del círculo. Posición de cada agujero para ser 2,5 cm del borde de laberinto y 13 cm orificios vecinos.
- Las superficies lisas y pintarlas de blanco brillante (un color brillante se recomienda).
- Designar un lado de la Junta de laberinto para la inserción de taza pequeña ganchos aproximadamente 2-3 cm de cada uno de los 20 agujeros y coloque dos ganchos de cada agujero (uno a cada lado de cada agujero).
- Utilizar discos de poca profundidad negro (plástico) para cubrir los agujeros en el lado del laberinto con ganchos. Use ganchos para asegurar espesor bandas de caucho para sostener los discos en la parte inferior del laberinto.
- Monte firmemente el laberinto de Barnes 120 cm del suelo y alejada de otros objetos igualmente altos como mesas o sillas. Una caja o un taburete se puede utilizar para apoyar el centro del laberinto.
- Colocar grandes carteles blancos con una forma en cada pared (triángulo, círculo y Cruz) como señales extra-laberinto en 3 lados del laberinto. Mantener los carteles en las paredes por el laberinto para cada ensayo.
- El lado pasado de laberinto, creó una sólida cortina negra esconder observadores para que los datos se pueden grabar con precisión sin los investigadores siendo visible a los ratones en el laberinto.
- Suspender una cámara de vídeo sobre la arena con una vista panorámica de la superficie de todo laberinto.
- Limpie todas las superficies del laberinto (discos negro y blanco caja incluido) con agua luego una solución de etanol al 70% antes y después de cada ensayo de ratón.
- Coloque 100 W fuente de luz 25 cm sobre el centro del laberinto (encender o apagar en la salida y llegada de la prueba) y asegúrese de tener los discos y ganchos mirando hacia el piso.
Nota: Otros plafones en la sala deben desactivarse durante la prueba. Se recomienda la adición de un generador de ruido ultrasónico colgado al lado de 100 W de luz. Gire encendido/apagado en la salida y llegada de cada ensayo.
3. Barnes prueba laberinto: procedimiento
Nota: Asegúrese de que todos los componentes del laberinto se limpian con solución de etanol de agua y 70% antes y después de cada ensayo, lo que permite tiempo para secar completamente antes de la prueba se reanuda. Asegúrese de tener limpieza suministros listos, así como contadores de tiempo para los ensayos.
- Casa todos los ratones en grupos durante el uso de un método de identificación fiable. Mantener los ratones fuera de la sala de pruebas cuando no están funcionando activamente en el laberinto. Esto es para asegurar que no se someten al follonero ultrasónico prematuramente.
- Manejar ratones suavemente y mantiene la base de la cola, con las patas en la mano.
- Para la formación, tienen los ratones correr en el laberinto una vez diaria por día por 7 días consecutivos para evaluar la adquisición de aprendizaje.
Nota: Un único ensayo a largo plazo puede realizarse en una fecha posterior para evaluar la retención de la memoria. El protocolo actual entrenado ratones adolescentes comenzando en día postnatal 32 y se realizó un ensayo a largo plazo en adultos en 4 meses de edad. - Asignar al azar cada ratón a un agujero blanco a utilizar durante todo el periodo de prueba. Los agujeros pueden ser etiquetados 1-20 en la parte inferior del laberinto o en el exterior del perímetro de laberinto, donde no son visibles para el ratón en el laberinto.
- Reemplace el disco de orificio asignado con una pequeña caja negra (23 x 11 cm). Fije firmemente al laberinto de Barnes con bandas de goma conectadas a los ganchos más cercanos.
Nota: El cuadro de destino es poco profundo lo suficiente para que el ratón puede bajar fácilmente en él, o contiene un paso para asegurarse de que el ratón no tiene que saltar hacia abajo en él. - Coloque el ratón en el centro del laberinto debajo de una taza para aclimatarse durante 30 segundos hasta que comience la prueba. Comenzar a grabar video.
- Encienda el follonero de luz y ultrasonido. Levante la Copa a través de un mecanismo de cadena para evitar sesgar el título inicial del animal. Iniciar un temporizador y se sientan detrás de la cortina para observar.
- Después de que el ratón entra en el agujero blanco, cubrir el agujero con la misma copa opaca en el inicio de la prueba o una carpeta y apague el follonero ultrasónico. Si el ratón no ha introducido el objetivo después de transcurridos 5 minutos, corral el ratón en el agujero blanco.
- Asegúrese de que el ratón entra en el agujero. Cuando el ratón está dentro de la caja de blanco, cubrir el agujero y apague el follonero. Permitir que el ratón para permanecer en el cuadro destino por 1 minuto sin perturbaciones.
- Aunque el agujero blanco se mantendrá constante para cada ratón durante todo el período de entrenamiento, correr ratones en un orden aleatorio cada día para asegurarse de que no están siguiendo cualquier cues/olores dejados por el anterior ratón.
4. Barnes laberinto pruebas: Análisis de datos
- Durante los ensayos de laberinto de Barnes, registro el siguiente programado datos: total de tiempo invertido en el laberinto, tiempo para encontrar el destino y tiempo para entrar en agujero del objetivo si el objetivo se ha introducido.
- Seguir el movimiento general del ratón para determinar el número de errores (número de agujeros incorrecto explora) antes y después de encontrar el objetivo. También registre la distancia desde el agujero blanco en el primer orificio explorado (la distancia se mide en número de hoyos a), junto con cualquier notable comportamiento de la preparación.
- Seguimiento de los movimientos de cada animal en una hoja de papel con un diagrama del laberinto durante cada ensayo y se usa para analizar estrategias de búsqueda, así como determinar el número de agujeros que se analizaron en el cuadrante opuesto al objetivo. Utilice análisis de vídeo para confirmar los caminos.
5. damsel-en-señal de socorro pruebas: construcción de la cámara de retención
- Cortar un cilindro claro a una longitud igual a 3/4 de la longitud de la hembra del ratón de la base de la cola hasta la punta de la nariz. Asegúrese de que las dimensiones del cilindro son tales que el ratón dentro no puede dar vuelta alrededor.
Nota: Cortamos el extremo del cono de un tubo cónico de 50 mL hasta hacer un tubo largo de 4 cm para ratones de 1 mes de edad y un largo de 8 cm de tubo para los ratones de 4 meses. - La tapa de ambos extremos del cilindro tal que uno de los casquillos se puede quitar y colocar. 3-4 agujeros, aproximadamente 0,5 cm por cada uno, en cada tapa. Asegúrese de que los agujeros son lo suficientemente grandes como para permitir la nariz tocando entre ratones y respiración12.
Nota: Como alternativa, un dispositivo para sujeción del ratón durante la recogida de sangre puede utilizarse.
6. damsel-en-señal de socorro pruebas: preparación de la Arena
- Asegúrese de que la arena es una caja cuadrada plástico topless opaca de 38 x 38 cm con paredes de 19 cm. Llenar uniformemente con lecho de maíz a una altura de aproximadamente 2,5 cm.
Nota: Las camas de mazorca de maíz hacen eventos de excavación más fácil de detectar. - Suspender una cámara de vídeo sobre la arena para que la totalidad de la arena está a la vista.
7. damsel-en-señal de socorro de prueba: medida de la conducta exploratoria
- Coloque la cámara cerrada y vacía el estrés en el centro de la arena.
- Comenzar la grabación con la cámara suspendida.
- Seleccione un ratón macho. Si los ratones están marcados para identificación, nota de identidad de este hombre; Si no, marcar este ratón de modo que pueden distinguirse después de regresar a la jaula.
- Coloque suavemente el ratón macho debajo de una taza en la esquina inferior izquierda en la arena. Después de 30 segundos, retire la taza a través de un mecanismo de cadena.
- Permitir que el ratón para explorar durante 10 minutos, teniendo cuidado de permanecer fuera de su campo de visión durante grabación. Al final de 10 min, quitar el ratón de la arena y volver a una jaula de explotación para los próximos 5 minutos12.
- Detener la grabación y guardar el archivo de vídeo con un identificador apropiado.
8. damsel-en-señal de socorro de prueba: medida de capacidad de respuesta Social
- Utilizar la misma configuración de grabación y arena como en la medida de la conducta exploratoria.
- Seleccione un ratón hembra. Si los ratones están marcados para identificación, nota de identidad de la hembra; Si no, marcar este ratón de modo que pueden distinguirse después es devuelto a la jaula.
Nota: Un littermate, compañero de jaula o nuevo ratón puede utilizarse, dependiendo de la pregunta de investigación. Si se realizan múltiples ensayos, mantener el tipo de relación a través de todos los ensayos. - Sostenga el ratón hembra suavemente por la base de la cola, o por sujeción de cuello, si es necesario y baje en la cámara de seguridad. Cerrar el extremo abierto detrás de él y asegurarse de que es incapaz de dar la vuelta.
Nota: Considere usar guantes resistentes a la mordedura, como el ratón hembra será resistente a entrar en la cámara de seguridad. - Comenzar la grabación con la cámara suspendida.
- Coloque la cámara de retención con el ratón hembra atrapado dentro en el centro de la arena de la empatía y permita que la mujer se adapte durante 10 minutos. Tenga cuidado de permanecer fuera del campo de visión de la hembra.
- Después el ratón hembra en la cámara de seguridad durante 5 minutos, coloque el ratón macho marcado en la arena de empatía usando el mismo proceso que antes. Permitir que el ratón macho un 5 minutos adicionales explorar la arena, teniendo cuidado de permanecer fuera del campo de visión de los ratones.
- Detener la grabación y guardar el archivo de vídeo con un identificador apropiado.
- Al final de los 5 minutos, retire ambos ratones de la arena y colocar en sus jaulas. Vuelva a colocar el lecho de maíz y esterilizar la arena y la cámara de tensión con etanol de 70%12.
9. damsel-en-señal de socorro pruebas: Análisis de datos
- Software de seguimiento puede ser utilizado, pero el video también puede ser analizado manualmente. Una vez que el archivo de vídeo es visible en el equipo, superponer una hoja transparente sobre la pantalla y trazar el cuadrado de la arena usando un marcador. La Plaza de arena se dividen en nueve compartimentos iguales.
- Revisar los datos de vídeo para los primeros 5 minutos de la medida exploratoria inicial. Registrar el número de compartimentos cruzados (comportamiento de la actividad locomotriz, exploratoria), tiempo en el centro de la arena (aversión al campo abierto), número de excavación y episodios de la preparación y número de veces que el ratón toca el alojamiento del centro vacío cámara.
Nota: Puntuación no se realiza para el minuto 5 segundo de exploración inicial de 10 minutos del hombre, ni para 10 min la mujer está atrapada en la cámara central en ausencia del macho. - Revisar los datos de videos de 5 min de la medida de la capacidad de respuesta social inmediatamente después de que el hombre es reintroducido en la arena con la mujer atrapada. Registrar los mismos datos en cuanto a la medida exploratoria inicial, pero además registrar el número de veces que el macho ratón tocado las narices con el ratón hembra atrapado.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
El laberinto de Barnes
Para ilustrar cómo se puede utilizar el laberinto de Barnes, investigamos si una sola exposición temprana de etanol causa una diferencia en el aprendizaje a lo largo del desarrollo del ratón. Ratones C57Bl6/J o fueron inyectadas con una solución de etanol de 2,5 g/kg (n = 8) o con solución fisiológica (n = 6) dos veces, dos horas, en el día postnatal 6. Entrenados los animales en el laberinto de Barnes durante la adolescencia (P30), y había realizado un único ensayo a largo plazo en la edad adulta (4 meses). Los datos recogidos se pueden dividir en varias categorías principales: 1) precisión de tiempo y el error, entrada 2) blanco y 3) asignación de la ruta de exploración.
Precisión por el tiempo y el error:
Las mediciones del tiempo abarcan varios aspectos importantes: la latencia para alcanzar el primer agujero (el tiempo que tarda el ratón para investigar cualquier agujero primero después de iniciar el juicio) ilustrará si el ratón es el aprendizaje que tiene que para ir a buscar el (orificio de escape Figura 1A). La latencia para encontrar el agujero blanco (marcado por un descenso inicial de la nariz en el plano del agujero blanco) es capaz de encontrar el agujero correcto (figura 1B). Con cada sesión, debería disminuir el tiempo para ejecutar la sesión de entrenamiento, indicando que los animales están aprendiendo el laberinto.
El número de investigaciones de mal agujero (llamadas errores) el ratón realiza antes de localizar el orificio correcto (figura 1) indica si el animal es capaz de ir relativamente hacia el orificio de escape de destino. El número total de veces que un ratón explora un agujero incorrecto en el transcurso de la prueba da una medida rudimentaria de la actividad locomotriz y conducta exploratoria. (Figura 1). Todos los ratones fueron entrenados con éxito en el laberinto de Barnes durante un período de prueba de 7 días durante la adolescencia (representado aquí por sesiones diarias en los días postnatales 32-39), indicado por una disminución en la tasa de error y el tiempo para encontrar el agujero blanco. No hubo diferencias estadísticas en el aprendizaje entre los animales a lo largo del período de formación de etanol y control.
Velocidad de entrada de destino:
La latencia para realmente entrar en el agujero blanco es de uso general como los criterios para la terminación exitosa del laberinto, pero es probable que no da tanta información como otros aspectos de la prueba. Entrada en el objetivo puede ser también anotó como un 0 o un 1. Si el mouse entra en el objetivo antes de transcurrir el minuto 5, la prueba se considera exitoso, pero si el ratón no entra en el objetivo, debe utilizarse un cuaderno o libro al corral del animal en el blanco por lo que experimenta la seguridad de la cámara por debajo de. En los primeros días de entrenamiento, debe esperarse para ver tarifas de entrada en el objetivo y los animales que los 5 minutos completos el laberinto. En los días posteriores, la prueba debe tomar menos tiempo.
Varios errores después de encontrar el destino indica poca motivación para entrar en el cuadro destino y también puede detectar confort anormal con una situación que es típicamente aversiva a los ratones (plataforma elevada, campo abierto, luz brillante, ruido ultrasónico). Una gran diferencia entre errores antes de encontrar el destino y el número total de exploraciones del agujero durante un juicio indica pobre motivación para entrar en la cámara de escape blanco (figura 2A). Si los ratones no entran en el orificio de escape de destino después de descubrimiento, luces brillantes o ruido puede añadirse a la situación de prueba como estímulos nocivos suavemente.
En nuestro experimento, un emisor de ruido ultrasónico se añadió sobre el laberinto prueba día 5 para introducir una motivación extra para entrar en la meta. Antes de la introducción del ruido ultrasónico, no Salinas ratones tratados nunca habían entrado en la meta, pero las entradas que se añadió después de la introducción del ruido. Significativamente más ratones (solución salina y etanol combinado) entraron en el objetivo 6 de ensayo en comparación con el ensayo 4 (t-test, p = 0,0014) (figura 2B).
Asignación de ruta de acceso:
Asignación de la ruta del ratón puede ayudar a evaluar la retención de la información y estrategias de aprendizaje, así. La distancia entre el primer orificio explorado y el agujero blanco es un buen indicador de memoria para la ubicación de destino, como este las pistas donde el ratón va primero y lo cerca están en el destino (Figura 3A). Esperan que esta medida para variar extensamente al principio del entrenamiento, pero el primer agujero visitado debe acercarse a la meta como los ratones aprenden la ubicación de destino.
Aunque se encontró ninguna diferencia estadística en el aprendizaje entre el etanol y control de animales durante el período de entrenamiento, cuando estos ratones se vuelvan como adultos utilizando un único ensayo a largo plazo (a los 4 meses), los inyección de etanol los animales tenían más difícil recordar donde se encontraba el agujero blanco (figura 3B)12. No se encontró esta diferencia en la retención de memoria en el laberinto de Barnes inicial de formación, así utilizando el laberinto otra vez en otro momento nos permitido recoger diferencias sutiles en la memoria de aprendizaje, como los que se encuentran con un evento de intoxicación del etanol del desarrollo individual. Un diagrama representativo de la Barnes superficie laberinto permite a los investigadores mapa la ruta que tomó el ratón, incluyendo el número de errores y un registro de la primera perforación visitó (figura 3).
Tiempo de permanencia en el cuadrante opuesto corresponde a la cantidad de tiempo que un ratón explora una parte del laberinto de otras, específicamente un contrario del blanco. Es posible que un investigador obtener y calcular otras medidas como el ratón corre el laberinto, pero esta medida requiere un análisis más adelante. Un ratón que está aprendiendo debe disminuir tiempo explorando los orificios en el cuadrante opuesto. En el ensayo de adulto a largo plazo, etanol trataron ratones exploraron significativamente más agujeros en el cuadrante opuesto del objetivo, lo que indica un fracaso para recordar la correcta ubicación espacial general (p = 0,03) (Figura 4A).
Es importante romper esta medidas de asignación en errores cometidos antes y después de encontrar realmente el objetivo. El número de errores antes de encontrar el destino puede revelar si es que ocurre el aprendizaje, pero también nos cuente sobre la estrategia de búsqueda del ratón. En lugar de visitar al azar los agujeros, el ratón puede adoptar una estrategia para encontrar rápidamente el objetivo. Durante el juicio a largo plazo, todos los animales tratados con etanol utilizan una búsqueda secuencial de agujero a agujero de manera en forma de anillo hasta que se encontró el agujero, mientras que perceptiblemente menos solución salina tratada ratones emplearon esta técnica (p = 0.004) (Figura 4B y 4 D). Por otra parte, ratones pueden apuntar una dirección general del laberinto (figura 4), que indica que está produciendo el aprendizaje espacial y el animal probablemente está utilizando claves externas a las proximidades del agujero blanco.
Damsel en señal de socorro
La arena de Damsel en señal de socorro fue construida y utilizada para probar la conducta exploratoria y social de ratones C57Bl6/J a ambos 1M (n = 15) y 4M (n = 12) de edad. Se utilizó un espacio de empatía donde el macho ratón colocado en una esquina (figura 5A). Conducta exploratoria de ratón se cuantificó como el número de cuadrados cruzados en el minuto 5 en el ámbito de la novela. Nuestros resultados muestran que ratones más viejos (4 meses) cruzan más cuadrados que los ratones más jóvenes (1 mes) (p < 0.0001) (figura 5B).
A continuación, la hembra atrapada fue colocada en un cilindro en el centro de la arena (figura 5A). Una vez que la mujer está atrapada en la cámara, conducta exploratoria puede cuantificarse otra vez como el número de cuadros cruzados. La presencia de la hembra atrapada afecta comportamiento exploratorio masculino. Sin importar la edad, ratones machos exploran menos en presencia de una mujer atrapada. Varones juveniles exploraron la arena menos (según lo medido por el número de cuadrados cruzados en presencia de una mujer atrapada de ratón que cuando solo (en 1 mes: t-test, p = 0,001; promedio ± de hombre solo 46 4,34 plazas vs mujer 26,13 ± 3,42 plazas). Esta diferencia también fue evidente en adultos (en 4 meses: t-test, p < 0.000001; significa hombre solo 151.5 ± 5,31 plazas vs mujer 103,08 ± 0.3.59 cuadrados) (figura 5B).
Además, se debe evaluar la cantidad de tiempo un ratón en la plaza central durante un período de 5 minutos. Tiempo de permanencia en la Plaza del centro se debe comparar en la presencia y la ausencia de la mujer como una medida de interés social. Nuestros resultados muestran que los hombres pasan más tiempo en la Plaza del centro en presencia de la mujer atrapada. Varones juveniles dedicado más tiempo a explorar el centro de la arena en presencia de una mujer atrapada de ratón que cuando solo (en 1 mes: p = 0,05; significa hombre solo 13.14 ± 2.79 s vs mujer 33.42 ± 9,32 s). Esta diferencia también se observa en adultos (en 4 meses: p = 0.001; significa hombre solo 14.80 ± 1.89 s vs mujer 52.87 ± 8,9 s) (figura 5).
Además, los investigadores también deben cuantificar el número de eventos de cavar en la arena, que podría ser una medida de ansiedad o comportamiento prosocial hacia la hembra atrapada. Esta medida fue significativamente diferente en presencia de la hembra para ratones de 1 mes (1 M), pero no ratones de 4 meses (4 M). Varones juveniles pasaron más excavación del tiempo durante su tiempo en la arena en presencia de una mujer atrapada de ratón que cuando solo (en 1 mes: p = 0.027; significa hombre solo 0,4 ± 0.27 veces vs con mujer ± 3.2 1.09 veces). Esta diferencia no se observa en adultos (en 4 meses: p = 0,65; significa hombre solo 1.33 ± 0.54 veces vs. con mujer 1 ± 0.49 veces) (figura 5).
El número de veces que un hombre toca la cámara de seguridad que contiene la hembra atrapada y el número de veces que los animales tocaron narices a través de los agujeros de aire es medidas de comportamiento prosocial. En nuestros resultados, ratones machos tocaron el tubo que contiene la hembra atrapada significativamente con más frecuencia que los adultos (4 meses) que como menores de edad (1 mes) (p = 0.00001; promedio 1 mes 4,73 ± 0.95 veces vs. 4 meses 15.92 ± 1.64 veces) (figura 5E). Los machos adultos también iniciados más atrapado eventos contacto mujer. Ratones machos tocaron las narices con la mujer atrapada por los agujeros de aire considerablemente más con frecuencia que los adultos (4 meses) que como menores de edad (1 mes) (p = 0.002; media ± 1 mes 3.93 veces 1 vs 4 meses 8.67 ±.94 veces). (Figura 5F).
Aparato de ultrasonidos de control fue utilizado para escuchar ultrasonidos vocalizaciones sobre 20 kilociclos por ratones femeninos, y también fue utilizado para escuchar vocalizaciones ultrasónicas por ratones machos atrapados en un paradigma de revocación "Licenciado-en-señal de socorro". No vocalizaciones fueron detectados en cualquier situación, que se espera, ya que investigaciones anteriores no hallaron ratones ultrasonidos vocalizaciones durante estímulos aversivos exposición (como restricción física o choque eléctrico)11.
Figura 1 : Representante de precisión de laberinto de Barnes resultados por tiempo y el error de. Ratones o fueron inyectados con una solución de etanol de 2,5 g/kg o con una solución salina dos veces 2 horas en el día postnatal 6. Entrenados los animales una vez al día por 7 días durante la adolescencia, luego realiza un único ensayo a largo plazo en la edad adulta11. (A) la latencia para alcanzar el primer agujero (el tiempo que tarda el ratón para investigar cualquier agujero primero después de iniciar el juicio) revela si el ratón es aprender a encontrar el orificio de escape. (B) la latencia para encontrar el agujero blanco (marcado por un descenso inicial de nariz en el plano del agujero blanco) es capaz de encontrar el agujero correcto. (C) el número del agujero equivocado investigaciones (denominadas errores) el ratón hace antes de localizar el orificio correcto indica si el animal es capaz de ir relativamente hacia el orificio de escape de destino. (D) el total número de veces que un ratón explora un agujero incorrecto en el transcurso de la prueba da una medida rudimentaria de la actividad locomotriz y conducta exploratoria. Barras de error representan SEM11. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2 : Terminación de laberinto de Barnes acertado. La latencia para realmente entrar en el agujero blanco es de uso general como los criterios para la terminación exitosa del laberinto, pero los animales no podrán entrar en el agujero blanco después de descubrimiento. (A) A gran diferencia entre errores antes de encontrar el destino y el número total de exploraciones del agujero durante un juicio indica pobre motivación para entrar en la cámara de escape blanco. En nuestro experimento, un ruido ultrasónico fue agregado en ensayo 5 ratones para entrar en el objetivo de inducir. (B) significativamente más ratones (solución salina y etanol combinado) entraron en la meta 6 ensayo en comparación con el ensayo 4 (t-test, p = 0,0014). No ratones de etanol mantenidos explorar después de encontrar el destino por día 7. Barras de error representan SEM. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3 : Motivación de laberinto de Barnes. Mapeo de rutas de ratón puede proporcionar información sobre motivación. (A) la distancia entre el primer orificio explorado y el agujero blanco es un buen indicador de memoria para la ubicación de destino, como este pistas de medida donde el ratón va primero y cuánto se distancia del objetivo. (B) aunque se encontró ninguna diferencia estadística en el aprendizaje entre el etanol y control de animales durante el período de entrenamiento, cuando estos ratones se vuelvan como adultos utilizando un único ensayo a largo plazo (a los 4 meses), los animales de la inyección de etanol tenía un tiempo más difícil recordar donde se encontraba el agujero blanco. (C) A diagrama representativo de la Barnes superficie laberinto permite a los investigadores mapa la ruta que tomó el ratón, incluyendo el número de errores y un registro de la primera perforación visitó. Este ratón fue directamente a la meta en 16 segundos, pero nunca entró en el transcurso de 5 minutos y había explorado 41 agujeros luego. Este comportamiento indica poca motivación para entrar en la meta. Barras de error representan SEM. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4 : Estrategia de búsqueda de laberinto de Barnes. Mapeo de rutas de ratón puede descubrir estrategias de búsqueda y proporcionar información sobre la estrategia de aprendizaje. (A) en el ensayo de adulto a largo plazo, etanol trataron ratones exploraron significativamente más agujeros en el cuadrante opuesto del objetivo, lo que indica un fracaso para recordar la correcta ubicación espacial general (* p = 0,03). (B) durante el juicio a largo plazo, todos los animales tratados con etanol utilizan una búsqueda secuencial de agujero a agujero de manera en forma de anillo hasta que se encontró el agujero, mientras que perceptiblemente menos de la solución salina tratada ratones emplearon esta técnica (** p = 0.004) (B D). Ensayo día 6 resultados están en la foto para una solución salina (C) tratamiento (D) etanol tratada ratón y ratón. Ratones pueden dirigirse a una dirección general del laberinto (C), que indica que está produciendo el aprendizaje espacial y el animal probablemente está utilizando claves externas a las proximidades del agujero blanco. Por lo general, las puntuaciones cuadrante son mucho mejores para los ratones usando esta estrategia. (D) el agujero a agujero secuencial de búsqueda es una estrategia de anillo, donde el ratón va a cualquier borde del laberinto y busca en cada agujero para encontrar el objetivo. Cuadrante las puntuaciones son pobres con gran variación cuando utilizan la estrategia de anillo de ratones. Barras de error representan SEM. haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 5: Damsel en señal de socorro. Arena (A) la doncella en peligro se divide en 9 cuadrados. El ratón macho se coloca en una esquina y se observa el comportamiento masculino. El ratón hembra, atrapado en un contenedor de cilindro, se coloca en la plaza central de la arena. Conducta exploratoria (B) dentro de la arena aumenta entre la adolescencia (1 mes = 1 M) y la edad adulta (4 meses = 4 M). Ratones en generales, hombres exploraron menos en presencia de una mujer atrapada. En adición, el juveniles ratones explorados menos de ratones adultos en presencia de la mujer atrapada. (C) respuesta Social puede medirse también por el tiempo en la Plaza del centro donde se celebra el ratón atrapado un ratón. Juveniles y adultos los machos pasaron más tiempo en la Plaza del centro en presencia de la mujer atrapada. Varones juveniles (D) pasaron más excavación del tiempo durante su tiempo en la arena en presencia de una mujer atrapada de ratón que cuando solo. Ratones machos (E) tocan el tubo que contiene la hembra atrapada considerablemente más con frecuencia como adultos que como juveniles. (F) los machos adultos también iniciados más atrapada mujer eventos contacto de menores de edad. Barras de error representan SEM (*** p < 0.0001, ** p 0,001, * p 0.05). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
El laberinto de Barnes y los experimentos de Damsel en señal de socorro son maneras baratos, rápidos y relativamente fáciles de evaluar el aprendizaje espacial, actividad locomotriz y conducta prosocial en ratones. Otras ventajas incluyen la ausencia de factores estresantes manifiestos, el dolor o la restricción de alimento para el animal. Como la mayoría paradigmas de aprendizaje/memoria, una desventaja del laberinto de Barnes es el número de ensayos necesarios para que los animales aprender donde se encuentra el agujero blanco y entrar.
Recolección de datos:
Datos deben recopilarse constantemente al observar las actividades y conductas en ambos paradigmas del ratón. Para el laberinto de Barnes, esto incluye el tiempo que el primer agujero es alcanzado, el número de agujeros de errores/mal explora, el momento en que alcanza el agujero blanco y el momento en que entra en el agujero blanco. Además, los investigadores deben asignar la ruta de acceso de cada ratón en el laberinto. Los datos pueden ser rastreados utilizando un mapa de papel del laberinto de Barnes a la vez que el ratón corre el laberinto, y los números de sincronización y el agujero pueden ser confirmados mediante imágenes de vídeo. Cuando el seguimiento del animal, puede ser útil cambiar los colores de pluma una vez por minuto para mantener un registro de exploraciones agujero potencialmente superpuestos. Sistemas de seguimiento de informática están disponibles para asegurar la exactitud y confiabilidad, tal como idTracker, Ctrax o tracktor, y algunos son gratis o de código abierto.
Para el análisis de la damisela en peligro, la información registrada debe incluir cuantas plazas entra en el hombre, el tiempo que tarda el macho a la hembra, cuánto tiempo pasa el hombre en la Plaza del centro cuando la mujer atrapada en comparación con sólo el cilindro vacío , cuántos eventos contacto son con el cilindro, el número de veces las narices animales tocados a través de la cámara, y cuantas veces eventos excavación ocurrieron en general y en el centro de la Plaza.
Constantes en las pruebas de comportamiento:
Como con todas las pruebas de comportamiento, es fundamental que las condiciones se mantienen constantes entre y dentro de los ensayos animales para asegurar que las variables ambientales no confundir los resultados del estudio. Estímulos visuales, auditivos u olfativos en el entorno experimental pueden causar cambios de comportamiento en los ratones, si se pretende o no13. Como tal, se debe tener cuidado para proteger los ratones de distracción de estímulos externos14. La arena utilizada para el escenario de la damisela en peligro tanto el laberinto de Barnes debe limpiarse después de cada prueba con agua y desinfectado con etanol al 70% para asegurar que no hay indicadores persistentes de ratones anteriores influyen en un juicio posterior. Además, ropa de cama debe cambiarse después de cada ensayo de damisela en peligro. Recolección de datos se debe registrar siempre en video para permitir a los experimentadores a revisar los datos y garantizar un análisis minucioso. Puede ser un desafío para el investigador permanecer oculto detrás de una cortina o fuera de la vista mientras recogía los datos, pero esto es importante para mantener un ajuste constante, libre de distracciones para los ratones.
Diseño de paradigma de laberinto de Barnes y modificaciones:
Hay varios paradigmas publicados en uso para el laberinto de Barnes. Protocolos de entrenamiento de laberinto de Barnes por lo general entre 7-15 días, pero el protocolo puede ser acortado. A veces truncando el número de sesiones de entrenamiento para aprender la tarea más difícil puede aislar las diferencias que más protocolos perder15. Se puede utilizar con sólo un sobrepuesto (como en el estudio original de Barnes), o pueden añadirse otros elementos (como una luz más brillante, un ventilador o un ruido) para hacer los ratones más motivado para entrar en la cámara de escape3,16. Si observa mala motivación para entrar en el cuadro de destino durante un estudio piloto, se debe considerar la adición de estos elementos durante el entrenamiento real.
Entrada en el agujero correcto destino probablemente ocurrirá menos rápidamente sin estos elementos, pero los investigadores deben ser conscientes que estas adiciones pueden ser estrés induciendo estímulos. La presencia o ausencia de estímulos aversivos puede manipularse para evaluar la motivación para entrar en el agujero blanco. Nuestro estudio mostró que etanol prenatal tuvo un efecto sobre la probabilidad de que un ratón entraría el agujero de escape durante el período de formación cuando se utilizó sólo la luz brillante, y este fenómeno era distinto de aprendizaje realmente donde se encuentra el agujero blanco.
Como se ve en días 1-4 de nuestro protocolo, los ratones no fueron muy motivados para entrar en el agujero, aunque parecían encontrar bastante fácilmente. Sin embargo, cuando el ruido ultrasónico fue colocado por encima del laberinto el día 5, partituras mejoraron en la mayoría de Barnes de medidas, incluyendo la probabilidad que ratones entraría a la cámara de destino después de encontrarlo. El ruido parece reducir drásticamente el número de investigaciones agujero extraño a juicio día 6 y 7, y por día 7 no guardan explorando ratones de etanol después de encontrar el destino (figura 2A). Aunque es posible que esto es una consecuencia natural de aprendizaje del laberinto, los animales pareció más agitada después de la introducción del ruido ultrasónico y menos propensos a explorar el laberinto. En orden para que la cámara seguirá una situación gratificante para los ratones, los investigadores también deben tener cuidadosos de desactivar los estímulos aversivos (cubrir el agujero y apagar el ruido) y permite al animal permanecer inalterados en la cámara la cantidad asignada de tiempo de recuperación antes de retirar el animal.
El diseño del laberinto de Barnes puede tener un impacto en el aprendizaje y la evaluación de la memoria. El protocolo actual utiliza señales extra-laberinto. Además de la asimetría de la sala de ensayo, carteles de las cuatro formas de negro sobre fondo blanco simple (cuadrado, triángulo, círculo, Cruz) fueron montados en las paredes de la habitación como señales visuales. El laberinto de Barnes se puede solucionar con o sin las señales distales en las paredes de la sala de prueba o puede ser resuelto utilizando una estrategia de búsqueda serial. Debido a esto, usando sólo una medida de "primer agujero cerca del objetivo" puede pasar por alto diferencias relevantes en la manera que el ratón resuelve el laberinto y no puede distinguir espacial de habilidades no-espacial17. Puede usarse varias medidas de análisis, como también examinar el número de agujeros explorados en la Plaza de enfrente o el número de errores antes de la meta. El patrón de la estrategia de búsqueda también puede ser analizado.
Diferentes cepas consanguíneas de ratones pueden tener rendimiento variable en el laberinto de Barnes, posiblemente debido a diferencias en la agudeza visual. Si una cepa de ratones con agudeza visual pobre es elegida para su uso en el laberinto de Barnes, la adición de un pequeño muro alrededor del borde del laberinto puede aumentar thigmotaxis (comportamiento abrazando a la pared) y aumentar el uso de una estrategia de búsqueda no visuales. Los machos tenían aprender mejor rendimiento que las hembras en las cepas DBA/2J y C3H/HeJ, y aunque sólo los machos fueron utilizados en el protocolo actual, ratones C57/Bl6 no se han encontrado para mostrar las diferencias de género en la memoria en el laberinto de Barnes18.
Diseño de paradigma de la damisela en peligro y modificaciones:
Para el experimento de la damisela en peligro, una limitación importante es que no hay forma para que el ratón exploratorio el ratón hembra o "doncella," del tubo en el centro de la arena. Rediseño de la cámara para contener un mecanismo de liberación sería una interesante modificación futura. Una desventaja de la damisela en peligro es la ausencia de estudios comparativos utilizando el paradigma, ya que es una evaluación para medir el comportamiento prosocial.
La damisela en peligro podría modificarse aún más para evaluar la sociabilidad (definida como la inclinación a pasar tiempo con otro ratón), preferencia por la novedad social (la inclinación a investigar un nuevo ratón en comparación con un ratón familiar,) acoplamiento o agresivo comportamientos (atrapando a una hembra en estro o un hombre nuevo en la cámara) y temas de biología evolutiva, como el impacto del fondo genético común en tendencias de comportamiento altruista (la respuesta a un littermate atrapado en comparación con un littermate no atrapado de ratón)19.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Los autores no tienen nada que revelar.
Acknowledgments
Universidad de Hampden-Sydney damos reconocimiento y aprecio a Sean Walden, Zach Leitner, Hunter Lee y Anton Kheirani por su participación en las pruebas de los protocolos para el laberinto de Barnes y experimentos de la damisela en peligro. También nos gustaría agradecer a James Foster en el Randolph-Macon College por la construcción del laberinto de Barnes y del Departamento de Biología de Randolph-Macon College para proporcionar espacio de pruebas.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Damsel-in-Distress | |||
| 50 mL conical tube | Fisher Scientific | 14-432-22 | Any brand of 50 mL conical tube will work |
| Rubber bands | Sprano Brand | n/a | Size 62, used to keep caps held to plywood |
| hammer | Grainger | 6R252 | Any standard hammer will work |
| nail (size 8D) | Grainger | 4NFE3 | Similarly-sized nails should work just as well |
| opaque, topless plastic box | AcmePlastics | CUT-TO-SIZE-ACRYLIC-CAST-BLACK-SHEET-2025 | Opaque plastic, cut to size (30 cm L x 19 cm W x 3-6 cm H). Step may be added to ensure no more than a 3.5 cm entrance depth for the mouse. |
| video camera (smartphone) | N/A | N/A | Any camera-equipped smartphone will work |
| bite-resistant gloves | Kent Scientific | GLVDYN02 | Any brand offering appropriate protection |
| transparency sheet | Staples | 954145 | Any brand of clear plastic sheet will work, used for scoring |
| Barnes Maze | |||
| Petri Dishes | Corning | 353025 | Spray painted and used as covers for Barnes maze holes |
| Plywood (3/4 in.) | LP Building Products | 22487 | To construct Barnes maze |
| Spray Paint | Krylon | 1274937 | Used to paint petri dish caps black, white paint used to paint plywood |
| Cup Hooks (5/8 in.) | Ace Hardware | 5360615 | 2 used on either side of ventral hole surfaces; Rubber band wraps around hooks to hold cap flat |
| Poster Board | Creatology | n/a | Used at edges of maze as extra cues |
| Light Bulbs | Phillips | n/a | 100W light bulb, used to during the trials |
| Rubber bands | Sprano Brand | n/a | Size 62, used to keep caps held to plywood |
| Ultrasonic noisemaker | Victor mini PestChaser | M753SN | Used as aversive stimuli |
References
- Sunyer, B., Patil, S., Höger, H., Lubec, G. Barnes maze, a useful task to assess spatial reference memory in the mice. Protocol Exchange. 2007, (2016).
- Vorhees, V., Williams, M. T. Assessing Spatial Learning and Memory in Rodents. ILAR Journal. 55 (2), 310-332 (2014).
- Barnes, C. A. Memory deficits associated with senescence: A neurophysiological and behavioral study in the rat. Journal of Comparative and Physiological Psychology. 93 (1), 74-104 (1979).
- Harrison, F. E., Hosseini, A. H., McDonald, M. P. Endogenous anxiety and stress responses in water maze and Barnes maze spatial memory tasks. Behavioural Brain Research. 198 (1), 247-251 (2009).
- Silverman, J. L., Yang, M., Lord, C., Crawley, J. N. Behavioural phenotyping assays for mouse models of autism. Nature Reviews Neuroscience. 11 (7), 490 (2010).
- Bartal, I. B. A., Decety, J., Mason, P. Empathy and pro-social behavior in rats. Science. 334 (6061), 1427-1430 (2011).
- Langford, D. L., et al. Social modulation of pain as evidence for empathy in mice. Science. 312 (5782), 1967-1970 (2006).
- Smith, M. L., Hostetler, C. M., Heinricher, M. M., Ryabinin, A. E.
- Melia, K. R., Ryabinin, A. E., Schroeder, R., Bloom, F. E., Wilson, M. C. Induction and habituation of immediate early gene expression in rat brain by acute and repeated restraint stress. Journal of Neuroscience. 14 (10), 5929-5938 (1994).
- Watanabe, S. Empathy and reversed empathy of stress in mice. Public Library of Science (PloS) One. 6 (8), e23357 (2011).
- Portfors, C. V. Types and functions of ultrasonic vocalizations in laboratory rats and mice. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 46 (1), 28-34 (2007).
- Houlé, K., Abdi, M., Clabough, E. B. D. Acute ethanol exposure during late mouse neurodevelopment results in long term deficits in memory retrieval, but not in social responsiveness. Brain and Behavior. , (2017).
- Sales, G. D., Wilson, K. J., Spencer, K. E., Milligan, S. R. Environmental ultrasound in laboratories and animal houses: A possible cause for concern in the welfare and use of laboratory animals. Laboratory Animals. 22, 369-375 (1988).
- Crabbe, J. C., Walhsten, D., Dudek, B. C. Genetics of mouse behavior: Interactions with laboratory environment. Science. 248, 1670-1672 (1999).
- Attar, A., Liu, T., Chan, W. T. C., Hayes, J., Nejad, M., Lei, K., Bitan, G. A shortened Barnes maze protocol reveals memory deficits at 4-months of age in the triple-transgenic mouse model of Alzheimer's disease. PloS One. 8 (11), (2013).
- Inman-Wood, S. L., Williams, M. T., Morford, L. L., Vorhees, C. V. Effects of prenatal cocaine on Morris and Barnes maze tests of spatial learning and memory in the offspring of C57BL/6J mice. Neurotoxicology and Teratology. 22 (4), 547-557 (2000).
- Harrison, F. E., Reiserer, R. S., Tomarken, A. J., McDonald, M. P. Spatial and nonspatial escape strategies in the Barnes maze. Learning and Memory. 13 (6), 809-819 (2006).
- O'Leary, T. P., Savoie, V., Brown, R. E. Learning, memory and search strategies of inbred mouse strains with different visual abilities in the Barnes maze. Behavioural Brain Research. 216 (2), 531-542 (2011).
- Kaidanovich-Beilin, O., Lipina, T., Vukobradovic, I., Roder, J., Woodgett, J. R. Assessment of social interaction behaviors. Journal of Visualized Experiments. 48, (2011).
