Summary
इस प्रोटोकॉल स्थानिक सीखने और स्मृति बार्ंस भूलभुलैया का उपयोग करने के उपाय । एक उपंयास युवती में संकट प्रतिमान के लिए चूहों में हरकत गतिविधि और सामाजिक व्यवहार का आकलन किया जाता है ।
Abstract
बार्ंस भूलभुलैया स्थानिक सीखने और स्मृति है कि खाद्य प्रतिबंध या अत्यंत तनावपूर्ण उत्तेजनाओं के लिए जोखिम की आवश्यकता नहीं है की एक विश्वसनीय उपाय है । बार्ंस भूलभुलैया भी ऐसे सामांय प्रेरणा के रूप में अंय माउस व्यवहार, का आकलन कर सकते है भूलभुलैया मंच और खोजपूर्ण व्यवहार से बचने के लिए । बार्ंस भूलभुलैया उपाय कर सकते है कि एक आनुवंशिक उत्परिवर्तन या पर्यावरण चर अधिग्रहण और स्थानिक यादों के प्रतिधारण को प्रभावित कर सकते हैं, साथ ही खोज चूहों द्वारा नियोजित रणनीति के बारे में जानकारी प्रदान करते हैं । यहां हम बार्ंस भूलभुलैया का उपयोग करने के लिए एक एकल विकास इथेनॉल जोखिम घटना के बाद वयस्क चूहों में एक स्मृति घाटे का पता लगाने । नव वर्णित युवती में संकट प्रतिमान एक महिला अखाड़ा के खुले केंद्र क्षेत्र में एक चैंबर में फंस माउस को एक पुरुष माउस को उजागर करता है । यह माउस को सामाजिक रूप से फंस महिला और प्रदर्शन सामाजिक व्यवहार का जवाब देने के लिए एक अवसर प्रदान करता है । युवती-में-संकट प्रतिमान भी एक उपंयास क्षेत्र और उपाय हरकत गतिविधि में माउस व्यवहार की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । दोनों बार्ंस भूलभुलैया और युवती-संकट प्रोटोकॉल में ंयूनतम वित्तीय निवेश और परीक्षण के सबसे पहलुओं की आवश्यकता है आम प्रयोगशाला की आपूर्ति से निर्माण किया जा सकता है । इन लचीला और सुलभ उपकरण भी विकास के पाठ्यक्रम पर व्यवहार परिवर्तन का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
Introduction
इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य युवती में संकट प्रतिमान का उपयोग बार्ंस भूलभुलैया के रूप में अच्छी तरह से सामाजिक जवाबदेही और गतिवान का उपयोग कर चूहों में स्थानिक सीखने और स्मृति को मापने के लिए है । आमतौर पर इस्तेमाल किया स्थानिक सीखने और कुतर के लिए स्मृति परीक्षण रेडियल हाथ भूलभुलैया, जो एक बहु-स्पोक उपकरण के एक हाथ में छिपा भोजन खोजने के लिए एक माउस की क्षमता के उपाय, और मॉरिस पानी भूलभुलैया, जो एक बड़े टब या पानी के पूल में एक चूहा स्थानों में शामिल है और यह एक छिपा पानी के नीचे मंच खोजने के लिए लेता है कितनी देर का आकलन । आमतौर पर, इन मानदंड के लिए प्रशिक्षण कई परीक्षणों तक फैला है और अल्पावधि और दीर्घकालिक स्मृति परीक्षणों के माध्यम से दोनों शिक्षण अधिग्रहण दर और प्रतिधारण के मापने की अनुमति देता है ।
हालांकि रेडियल-आर्म भूलभुलैया और मॉरिस पानी भूलभुलैया कुतर में स्मृति परीक्षण करने के लिए विश्वसनीय तरीके हैं, वे कुछ शोधकर्ताओं के लिए जटिलताओं मौजूद. दोनों भूलभुलैया अभाव या सुदृढीकरण1के रूप में मजबूत aversive उत्तेजनाओं का उपयोग करें । रेडियल बांह भूलभुलैया भोजन के अभाव का उपयोग करता है यह सुनिश्चित करने के लिए कि कुतर ठीक से एक खाद्य इनाम खोजने के लिए प्रेरित कर रहे हैं । मॉरिस पानी भूलभुलैया में, एक मजबूर तैरना द्वारा प्रेरित तनाव के प्रभाव चूहों2में परिणाम बदल सकते हैं ।
बार्ंस भूलभुलैया एक वैकल्पिक स्थानिक जागरूकता कार्य है कि एक छेद की स्थिति जानने के लिए उज्ज्वल, खुली भूलभुलैया सतह3से बचने के लिए कुतर की आवश्यकता है । कमजोर aversive उत्तेजना (प्रकाश या ध्वनि) तो चूहे के मंच से बच जाएगा संभावना को बढ़ाने के लिए लागू किया जाता है । बार्ंस भूलभुलैया भोजन अभाव की आवश्यकता नहीं है, तो पशु तैयारी की राशि रेडियल हाथ भूलभुलैया की तुलना में कम है । यह शोधकर्ताओं जो व्यवहार या खाने के साथ जुड़े अणुओं की जांच कर रहे हैं द्वारा संघर्ष के बिना इस्तेमाल किया जा सकता, हार्मोनल विनियमन, या हाइपोथैलेमस रास्ते.
बार्ंस भूलभुलैया भी मॉरिस पानी भूलभुलैया से अधिक लाभ है । यह कम मॉरिस पानी भूलभुलैया की तुलना में तनावपूर्ण है, चूहों4में corticosterone के कम ऊंचा स्तर के कारण. इसके अलावा, यह बहुत आसान है और इकट्ठा करने के लिए परीक्षण प्रक्रिया और भंडारण के दौरान कम समर्पित अंतरिक्ष की आवश्यकता है ।
युवती-में-संकट परख एक साधारण दो हिस्सा प्रयोग है कि हरकत सामाजिक व्यवहार के बाद गतिविधि का आकलन कर सकते हैं । युवती-में-कष्ट परख एक फंस मादा कुतर के जवाब में खोजपूर्ण व्यवहार और एक पुरुष के सामाजिक जवाबदेही का आकलन करने के लिए डिज़ाइन किया गया है । एक सामांय रूप से इस्तेमाल विधि सुजनता का आकलन करने के लिए (के रूप में अच्छी तरह से सामाजिक नवीनता के लिए वरीयता) है Crawley तीन चैंबर सुजनता परीक्षण है, जो एक माउस के मुफ्त विकल्प के पास समय बिताने के लिए या अंय चूहों से दूर का आकलन है5।
Crawley के तीन चैंबर सुजनता परीक्षण के लिए इसी तरह, युवती में संकट परख भी मुफ्त विकल्प के बारे में कैसे एक और माउस की उपस्थिति में समय बिताने के लिए उपाय है, लेकिन यह भी सामाजिक कार्य के गहरे पहलुओं के लिए माप प्रदान करता है: 1) युवती-में संकट परख, फंस महिला माउस एक खुले मैदान के केंद्र में आयोजित किया जाता है, तो एक खुले मैदान में पुरुष की क्षमता बचने के लिए अपने अभियान के खिलाफ खड़ा है सामाजिक तलाशने या एक व्यथित महिला विशिष्ट जांच । 2) युवती-इन-संकट मॉडल भी एक तरीका है, जो चूहों में अक्सर तलाशी नहीं किया गया है फंस माउस के जवाब में सामाजिक और empathetic व्यवहार का आकलन करने के लिए प्रदान करता है ।
पशु सहानुभूति निश्चित रूप से चौकस और मध्यम श्रेणी का है, हालांकि नहीं कई मानदंड इस प्रयोजन के लिए मौजूद हैं । उदाहरण के लिए, चूहों में, एक फंस पिंजरे दोस्त, जहां चूहों फंस जानवर मुक्त करने के लिए काम करेंगे सामाजिक प्रेरणा का एक राज्य पैदा कर सकता है । वास्तव में, चूहों एक चॉकलेट नाश्ता युक्त एक समान कंटेनर खोलने से पहले भी फंस जानवर मदद करने के लिए चुनते हैं, तो चॉकलेट का उपयोग और यह नए मुक्त चूहे6के साथ साझा करेंगे ।
चूहों में सहानुभूति के उपाय आम तौर पर दर्द के दण्ड शामिल; दरअसल, चूहे जो दर्द में दूसरे चूहे देखते हैं दर्द खुद7,8के प्रति अधिक संवेदनशील होते हैं. संयम तनाव कुतर में एक विशेषता घटना है और तनाव प्रतिक्रियाओं की जांच करने के सदमे के साथ युग्मित किया गया है,9चूहों में सहानुभूति का एक उपाय के रूप में,10।
वहां नैतिक प्रेरित दर्द या सदमे से जुड़े विचार कर रहे हैं, तो तनाव उत्प्रेरण विकल्प की जरूरत है । हम या तो दर्द या सदमे उपचार के अभाव में empathetic व्यवहार के एक उपाय के रूप में युवती में संकट प्रतिमान विकसित की है । हमारे युवती में फंस चूहों-संकट प्रोटोकॉल में संकट के प्रकट संकेत के बाद ही कई क्षणों के रूप में वे छोटे कंटेनर के भीतर घूम नहीं कर पा रहे हैं, फिर भी वे नुकसान पहुंचाया जबकि अंय चूहों के लिए एक अवसर प्रदान करने के लिए उनके संकट का जवाब है ।
युवती-इन-संकट मूल्यांकन शुरू करने के लिए, एक पुरुष माउस एक छोटे से खाली केंद्रीय सिलेंडर युक्त एक बड़े उपंयास क्षेत्र में रखा गया है । खोजपूर्ण व्यवहार कई मिनट के लिए दर्ज कर रहे हैं, सहित कैसे अखाड़ा के कई वर्गों को पार कर रहे है और कितना समय केंद्रीय खुले क्षेत्र में खर्च किया जाता है । इस विधि के एक त्वरित और आसान तरीका है एक सीखने की स्थिति है कि सफल समापन के लिए समंवित आंदोलन की आवश्यकता में एक संभावित निराधार के रूप में हरकत घाटे शासन प्रदान करता है । यह भी खुला केंद्र क्षेत्र के लिए कितना घृणा का एक बुनियादी उपाय प्रदान करता है मौजूद है । दोनों उपायों बार्ंस भूलभुलैया प्रदर्शन को प्रभावित कर सकता है ।
प्रारंभिक अंवेषण के बाद, पुरुष क्षेत्र से हटा दिया जाता है और एक महिला माउस एक संलग्न, छोटे स्पष्ट केंद्रीय सिलेंडर (है कि चूहों से खून इकट्ठा करने के लिए इस्तेमाल के समान) में रखा गया है । फिर, मूल पुरुष माउस को क्षेत्र में पुन: शुरू है, और खोजपूर्ण व्यवहार फिर से रन बनाए है । युवती में संकट प्रतिमान का आकलन है कि एक माउस एक सामाजिक व्यवहार पैटर्न में परिवर्तन के आधार पर बातचीत में रुचि है जब एक फंस महिला मौजूद है (समय से रन बनाए केंद्र वर्ग में खर्च और एपिसोड खुदाई की संख्या), और क्या चूहे फंस महिला के प्रति सामाजिक व्यवहार दर्शाती है (सिलेंडर जांच की राशि और फंस महिला के साथ संपर्क की घटनाओं से रन बनाए) । युवती-में संकट परख के लिए सामाजिक नवीनता के लिए एक प्रवृत्ति को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है (है Crawley तीन चैंबर सुजनता परीक्षण के समान) पर निरभर है कि शोधकर्ताओं जाल एक परिचित या उपंयास माउस ।
साथ में, बार्ंस भूलभुलैया और युवती-संकट प्रयोगों में अत्यंत तनावपूर्ण उत्तेजनाओं के अभाव में क्षमता और सामाजिक जवाबदेही सीखने माउस के सटीक मूल्यांकन की अनुमति देते हैं । सभी व्यवहार परख के साथ के रूप में, इन प्रयोगों पशु अनुभव के प्रति बड़ी संवेदनशीलता के साथ प्रदर्शन किया जाना चाहिए, पशु द्वारा अनुभवी असुविधा को कम करने ।
सबसे उलझनों की तरह, हरकत गतिविधि में अंतर बार्ंस भूलभुलैया पर प्रदर्शन को प्रभावित कर सकते हैं, तो शोधकर्ताओं को भी हरकत गतिविधि का आकलन करना चाहिए, खासकर जब बार्ंस भूलभुलैया का उपयोग करने के लिए उत्परिवर्तनों है कि आंदोलन ख़राब कर सकते है के साथ चूहों में सीखने का आकलन (जैसे उन में पाया Huntington रोग माउस मॉडल, या विषाक्त पदार्थों है कि सक्रियता या मंदबुद्धि आंदोलन जैसे इथेनॉल के रूप में पैदा हो सकता है उन से अवगत कराया । इसके अलावा, भूलभुलैया और चैंबर सतहों अच्छी तरह से साफ किया जाना चाहिए और प्रत्येक जानवर के बीच बदल बिस्तर खुशबू क्यू निराधार से बचने के लिए ।
महत्वपूर्ण बात, सभी सामग्री ंयूनतम वित्तीय निवेश और इन परख के छोटे भौतिक पदचिह्न के साथ साइट पर गढ़े जा सकता है मतलब है कि इन प्रयोगों लगभग किसी भी सेटिंग में दोहराया जा सकता है, महान लचीलेपन के लिए अनुमति दी । पहुंच के इस प्रकार के अच्छे विज्ञान सीमित संसाधनों या स्थितियों में जहां पायलट डेटा के लिए पर्याप्त समर्थन के अभाव में जल्दी से एकत्र की जरूरत के साथ छोटे संस्थानों में प्रदर्शन किया जा करने की अनुमति देता है ।
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Protocol
सभी विधियां यहां वर्णित संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) Hampden-सिडनी कॉलेज या Randolph-Macon कॉलेज (जहां कुछ काम पहले प्रदर्शन किया गया था) द्वारा अनुमोदित किया गया ।
1. चूहों का मूल आवास
- ठोस नीचे से और पक्षों के साथ प्लास्टिक के पिंजरों में चूहों घर, और नरम बिस्तर और घोंसले की सामग्री की एक परत जैसे कागज कटा हुआ । बिस्तर कि कटा हुआ मकई दानों या लकड़ी शेविंग्स से बना है का प्रयोग करें, और यह सुनिश्चित करें कि बिस्तर स्वच्छता के लिए नियमित रूप से बदल गया है ।
- खाद्य और जल ad libitumतक पहुंच प्रदान करें । प्लास्टिक पिंजरे के ऊपर एक खाना कूदनेवाला घरों । ठीक से तैयार माउस खाद्य छर्रों भोजन कूदनेवाला से वितरण और एक पानी की मशीन प्रदान करते हैं । पिंजरे शीर्ष एक हवा फिल्टर बाहर दूषित पदार्थों से चूहों की रक्षा करने के लिए सुविधाएँ कि सुनिश्चित करें.
- आवास सुविधा में 12 घंटे के हल्के-अंधेरे चक्र का पालन करते हुए चूहों के प्राकृतिक circadian लय को बनाए रखें । दिन के एक ही समय में व्यवहार परीक्षण आचरण, आदर्श जानवर के अंधेरे चक्र के दौरान, जैसे शाम घंटे के दौरान ।
नोट: देखभाल आवास में चूहों भेद करने के लिए लिया जाना चाहिए. चूहों भेद के लिए विभिन्न तरीकों जैसे कान घूंसे, कान टैग, और पूंछ चिह्नों के रूप में उपलब्ध हैं ।
2. बार्ंस भूलभुलैया परीक्षण: निर्माण
- एक परिपत्र लकड़ी के बोर्ड है कि व्यास में १२० सेमी है प्राप्त करें ।
- सर्कल की परिधि के चारों ओर 20 परिपत्र छेद (व्यास में ४.५ सेमी) कटौती । प्रत्येक छेद स्थिति भूलभुलैया एज और पड़ोसी छेद से अलग 13 सेमी से २.५ सेमी दूर हो ।
- सतहों चिकनी और उन्हें चमकदार सफेद रंग (एक चमकदार रंग की सिफारिश की है) ।
- छोटे कप के सम्मिलन के लिए भूलभुलैया बोर्ड के एक तरफ निर्दिष्ट 20 छेद के प्रत्येक से लगभग 2-3 सेमी दूर हुक और जगह दो प्रत्येक छेद के लिए हुक (प्रत्येक छेद के दोनों ओर से एक) ।
- हुक के साथ भूलभुलैया के किनारे पर छेद को कवर करने के लिए उथले काले (प्लास्टिक) डिस्क का प्रयोग करें । का प्रयोग करें हुक के लिए मोटी रबर बैंड सुरक्षित करने के लिए भूलभुलैया के तल पर डिस्क पकड़ ।
- सुरक्षित रूप से जमीन के ऊपर बार्ंस भूलभुलैया १२० सेमी माउंट और अंय तालिकाओं या कुर्सियों की तरह इसी तरह लंबा वस्तुओं से दूर । एक बॉक्स या स्टूल भूलभुलैया के बीच समर्थन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
- भूलभुलैया के 3 पक्षों पर अतिरिक्त भूलभुलैया cues के रूप में प्रत्येक दीवार (त्रिकोण, सर्कल, और पार) पर एक आकार के साथ बड़े सफेद पोस्टर प्लेस । प्रत्येक परीक्षण के लिए भूलभुलैया के आसपास दीवारों पर पोस्टर बनाए रखें ।
- भूलभुलैया के अंतिम पक्ष पर, एक ठोस काले पर्दे की स्थापना के लिए पर्यवेक्षकों को छिपाने ताकि डेटा सही दर्ज किया जा सकता है शोधकर्ताओं के बिना भूलभुलैया पर चूहों को दिखाई जा रही है ।
- पूरे भूलभुलैया सतह के एक पक्षी की आंख को देखने के साथ क्षेत्र पर एक वीडियो कैमरा निलंबित.
- साफ भूलभुलैया की हर सतह (ब्लैक डिस्क और लक्ष्य बॉक्स शामिल) पानी के साथ तो एक ७०% इथेनॉल समाधान से पहले और प्रत्येक माउस परीक्षण के बाद ।
- भूलभुलैया के केंद्र पर एक १०० W प्रकाश स्रोत 25 सेमी प्लेस (चालू/बंद परीक्षण के शुरू/और डिस्क है और फर्श का सामना करना पड़ हुक करने के लिए सुनिश्चित करें ।
नोट: परीक्षण के दौरान कमरे में अन्य सभी ओवरहेड लाइट्स बंद कर दी जानी चाहिए. १०० W प्रकाश के बगल में एक अल्ट्रासोनिक शोर निर्माता के अलावा त्रिशंकु की सिफारिश की है । यह चालू/बंद प्रत्येक परीक्षण के प्रारंभ/
3. बार्ंस भूलभुलैया परीक्षण: प्रक्रिया
नोट: सुनिश्चित करें कि सभी भूलभुलैया घटक पानी और ७०% इथेनॉल समाधान से पहले और प्रत्येक परीक्षण के बाद साफ कर रहे हैं, समय के लिए पूरी तरह से परीक्षण शुरू होने से पहले सूखे की अनुमति । सुनिश्चित करें कि सफाई की आपूर्ति के रूप में अच्छी तरह के रूप में परीक्षण के लिए टाइमर तैयार है ।
- घर सभी चूहों समूहों में एक विश्वसनीय पहचान विधि का उपयोग करते हुए । जब वे सक्रिय रूप से भूलभुलैया पर नहीं चल रहे हैं परीक्षण कमरे के बाहर चूहों रखें. यह सुनिश्चित करने के लिए वे समय से पहले अल्ट्रासोनिक noisemaker के अधीन नहीं हैं ।
- धीरे उठा द्वारा चूहों संभाल और पूंछ के आधार से उंहें पकड़े हुए, एक हाथ पर रखा पंजे के साथ ।
- प्रशिक्षण के लिए, चूहों दैनिक भूलभुलैया पर चलाने के लिए एक पंक्ति में 7 दिनों के लिए प्रति दिन एक बार सीखने का आकलन/
नोट: एक लंबी अवधि के परीक्षण के लिए एक बाद की तारीख पर किया जा सकता है स्मृति का आकलन/ वर्तमान प्रोटोकॉल किशोर चूहों जन्मोत्तर दिन ३२ में शुरू और एक लंबी अवधि के परीक्षण वयस्कों में उंर के 4 महीने में प्रदर्शन किया गया प्रशिक्षित । - बेतरतीब ढंग से एक लक्ष्य छेद करने के लिए प्रत्येक माउस को असाइन करने के लिए परीक्षण अवधि भर का उपयोग करें । छेद भूलभुलैया के तल पर या भूलभुलैया परिधि के बाहर, जहां वे भूलभुलैया में माउस को दिखाई नहीं कर रहे है पर 1-20 लेबल किया जा सकता है ।
- असाइन किए गए होल डिस्क को छोटे ब्लैक बॉक्स (23 x 11 सेमी) से बदलें । दृढ़ता से यह बार्ंस रबड़ निकटतम हुक से जुड़े बैंड का उपयोग कर भूलभुलैया के लिए देते हैं ।
नोट: लक्ष्य बॉक्स पर्याप्त उथले इतना है कि माउस को आसानी से इसे में कदम कर सकते है या यह सुनिश्चित करें कि माउस में नीचे कूदने की नहीं है के लिए एक कदम शामिल है । - परीक्षण शुरू होता है जब तक 30 सेकंड के लिए acclimate के लिए एक कप के नीचे भूलभुलैया के केंद्र पर माउस प्लेस । वीडियो रिकॉर्डिंग शुरू करते हैं ।
- प्रकाश और अल्ट्रासोनिक noisemaker चालू करें । एक स्ट्रिंग तंत्र के माध्यम से कप लिफ्ट पशु के प्रारंभिक शीर्षक पूर्वाग्रह से बचने के लिए । एक टाइमर शुरू और निरीक्षण करने के लिए पर्दे के पीछे बैठते हैं ।
- माउस के बाद लक्ष्य छेद में प्रवेश करती है, उसी अपारदर्शी परीक्षण या एक बांधने की मशीन के शुरू में इस्तेमाल किया कप के साथ छेद कवर और बंद अल्ट्रासोनिक noisemaker । अगर 5 मिनट बीत जाने के बाद भी माउस ने लक्ष्य दर्ज नहीं किया है तो माउस को टारगेट होल में खेत ।
- सुनिश्चित करें कि माउस छेद में प्रवेश करती है । जब माउस लक्ष्य बॉक्स के अंदर है, छेद को कवर और बंद noisemaker बारी । माउस को लक्ष्य बॉक्स में 1 मिनट के लिए परेशान रहने की अनुमति दें ।
- हालांकि लक्ष्य छेद लगातार प्रशिक्षण अवधि के दौरान प्रत्येक माउस के लिए रहेगा, एक यादृच्छिक क्रम में प्रत्येक दिन चूहों को चलाने के लिए सुनिश्चित करें कि वे किसी भी संकेत का पालन नहीं कर रहे है/
4. बार्ंस भूलभुलैया परीक्षण: डेटा विश्लेषण
- बार्ंस भूलभुलैया परीक्षणों के दौरान, रिकॉर्ड निंनलिखित समय डेटा: कुल भूलभुलैया पर खर्च समय, लक्ष्य को खोजने के लिए समय है, और समय लक्ष्य छेद में प्रवेश करने के लिए अगर लक्ष्य दर्ज किया है ।
- लक्ष्य पाया जाता है पहले और बाद में त्रुटियों की संख्या (गलत छेद का पता लगाया की संख्या) का निर्धारण करने के लिए माउस के समग्र आंदोलन को ट्रैक । इसके अलावा लक्ष्य छेद से पहले छेद का पता लगाने के लिए दूरी का रिकॉर्ड (दूरी छेद की संख्या में मापा जाता है दूर), साथ में किसी भी उल्लेखनीय सौंदर्य व्यवहार के साथ ।
- प्रत्येक परीक्षण के दौरान भूलभुलैया के एक चित्र के साथ कागज के एक टुकड़े पर प्रत्येक जानवर के आंदोलनों को ट्रैक और खोज रणनीतियों का विश्लेषण करने के लिए इसका इस्तेमाल करते हैं, साथ ही लक्ष्य के विपरीत चक्र में पता लगाया गया है कि छेद की संख्या का निर्धारण. रास्तों की पुष्टि के लिए वीडियो विश्लेषण का प्रयोग करें ।
५. युवती-इन-कष्ट परीक्षण: संयम कक्ष का निर्माण
- पूंछ के आधार से नाक की नोक करने के लिए मादा माउस की लंबाई के ¾ के बराबर एक लंबाई के लिए एक स्पष्ट सिलेंडर में कटौती । सुनिश्चित करें कि सिलेंडर के आयाम इस तरह के है कि अंदर रखा माउस के आसपास नहीं बदल सकते हैं ।
नोट: हम 1 महीने पुराने चूहों और 4 महीने पुराने चूहों के लिए एक 8 सेमी लंबी ट्यूब के लिए एक 4 सेमी लंबी ट्यूब बनाने के लिए नीचे एक ५० मिलीलीटर शंकु ट्यूब के शंकु अंत में कटौती । - टोपी सिलेंडर के दोनों सिरों ऐसी है कि एक टोपियां हटाया जा सकता है और reattacheded । पंच 3-4 छेद, प्रत्येक टोपी में लगभग ०.५ सेमी प्रत्येक । सुनिश्चित करें कि छेद काफी बड़े है नाक छू चूहों और12श्वास के बीच की अनुमति है ।
नोट: वैकल्पिक रूप से, रक्त संग्रह के दौरान माउस संयम के लिए एक डिवाइस इस्तेमाल किया जा सकता है ।
6. युवती-in-संकट परीक्षण: अखाड़ा की तैयारी
- सुनिश्चित करें कि arena 19 सेमी दीवारों के साथ ३८ x ३८ सेमी की एक अपारदर्शी topless प्लास्टिक स्क्वायर बॉक्स है । यह लगभग २.५ सेमी की ऊंचाई को मकई बिस्तर के साथ समान रूप से भरें ।
नोट: corncob बिस्तर खुदाई की घटनाओं का पता लगाने के लिए आसान बनाता है । - अखाड़ा की पूरी तरह से देखने में है कि इस क्षेत्र पर एक वीडियो कैमरा निलंबित ।
७. युवती-इन-कष्ट परीक्षण: खोजपूर्ण व्यवहार उपाय
- मैदान के केंद्र में बंद और खाली तनाव चैंबर प्लेस ।
- निलंबित कैमरे के साथ रिकॉर्डिंग शुरू करो ।
- एक पुरुष माउस का चयन करें । यदि चूहों को पहचान के लिए चिह्नित किया जाए तो इस पुरुष की पहचान पर ध्यान दें; यदि नहीं, तो इस माउस को चिह्नित करें ताकि पिंजरे में लौटने के बाद उसे प्रतिष्ठित किया जा सके ।
- धीरे क्षेत्र में निचले बाएं कोने में एक कप के नीचे पुरुष माउस जगह है । 30 सेकंड के बाद, एक स्ट्रिंग तंत्र के माध्यम से कप निकालें ।
- 10 मिनट के लिए पता लगाने के लिए माउस की अनुमति दें, रिकॉर्डिंग के दौरान देखने के अपने क्षेत्र से बाहर रहने के लिए देखभाल. 10 मिनट के अंत में, क्षेत्र से माउस को हटाने और यह अगले 5 मिनट12के लिए एक पकड़ पिंजरे में लौटने ।
- रिकॉर्डिंग रोकें और एक उपयुक्त पहचानकर्ता के साथ वीडियो फ़ाइल सहेजें ।
8. युवती-in-संकट परीक्षण: सामाजिक जवाबदेही उपाय
- खोजपूर्ण व्यवहार माप में के रूप में एक ही क्षेत्र और रिकॉर्डिंग सेटअप का उपयोग करें ।
- एक महिला माउस का चयन करें । यदि चूहे पहचान के लिए चिह्नित कर रहे हैं, इस महिला की पहचान ध्यान दें; यदि नहीं, तो इस माउस को चिह्नित करें ताकि यह पिंजरे में वापस आने के बाद प्रतिष्ठित किया जा सकता है ।
नोट: एक littermate, पिंजरे दोस्त, या उपंयास माउस, अनुसंधान प्रश्न के आधार पर इस्तेमाल किया जा सकता है । यदि एकाधिक परीक्षण किया जा रहा है, सभी परीक्षणों में संबंध के प्रकार बनाए रखें । - पूंछ के आधार से धीरे महिला माउस पकड़ो, या गर्दन संयम से, यदि आवश्यक हो, और यह संयम कक्ष में कम है । इसके पीछे खुले छोर को बंद कर दें और यह सुनिश्चित करें कि वह चारों ओर मुड़ने में असमर्थ है ।
नोट: काटने के लिए प्रतिरोधी दस्ताने पहने पर विचार करें, के रूप में महिला माउस संयम कक्ष में प्रवेश करने के लिए प्रतिरोधी होगा । - निलंबित कैमरे के साथ रिकॉर्डिंग शुरू करो ।
- सहानुभूति क्षेत्र के केंद्र में अंदर फंस महिला माउस के साथ संयम कक्ष प्लेस और 10 मिनट के लिए acclimate के लिए महिला की अनुमति देते हैं । ध्यान रखने के लिए महिला के क्षेत्र से बाहर रहने के लिए देखते हैं ।
- महिला माउस 5 मिनट के लिए संयम कक्ष में किया गया है के बाद, चिह्नित पुरुष माउस सहानुभूति क्षेत्र में वापस जगह के रूप में एक ही प्रक्रिया का उपयोग कर पहले । पुरुष माउस एक अतिरिक्त 5 मिनट की अनुमति के लिए क्षेत्र का पता लगाने, फिर से देखभाल करने के लिए चूहों के देखने के क्षेत्र से बाहर रहते हैं ।
- रिकॉर्डिंग रोकें और एक उपयुक्त पहचानकर्ता के साथ वीडियो फ़ाइल सहेजें ।
- 5 मिनट के अंत में, क्षेत्र से दोनों चूहों को हटाने और उन्हें अपने पिंजरों में जगह है । मकई बिस्तर बदलें और दोनों क्षेत्र और ७०% इथेनॉल12के साथ तनाव कक्ष साफ ।
9. युवती-में संकट परीक्षण: डेटा विश्लेषण
- ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर इस्तेमाल किया जा सकता है, लेकिन वीडियो भी मैंयुअल रूप से विश्लेषण किया जा सकता है । एक बार वीडियो फ़ाइल कंप्यूटर पर दिखाई देता है, स्क्रीन पर एक पारदर्शी शीट ओवरले और एक मार्कर का उपयोग कर क्षेत्र के वर्ग की रूपरेखा । अखाड़ा वर्ग को नौ बराबर के डिब्बों में बांटें ।
- प्रारंभिक खोजपूर्ण माप के पहले 5 मिनट के लिए वीडियो डेटा की समीक्षा करें । रिकॉर्ड डिब्बों की संख्या (हरकत गतिविधि/खोजपूर्ण व्यवहार), क्षेत्र के केंद्र वर्ग में बिताए समय (खुला क्षेत्र से बचने), खुदाई और दूल्हे प्रकरणों की संख्या, और समय की संख्या माउस खाली केंद्र संयम को छुआ कक्ष.
नोट: स्कोरिंग पुरुष के 10 मिनट के प्रारंभिक अंवेषण के दूसरे 5 मिनट के लिए नहीं किया है, और न ही 10 मिनट के लिए महिला पुरुष के अभाव में केंद्रीय कक्ष में फंस गया है । - सामाजिक जवाबदेही उपाय के 5 मिनट के लिए वीडियो डेटा की समीक्षा के बाद तुरंत पुरुष फंस महिला के साथ क्षेत्र में पुनः शुरू है । प्रारंभिक खोजपूर्ण उपाय के लिए के रूप में एक ही डेटा रिकॉर्ड है, लेकिन इसके अतिरिक्त बार पुरुष माउस फंस महिला माउस के साथ नाक छुआ की संख्या रिकॉर्ड ।
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Representative Results
बार्ंस भूलभुलैया
वर्णन कैसे बार्ंस भूलभुलैया इस्तेमाल किया जा सकता है, हम जांच की है कि एक जल्दी इथेनॉल जोखिम माउस विकास के पाठ्यक्रम पर सीखने में एक अंतर का कारण बना । C57Bl6/जे चूहों या तो एक २.५ g/kg इथेनॉल समाधान (n = 8) या खारा (n = 6) के साथ दो घंटे, के अलावा जन्मोत्तर दिन 6 पर इंजेक्शन थे । हम किशोरावस्था (P30) के दौरान बार्ंस भूलभुलैया पर जानवरों को प्रशिक्षित किया है, तो वयस्कता में एक लंबी अवधि के परीक्षण प्रदर्शन (4 महीने) । हमारे एकत्र डेटा कई मुख्य श्रेणियों में विभाजित किया जा सकता है: 1) समय और त्रुटि दर, 2) लक्ष्य प्रविष्टि द्वारा सटीकता, और 3) अंवेषण पथ मानचित्रण ।
समय और त्रुटि दर द्वारा सटीकता:
समय माप कई महत्वपूर्ण पहलुओं को शामिल: विलंबता पहले छेद तक पहुंचने के लिए (समय यह माउस के लिए लेता है परीक्षण शुरू करने के बाद किसी भी पहले छेद की जांच) अगर माउस सीख रहा है कि यह जाना माना जाता है बच छेद मिल ( चित्र 1a) । विलंबता लक्ष्य छेद को खोजने के लिए (लक्ष्य छेद के विमान में नाक के एक प्रारंभिक कम से रन बनाए) को सही छेद (आंकड़ा 1b) मिल में सक्षम है । प्रत्येक सत्र के साथ, प्रशिक्षण सत्र चलाने के लिए समय कम होना चाहिए, यह दर्शाता है कि जानवरों भूलभुलैया सीख रहे हैं ।
गलत छेद जांच की संख्या (त्रुटियां) माउस सही छेद का पता लगाने से पहले प्रदर्शन करता है (चित्रा 1C) इंगित करता है कि पशु लक्ष्य भागने छेद करने के लिए अपेक्षाकृत सीधे जाने के लिए सक्षम है । एक माउस परीक्षण के पाठ्यक्रम पर एक गलत छेद की पड़ताल के अवसरों की कुल संख्या हरकत गतिविधि और खोजपूर्ण व्यवहार का एक मामूली उपाय देता है । (चित्रा 1 डी) । सभी चूहों सफलतापूर्वक किशोरावस्था के दौरान एक 7 दिन परीक्षण अवधि पर बार्ंस भूलभुलैया पर प्रशिक्षित किया गया (जन्मोत्तर दिन 32-39 पर दैनिक सत्रों द्वारा यहां का प्रतिनिधित्व), त्रुटि दर और समय में कमी से संकेत मिल लक्ष्य छेद । प्रशिक्षण अवधि के दौरान इथेनॉल और नियंत्रण पशुओं के बीच सीखने में कोई सांख्यिकीय अंतर नहीं था ।
लक्ष्य प्रवेश दर:
विलंबता वास्तव में लक्ष्य छेद में प्रवेश करने के लिए आमतौर पर सफल भूलभुलैया पूरा करने के लिए मानदंड के रूप में प्रयोग किया जाता है, लेकिन संभावना परीक्षण के अंय पहलुओं के रूप में ज्यादा जानकारी के रूप में नहीं देते । लक्ष्य में प्रवेश भी एक 0 या 1 के रूप में बनाए जा सकते हैं । यदि माउस 5 मिनट बीतना से पहले लक्ष्य में प्रवेश करती है, परीक्षण सफल माना जाता है, लेकिन अगर माउस लक्ष्य दर्ज नहीं करता है, एक बांधने की मशीन या किताब लक्ष्य में पशु खेत तो यह चैंबर की सुरक्षा के अनुभव के नीचे इस्तेमाल किया जाना चाहिए । पहले प्रशिक्षण के दिनों पर, यह लक्ष्य और जानवरों है कि भूलभुलैया पर पूरा 5 मिनट ले में प्रवेश की कम दरों को देखने की उंमीद की जानी चाहिए । बाद के दिनों में, परीक्षण कम समय ले जाना चाहिए ।
लक्ष्य को खोजने के बाद कई त्रुटियाँ बनाना लक्ष्य बॉक्स में प्रवेश करने के लिए कम प्रेरणा इंगित करता है और भी आम तौर पर चूहों (ऊंचा मंच, उज्ज्वल प्रकाश, खुले मैदान, अल्ट्रासोनिक शोर) के लिए aversive है कि एक स्थिति के साथ असामान्य आराम का पता लगा सकते हैं. लक्ष्य को खोजने और एक परीक्षण के दौरान होल अन्वेषणों की कुल संख्या से पहले किए गए त्रुटियों के बीच एक बड़ा अंतर गरीब प्रेरणा लक्ष्य एस्केप चैंबर (चित्रा 2a) में प्रवेश करने के लिए इंगित करता है । यदि चूहों खोज के बाद लक्ष्य भागने छेद में प्रवेश नहीं कर रहे हैं, चमकदार रोशनी या शोर हल्के हानिकारक उत्तेजनाओं के रूप में परीक्षण स्थिति के लिए जोड़ा जा सकता है ।
हमारे प्रयोग में, एक अल्ट्रासोनिक शोर उत्सर्जक परीक्षण दिन 5 पर भूलभुलैया के ऊपर जोड़ा गया था लक्ष्य में प्रवेश करने के लिए अतिरिक्त प्रेरणा का परिचय । अल्ट्रासोनिक शोर की शुरूआत करने से पहले, कोई खारा इलाज चूहों कभी लक्ष्य में प्रवेश किया था, लेकिन प्रवेश द्वार शोर की शुरूआत के बाद नुकीला । काफी अधिक चूहों (खारा और संयुक्त इथेनॉल) 6 परीक्षण पर लक्ष्य दर्ज 4 (टीपरीक्षण, पी = ०.००१४) (चित्रा 2 बी) की तुलना में ।
पथ मैपिंग:
माउस के रास्ते मानचित्रण जानकारी प्रतिधारण और सीखने की रणनीतियों, के रूप में अच्छी तरह से आकलन में मदद कर सकते हैं । पहले का पता लगाया छेद और लक्ष्य छेद के बीच की दूरी लक्ष्य स्थान के लिए स्मृति का एक अच्छा संकेतक है, इस पटरियों के रूप में जहां माउस पहले चला जाता है और कैसे बंद वे लक्ष्य (3ए) के लिए कर रहे हैं । इस उपाय के प्रशिक्षण की शुरुआत में व्यापक रूप से भिंन होने की उंमीद है, लेकिन पहले छेद का दौरा किया लक्ष्य के करीब जाना चाहिए के रूप में चूहों लक्ष्य स्थान जानें ।
हालांकि सीखने में कोई सांख्यिकीय अंतर प्रशिक्षण अवधि के दौरान इथेनॉल और नियंत्रण जानवरों के बीच पाया गया था, जब इन चूहों को फिर से एक लंबी अवधि के परीक्षण (4 महीने में) का उपयोग कर वयस्कों के रूप में चला रहे थे, इथेनॉल इंजेक्शन पशुओं एक कठिन समय था याद है, जहां लक्ष्य छेद (आंकड़ा 3 बी) स्थित था12। स्मृति प्रतिधारण में यह अंतर प्रारंभिक बार्ंस भूलभुलैया प्रशिक्षण में पाया नहीं गया था, तो एक बाद के समय में फिर से भूलभुलैया का उपयोग कर हमें सीखने में सूक्ष्म मतभेदों को लेने के लिए/स्मृति, जैसे एक ही विकास इथेनॉल नशे की घटना के साथ पाया उन । बार्ंस भूलभुलैया सतह के एक प्रतिनिधि आरेख शोधकर्ताओं पथ माउस लिया नक्शा करने की अनुमति देता है, त्रुटियों की संख्या और पहले छेद का दौरा किया (आंकड़ा 3सी) का एक रिकॉर्ड भी शामिल है ।
समय विपरीत वृत्त का चक्र में बिताया समय एक माउस दूसरों पर भूलभुलैया के एक खंड की पड़ताल की राशि से मेल खाती है, विशेष रूप से लक्ष्य के विपरीत एक । यह संभव है के लिए एक शोधकर्ता प्राप्त करने और अंय सभी उपायों की गणना के रूप में माउस भूलभुलैया चल रहा है, लेकिन इस उपाय के बाद एक समय में विश्लेषण की आवश्यकता है । एक चूहा जो समय कम होना चाहिए सीख रहा है विपरीत वृत्त का चक्र में छेद की खोज बिताया । दीर्घकालिक वयस्क परीक्षण पर, इथेनॉल का इलाज चूहों लक्ष्य से विपरीत वृत्त का चक्र में काफी अधिक छेद का पता लगाया, एक विफलता का संकेत सही सामान्य स्थानिक स्थान (पी = ०.०३) (चित्रा 4a) याद करने के लिए.
यह करने से पहले और वास्तव में लक्ष्य खोजने के बाद की गई त्रुटियों में इस मानचित्रण माप को तोड़ने के लिए महत्वपूर्ण है । लक्ष्य खोजने से पहले त्रुटियों की संख्या प्रकट कर सकते है अगर सीखने हो रही है, लेकिन यह भी हमें माउस की खोज रणनीति के बारे में बता सकते हैं । बेतरतीब ढंग से छेद का दौरा करने के बजाय, माउस जल्दी से लक्ष्य को खोजने के लिए एक रणनीति अपनाने हो सकता है । लंबी अवधि के परीक्षण के दौरान, इथेनॉल का इलाज पशुओं के सभी एक अंगूठी में एक अनुक्रमिक छेद-छेद खोज करते थे आकार फैशन जब तक छेद पाया गया था, जबकि काफी कम खारा इलाज चूहों इस तकनीक (पी = ०.००४) कार्यरत (चित्रा 4B और 4d) । वैकल्पिक रूप से, चूहों भूलभुलैया की एक सामान्य दिशा (चित्रा 4c) लक्ष्य कर सकते हैं, जो इंगित करता है कि स्थानिक सीखने होने वाली है और पशु की संभावना लक्ष्य छेद के आसपास के लिए सिर करने के लिए बाहरी संकेतों का उपयोग कर रहा है.
युवती-इन-कष्ट
युवती में संकट arena का निर्माण किया गया था और C57Bl6/जे चूहों के खोजपूर्ण और सामाजिक व्यवहार का परीक्षण करने के लिए दोनों 1m (n = 15) और 4M (n = 12) उंर के । एक सहानुभूति क्षेत्र का उपयोग किया गया था जहां पुरुष माउस एक कोने में रखा (आंकड़ा 5ए) । माउस खोजपूर्ण व्यवहार उपंयास arena में 5 मिनट में पार चौकों की संख्या के रूप में quantified है । हमारे परिणामों से पता चलता है कि पुराने चूहों (4 महीने) छोटे चूहों से अधिक चौकों (1 महीने) (p < ०.०००१) (figure 5B) को पार करते हैं ।
अगले, फंस महिला एक सिलेंडर में अखाड़ा (चित्रा 5) के बीच में रखा गया था । एक बार महिला कक्ष में फंस गया है, खोजपूर्ण व्यवहार फिर से पार वर्गों की संख्या के रूप में quantified जा सकता है । फँसे स्त्री प्रभावों की उपस्थिति पुरुष खोजपूर्ण व्यवहार. उम्र की परवाह किए बिना, पुरुष चूहे एक फँसे हुए मादा की उपस्थिति में कम अन्वेषण करते हैं. किशोर नर कम क्षेत्र का पता लगाया (के रूप में जब अकेले (1 महीने में एक फंस महिला माउस की उपस्थिति में पार चौकों की संख्या से मापा: टीपरीक्षण, पी = ०.००१; मतलब पुरुष अकेले ४६ ± ४.३४ चौकों बनाम महिला २६.१३ ± ३.४२ चौकों के साथ) । यह अंतर भी वयस्कों में स्पष्ट था (4 महीने: टीपरीक्षण, पी < ०.०००००१; मतलब पुरुष अकेले १५१.५ ± ५.३१ चौकों बनाम महिला १०३.०८ ± 0.3.59 चौकों के साथ) (चित्रा 5B) ।
इसके अलावा, 5 मिनट की अवधि में मध्य वर्ग में एक माउस खर्च समय की मात्रा भी मूल्यांकन किया जाना चाहिए । केंद्र वर्ग में बिताए समय की उपस्थिति और सामाजिक हित के एक उपाय के रूप में महिला की अनुपस्थिति में तुलना की जानी चाहिए । हमारे परिणामों से पता चलता है कि नर फंस महिला की उपस्थिति में केंद्र वर्ग में अधिक समय बिताते हैं । किशोर नर अधिक समय बिताया एक फंस महिला माउस की उपस्थिति में क्षेत्र के केंद्र की खोज से जब अकेले (1 महीने में: p = ०.०५; मतलब पुरुष अकेले १३.१४ ± २.७९ एस महिला ३३.४२ ± ९.३२ एस के साथ बनाम) । यह अंतर भी वयस्कों में देखा गया था (4 महीने: p = ०.००१; मतलब पुरुष अकेले १४.८० ± १.८९ एस महिला ५२.८७ ± ८.९ एस के साथ बनाम) (चित्रा 5C) ।
इसके अलावा, शोधकर्ताओं को भी क्षेत्र में खुदाई की घटनाओं की संख्या है, जो फंस महिला के प्रति चिंता या सामाजिक व्यवहार का एक उपाय हो सकता है यों तो होना चाहिए । यह उपाय काफी अलग था 1 महीने के लिए महिला की उपस्थिति में (1m) चूहों लेकिन नहीं 4 महीने (4M) चूहों । किशोर पुरुषों की तुलना में एक फंस महिला माउस की उपस्थिति में क्षेत्र में अपने समय के दौरान अधिक समय खुदाई खर्च जब अकेले (1 महीने में: p = ०.०२७; मतलब पुरुष अकेले ०.४ ± ०.२७ बार महिला ३.२ ± १.०९ बार के साथ बनाम) । यह अंतर वयस्कों में नहीं देखा गया था (4 महीने: p = ०.६५; मतलब पुरुष अकेले १.३३ ± ०.५४ बार महिला 1 ± ०.४९ बार के साथ बनाम) (चित्रा 5d) ।
कई बार एक पुरुष संयम कक्ष को छूता हुआ मादा से युक्त होता है और बार की संख्या में जानवरों को हवा के छेद के माध्यम से नाक को छुआ जाता है जो कि सामाजिक व्यवहार के उपाय हैं । हमारे परिणामों में, नर चूहों ट्यूब को छुआ काफी अधिक बार के रूप में वयस्कों (4 महीने) के रूप में किशोर (1 महीने) (पी = ०.००००१; मतलब 1 महीने ४.७३ ± ०.९५ बार बनाम 4 महीने १५.९२ ± १.६४ बार) (चित्रा 5E) । वयस्क पुरुषों ने भी अधिक फँसे महिला संपर्क की घटनाएँ शुरू कीं. नर चूहों हवा छेद के माध्यम से फंस महिला के साथ नाक छुआ काफी अधिक बार वयस्कों के रूप में (4 महीने) के रूप में (1 महीने) (पी = ०.००२; मतलब 1 महीने ३.९३ ± 1 बार बनाम 4 महीने ८.६७ ±. ९४ बार) । (चित्रा 5F).
अल्ट्रासोनिक रिकॉर्डिंग उपकरण अल्ट्रासोनिक vocalizations ऊपर 20 kHz महिला चूहों द्वारा के लिए सुनने के लिए उपयोग किया गया था, और यह भी एक "स्नातक में संकट" उलटा प्रतिमान में फंस पुरुष चूहों द्वारा अल्ट्रासोनिक vocalizations के लिए सुनने के लिए इस्तेमाल किया गया था । कोई vocalizations या तो स्थिति है, जो उंमीद की जाती है में पता लगाया गया है, के बाद से पिछले अनुसंधान कोई अल्ट्रासोनिक vocalizations चूहों aversive उत्तेजनाओं जोखिम के दौरान पाया (जैसे शारीरिक संयम या बिजली के झटके के रूप में)11।
चित्रा 1 : बार्ंस भूलभुलैया सटीकता प्रतिनिधि समय और त्रुटि दर से परिणाम । चूहों या तो एक २.५ ग्राम/किलो इथेनॉल समाधान या खारा के साथ दो बार 2 घंटे के अलावा जन्मोत्तर 6 दिन के साथ इंजेक्शन थे । हम जानवरों को प्रशिक्षित एक बार किशोरावस्था के दौरान 7 दिनों के लिए दैनिक, तो एक एकल दीर्घकालिक परीक्षण वयस्कता में11प्रदर्शन किया । (क) विलंबता पहले छेद तक पहुंचने के लिए (समय यह माउस के लिए लेता है परीक्षण शुरू करने के बाद किसी भी पहले छेद की जांच) से पता चलता है अगर माउस को भागने छेद मिल सीख रहा है । (ख) विलंबता लक्ष्य छेद को खोजने के लिए (एक प्रारंभिक लक्ष्य छेद के विमान में नाक के कम से रन बनाए) सही छेद खोजने के लिए सक्षम है । (ग) गलत छेद जांच की संख्या (त्रुटियां) सही छेद का पता लगाने से पहले माउस बनाता है इंगित करता है अगर पशु को अपेक्षाकृत सीधे लक्ष्य भागने छेद करने के लिए जाने में सक्षम है । (D) परीक्षण के दौरान किसी माउस द्वारा गलत छिद्र की पड़ताल करने के समय की कुल संख्या हरकत गतिविधि और खोजपूर्ण व्यवहार का एक प्रारंभिक माप देती है. त्रुटि पट्टियां SEM11का प्रतिनिधित्व करती हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 2 : सफल बार्ंस भूलभुलैया पूरा । वास्तव में लक्ष्य छेद में प्रवेश करने के लिए विलंबता आमतौर पर सफल भूलभुलैया पूरा करने के लिए मानदंड के रूप में इस्तेमाल किया जाता है, लेकिन जानवरों की खोज के बाद लक्ष्य छेद में प्रवेश नहीं कर सकते । (a) लक्ष्य खोजने से पहले की गई त्रुटियों के बीच एक बड़ा अंतर और एक परीक्षण के दौरान होल अन्वेषणों की कुल संख्या, लक्ष्य एस्केप चैम्बर में प्रवेश करने के लिए गरीब प्रेरणा इंगित करता है । हमारे प्रयोग में, एक अल्ट्रासोनिक शोर परीक्षण 5 पर जोड़ा गया था चूहों लक्ष्य दर्ज करने के लिए प्रेरित करने के लिए । (ख) काफी अधिक चूहों (खारा और संयुक्त इथेनॉल) परीक्षण करने के लिए 6 परीक्षण पर लक्ष्य दर्ज 4 (टीपरीक्षण, पी = ०.००१४). कोई इथेनॉल चूहों 7 दिन से लक्ष्य को खोजने के बाद तलाश रखा । त्रुटि पट्टियों का प्रतिनिधित्व SEM. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए ।
चित्रा 3 : बार्ंस भूलभुलैया प्रेरणा । मैपिंग माउस पथ प्रेरणा के बारे में जानकारी प्रदान कर सकते हैं । (क) पहले पता लगाया छेद और लक्ष्य छेद के बीच की दूरी लक्ष्य स्थान के लिए स्मृति का एक अच्छा संकेतक है, इस उपाय के रूप में पटरियों जहां माउस पहले चला जाता है और कितनी दूर वे लक्ष्य से दूर हैं । (ख) हालांकि सीखने में कोई सांख्यिकीय अंतर प्रशिक्षण अवधि के दौरान इथेनॉल और नियंत्रण जानवरों के बीच पाया गया था, जब इन चूहों को फिर से एक दीर्घकालिक परीक्षण (4 महीने में) का उपयोग कर वयस्कों के रूप में चला रहे थे, इथेनॉल इंजेक्शन पशु एक कठिन समय याद है, जहां लक्ष्य छेद स्थित था । (ग) बार्ंस भूलभुलैया सतह के एक प्रतिनिधि आरेख शोधकर्ताओं पथ माउस लिया नक्शा करने की अनुमति देता है, त्रुटियों की संख्या और पहले छेद का एक रिकार्ड का दौरा भी शामिल है । इस माउस को सीधे लक्ष्य को 16 सेकंड के भीतर चला गया, लेकिन यह 5 मिनट के पाठ्यक्रम पर प्रवेश किया और बाद में ४१ छेद का पता लगाया कभी नहीं । यह व्यवहार लक्ष्य दर्ज करने के लिए कम प्रेरणा इंगित करता है । त्रुटि पट्टियों का प्रतिनिधित्व SEM. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए ।
चित्र 4 : बार्ंस भूलभुलैया खोज रणनीति । मानचित्रण माउस पथ खोज रणनीतियों को उजागर कर सकते है और सीखने की रणनीति के बारे में जानकारी प्रदान करते हैं । (क) दीर्घकालिक वयस्क परीक्षण पर, इथेनॉल का इलाज चूहों लक्ष्य से विपरीत वृत्त का चक्र में काफी अधिक छेद का पता लगाया, एक विफलता का संकेत सही सामान्य स्थानिक स्थान याद (* पी = ०.०३). (ख) लंबी अवधि के परीक्षण के दौरान, इथेनॉल का इलाज जानवरों के सभी एक अनुक्रमिक छेद करने वाली एक अंगूठी के आकार का फैशन में छेद खोज करते थे जब तक छेद पाया गया था, काफी कम खारा इलाज चूहों इस तकनीक (* * p = ०.००४) कार्यरत (ख , घ). परीक्षण दिवस 6 परिणाम एक (ग) नमकीन इलाज माउस और (घ) इथेनॉल इलाज माउस के लिए चित्र हैं । चूहों भूलभुलैया (सी) के एक सामान्य दिशा लक्ष्य कर सकते हैं, जो इंगित करता है कि स्थानिक सीखने होने वाली है और पशु की संभावना लक्ष्य छेद के आसपास के लिए सिर करने के लिए बाहरी संकेतों का उपयोग कर रहा है. आमतौर पर, इस रणनीति का उपयोग चूहों के लिए चक्र स्कोर बहुत बेहतर हैं. (घ) अनुक्रमिक छेद से छेद खोज एक अंगूठी रणनीति है, जहां माउस भूलभुलैया के किसी भी किनारे करने के लिए चला जाता है और प्रत्येक छेद में लग रहा है लक्ष्य को खोजने के लिए है । चक्र स्कोर महान भिन्नता के साथ गरीब हैं जब चूहों अंगूठी रणनीति का उपयोग करें. त्रुटि पट्टियों का प्रतिनिधित्व SEM. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए ।
चित्रा 5: युवती-कष्ट में । (क) युवती-संकट के क्षेत्र में 9 चौकों में विभाजित है । पुरुष माउस एक कोने में रखा गया है और पुरुष व्यवहार मनाया जाता है । महिला माउस, एक सिलेंडर कंटेनर में फंस गया है, अखाड़ा के केंद्रीय वर्ग में रखा गया है । (ख) किशोरावस्था (1 महीने = 1m) और वयस्कता के बीच क्षेत्र में वृद्धि के भीतर खोजपूर्ण व्यवहार (4 महीने = 4M) । कुल मिलाकर, पुरुष चूहों एक फंस महिला की उपस्थिति में कम पता लगाया । इसके अलावा, जुवेनाइल चूहों ने फँसे मादा की मौजूदगी में वयस्क चूहों से कम खोजबीन की. (ग) सामाजिक जवाबदेही भी एक चूहा जहां फंस माउस आयोजित किया जाता है केंद्र वर्ग में खर्च करता है समय से मापा जा सकता है । किशोर और वयस्क दोनों पुरुषों ने फँसे हुए मादा की उपस्थिति में केंद्र वर्ग में अधिक समय बिताया. (घ) किशोर पुरुषों की तुलना में जब अकेले एक फंस महिला माउस की उपस्थिति में क्षेत्र में अपने समय के दौरान अधिक समय खुदाई बिताया । (ङ) पुरुष चूहों ट्यूब को छुआ के रूप में फंस महिला काफी अधिक बार किशोरों के रूप में वयस्कों की तुलना में । (च) वयस्क पुरुषों ने भी किशोरों की तुलना में अधिक फँसे महिला संपर्क घटनाओं को आरंभ किया. त्रुटि पट्टियां SEM (* * * p < ०.०००१, * * p ०.००१, * p ०.०५) का प्रतिनिधित्व करते हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
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Discussion
बार्ंस भूलभुलैया और युवती-में-संकट प्रयोगों सस्ती, जल्दी, और अपेक्षाकृत आसान तरीके से स्थानिक शिक्षा, हरकत गतिविधि, और चूहों में सामाजिक व्यवहार का मूल्यांकन कर रहे हैं । अंय लाभ प्रकट तनाव, दर्द, या पशु के लिए खाद्य प्रतिबंध के अभाव में शामिल हैं । सबसे सीखने/स्मृति मानदंड, बार्ंस भूलभुलैया का नुकसान की तरह पशुओं के लिए आवश्यक परीक्षणों की संख्या को जानने के लिए जहां लक्ष्य छेद स्थित है और दर्ज है ।
डेटा संग्रह:
डेटा लगातार जब दोनों मानदंड में है माउस गतिविधियों और व्यवहार देख इकट्ठा किया जाना चाहिए । बार्ंस भूलभुलैया के लिए, यह समय पहले छेद तक पहुंच जाता है रिकॉर्डिंग भी शामिल है, त्रुटियों की संख्या/गलत छेद यह पता लगाने, जिस समय पर यह लक्ष्य छेद तक पहुंचता है, और समय है जिस पर यह लक्ष्य छेद में प्रवेश करती है । इसके अलावा, शोधकर्ताओं को भूलभुलैया पर प्रत्येक माउस के रास्ते नक्शा चाहिए । डेटा एक ही समय है कि माउस भूलभुलैया चल रहा है पर बार्ंस भूलभुलैया के एक कागज के नक्शे का उपयोग कर ट्रैक किया जा सकता है, और समय और छेद संख्या वीडियो फुटेज का उपयोग कर पुष्टि की जा सकती है । जब जानवर ट्रैकिंग, यह संभावित अतिव्यापी छेद अन्वेषणों का ट्रैक रखने के लिए हर मिनट एक बार कलम रंग बदलने के लिए मददगार हो सकता है । कंप्यूटर-सहायता ट्रैकिंग सिस्टम सटीकता और विश्वसनीयता सुनिश्चित करने के लिए उपलब्ध हैं, जैसे idTracker, Ctrax, या tracktor, और कुछ स्वतंत्र या खुले स्रोत हैं ।
युवती के लिए-in-कष्ट परख, दर्ज डेटा कितने चौकों पुरुष में प्रवेश करती है शामिल होना चाहिए, पुरुष के लिए समय लेता है महिला तक पहुंचने के लिए, कितना समय पुरुष केंद्र वर्ग में खर्च करता है जब फंस महिला केवल खाली सिलेंडर की तुलना में मौजूद है , कितने संपर्क घटनाओं वहां सिलेंडर के साथ कर रहे हैं, समय की संख्या जानवरों के चैंबर के माध्यम से नाक छुआ, और कितनी बार घटनाओं खुदाई समग्र और केंद्र वर्ग में हुई ।
व्यवहार परीक्षण में स्थिरांक:
सभी व्यवहार परीक्षण के साथ के रूप में, यह महत्वपूर्ण है कि स्थितियों के बीच और पशु परीक्षण के भीतर रखा जाता है सुनिश्चित करने के लिए कि पर्यावरण चर अध्ययन के परिणाम नहीं मिला । प्रयोगात्मक वातावरण में दृश्य, श्रवण, या घ्राण उत्तेजनाएं चूहों में व्यवहार परिवर्तन का कारण बन सकती हैं, चाहे वह इरादा हो या नहीं13. इस तरह, देखभाल के लिए चूहों को विचलित बाहरी उत्तेजनाओं14से ढाल लिया जाना चाहिए । दोनों युवती के लिए इस्तेमाल क्षेत्र-संकट परिदृश्य में और बार्ंस भूलभुलैया पानी के साथ प्रत्येक परीक्षण के बाद साफ किया जाना चाहिए और ७०% इथेनॉल के साथ प्रक्षालित करने के लिए सुनिश्चित करें कि पिछले चूहों के कोई सुस्त संकेतक एक बाद में परीक्षण प्रभाव । इसके अलावा, बिस्तर प्रत्येक युवती-में संकट परख के बाद बदला जाना चाहिए । प्रयोगकर्ता को डेटा की समीक्षा करने और सटीक विश्लेषण सुनिश्चित करने की अनुमति देने के लिए डेटा संग्रहण हमेशा वीडियो पर रिकॉर्ड किया जाना चाहिए. यह शोधकर्ता के लिए एक चुनौती के लिए एक पर्दे के पीछे छिपा हुआ है या अंयथा दृष्टि से बाहर रहते हैं, जबकि डेटा इकट्ठा कर सकते हैं, लेकिन इस के लिए एक निरंतर, व्याकुलता से मुक्त सेटिंग को बनाए रखने के चूहों के लिए महत्वपूर्ण है ।
बार्ंस भूलभुलैया प्रतिमान डिजाइन और संशोधन:
वहां कई बार्ंस भूलभुलैया के लिए उपयोग में प्रकाशित मानदंड हैं । बार्ंस भूलभुलैया प्रशिक्षण प्रोटोकॉल आमतौर पर 7-15 दिन से लेकर, लेकिन प्रोटोकॉल छोटा किया जा सकता है । कभी-कभार प्रशिक्षण सत्रों की संख्या को कठिन बनाने के लिए सीखने के लिए काम मुश्किल अंतर है कि अब प्रोटोकॉल15याद आती है अलग कर सकते हैं । यह केवल एक उपरि प्रकाश के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है (के रूप में मूल बार्ंस अध्ययन में), या अंय तत्वों (जैसे एक उज्जवल प्रकाश, एक प्रशंसक, या शोर के रूप में) जोड़ा जा सकता है आदेश में चूहों और भागने के चैंबर में प्रवेश करने के लिए प्रेरित करने के लिए3,16। यदि आप एक पायलट अध्ययन के दौरान लक्ष्य बॉक्स में प्रवेश करने के लिए गरीब प्रेरणा का पालन, इन तत्वों के अलावा वास्तविक प्रशिक्षण के दौरान विचार किया जाना चाहिए ।
सही लक्ष्य छेद में प्रवेश की संभावना कम तेजी से इन तत्वों के बिना हो जाएगा, लेकिन शोधकर्ताओं को पता होना चाहिए कि इन अतिरिक्त तनाव उत्प्रेरण उत्तेजनाएं हो सकता है । उपस्थिति या aversive उत्तेजनाओं की अनुपस्थिति के लक्ष्य छेद में प्रवेश करने के लिए प्रेरणा का आकलन करने के लिए हेरफेर किया जा सकता है । हमारे अध्ययन से पता चला कि जंम के पूर्व इथेनॉल संभावना है कि एक चूहा प्रशिक्षण की अवधि के दौरान एस्केप होल में प्रवेश जब केवल उज्ज्वल प्रकाश का इस्तेमाल किया गया था पर एक प्रभाव था, और इस घटना वास्तव में सीखने जहां लक्ष्य छेद स्थित था से अलग था ।
के रूप में हमारे प्रोटोकॉल के 1-4 दिनों में देखा, चूहों को छेद में प्रवेश करने के लिए बहुत प्रेरित नहीं थे, हालांकि वे इसे आसानी से खोजने के लिए पर्याप्त लग रहा था । हालांकि, जब अल्ट्रासोनिक शोर 5 दिन पर भूलभुलैया के ऊपर रखा गया था, स्कोर सबसे बार्ंस उपायों, संभावना है कि चूहों इसे खोजने के बाद लक्ष्य कक्ष में प्रवेश करेंगे सहित, पर सुधार । शोर के लिए नाटकीय रूप से परीक्षण दिन 6 और 7 पर बाहरी छेद जांच की संख्या कम दिखाई दिया, और 7 दिन से कोई इथेनॉल लक्ष्य (चित्रा 2a) ढूंढने के बाद तलाश रखा । हालांकि यह संभव है यह भूलभुलैया सीखने का एक स्वाभाविक परिणाम है, जानवरों और अधिक अल्ट्रासोनिक शोर की शुरूआत के बाद उत्तेजित दिखाई दिया और कम भूलभुलैया का पता लगाने की संभावना है । चैंबर के लिए आदेश में चूहों के लिए एक पुरस्कृत स्थिति रहने के लिए, शोधकर्ताओं ने भी aversive उत्तेजनाओं को बंद करने के लिए सावधान रहना चाहिए (छेद कवर और बंद शोर बारी) और आवंटित राशि के लिए चैंबर में परेशान रहने के लिए पशु की अनुमति पशु को हटाने से पहले वसूली समय ।
बार्ंस भूलभुलैया के डिजाइन सीखने और स्मृति मूल्यांकन पर एक प्रभाव हो सकता है । वर्तमान प्रोटोकॉल अतिरिक्त भूलभुलैया cues का उपयोग करता है । परीक्षण कक्ष की विषमता के अलावा, चार सरल काले पर सफेद पृष्ठभूमि आकार (स्क्वायर, त्रिकोण, सर्कल, क्रॉस) के पोस्टर दृश्य cues के रूप में कमरे की दीवारों पर बढ़ रहे थे । बार्ंस भूलभुलैया के साथ या परीक्षण कमरे की दीवारों पर बाहर cues के बिना या हल किया जा सकता है एक धारावाहिक खोज रणनीति का उपयोग कर हल किया जा सकता है । इस वजह से, केवल एक "लक्ष्य से पहले छेद दूरी" माप का उपयोग करने के तरीके में प्रासंगिक अंतर याद कर सकते है कि माउस भूलभुलैया हल और गैर स्थानिक क्षमताओं से स्थानिक अंतर नहीं हो सकता17। एकाधिक विश्लेषण उपायों का इस्तेमाल किया जाना चाहिए, जैसे कि यह भी विपरीत वर्ग या लक्ष्य से पहले त्रुटियों की संख्या में पता लगाया छेद की संख्या की जांच । खोज कार्यनीति के प्रतिमान का विश्लेषण भी किया जा सकता है.
चूहों के विभिंन नस्ल उपभेदों बार्ंस भूलभुलैया पर चर प्रदर्शन, शायद दृश्य तीक्ष्णता में मतभेदों के कारण हो सकता है । यदि गरीब दृश्य तीक्ष्णता के साथ चूहों का एक तनाव बार्ंस भूलभुलैया में उपयोग के लिए चुना जाता है, भूलभुलैया के किनारे के आसपास एक छोटी सी दीवार के अलावा thigmotaxis (दीवार गले व्यवहार) में वृद्धि हो सकती है और एक गैर दृश्य खोज रणनीति का उपयोग बढ़ा सकते हैं । पुरुषों DBA/2J और C3H/HeJ उपभेदों में महिलाओं की तुलना में बेहतर प्रदर्शन सीखने की थी, और यद्यपि केवल पुरुषों वर्तमान प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किया गया था, C57/Bl6 चूहों को बार्ंस भूलभुलैया18पर स्मृति में लैंगिक मतभेद प्रदर्शित नहीं पाया गया है ।
युवती-संकट प्रतिमान डिजाइन और संशोधनों में:
युवती के लिए-में-कष्ट प्रयोग, एक प्रमुख सीमा है कि वहां खोजपूर्ण माउस के लिए कोई रास्ता नहीं है मादा माउस, या "युवती," क्षेत्र के केंद्र में ट्यूब से मुक्त करने के लिए । चैंबर को फिर से डिजाइन करने के लिए एक रिलीज तंत्र को शामिल एक दिलचस्प भविष्य के संशोधन होगा । युवती का एक नुकसान-में-संकट तुलनात्मक अध्ययन के प्रतिमान का उपयोग कर के अभाव है, क्योंकि यह सामाजिक व्यवहार को मापने के लिए एक नया आकलन है ।
युवती में संकट और सुजनता का आकलन करने के लिए संशोधित किया जा सकता है (झुकाव के रूप में परिभाषित करने के लिए एक और माउस के साथ समय बिताना), सामाजिक नवीनता के लिए वरीयता (झुकाव एक उपंयास माउस की जांच के लिए एक परिचित माउस की तुलना में), संभोग या आक्रामक व्यवहार (मद या चैंबर में एक उपंयास पुरुष में एक महिला को फँसाने), और विकासवादी जीवविज्ञान मुद्दों, ऐसे परोपकारी व्यवहार प्रवृत्तियों पर साझा आनुवंशिक पृष्ठभूमि के प्रभाव के रूप में (एक फंस गैर की तुलना में एक फंसे littermate की प्रतिक्रिया littermate माउस)19.
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
हम Hampden-सिडनी कॉलेज में पावती और शॉन Walden, Zach Leitner, हंटर ली, और एंटोन Kheirani को सराहना बार्ंस भूलभुलैया और युवती के लिए प्रोटोकॉल के परीक्षण में उनकी भागीदारी के लिए दे-संकट में प्रयोग । हम भी Randolph में जेंस फोस्टर शुक्रिया अदा करना चाहूंगा-बार्ंस भूलभुलैया के निर्माण के लिए Macon कॉलेज और Randolph-Macon कॉलेज परीक्षण अंतरिक्ष प्रदान करने के लिए जीवविज्ञान विभाग ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Damsel-in-Distress | |||
| 50 mL conical tube | Fisher Scientific | 14-432-22 | Any brand of 50 mL conical tube will work |
| Rubber bands | Sprano Brand | n/a | Size 62, used to keep caps held to plywood |
| hammer | Grainger | 6R252 | Any standard hammer will work |
| nail (size 8D) | Grainger | 4NFE3 | Similarly-sized nails should work just as well |
| opaque, topless plastic box | AcmePlastics | CUT-TO-SIZE-ACRYLIC-CAST-BLACK-SHEET-2025 | Opaque plastic, cut to size (30 cm L x 19 cm W x 3-6 cm H). Step may be added to ensure no more than a 3.5 cm entrance depth for the mouse. |
| video camera (smartphone) | N/A | N/A | Any camera-equipped smartphone will work |
| bite-resistant gloves | Kent Scientific | GLVDYN02 | Any brand offering appropriate protection |
| transparency sheet | Staples | 954145 | Any brand of clear plastic sheet will work, used for scoring |
| Barnes Maze | |||
| Petri Dishes | Corning | 353025 | Spray painted and used as covers for Barnes maze holes |
| Plywood (3/4 in.) | LP Building Products | 22487 | To construct Barnes maze |
| Spray Paint | Krylon | 1274937 | Used to paint petri dish caps black, white paint used to paint plywood |
| Cup Hooks (5/8 in.) | Ace Hardware | 5360615 | 2 used on either side of ventral hole surfaces; Rubber band wraps around hooks to hold cap flat |
| Poster Board | Creatology | n/a | Used at edges of maze as extra cues |
| Light Bulbs | Phillips | n/a | 100W light bulb, used to during the trials |
| Rubber bands | Sprano Brand | n/a | Size 62, used to keep caps held to plywood |
| Ultrasonic noisemaker | Victor mini PestChaser | M753SN | Used as aversive stimuli |
References
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